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LAMP技术在微生物检测中的应用
李志强
【期刊名称】《生命科学仪器》
【年(卷),期】2009(007)008
【摘要】LAMP(loop-mediated isothermal amplification)技术是一种新的恒温核酸扩增技术,具有特异性强、等温灵敏、操作简单、产物易检测等优点.该技术已被用于多种病原微生物的检测.本文综述了LAMP技术的原理,及其在几种微生物检测中的应用,并对其应用前景做了展望.
【总页数】4页(P7-10)
【作者】李志强
【作者单位】西华大学生物工程学院,四川,成都,610039
【正文语种】中文
【中图分类】Q1
【相关文献】
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MP技术在鸭病原微生物检测中的应用 [J], 曹宗喜;王峰;张艳;叶保国;林哲敏;关帅印;尤志娟;谭树义
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作者单位:1.南华大学医学院病原生物研究所,湖南衡阳421200; 2.珠海市疾病预防控制中心 通讯作者:魏泉德,E2mail:weiqd99@ ・综述・LA MP技术在病原微生物检测中的应用张如胜1,2综述,魏泉德2审校 【摘要】 环介导等温扩增(l oop2mediated is other mal a mp lificati on,LAMP)技术是近年来发展出的一种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。
与传统PCR方法相比,LAMP不需要热循环,为等温扩增,且由于LAMP反应中产生大量的副产物-白色焦磷酸镁沉淀,扩增产物可不经过电泳,通过肉眼观察或浊度计即可判定结果。
因此LAMP是一种不需要热循环仪、肉眼即可判定结果的高度特异和敏感的DNA扩增方法,适合于现场、战时野外或条件较差的实验室进行病原微生物的快速检测。
近年LAM P技术在病原微生物检测方面已有广泛应用,本文就这一方面的研究进展作一综述。
【关键词】 环介导等温扩增; 病原微生物 中图分类号:R37 文献标识码:A 文章编号:1671-5039(2007)05-0045-05 目前对病原微生物的检测主要依靠病原体分离法、免疫学方法和各种PCR方法。
病原体分离虽然是金标准,但繁琐费时;免疫学方法的特异性和敏感性均较低;PCR方法敏感、准确、快速,可替代病原学检测,但由于需要昂贵的仪器设备、较高检测费用以及对检测人员较高的技术要求而使其不适用于现场快速检测及基层普及应用。
NOT OM I等[1]于2000年报道了一种新型的等温核酸扩增方法,即环介导等温扩增法(l oop2mediated is other mal a mp lifica2 ti on,LAMP),该法针对靶基因的6个区域设计4条特异引物,利用一种链置换DNA聚合酶(B st DNA poly merase)在恒温条件(65℃左右)保温约60m in,即可完成核酸扩增反应,扩增出LAMP特征性梯状条带。
LAMP技术在病毒检测中的应用发表时间：2013-01-31T16:04:31.107Z 来源：《医药前沿》2012年第31期供稿作者：吴昊1 孙立新2 叶松1 陆军1 杨庆贵2[导读] LAMP（Loop-mediated Isothermal Amplification）环介导等温扩增技术，是近年来新兴的分子生物学检测技术吴昊1 孙立新2 叶松1 陆军1 杨庆贵2（1安徽理工大学医学院病原生物教研室安徽淮南 232001）（2江苏出入境检验检疫局医学媒介生物监测实验室江苏南京 210001）【摘要】LAMP（Loop-mediated Isothermal Amplification）环介导等温扩增技术，是近年来新兴的分子生物学检测技术。
因其特异性强、等温扩增，反应灵敏、操作简单、产物易检测，此项技术已被用于多种病原微生物的检测。
本文综述了LAMP技术的原理以及其在几种常见病毒检测项目中的应用。
【关键词】 LAMP 技术原理病毒检测【中图分类号】R319 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）31-0064-02病原微生物带来的卫生问题时常出现，各种检测手段也不断更新。
但由于非特异性扩增、反应操作程序复杂、及仪器昂贵等问题，很多方法在疾病爆发时筛查现场和监测站点的应用受到限制。
LAMP技术是由日本学者Notomi等[1]在2000年开发的一种新型快速的扩增技术，它能在一定温度范围内，通过一个步骤在短时间内对目的片段进行大量有效扩增。
其具有高特异性、高效性、快速、低成本、易检测、结果易观察等特点，被广泛用于各种病原体检测和研究中并取得了一定的成就。
1 LAMP技术原理1.1 扩增机制LAMP技术利用能够特异性识别靶序列上的6个独立区域的两对内、外引物，及具有链置换活性的BstDNA聚合酶启动循环链置换反应来进行靶序列的扩增[1]。
反应中，先由外部引物将内部引物扩增所需要的模板扩增出来，然后由内部引物对靶基因片段进行引导合成。
LAMP技术研究进展及其在动物疫病检测中的应用LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）技术是一种能够在恒温下快速、高效地进行核酸扩增的方法。
它通过特殊的引物和酶，在简单的实验条件下可以在短时间内扩增大量目标DNA序列，并且具有高度的特异性和灵敏性。
LAMP技术最早由日本学者Notomi等人于2000年首次提出，自此以后，LAMP技术在许多领域得到了广泛的应用，尤其在动物疫病检测中。
1.快速诊断：LAMP技术可以在一个小时内进行核酸扩增反应，比传统的PCR方法要快得多。
这对于迅速确定疫病的诊断结果非常重要，可以提高动物疫病的早期预警和防控能力。
2.高度特异性：LAMP技术使用多个特异性引物，在同一个反应体系中进行扩增，可以显著提高对目标序列的特异性识别能力。
这对于区分不同疫病病原体或者同一病原体的不同亚型具有重要意义，可以帮助鉴定传染病源和病原菌的变异。
3.高灵敏性：LAMP技术不仅在快速扩增速度上具有优势，还在扩增效果上具有高灵敏性。
在初始目标DNA浓度低至10个分子时，LAMP技术仍能够进行有效扩增，这对于低浓度病原体的检测非常关键。
4.操作简便性：LAMP技术不需要复杂的设备和特殊的实验条件，只需要一个简单的恒温器就可以进行核酸扩增反应。
这极大地降低了操作门槛，使得不同实验室和场所都可以进行动物疫病的检测工作。
5.物价低廉：LAMP技术所需的试剂和设备成本相对较低，特别是与PCR技术相比较，更加经济实惠。
这对于资源有限的地区和农村地区的疫病监测和防控工作尤为适用。
目前，LAMP技术已经在许多动物疫病的检测中得到了应用。
比如，它被成功用于禽流感、猪瘟、传染性胸膜炎、家禽新城疫等重大疫病的快速检测。
通过该技术，可以快速而准确地检测出病原体的存在，为疫病的早期检测和防控提供了有力的手段。
总之，LAMP技术在动物疫病检测中具有广阔的应用前景。
随着该技术的不断进步和完善，相信将能够更好地满足动物疫病检测的需求，为动物疫病的防控提供更加可靠、快速和经济实惠的手段。
LAMP技术及其在微生物检测中的应用近年来，随着食品安全事件的频繁发生，食品安全问题受到了越来越多的重视。
然而，在食品微生物检测过程中，传统的检测方法已经远远不能满足微生物快速、简易、高特异性的鉴定要求。
随着分子生物学技术的发展，核酸扩增法已经被广泛应用于病原微生物的鉴定，LAMP法（即环-媒恒温核酸扩增方法）就是近几年发展起来的新技术之一。
1 LAMP技术简介1.1 LAMP技术原理LAMP法是由Notomi等[1]于2000年开发出来的一种连续、恒温、基于酶反应的新型核酸扩增方法，其原理是针对靶基因的6个区域设计两对特殊的内、外引物，利用一种链置换DNA聚合酶（Bst酶）在恒温条件（60-65℃）下启动循环链置换反应。
在靶标DNA区启动互补链合成，结果在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物。
LAMP反应过程中，从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg2+结合，产生副产物（焦磷酸镁）形成乳白色沉淀，加入显色液，即可通过肉眼观察判定扩增与否。
1.2 LAMP技术的优缺点1.2.1 优点1.2.1.1 特异性强、灵敏度高4条引物可以严格识别靶核酸序列上的6个独立区域，反应过程不会受到反应混合物种非靶序列DNA的影响，保证了LAMP扩增的高度特异性。
在检测过程中可以根据是否扩增就能判断目标基因是否存在，可用于细菌或病毒的定性检测。
1.2.1.2 等温高效L AMP在等温条件下扩增，不会因温度改变而造成时间的损失，在1h 内可将靶序列扩增至109~1010倍。
而且受非靶序列的影响小，模板也不需要热变性。
1.2.1.3 整个扩增反应操作简便、快捷LAMP反应过程中会产生白色的焦磷酸镁沉淀，肉眼即可直接观察，是鉴定反应是否进行的最直接方法。
另外，LAMP扩增产物可以像PCR 反应利用凝胶电泳结合成像系统进行鉴定，通过产生的不同梯型来区分特异性扩增和非特异性扩增。
1.2.1.4 实验装置简单，费用相对较低LAMP反应不需要进行模板的热变性、长时间的温度循环、繁琐的电泳和紫外观察等，在操作过程中，仅需要普通的水浴锅或其他可以得到稳定热源的设备即可。
LAMP在下呼吸道感染病原菌快速检测中的临床应用雷星;龙丽【期刊名称】《中国现代医生》【年(卷),期】2024(62)12【摘要】目的利用环介导等温扩增检测(loop mediated isothermal amplification,LAMP)即呼吸道病原菌核酸联合检测法(13联)分析痰标本病原菌的检出情况,为临床诊疗提供病原学循证依据。
方法选取2022年1月至12月铜仁市人民医院收治的1642例下呼吸道感染患者作为研究对象,采集痰标本/肺泡灌洗液进行LAMP(13联)检测,分析呼吸道病原菌检出情况及其与性别、年龄、季节的关系。
结果13种呼吸道病原菌的总体检出率男性明显高于女性(P<0.01)。
在不同年龄组中,3~6岁患者流感嗜血杆菌和肺炎链球菌的检出率、6~18岁患者肺炎支原体的检出率、>60岁患者耐甲氧西林葡萄球菌、嗜麦芽窄食单胞菌和肺炎克雷伯菌的检出率均明显高于其他组(P<0.05)。
在不同季节组中,肺炎链球菌和肺炎衣原体好发于春季,肺炎支原体在秋节感染率最高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。
结论LAMP可快速检测出病原菌,为下呼吸道感染的预防及临床诊疗提供病原学依据。
【总页数】4页(P60-63)【作者】雷星;龙丽【作者单位】铜仁市人民医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R743.3【相关文献】1.呼吸道病原菌核酸检测在重症监护病房肺部感染患者中的临床应用分析MP 芯片十三联法检测重症监护患者下呼吸道感染病原菌的应用价值3.肺泡灌洗液LAMP在下呼吸道感染病原体检测中的应用MP技术在禽源病原菌快速检测中的应用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
LAMP方法在食品微生物检测中的应用作者：陈跃龙楚雄医药高等专科学校来源：《中国食品》 2018年第15期摘要：近年来微生物食品中毒事件发生率不断增长，因此建立完善的食品安全监管体系，找到一种可靠的食品微生物检测办法至关重要。
LAMP法是在21世纪初期开发出来的恒温、连续性的新型核酸扩增方法，在食品微生物检测中发挥着重要作用。
本文对LAMP方法在食品微生物检测中的应用进行了分析与探讨。
关键词：LAMP；食品微生物检测；应用一、LAMP技术原理LAMP法是在2000年所开发出来的方法，是对靶基因设计出来的特殊内外引物，利用链置换DNA聚合酶，在恒温条件下开启循环链置换反应，在靶标DNA区域启动互补链合成，在同一链上互补序列，通过多次反复形成有很多环花椰菜结构茎环DNA混合物。
在LAMP反应中从NTP析出焦磷酸根离子和反应溶液中的镁离子相结合，从而产生焦磷酸酶，形成乳白色沉淀，加入显色液后即可通过人肉眼观察并判定是否扩增。
二、LAMP方法在食品微生物检测中的应用大肠杆菌检测。
大肠杆菌是可以引起人类发生出血性肠炎的微生物因子，主要是经口传播，虽然大肠杆菌传染病在一些卫生条件良好的国家中已经基本得到控制，但部分地区仍然有大肠杆菌感染问题发生，并受到各国相关部门的高度重视。
由于大肠杆菌类型较多、血清复杂，采用常规的检测方法难以对其进行灵敏、快速、准确的全面检测。
刘倩瑛等人在食品大肠杆菌检测中采用原位LAMP方法对stx2基因进行检测，采用FIFC标记抗体，在紫外线下照射，经试验研究结果发现，原位LAMP与原位PCR相比，其温和渗透性对细胞损伤较小，且在DNA扩增中可以采用荧光抗体标记。
另外还有相关学者发现LAMP方法的背景颜色浅，因此LAMP具有较强的敏感性和特异性，在EHEC检测中较为适用。
沙门氏菌检测。
沙门氏菌是导致食物中毒的主要病原菌，其通过水源和污染食品传播，在食物中毒事件中，沙门氏菌病毒是最为常见的一种病原菌，约占细菌性食物中毒事件的50%。
