【CN109897912A】一种LAMP引物及检测葡萄霜霉病菌的方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910201728.3(22)申请日 2019.03.18(71)申请人 浙江农林大学地址 311300 浙江省杭州市临安区武肃街666号(72)发明人 张传清　王琼伟　刘亚慧　徐炳潮　(74)专利代理机构 杭州中成专利事务所有限公司 33212代理人 金祺(51)Int.Cl.C12Q 1/6895(2018.01)C12Q 1/6851(2018.01)C12Q 1/06(2006.01)C12N 15/11(2006.01)C12R 1/645(2006.01)(54)发明名称用于定量监测山核桃干腐病侵染和传播的qLAMP方法及所用引物(57)摘要本发明公开了一种用于监测山核桃干腐病病菌孢子数量动态的定量环介导等温扩增引物，q -LAMP引物组合物由以下4条引物组成：上游外引物(F3)、下游外引物(B3)、上游内引物(FIP)、下游内引物(FIB)。

本发明还同时提供了包含上述q -LAMP引物组合物的定量环介导等温扩增试剂盒，以及提供了利用该试剂盒进行的山核桃干腐病病菌孢子数量动态的定量环介导等温扩增方法，从而获得孢子数量、DNA浓度。

采用本发明的方法能定量监测雨水、树体和土壤等处的山核桃干腐病菌孢子数量。

权利要求书1页 说明书11页序列表1页 附图2页CN 109897908 A 2019.06.18C N 109897908A权　利　要　求　书1/1页CN 109897908 A1.用于监测山核桃干腐病病菌孢子数量动态的定量环介导等温扩增引物，其特征在于：q-LAMP引物组合物由以下4条引物组成：上游外引物(F3)：5’—TGTCCATAGGTTCACCTCCA—3’；下游外引物(B3)：5’—AGATGGTCTGCCTGTGGT—3’；上游内引物(FIP)：5’—CAAAGTCAGCGCGATGCAGCGACCGGCCAATGCGTAAG—3’；下游内引物(FIB)：5’—AGGGTAACCAAATCGGTGCTGCGTCGATTCGCGTTAGCGG—3’。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710045658.8(22)申请日 2017.01.22(71)申请人 北京市农林科学院地址 100097 北京市海淀区曙光花园中路9号(72)发明人 张玮　李兴红　燕继晔　刘梅　周莹　邢启凯　卢蝶　(74)专利代理机构 北京惟诚致远知识产权代理事务所(普通合伙) 11536代理人 王慧凤　赵静(51)Int.Cl.C12Q 1/68(2006.01)C12Q 1/04(2006.01)C12N 15/11(2006.01)C12R 1/645(2006.01)(54)发明名称同时检测葡萄溃疡病菌和葡萄蔓枯病菌的引物及其应用(57)摘要本发明公开了一组同时检测葡萄溃疡病菌和葡萄蔓枯病菌的双重PCR引物及其应用。

该组引物，由序列表中序列1所示的核苷酸、序列表中序列2所示的核苷酸、序列表中序列3所示的核苷酸和序列表中序列4所示的核苷酸组成。

这组引物可以在一个双重PCR反应中分别检测到我国3个葡萄溃疡病菌优势种——小新壳梭孢、可可毛色二孢和葡萄座腔菌与4种葡萄蔓枯病菌的存在，这表明该组引物可以快速、准确、灵敏的确定葡萄苗木以及田间葡萄病样中的葡萄溃疡病菌和葡萄蔓枯病菌，为苗木带菌检测和针对性防治这2类病原菌引起的葡萄枝干病害提供依据。

权利要求书1页 说明书7页序列表1页 附图2页CN 106701968 A 2017.05.24C N 106701968A1.一组检测葡萄溃疡病菌和葡萄蔓枯病菌的双重PCR引物组，由序列表中序列1所示的核苷酸、序列表中序列2所示的核苷酸、序列表中序列3所示的核苷酸和序列表中序列4所示的核苷酸组成。

2.根据权利要求1所述的检测葡萄溃疡病菌和葡萄蔓枯病菌的双重PCR引物组，其特征在于：所述葡萄溃疡病菌为小新壳梭孢(Neof usicoccum pa rvum)、可可毛色二孢(Lasiodiplodia theobromae)和/或葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)，所述葡萄蔓枯病菌为Diaportheeres ,Diaporthehongkongensis ,Diaporthephaseolorum和/或Diaporthesojae。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910337631.5(22)申请日 2019.04.25(71)申请人 常州机电职业技术学院地址 213164 江苏省常州市武进区鸣新中路26号(72)发明人 乔宏哲　陶国正　(74)专利代理机构 大连理工大学专利中心21200代理人 梅洪玉　戴风友(51)Int.Cl.A01G 13/00(2006.01)A01G 17/02(2006.01)G06F 17/18(2006.01)(54)发明名称一种葡萄霜霉病防控方法(57)摘要本发明属于植物病害防治领域，涉及一种葡萄霜霉病防控方法。

所述防控方法，步骤如下：第一步：根据温度、湿度、葡萄品种、等效持续时间和葡萄感染霜霉病的历史数据，得出关于温度、湿度、葡萄品种、等效持续时间与葡萄感染霜霉病关系的回归系数。

第二步：根据所预测可能感染的严重程度概率启动高温及除湿设备并控制其运行时间。

本发明能根据历史数据，得出平均温度、平均湿度、葡萄品种、温湿度持续时间多种因素与感染霜霉病的关系，可根据多种因素的影响合理设置采取高温及除湿操作的条件。

根据本条件启动高温及除湿设备更全面科学和合理。

本发明还能根据所预测感染的可能性大小智能调节控制高温及除湿设备的运行时间，更节能环保。

权利要求书2页 说明书4页 附图1页CN 109937770 A 2019.06.28C N 109937770A1.一种葡萄霜霉病防控方法，其特征在于，步骤如下：第一步：1.1建立葡萄参数向量：x＝(x (1)，x (2)，x (3)，x (4)，1)其中，x (1)为平均温度，x (2)为平均湿度，x (3)为葡萄品种，x (4)为等效持续时间；等效持续时间计算方法为：T e ＝βT w +(1-β)T s其中，T e 为等效持续时间；T w 为在总时间段中温度在易感染区间的时间总和；T s 为在总时间段中湿度在易感染区间的时间总和；β为温度/湿度权重系数；1.2建立系数向量w＝(w (1)，w (2)，w (3)，w (4)，b)；其中，w (1)为温度系数；w (2)为湿度系数；w (3)为葡萄品种系数，w (4)为等效持续时间系数；b为偏置；1.3设函数h w(x)：1.4求取损失函数，损失函数为：其中，m为数据集样本数；y为类别标签，表示“有感染”和“无感染”两种状态，并且y＝1时，代表“感染”，y＝0时，表示“无感染”；i为第i个；W T 为W的转置；1.5利用梯度下降法对损失函数J(w)进行迭代，求解使J(w)最小化的w最佳值；迭代函数为：其中，α表示步长；第二步：设临界感染概率为P L ，T 0为在上述临界感染状态；2.1根据前述迭代所求得的w，以及当前葡萄的参数，求得w T X；则当满足条件时，启动高温及除湿设备；其中，γ为启动临界系数；2.2高温及除湿设备的工作时间由下式确定：2.如权利要求1所述的一种葡萄霜霉病防控方法，其特征在于，第一步中，设定w初值为：2，2，1，1，2；α＝0.01。

专利名称：一种葡萄霜霉病菌的快速分子检测方法与应用专利类型：发明专利
发明人：秦文韬,张昊,孔繁芳,黄晓庆,王忠跃
申请号：CN201310178162.X
申请日：20130515
公开号：CN103243166A
公开日：
20130814
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于作物病害诊断与防治技术领域，具体涉及一种葡萄霜霉菌的分子检测方法及应用。

本发明根据已公开的多种霜霉目真菌和其他常见的植物病原真菌的ITS序列信息，通过生物信息分析，自行设计了一组LAMP引物，结合葡萄霜霉病菌的基因组DNA快速提取技术，采用一步LAMP 反应，仅需55min即可从不同葡萄种植区不同品种的葡萄霜霉病样中快速检测出33fg/μL水平葡萄霜霉病菌基因组DNA的存在。

本发明特异性强、灵敏度高、检测准确率高、适用范围广，可作为葡萄霜霉病菌的快速检测技术在各地推广应用。

申请人：中国农业科学院植物保护研究所
地址：100193 北京市海淀区圆明园西路2号
国籍：CN
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910794854.4(22)申请日 2019.08.27(71)申请人 宁夏大学地址 750021 宁夏回族自治区银川市西夏区贺兰山西路489号(72)发明人 史娟　田芸瑞　马新　(74)专利代理机构 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427代理人 陈娟(51)Int.Cl.C12N 1/14(2006.01)C12Q 1/06(2006.01)G01N 21/84(2006.01)C12R 1/645(2006.01)(54)发明名称霜霉病菌培养和观察的方法(57)摘要本发明涉及生物技术领域，尤其涉及霜霉病菌培养和观察的方法。

霜霉病菌的采集；孢子囊悬浮液的制备；孢子囊悬浮液的培养。

通过反复试验获得了一种能够诱导黄瓜霜霉病菌孢子囊萌发释放游动孢子、游动孢子通过运动和形态变化形成静止孢子，静止孢子萌发形成附着胞，附着胞萌发产生侵染丝的技术。

该技术可为研究者进行霜霉病菌生物学基础、抗病性鉴定、杀菌剂筛选等的深入研究提供了有效的技术。

通过该方法研究者可实现对霜霉菌游动孢子数量，形态变化以及形成侵染体数量的定量统计和监测，还可以实现杀菌剂作用机制的研究。

清楚观察到霜霉病菌侵入寄主前必须经历的几个发育阶段。

系统的观察方法将能够为该病菌的对症药物的防治提供第一手的资料。

权利要求书2页 说明书5页 附图2页CN 110835605 A 2020.02.25C N 110835605A1.霜霉病菌培养和观察的方法，其特征在于，包含如下步骤：霜霉病菌的采集：田间采集新鲜的霜霉病菌病斑，观察病斑背面长出的灰白色-灰黑色的霉层即霜霉病菌的孢囊梗和孢子囊；装入干净塑料袋中，带回实验室备用；孢子囊悬浮液的制备：将田间采回的霜霉病病叶，置于洁净的工作台上，肉眼仔细观察，以鲜黄色病斑叶背产生的霉层为菌种，用洁净的毛笔，轻轻顺势刷取叶背的霉层，顺势推送在装有灭菌或蒸馏水的离心管或指形瓶中，反复多次刷取，摇匀离心管或指形瓶，同时吸取含有孢子囊的悬浮液，滴于凹玻片上，盖上载玻片，置于显微镜下观察，观察孢子囊的个数和发育情况；孢子囊悬浮液的培养：将含有孢子囊悬浮液的离心管或指形瓶置于有光照，温度为15℃-20℃度的培养箱中预培养1h。

专利名称：一种检测双歧杆菌的LAMP检测用引物及检测方法专利类型：发明专利
发明人：范一灵,杨美成,刘浩,刘冬玲
申请号：CN201510350140.6
申请日：20150619
公开号：CN104928388A
公开日：
20150923
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种检测双歧杆菌的LAMP检测用引物及检测方法，通过LAMP技术特有的颜色或浊度变化检测样品中的双歧杆菌属细菌。

本发明方法不受培养条件的限制，可在60min内完成核酸的检测。

本发明对双歧杆菌定性检测灵敏度可达到16.1pg/μL(DNA浓度)或0.1CFU/mL(细菌浓度)，优于一般PCR检测方法。

本发明方法操作简单，反应结果易于观察，特异性好，适合于现场快速检测，可以为监管部门对上市产品的监督检查和突发事件处理提供快速的筛查结果。

同时，本发明首次设计、筛选到双歧杆菌LAMP检测引物，并建立了双歧杆菌LAMP检测方法，填补了国内外在此检测领域的空白。

申请人：上海市食品药品检验所
地址：200120 上海市浦东新区张衡路1500号
国籍：CN
代理机构：上海申新律师事务所
代理人：竺路玲
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911236437.4(22)申请日 2019.12.05(71)申请人 华南农业大学地址 510000 广东省广州市天河区五山(72)发明人 张建民　温俊平　廖明　张红霞　(74)专利代理机构 佛山市禾才知识产权代理有限公司 44379代理人 资凯亮　刘颖(51)Int.Cl.C12Q 1/689(2018.01)C12Q 1/6844(2018.01)C12Q 1/04(2006.01)C12N 15/11(2006.01)C12R 1/42(2006.01)(54)发明名称一种可检测SNP的新型LAMP方法、引物组和试剂盒(57)摘要本发明公开了一种可检测SNP的新型LAMP方法，包括以下步骤：(1)提取DNA为待检测模板；(2)设计荧光基团修饰的环引物探针、内引物和外引物，环引物探针具有与DNA突变位点相结合的RNA碱基；(3)建立反应体系，将待检测模板加入到反应体系中，检测反应物是否产生荧光信号，若产生荧光信号则表示待检测模板中具有目标DNA，若未产生荧光信号则表示待检测模板中无目标DNA。

相应的，本发明还公开了基于上述方法的用于检测鸡白痢沙门菌的引物组和试剂盒。

本发明的检测方法具有特异性强和灵敏度高的优点。

权利要求书2页 说明书7页序列表1页 附图3页CN 110878368 A 2020.03.13C N 110878368A1.一种可检测SNP的新型LAMP方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取DNA为待检测模板；(2)设计荧光基团修饰的环引物探针、内引物和外引物，所述环引物探针具有与DNA突变位点相结合的RNA碱基；(3)建立反应体系，将待检测模板加入到反应体系中，检测反应物是否产生荧光信号，若产生荧光信号则表示待检测模板中具有目标DNA，若未产生荧光信号则表示待检测模板中无目标DNA。

专利名称：一种葡萄霜霉病的防治方法专利类型：发明专利
发明人：李美琼,李佩龙
申请号：CN201510372194.2
申请日：20150630
公开号：CN105165487A
公开日：
20151223
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提出一种葡萄霜霉病的防治方法，用以解决现有技术中病菌产生不同程度的抗药性的问题。

一种葡萄霜霉病的防治方法，它按照下述方式进行：(1)土壤生态治理；(2)农业防治；(3)生物控制；(4)生物防治；(5)物理防治；(6)化学防治，使用以下重量份数的组合物制成杀菌剂喷洒：醚菌酯10-30、嘧菌酯10-30、苯醚菌酯10-30、聚氧乙烯脂肪醇醚5-10、乙醇20-50、间苯二酚2-8、丙二醇1-2、羟甲基纤维素1-2、水20-50。

本发明杀菌剂药效突出，持效期长，并且可以减少药物的使用次数，节约原料，减少环境污染。

申请人：云南天质网络科技有限公司
地址：650000 云南省昆明市盘龙区北京路与白云路交叉口西南角心景假日大厦21层2112层国籍：CN
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专利名称：一种葡萄霜霉病防控方法和防控系统专利类型：发明专利
发明人：来智勇,吕岩夫,刘昱显,张志毅,房玉林,段琪申请号：CN201510998041.9
申请日：20151228
公开号：CN105613176A
公开日：
20160601
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种葡萄霜霉病防控方法和防控系统，包括设置在葡萄树上或葡萄树附近的多个数据采集节点，数据采集节点连接照明装置，且多个数据采集节点均与数据汇总节点连接。

本发明实现葡萄植株冠层周围的湿度和光照强度信息的自动化采集，并根据湿度和光照强度情况进行自动化控制，当相对湿度达到90％以上1-2小时后，如果光照强度不够，则自动控制打开照明系统，消除霜霉病产生和流行的条件。

申请人：西北农林科技大学
地址：712100 陕西省西安市杨凌示范区邰城路3号
国籍：CN
代理机构：西安恒泰知识产权代理事务所
代理人：李婷
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