膨化大豆的掺假鉴别法及脲酶活性的专业控制

大豆制品中尿素酶活性测定方法中华人民共和国专业标准蛋白酶活力测定法ZBX66030-87Measurementofproteinaseactivity本方法适用于酿造酱油时在制品菌种、成曲的蛋白酶活力测定。

1福林法试剂及溶液:以下试剂都为分析纯福林试剂(Folin试剂):于2000mL磨口回流装置内,加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g,钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)25g,蒸馏水700mL,85%磷酸50mL,浓盐酸100mL,文火回流10h。

取去冷凝器,加入硫酸锂(Li2SO4)50g,蒸馏水50mL,混匀,加入几滴液体溴,再煮沸15min,以驱逐残溴及除去颜色,溶液应呈黄色而非绿色。

若溶液仍有绿色,需要再加几滴溴液,再煮沸除去之。

冷却后,定容至1000mL,用细菌漏斗(No4～5)过滤,置于棕色瓶中保存。

此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释。

即成已稀释的福林试剂。

碳酸钠溶液:称取无水碳酸钠(Na2CO3),定容至1000mL。

三氯乙酸(TCA)溶液:称取三氯乙酸(CCL3COOH),定容至1000mL。

磷酸盐缓冲液:称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O),定容至1000mL,即成溶液(A液)。

称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O),定容至1000mL,即成溶液(B液)。

取A液28mL和B液72mL,再用蒸馏水稀释1倍,即成的磷酸盐缓冲液。

2%酪蛋白溶液:准确称取干酪素2g,称准至,加入氢氧化钠10mL,在水浴中加热使溶解(必要时用小火加热煮沸),然后用磷酸盐缓冲液定容至100mL即成。

配制后应及时使用或放入冰箱内保存,否则极易繁殖细菌,引起变质。

100μg/mL酪氨酸溶液:精确称取在105℃烘箱中烘至恒重的酪氨酸,逐步加入6mL1N盐酸使溶解,用盐酸定容至100mL,其浓度为1000μg/mL,再吸取此液10mL,以盐酸定容至100mL,即配成100μg/mL的酪氨酸溶液。

膨化大豆掺假鉴别方法感官特征：鲜黄亮泽，粉细蓬松，豆香浓郁。

询问法：①询问膨化大豆的原料：是进口大豆还是国产大豆膨化大豆的蛋白和脂肪含量因产地不同而异，但两者一般呈负相关； 国产大豆膨化大豆，蛋白36-38%、脂肪17-19%，色泽金黄色； 进口大豆膨化大豆，蛋白34-36%、脂肪19-21%，色泽较暗；色泽除因大豆品种、产地区别外，还与杂质含量有关，杂质多则颜色偏暗。

理化指标：要求膨化大豆供应商提供蛋白、脂肪含量和尿酶活性等指标。

水分 % 粗蛋白 %粗脂粉 % 粗纤维% 粗灰分 % 脲酶活性 Mg/g.m in 蛋白质溶解度 % 猪消化能 兆卡/千克 鸡代谢能兆卡/千克 ≤12 ≥35 ≥16 ≤7.0 ≤6.0 0.02-0.272-85 4.22 3.75价格比较法：膨化大豆价格比大豆原粮一般会高出350-500元，如低于大豆原料肯定是有问题的膨化大豆。

膨化大豆参考价位阈值自行估算法：Waldroup (1982)A = (0.874 X B) + C (1.256 x D)B = 1吨 44% CP 豆粕价C = 全脂大豆含油量D = 1吨植物油价格后端加油的辨别方法：油厂不合格低蛋白豆粕+油厂大豆油精炼过程中的下脚油，感观上呈，粗蛋白粗脂肪化验合格。

眼观法：如多次处理过的油条鼻嗅法：没有豆香浓郁的感觉吸油纸法：膨化大豆外边油份大镜检法：显微镜下油脂分子分布不均匀筛下豆、豆瓣、劣质豆加工膨化大豆：毒素检测法：毒素超标灰分检测法：灰分值偏高价格测算法：与膨化大豆使用价值公式偏离较大第二页膨化大豆的脲酶的专业控制（已设计好）。

全脂膨化大豆的加工及品质检测在上世纪60年代末，人们已在肉鸡饲喂中进行了熟化全脂大豆的应用研究。

随着人们对全脂膨化大豆营养价值的认识加深和膨化工艺的逐步完善，全脂膨化大豆作为高能高蛋白饲料资源越来越多地应用于畜禽饲料中，在饲料生产中使用全脂膨化大豆来降低成本，提高效益，具有十分重要的意义。

一、全脂膨化大豆的概念及其特点大豆蕴藏着极其丰富的营养物质，但由于生大豆内含有许多抗营养因子，如胰蛋白酶抑制因子、尿素酸、血球凝集素等不利于动物消化吸收的成分，所以不能直接用来饲喂动物。

通过热处理加工可以很容易地使这些有害因子的含量降低到可以饲用的安全范围之内。

所谓的全脂膨化大豆是将整粒大豆或粉碎后的大豆经过热处理加工，通常是经过膨化机，在加工的过程中不添加或提取任何物质而加工的产品，呈金黄色，多微孔、细粒状具有高能高蛋白的特性。

全脂膨化大豆在高能高蛋白饲料中有较高的使用价值，并且进行了140－170℃高温处理，降低了胰蛋白酶抑制因子、尿素酶等抗营养因子的活性，提高了利用率，而且它所含脂肪的热能比牛油、猪油高，且多属不饱和脂肪酸，饲料中可以减少添加的脂肪量，大豆在挤压膨化过程中，其物理、化学组成和性质都发生了不同程度的变化，其代谢能值及蛋白质和脂肪的消化率明显提高，各种氨基酸的消化率都在90％以上。

膨化以后，大豆具有较好的适口性和诱食性，提高畜禽的采食量。

膨化后的全脂大豆粉在去掉毒素的同时，保全了大豆的营养成分，权衡配合饲料中能值与蛋白质的限制性影响，可使蛋能比例维持在一个理想的水平上，使用全脂膨化大豆可以节省添加油脂设备和减少饲料中添加油脂的数量，避免了混合加油的不均匀现象，可以改善饲料外观，提高畜禽对饲料的适口性，并且可以减少饲料加工的粉尘浓度，减少混合机、制粒机的磨损，便于随时生产加工以及生产效率的提高。

二、全脂膨化大豆的加工工艺及工作原理常规的膨化加工工艺为：原料－筛选除杂－粉碎－膨化－冷却－成品打包。

不同方法测定大豆脲酶活性的比较研究杨奇慧舒璐钟剑锋摘要：用滴定法和增值法测定大豆粉在85℃和140℃下分别热处理0、45、90、135、180min的脲酶活性，并用0.2%KOH溶解法测定大豆粉在不同热处理下的蛋白质溶解度。

结果表明：在85℃条件下，处理0～180min 大豆粉的脲酶活性和蛋白质溶解度随着时间延长无明显变化；而在140℃条件下，大豆粉的脲酶活性和蛋白质溶解度随着处理时间的延长显著降低。

通过测定结果可见，同一样品用滴定法和增值法测得的脲酶活性在数值上不相等，不能互用，但蛋白质溶解度更能反映大豆粉受热过度的程度。

关键词：大豆粉；脲酶活性；蛋白质溶解度；pH增值法；滴定法众所周知，大豆含有较丰富的蛋白质、脂肪、碳水化合物等，是饲料生产中主要的植物蛋白质源之一，具有较高营养价值。

但是，大豆中含有多种抗营养因子，如蛋白酶抑制因子、植物凝集素、胃肠胀气因子、抗维生素因子、抗原蛋白等，这些抗营养因子阻碍营养物质在动物体内的利用，尤其是胰蛋白酶抑制因子的存在不仅会降低饲料营养成分的消化率和适口性，而且也会影响动物对蛋白质的消化吸收，对动物生长发育也产生不良的影响。

但是，胰蛋白酶抑制因子的测定较困难，而豆粕中脲酶活性与胰蛋白酶抑制因子活性呈正相关，所以通常通过测定脲酶活性来反映蛋白酶抑制因子的活性。

目前，脲酶活性的测定方法有滴定法（国标法）、pH增值法等，目前，对脲酶活性不同测定方法差异性的研究较少，本文拟对两种方法进行研究，以比较不同方法对测定结果的影响，为实际生产和理论研究提供依据和参考。

1 材料和方法1.1 实验材料大豆粉：将生大豆粉碎，过60目标准筛。

在85℃和140℃下分别处理0、45、90、135和180min冷却后装入封口袋保存备用。

1.2 化学试剂本实验所用试剂均为分析纯（AR），实验用水为蒸馏水。

1.3 测定方法1.3.1 pH增值法实验原理：将研细的试样与尿素缓冲液混合，尿素在尿素酶作用下水解产生氨，使溶液pH 值改变，改变的程度与脲酶活性大小相关，因此可以用其与空白溶液的差值表示脲酶活性高低，单位为△pH值。

随着膨化技术在饲料工业中推广普及，越来越多的饲料生产商在配方中使用膨化大豆粉，与其它蛋白资源一样，大豆的适度熟化非常重要，熟化程度低会含抗胰蛋白酶等营养抑制因子，熟化度过高又会导致氨基酸利用率低。

判断膨化大豆粉是否合格的主要指标是脲酶活性。

脲酶活性是指：在30±5℃和PH值等于7的条件下，每分钟每克膨化大豆分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。

脲酶本身无营养意义，但它与抗胰蛋白酶的含量接近，并且遇热变性失活的程度与抗胰蛋白酶相似，因此，尿酶活性用来作为膨化大豆加热是否合适的间接估测指标。

脲酶活性没有负值，最低为0。

在我国现行的国标推荐值为0.3，在美国一般认为以不超过0.2为宜，并且针对日粮中有尿素的反刍动物而言不得超过0.12，当然对于家禽和猪0.3或稍高都可以接受。

国内很多大企业一般均采用0.2。

实验室定量测定脲酶活性的方法较复杂，有滴定法和pH增值法两种，已有研究表明两者对同一样品测得的数值也不相等。

目前国内绝大部分企业都采用快速而简单的简易判定方法定性地估测脲酶活性，一般来说，主要有如下两种方法。

一.液态法1.原理：大豆制品中的脲酶可使尿素分解成氨，会使酚红指示剂改变颜色。

2.试剂2.1尿素:GB696，分析纯。

2.2酚红指示剂2.2.1称取0.1g酚红，加1.43mL0.1mol/L氢氧化钠溶液，在研钵中研磨以促溶解；2.2.2转移至250mL定量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀备用。

3.操作方法3.1取0.2g粉末样品，置于25mL比色管中。

3.2加0.02g尿素，加酚红指示剂2滴，再加水20mL，充分摇匀15s。

3.3记录粉红色出现时间，并根据时间判断尿酶活性，颜色出现时间应少于15min。

颜色出现时间脲酶活性1min 极强1～5min 强5～15min 稍有15min 无同时作空白对照试验。

样品空白(不加尿素)及试剂空白(不加样品)，只有上述空白正常时，即酚红指示剂不改变颜色，试验结果才是可靠的。

大豆制品中尿素酶活性的两种快速检测法饲料公司酚红法1原理酚红指示剂在pH6.4~8.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶，在室温下可将尿素水解产生氨。

释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红的时间长短来判断尿素酶活性的大小。

2仪器和试剂2.1粉碎装置粉碎时应不产生强烈发热（如研钵、球磨机）；2.2天平感量0.01 g；2.3 试管直径18 mm，150 mm；2.4尿素；2.5酚红试剂1g/L乙醇溶液。

3测定步骤将试样研细，称取0.02 g试样，称准至0.01 g，转入试管中。

加入0.02 g结晶尿素及2滴酚红指示剂，加20~30 mL蒸馏水，摇动10 s。

观察溶液颜色，并记下呈粉红色的时间。

4尿素酶活性的测定结果表示1 min内呈粉红色为：活性很强；1~5 min内呈粉红色为：活性强；5~15 min内呈粉红色为：有点活性；15~30 min内呈粉红色为：没有活性。

注：通常，10 min以上不显粉红色或红色的大豆制品，其尿素酶活性即认为合格。

饲料公司pH-增值法本法是美国、日本和前苏联等国常用方法。

尿素水解释放的氨是碱性的，可使溶液pH值升高。

试样反应30 min后，与空白溶液的pH之差数，可间接用来表示氨量的多少。

1. 仪器设备1.1 恒温水浴须能保持温度于30℃±0.5℃；1.2 酸度计（pH计）具有玻璃电极、甘汞电极、可测试5 mL 的溶液。

此为一种精密仪器，须装有温度补正器，其敏感度应为±0.02 pH单位或更佳。

仪器操作及pH值测定均应依照制造商的说明，该pH计应在测定前以标准缓冲液加以校正。

1.2试管20 mm×150 mm并配有橡皮塞。

2. 试剂2.1 取0.05 mol/L磷酸盐缓冲液溶解3.403 g磷酸二氢钾（KH2PO4）于约100 mL新蒸馏水中，溶解4.335 g磷酸氢二钾（K2HPO4）于约100 mL的蒸馏水中，然后将此两种溶液合并配成1000 mL。

大豆制品中尿素酶活性测定方法1 适用范围本标准适用于由大豆制得的产品和副产品中尿素酶活性的测定。

本法可确认大豆制品的湿热处理程度。

2 定义本标准所指尿素酶活性定义如下：在30±0.5℃和pH7的条件下, 每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。

3 原理将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min, 尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。

用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。

4 仪器设备4.1 样品筛: 孔径200μm;4.2 酸度计: 精度0.02pH, 附有磁力搅拌器和滴定装置;4.3 恒温水浴: 可控温30±0.5℃;4.4 试管: 直径18mm, 长150mm, 有磨口塞子;4.5 精密计时器;4.6 粉碎机: 粉碎时应不生强热(例如球磨机)4.7 分析天平: 感量0.1mg;4.8 移液管: 10ml。

5 试剂和溶液5.1 尿素(GB 696-77): 分析纯;5.2 磷酸氢二钠(GB 1263-77): 分析纯;5.3 磷酸二氢钾(GB 1274-77): 分析纯;5.4 尿素缓冲溶液(pH6.9至7.0): 4.45g磷酸氢二钠(5.2)和3.40g磷酸二氢钾(5.3)溶于水并稀释至1000ml, 再将30g尿素(5.1)溶于此缓冲溶液中, 可保存1个月。

5.5 盐酸(GB 622-77): 分析纯, 0.1M溶液;5.6 氢氧化钠(GB 629-77): 分析纯, 0.1M标准溶液, 按GB 601标准溶液制备方法的规定配制。

6 试样的制备用粉碎机(4.6)将10g试样粉碎, 使之全部通过样品筛(4.1)。

对特殊试样（水分或挥发物含量较高而无法粉碎的产品）应先在实验室温度下进行预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失重计算在内。

7 测定步骤称取约0.2g已粉碎的试样, 称准至0.1mg, 转入试管(4.4)中(如活性很高只称0.05g试样)移入10ml尿素缓冲溶液(5.4), 立即盖好试管并剧烈摇动, 马上置于30±0.5℃恒温水浴(4.3)中, 准确计时保持30min。

膨化大豆鉴别方法
膨化大豆富含蛋白质、油脂、矿物质和维生素，具有极高的营养价值，质优价廉，氨基酸平衡性好，是配制乳猪料和哺乳母猪料的重要高能高蛋白饲料原料，可提高仔猪的采食量，提高养分消化率，减轻过敏反应，加快生长速度，有利于改善仔猪的生长性能和哺乳母猪的泌乳能力。

建议在断奶仔猪料和哺乳母猪料中添加6-24%。

膨化大豆因工艺不同，有干法和湿法之分，其主要区别在感官、膨化程度、香
目前市场上出现了大量掺入玉米、玉米胚芽或豆粕进行膨化的掺假膨化大豆，所以在采购膨化大豆时可以从以下几点进行鉴别：
①
询问膨化大豆的原料：是进口大豆还是国产大豆。

②
询问膨化大豆加工工艺：是湿法还是干法。

③
要求膨化大豆供应商提供蛋白、脂肪含量和尿酶活性等指标。

丰泽公司可免费为客户提供检测服务。

膨化大豆富含蛋白质、油脂、矿物质和维生素，具有极高的营养价值，质优价廉，氨基酸平衡性好，是配制乳猪料和哺乳母猪料的重要高能高蛋白饲料原料，可提高仔猪的采食量，提高养分消化率，减轻过敏反应，加快生长速度，有利于改善仔猪的生长性能和哺乳母猪的泌乳能力。

建议在断奶仔猪料和哺乳母猪料中添加
6-24%。

膨化大豆因工艺不同，有干法和湿法之分，其主要区别在感官、膨化程度、香味
目前市场上出现了大量掺入玉米、玉米胚芽或豆粕进行膨化的掺假膨化大豆，所以在采购膨化大豆时可以从以下几点进行鉴别：
①
询问膨化大豆的原料：是进口大豆还是国产大豆。

②
询问膨化大豆加工工艺：是湿法还是干法。

③
要求膨化大豆供应商提供蛋白、脂肪含量和尿酶活性等指标。

河北农业大学硕士（毕业）论文文献综述膨化全脂大豆的研究进展及其在断奶仔猪上的应用ｊ年—Ｌ剐百蛋白质是动物必需的一种营养物质，在机体内发挥着重要的作用。

仔猪断奶后必须从饲料中摄取足够的蛋白质，才能维持正常的生命和生产活动，同时防止各种缺乏症的出现。

大豆是一种优良的蛋白质资源，其中含有３５％的粗蛋白，而且必需氨基酸丰富平衡，它为全世界提供了超过１／４的油脂和２／３的蛋白质。

但生大豆中含有胰蛋白酶抑制因子（ＴＩ）等抗营养因子和抗原蛋白——大豆球蛋白和１３—伴大豆球蛋白，用生大豆喂仔猪会引起仔猪腹泻及生产性能的降低。

早期断奶仔猪腹泻是影响仔猪生产的一个世界性难题。

近二十年的研究表明：饲粮是引起仔猪断奶后腹泻的重要原因。

饲粮的蛋白质水平和来源、纤维物质、饲料的酸碱性、矿物质及抗营养因子均与腹泻有关。

其中蛋白质水平是引起腹泻的直接原因之一，高蛋白日粮比低蛋白日粮更易造成腹泻。

Ｓｔｏｋｅｓ等（１９８７）…观察到３周龄断奶仔猪采食大豆为唯一蛋白质来源的饲粮后第５天发生超敏反应，一周后超敏反应消失。

Ｌｉ等（１９９１）”１测出早期断奶仔猪采食大豆蛋白后血液中含有高水平的抗大豆抗体ＩｇＧ。

因此如何去除大豆中的抗原物质及抗营养因子，降低或消除其抗营养作用，提高大豆的营养价值，是多年来人们十分关心的研究课题。

为了降低大豆对断奶仔猪腹泻及生产性能的不利影响，提高大豆中各种养分的利用率，人们对大豆产品的加工工艺进行了无数研究。

０ｓｂｏｒｍｅ和Ｍｅｎｄｅｌ（１９１７）”１首次发表了关于热处理可以极大地改善大豆对生长鼠的营养价值的研究报道。

２０世纪５０年代美国将膨化技术应用于饲料工业。

挤压膨化的高温、高压、高剪切力的瞬时作用，有利于蛋白质的变性、淀粉的糊化及大豆油细胞的破裂，从而提高大豆的营养价值，因此受到人们的普遍关注。

到了８０年代该技术便成为国外发展速度最快的饲料加工新技术。

主要用于特种动物、水产饲料及断奶仔猪料的开发，最近１０年，在美国和欧洲，人们喜欢用整粒熟大豆饲喂家畜，膨化全脂大豆在畜禽上的应用得到了空前发展。

大豆膨化加工与营养质量1 大豆产地目前世界大豆生产主要集中于美国、巴西、中国、阿根廷、印度。

中国大豆主要来自东北三省（黑龙江省、吉林省、辽宁省）2 大豆常规营养成分大豆属于油籽实类作物，除了脂肪含量高以外，蛋白质含量也比较高。

与其他油籽相比，最大的特点是碳水化合物中粗纤维含量低，一般只有5%左右。

此外，粗灰分含量也不高。

详见表1.表1 大豆常规营养组成营养成分范围% 平均%粗蛋白粗脂肪碳水化合物粗灰分水分32-43.615.5-24.731.7-31.84.5-6.45.6-14371731510大豆蛋白的氨基酸组成明显比谷类蛋白的氨基酸组成更平衡。

相对动物的需要来说，仍然有一些不足。

含硫氨基酸明显不足。

组氨酸、赖酸、精氨酸处于临界满足需要，色氨酸特别高。

值得注意的是，大豆蛋白色氨酸高并不是坏事，在很多其他饲料中，包括动物性饲料，色氨酸含量都不高，配合饲料中使用大豆或豆粕胡利于弥补这些饲料色氨酸不足。

玉米豆粕或大豆型日粮，色氨酸一般是充分满足需要略有余，不会超过需要很多。

3 大豆膨化生产工艺膨化加工是一种高温短时间的加工工艺，能最大限度保证营养物质严重变质变性，最大限度提高营养物质利用效率。

最大限度避免大豆营养物质损失。

最大限度改善大豆对动物的适合程度，减少对采食量的影响。

最大限度提高产出投入比，充分发挥大豆的营养效率。

大豆膨化的生产工艺主要包括干法膨化、湿法膨化、挤压膨化。

从目前常用的膨化设备来看，膨化比挤压膨化更有优越性。

膨化机产量更大，耗能更少，膨化时间更短，这些都是不可多得的优点。

大豆其它的干燥方法包括：爆发、微波、烘炒等。

4 大豆膨化后常规营养价值变化从表2可知，膨化加工后的大豆，水分显著减少，粗纤维也减少，其他组成成分有不同程度增加。

无氮浸出物基本上不受加工影响。

膨化过程的损耗主要是水分，其他营养物质的损耗不到1%。

表2 大豆膨化后常规营养价值变化营养成分生大豆膨化大豆水分（%）粗蛋白质（%）粗脂肪（%）粗纤维（%）无氮浸出物（%）损耗率（%）14.2336.6517.026.7225.385.679.3838.2118.114.3529.955 膨化大豆验收标准（1）脲酶活性脲酶本身无营养意义，但它与抗胰蛋白酶的含量接近，而且遇热变性失活的程度与抗胰蛋白酶相似，因此可用脲酶活性来作为豆粕加工适宜程度的间接估测指标。

出口大豆饼粕脲酶活性测定方法pH增值法、盐酸中和法1.适用范围本方法适用于大豆饼粕类脲酶活性的测定。

2.方法一2.1.术语脲酶活性：在规定的操作条件下，使试样中的脲酶分解尿素释放出氨基氮，以溶液pH值的变量表示。

2.2.原理概要将研细的试样与缓冲尿素溶液混合，在30℃作用30min后，测定溶液的pH值。

2.3.主要试剂和仪器2.3.1.主要试剂磷酸缓冲溶液：将3.403g KH2PO4和4.355g K2HPO4溶解并稀释至1000mL。

临用前，以强酸或强碱调节其pH至7.0，其使用期限不超过90d；缓冲的尿素溶液：溶15g尿素（NH2CONH2）于500mL磷酸缓冲溶液中。

加入5mL甲苯，用于防腐和防止霉菌生长。

按上法调节其pH至7.0。

2.3.2.仪器分析天平：感量0.1mg；研磨器：易于清理，研磨过程中不发热，并能达到要求的磨粉细度；恒温水浴：能控制于30±0.5℃；pH计：备有玻璃电极和甘汞电极，灵敏度不低于±0.02pH单位，同时附有温度补偿；试管：直径22mm，长150mm，具橡胶塞；烧杯：容量10mL；单刻度移液管：10mL；精密计时器；标准筛。

2.4.试样的制备用研磨器将约10g的样品，在不升高温度的条件下尽可能研细，使其通过60目标准筛的量不少于60％。

收集全部磨碎物于广口瓶中，小心混合并立即进行分析。

2.5.过程简述准确称取试样0.200g，放入试管内，加10mL缓冲的尿素溶液，塞好橡胶塞，混匀。

置于30±0.5℃水浴中，记下时间。

隔5min放入第二个与此相同的试管作重复试验。

另称试样0.200g，放另一试管内，加10mL磷酸缓冲溶液，塞好橡胶塞，混匀，作为空白试验。

与上管间隔5min置于同一水浴中。

在消化过程中，每隔5min将试管内容物都摇匀一次。

每个试管都在消化30min后，从水浴中取出，倒出上清液于小烧杯中。

并在从水浴中取出后恰好5min时，测定pH 值读数。