细菌革兰染色

细菌的革兰氏染色法实验二细菌的革兰氏染色法学习细菌的革兰氏染色原理和方法。

单染色法：就可以观测微生物的大小、形状、和细胞排序状况，但无法辨别微生物以及它的特定结构等。

复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。

常用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。

革兰氏染色机制：由于g－肽聚糖层较厚，交联度高，不含较多脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融化了类脂质，减少了细胞的通透性，并使初染的结晶青色和碘的复合物不易喷出，经沙黄复染呈圆形红色。

而g＋细胞壁结构球状，用脱色剂处置后，肽聚糖层孔径增大，通透性减少，故细菌仍留存初染时的紫色。

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌（24h培养物）、革兰氏染色液一套3.初染：在搞好的涂面上碱液草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至并无紫色。

4.媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。

5.脱色：除去残水后，碱液95%酒精展开脱色约15-20秒，后立即用流水冲洗。

6.复染：滴加番红染色液，染3－5分钟，水洗后用吸水纸吸干。

7.镜检：观测染色结果并绘图。

记录所观察到的两种菌革兰氏染色颜色的差别，并绘图。

如图所示，被染为紫色的部分即为为金黄色葡萄球菌，红色部分即为为大肠杆菌。

六、问题与讨论必须获得恰当的革兰氏染色结果必须特别注意哪些操作方式？哪一步就是关键？why?按照操作顺序来看1、首先，必须特别强调的就是实验过程中全程的无菌操作：玻片的消毒、注射环路的杀菌以及实验所用材料试管的无菌采用；2、其次，是金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌的刮取过程中，它们的量一定要适中，以免过多影响后期观察结果；3、再者，涂片操作方式完结后，通过酒精灯的蒸煮将细菌紧固，必须特别注意掌控研磨的程度，避免细菌全系列被打死；4、接下来的染色过程中，注意各染色剂染色的时间长度，尤其是95%乙醇脱色的时长，18秒为适宜时长；5、最后，就是化成水分，特别注意油镜的采用，先在低倍镜下打听视野，再转换成高倍镜、油镜。

细菌革兰氏染色步骤
革兰氏染色是一种常用的细菌分类鉴定方法。

步骤如下：
1.准备细胞液片：将待染菌液滴在干净玻璃片上，并用火炉或灯火加热使其干燥。

2.固定菌液：用无定形火烧的镊子将玻璃片持在火炉/灯火上，烧过3-4次，让菌液固定在玻璃片上。

3.染色：将玻璃片浸入染色剂——紫晶染液中，静置1分钟。

4.漂洗：立即用水把紫晶染剂冲洗掉。

5.涂酒精：用乙醇涂抹菌液，使不产生色素复合物的细胞膜变性。

6.漂洗：用水把酒精冲洗掉。

7.染色：将玻璃片浸入染色剂——碘化钾液中，静置1分钟。

8.漂洗：用水把碘酸盐冲洗掉。

9.溶解：滴一两滴乙醚或丙酮，使不固定的染色剂冲出来，然后用热空气烘干涂片。

10.观察镜检：在显微镜下观察细胞的颜色和形态，区分不同的细菌群体。

革兰氏染色后，属于革兰氏阴性细菌的菌落呈现出红色或粉红色，而属于革兰氏阳性细菌的菌落呈现出蓝紫色或崩溃的黑色。

革兰氏染色法的原理和步骤革兰氏染色法是一种常用的细菌染色方法，它可以将细菌区分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

这种染色方法是由丹麦微生物学家Christian Gram于1884年首次提出的。

革兰氏染色法的原理是利用细菌细胞壁的特性来区分不同类型的细菌。

细菌细胞壁的主要成分是多聚糖和肽聚糖，革兰氏氏染色法通过不同的处理步骤，使得细菌细胞壁的特性在染色过程中显现出来。

革兰氏染色法的步骤如下：1. 准备细菌涂片：首先，从培养基中取一小块细菌培养物，涂抹在玻璃片上，形成细菌涂片。

2. 固定：将细菌涂片在空气中晾干，然后用火焰快速烘烤，使细菌固定在玻璃片上。

3. 染色：将固定的细菌涂片放入革兰染色液中浸泡几分钟。

革兰染色液主要由紫晶染料和碘酒组成。

紫晶染料可以渗透进入细菌细胞壁，而碘酒可以固定染色物质。

浸泡时间过长会导致革兰氏阳性菌染色过度。

4. 洗涤：用蒸馏水冲洗细菌涂片，以去除多余的染色剂。

5. 差染：将细菌涂片放入酒精-醋酸溶液中浸泡几秒钟，然后用蒸馏水冲洗。

这一步是为了除去革兰氏阴性菌表面的染色剂。

6. 洗涤：再次用蒸馏水冲洗细菌涂片。

7. 对比染色：将细菌涂片放入苏木精染色液中浸泡几分钟。

苏木精染色液会将革兰氏阴性菌染成红色。

8. 洗涤：用蒸馏水冲洗细菌涂片。

9. 干燥：将细菌涂片放入通风处晾干。

通过上述步骤，革兰氏染色法可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

革兰氏阳性菌在染色后呈紫色，而革兰氏阴性菌在染色后呈红色。

革兰氏染色法的原理基于细菌细胞壁的差异。

细菌细胞壁是由多聚糖和肽聚糖组成的。

革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，含有大量的多聚糖和肽聚糖，而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，含有较少的多聚糖和肽聚糖。

在染色过程中，革兰染色液中的紫晶染料可以渗透进入细菌细胞壁，并与细菌细胞内的多聚糖和肽聚糖结合，使革兰氏阳性菌呈紫色。

而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，紫晶染料不能渗透进去，因此在差染过程中被苏木精染色液染成红色。

简述菌株革兰氏染色后的观察结果
在微生物学领域中，革兰氏染色是一种常用的染色技术，通过染色可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。

革兰氏染色的原理是利用细菌细胞壁的不同结构特点来区分不同类型的细菌。

在进行革兰氏染色后，观察结果通常可以分为以下几个方面：
1. 革兰氏阳性菌的观察结果：
革兰氏阳性菌在染色后呈紫色或紫蓝色，这是因为它们细胞壁含有较多的革兰氏染色阳性物质，如壁多糖和蛋白多糖。

在显微镜下观察，可以看到这些菌细胞呈现出紫色或紫蓝色的颜色，通常形态较为规则，细胞壁较厚，且在细胞壁内外均有革兰氏阳性物质分布。

2. 革兰氏阴性菌的观察结果：
革兰氏阴性菌在染色后呈粉红色或粉红红色，这是因为它们细胞壁中的革兰氏染色阴性物质较多，如脂多糖。

在显微镜下观察，可以看到这些菌细胞呈现出粉红色或粉红红色的颜色，通常形态较为不规则，细胞壁较薄，且在细胞壁内外只有少量的革兰氏阴性物质分布。

3. 其他观察结果：
除了革兰氏阳性和阴性菌外，有时在染色后还会观察到一些特殊的细菌。

比如，有些细菌在革兰氏染色中呈现出不规则的颜色，可能是由于其细胞壁结构与传统的革兰氏阳性或阴性菌有所不同。

此时
需要进一步进行细菌鉴定，以确定其真实的细菌类型。

总的来说，革兰氏染色是一种简单而有效的细菌分类方法，通过观察染色后的细菌颜色和形态特征，可以初步判断细菌的类型。

然而，在实际操作中，还需要结合其他鉴定方法和技术，如生化试验、分子生物学方法等，来对细菌进行更准确的鉴定和分类。

革兰氏染色的观察结果只是鉴定细菌的第一步，只有综合多种方法才能准确判断细菌的种类和特性。