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液质联用分析重组人白细胞介素-11的肽图

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注射用重组人白介素-11

注射用重组人白介素-11
【禁忌】
同类产品国外曾发生严重过敏反应。因此对重组人IL-11及本品中其它成分过敏者禁用，对血液制品、大肠杆菌表达的其他生物制剂有过敏史者慎用。
【注意事项】
1. 本品应在化疗后24-48小时开始使用，不宜在化疗前或化疗过程中使用。 2. 使用本品过程中应定期检查血象（一般隔日一次），注意血小板数值的变化。在血小板升至100×109/L时应及时停药。 3. 器质性心脏病患者，尤其充血性心衰及房颤、房扑病史的患者慎用。 4. 使用期间应注意毛细血管渗漏综合征的监测。如体重、浮肿、胸腹腔积液等。 5. 该药仅供医嘱或在医生指导下使用。
【药物过量】
可引起水钠潴留、房颤等毒副反应，应减量使用或停药，并严密观察。
【药理毒理】
药理作用 本品是应用基因重组技术生产的一种促血小板生长因子，可直接刺激造血干细胞和巨核祖细胞的增值，诱导巨核细胞的成熟分化，增加体内血小板的生成，从而提高血液血小板计数，而血小板功能无明显改变。 临床前研究表明，体内应用本品后发育成熟的巨核细胞在超微结构上完全正常，生成的血小板的形态、功能和寿命也均正常。毒理研究安全性药理：在各种动物模型上，观察到本品的一些非造血系统效用，包括控制肠上皮细胞生长、抑制脂质形成、诱导急性期反应蛋白合成、抑制巨嗜细胞分泌促炎症细胞因子、刺激破骨活动及神经发生等。重复给药毒性：非人灵长类动物连续给药2～13周，未见关节囊和肌腱纤维化及骨膜增厚现象，但长期用药患者是否会有类似改变目前尚不清楚。遗传毒性：体外研究显示本品无致突变作用。生殖毒性：在正常人用剂量的2～20倍时，可见大鼠的发情期延长，但即使剂量高达1000μg/kg/天，对大鼠的生育力也未见影响。 在大鼠生育力及早期胚胎发育研究和大鼠、家兔器官形成期研究中，大鼠用药剂量在人用的2～20倍(不低于100μg/kg/天)，家兔在人用剂量的0.02～2倍(不低于1μg/kg/天)时，可见母体毒性。大鼠试验中可见母鼠一过性活动减少和呼吸困难、发情期延长、早期胚胎死亡率增加、胎仔存活率降低等。另外，在人用剂量的20倍时，可见大鼠胚胎重量下降和胚胎发育延迟（骨化的骶、尾椎椎骨数量减少），但未见长期的行为或发育异常。家兔可见摄食和排泄量减少、体重减轻、流产、胚胎及胎仔死亡率增加等，但未见致畸作用。目前尚无充分的和严格对照的孕妇临床研究资料，只有当本品的潜在益处大于对胎儿的潜在危害时，才可在孕期使用本品。 尚不清楚本品是否从人乳中分泌，鉴于许多药物都可从人乳中分泌，且本品可能给哺乳期婴儿带来严重的不良反应，应根据该药对究显示，本品对一系列来源于不同患者的肿瘤细胞尚未表现出生长刺激作用。

重组人白介素-11，你用对了吗？

重组人白介素-11，你用对了吗？

重组人白介素-11，你用对了吗？物致于此小得盈满今日小满——其含义是夏熟作物的籽粒开始灌浆饱满，但还未成熟，只是小满，还未大满。

血小板减少症定义血小板减少症指外周血血小板计数( PLT) ＜100 × 109 /L。

血小板＜50 × 109 /L 时，即存在皮肤、黏膜出血的危险性;血小板＜20 × 109 /L 时，有自发性出血的高度危险性;血小板＜10 × 109 /L 时则有极高度危险性。

血小板减少原因血小板数量减少是出血性疾病最常见的病因。

单纯血小板减少症的病因可分为血小板生成减少、血小板破坏增加和血小板分布异常三大类。

血小板生成减少主要见于放/化疗所致骨髓抑制、再生障碍性贫血(AA)、急性白血病(AL) 以及感染等。

血小板减少症的治疗对于血小板减少症的治疗，首先为病因处理，例如对于 ITP，可以采用糖皮质激素、丙种球蛋白以及脾切除治疗;对于AA 可采用免疫抑制方案等治疗。

血小板输注主要用于预防和治疗血小板减少或血小板功能缺失患者的出血症状，恢复和维持人体正常止血和凝血功能;并不适用于所有的血小板减少情况。

2007 年，美国血液学协会(ASH)以及· 2014 年美国血库协会(AABB)先后发布《血小板输注指南》，明确提出：预防性血小板输注的阈值为患者外周血 PLT ＜10 × 109 /L;而治疗性血小板输注仅推荐用于患者存在明显的出血症状，或预期将实施侵入性操作前输注血小板。

对于因血小板减少而非血小板功能缺陷发生显著出血的患者，为了获得持续的后续升血小板效应，可以考虑在血小板输注的同时，应用促血小板生成药物，例如重组人白介素-11 ( rhIL-11 ) 等。

重组人白介素-11药物简介rhIL-11白介素-11( IL-11) 是由造血微环境基质细胞和部分间叶细胞产生的多效性细胞因子。

IL-11 通过与细胞表面特异性受体-配体结合链 IL-11Ｒα 结合，并连接到信号传导链可溶性糖蛋白 130(gp130)后发挥其生物学作用，可以直接作用于骨髓巨核系祖细胞、巨噬细胞、T 细胞、上皮细胞和肝细胞，具有促进巨核细胞和血小板生成、调控免疫、抗炎和保护黏膜上皮等多种功能。

重组人血管内皮生长因子抑制剂理化对照品质控方法及质量标准的建立

重组人血管内皮生长因子抑制剂理化对照品质控方法及质量标准的建立

在进行新生物制品产品开发时，首先要做的一项工作是建立理化对照品及活性标准品。

理化对照品主要用于产品肽图、等电点、相对分子质量、纯度等理化性质的检测；活性参考品主要用于产品生物学活性的检测［1］。

进行理化对照品质量标准及质量方法的研究既便于检测和跟踪产品质量的一致性和稳定性，也是产品进一步走向临床和市场的必然要求，《中国药典》三部（2015版）也对其提出了明确规定［2-3］。

重组人血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）抑制剂是有VEGF阻断作用的重组蛋白，由2种不同的人VEGF受体VEGFR1和VEGFR2的细胞外区域，融合到人免疫球蛋白IgG1的Fc部分组成，是一种二聚体糖蛋白，其蛋白质相对重组人血管内皮生长因子抑制剂理化对照品质控方法及质量标准的建立毕华，陶磊，韩春梅，秦玺，范文红，杨靖清，丁有学，饶春明中国食品药品检定研究院重组药物室，北京100050摘要：目的建立重组人血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）抑制剂理化对照品质控方法及质量标准。

方法利用HEK293细胞增殖抑制法测定重组人VEGF抑制剂理化对照品生物学活性；紫外分光光度法测定蛋白含量；质谱法进行相对分子质量测定、液质肽图及糖基化位点分析、二硫键分析、N-寡糖糖型及比例分析；SDS-PAGE及SEC-HPLC法分析纯度；等点聚焦法进行电荷异质性分析；Edman降解法进行N-末端氨基酸序列分析。

结果重组人VEGF抑制剂理化对照品各项检定指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部（2015版）相关要求。

结论建立的质控方法和质量标准符合理化对照品的相关规定，具有保证该理化对照品结构正确、质量可控的特点。

检定合格的理化对照品可用于该类产品的常规检定。

关键词：血管内皮生长因子抑制剂；理化对照品；质量控制中图分类号：R979.1+9R392-33文献标识码：A文章编号：1004-5503（2017）08-0833-05Establishment of methods and standard for quality control ofphysicochemical reference substance for recombinanthuman vascular endothelial growth factor inhibitorBI Hua,TAO Lei,HAN Chun-mei,QIN Xi,FAN Wen-hong,YANG Jing-qing,DING You-xue,RAO Chun-mingNational Institutes for Food and Drug Control,Beijing100050,ChinaCorresponding author:RAO Chun-ming,E-mail:raocm@；DING You-xue,E-mail:dingyouxue@Abstract：Objective To establish the methods and standard for quality control of the physicochemical reference sub-stance for recombinant human vascular endothelial growth factor inhibitor（rhVEGF inhibitor）.Methods The biological activity of reference substance for rhVEGF inhibitor was determined by HEK293cell proliferation inhibition test,while the protein content by ultraviolet（UV）spectrophotometry.The relative molecular mass,liquid peptide map,glycosylation site, disulfide bond,type and proportion of N-oligosaccharide of the reference substance were analyzed by mass spectrometry, while the purity by SDS-PAGE and SEC-HPLC,the charge heterogeneity by isoelectric focusing,and the N-terminal amino acid sequence by Edman degradation method.Results All the indexes of rhVEGF inhibitor met the requirements in Guideline for Quality Control of Recombinant DNA Products for Human Use and Chinese Pharmacopoeia（Volume III, 2015edition）.Conclusion The established methods and standard met the requirements for the relevant physical and chemical reference substances,which may assure that the structure of the reference substance is correct and the quality is controllable.The qualified reference substance may be used for the routine quality control of products of the same kind.Key words：Vascular endothelial growth factor（VEGF）inhibitor;Physicochemical reference substance;Quality control·治疗性制剂·通讯作者：饶春明，E-mail：raocm@；丁有学，E-mail：dingyouxue@DOI:10.13200/ki.cjb.001845分子质量为96900。

人白细胞介素10IL-10酶联免疫分析ELISA

人白细胞介素10IL-10酶联免疫分析ELISA

人糖基化依赖的细胞黏附分子（GlyCAM-1）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中糖基化依赖的细胞黏附分子（GlyCAM-1）的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人糖基化依赖的细胞黏附分子（GlyCAM-1）水平。

用纯化的人糖基化依赖的细胞黏附分子（GlyCAM-1）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入糖基化依赖的细胞黏附分子（GlyCAM-1），再与HRP标记的糖基化依赖的细胞黏附分子（GlyCAM-1）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的糖基化依赖的细胞黏附分子（GlyCAM-1）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人糖基化依赖的细胞黏附分子（GlyCAM-1）含量。

试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

重组人白细胞介素_11的胰蛋白酶切肽图分析

重组人白细胞介素_11的胰蛋白酶切肽图分析

重组人白细胞介素211的胰蛋白酶切肽图分析饶春明3,张　翊,韩春梅,王军志(中国药品生物制品检定所生化室,北京100050)摘要:目的　建立标准肽图分析法,用于rhIL211的质量控制。

方法　应用Alliance HPLC系统及其温控自动进样器探索最佳胰蛋白酶切和色谱条件。

结果　连续3批rhIL211样品的RP2HPLC图谱完全一致,与rhIL211对照品比较,有20个峰与对照品吻合,但第6峰的峰高和峰面积均明显较小,且在第9和第10峰之间多一个峰,说明rhIL2 11样品蛋白质结构与对照品比较存在细小差别。

这种差别经多肽片段分离和氨基酸序列测定证明是由于样品N端多2个氨基酸引起的。

结论　本法精确度高、重复性好、自动化程度高,可用于rhIL211的质量控制。

关键词:重组人白细胞介素211;肽图;Alliance HPLC系统;胰蛋白酶切中图分类号:R927 文献标识码:A 文章编号:0513-4870(2000)05-0378-03 重组人白细胞介素211(rh IL211)为血小板生长因子,可刺激造血干细胞和巨核细胞母细胞的增殖,并诱导巨核细胞的成熟,从而增加血小板的生成[1,2]。

由美国G enetic Institute(简称GI)研制的rh IL211为177个氨基酸,比天然成熟的人IL211在N端少一个氨基酸;成都地奥九泓制药厂生产的大肠杆菌表达的rh IL211为179个氨基酸,比天然成熟的人IL211在N端多一个氨基酸,目前已进入新药研究阶段。

肽图分析是评价重组产品蛋白质结构及其生产工艺稳定性的重要方法,目前常用的方法有CNBr 裂解SDS2PA GE微量肽图法和胰蛋白酶切RP2 HPLC肽图法[3]。

本文用Alliance HPLC系统及其温控自动进样器摸索rh IL211肽图分析最佳胰蛋白酶切条件,在此条件下对成都地奥九泓制药厂生产的连续三批重组人白细胞介素211进行肽谱分析,并与GI公司研制的rhIL211比较,得到较好结果。

蛋白质、多肽类药物质量控制

蛋白质、多肽类药物质量控制
原理：蛋白质与硫酸和催 化剂一同加热消化，使蛋 白质分解，分解的氨与硫 酸结合生成硫酸铵。然后 在碱性条件下蒸馏将铵盐 转化为氨，随水蒸气蒸馏 出来并为过量的硼酸液吸 收，再以硫酸或盐酸标准 溶液滴定，计算出样品中 的氮量。由于蛋白质含氮 量比较恒定，蛋白质含量 =含氮量/16%，可由其氮 量计算蛋白质含量。
原理 • 样品与特殊基质混合形成 结晶，激光作用于晶体使 之直接气化并离子化。
优点 • 分析速度快，灵敏度高， 能忍受高盐样品。
缺点 • 背景信号大，不适于质荷 比太小的样品。
2.3 有关物质
工艺杂质 • 缺失肽，插入肽，未脱保 护肽。
降解产物 • 多肽氧化、还原、水解、 脱酰胺、二硫键错配。 聚合物 • 二聚体，多聚体。
3.8 蛋白质印迹法
适用 1～5ng蛋白质，用于细 范围 胞中特异蛋白质的测定。
优点 灵敏度高，特异性强。
缺点 成本高，技术难度大。
3.9 高效液相色谱法
原理：酪氨酸，苯丙氨酸和色氨酸残基在280nm处 有紫外吸收，吸光度与蛋白质含量成正比。反相 HPLC可以分析多肽，更大分子量的多肽需要用凝 胶过滤色谱柱。
2.1 氨基酸分析
2.1.1 酸水解 6mol/L盐酸，110℃，真空，20-24小时。
优点：氨基酸不消旋。
2.1 氨基酸分析
2.1.2 碱水解 5mol/L氢氧化钠溶液，充氮封管，110℃，22小时。
优点：色氨酸稳定。
2.1 氨基酸分析
2.1.3 酶水解 一组蛋白酶
优点：条件温和，氨基 酸不消旋，不被破坏。
3.9 高效液相色谱法
适用 范围
10-9～10-12g蛋白质。
优点
高灵敏度，快速分 析。
缺点

rhIL-11 2018共识--20180403

rhIL-11 2018共识--20180403

使用rhIL-11和（或）rhTPO
密切观察血小板及出血情况
注：
1、化疗后6-24小时即可以应用，rhIL-11推荐剂量为50μg/kg，皮下注射，每天1次，连用7-14 天 2、停药指征：血小板≥100×109/L 或至血小板较用药前升高50×109/L，在下一个周期化疗开始前2 天及化疗中不 得用药 3、对于因血小板减少而非血小板功能缺陷发生显著出血的患者，为获得持续的升血小板效应，可以考虑在血小板 输注的同时使用促血小板生成药物
指南及共识推荐
其他权威推荐：再生障碍性贫血诊断与治疗中国专家共识，卫生部血液内科临床路径等。
付蓉. 再生障碍性贫血诊断与治疗中国专家共识(2017年版)[J]. 中华血液学杂志, 2017, 38(1):15. 中国抗癌协会临床肿瘤学协作专业委员会. 肿瘤化疗所致血小板减少症诊疗中国专家共识(2014 版)[J]. 中华肿瘤杂志, 2014, 36(11):876-879.
CIT与的危险因素
年龄 体能评分（ECOG） 骨髓转移 既往化疗周期
既往接受过放疗，特别是长骨、扁骨
治疗方案（否含铂类、吉西他滨、阿糖胞苷、蒽环等化疗药）
Y.Hashiguchi, T.Fukuda, T.Ichimura,et al. Chemotherapy-induced thrombocytopenia and clinical bleeding in patients with gynecologic malignancy.EJGO. 2014, 168-173
SaitohM, et al. Recombinant human interleukin-11 improved carboplatin induced thrombocytopenia without affecting antitumor activeties in mice bearing. Lewis lung carcinoma cells. Cancer Chemother Pharmacol, 2002, 49: 161- l66.

IL 9-11因子介绍

IL 9-11因子介绍

IL-9因子介绍最后更新：2008-8-14 阅读次数：15 【字体：小中大】1988年Uyttenhove等报道了一种来自小鼠T细胞的细胞因子，能支持某些Th细胞克隆的生长，分子量在30～40kDa，又称T细胞生长因子-Ⅲ(T cell growth factor Ⅲ,TCGF-Ⅲ)或P40。

人IL-9最初是从HTLV桰感染的T细胞系培养上清中发现的，能刺激人巨核细胞白血病细胞株Mo7e的增殖。

1990年命名为IL-9。

1.IL-9的产生IL-9由活化T细胞(主要是CD4+T细胞)产生，PHA或抗CD3McAb、Ca2+载体可诱导T细胞分泌IL-9，PMA有协同作用。

PMA和Ca2+载体刺激人PBMC可转录大量IL-9 mRNA。

此外，HTLV-Ⅰ转化的T细胞株C5MJ2细胞、肥大细胞也可产生IL-9。

目前还没有检测到静止T细胞或活化B细胞中有IL-9 mRNA的表达。

2.IL-9的分子结构和基因人和小鼠IL-9基因结构相似，在DNA水平上有67％同源性。

人IL-9基因由5个外显子和4个内含子组成，基因长约4kb, 与IL-3、IL-4、IL-5、M-CSF、GM-CSF、c-fms、PDGFR基因位于第5号染色体中，在小鼠位于13号染色体。

IL-9基因5'非翻译区(UTR)含有TA TA盒以及活化蛋白(activator protein, AP) 1,2和3，NF-κB, specificity protein-1(SP-1)位点和糖皮质激素反应元件(GRE)等识别位点。

小鼠IL-9分子的前体由144个氨基酸残基组成，含18个氨基酸残基的信号肽。

人成熟IL-9由126个氨基酸残基组成,分子量为14.2kDa。

人和小鼠IL-9在氨基酸水平有56％同源性,均含有10个保守的半胱氨酸,在生理情况下可能形成复杂的二硫键。

IL-9为碱性蛋白，有多个N糖基化点。

3.IL-9受体IL-9 R结构上属于红细胞生成素受体超家族(ERS)，与配体结合为高亲和力。

AssayMAP技术进行溶液内蛋白酶解、肽段纯化以及肽段的

AssayMAP技术进行溶液内蛋白酶解、肽段纯化以及肽段的

摘要液质联用鉴定肽段的样品制备，通常由多步骤工作流程组成，包括溶液内蛋白酶解、肽段纯化，以及肽段分馏。

该过程通常需要根据样品特性及分析目的（即定量或表征）定制为具体的应用方法。

样品制备工作流程的自动化可提高样品处理能力、降低差异性，并且无需熟练操作人员执行重复工作。

然而，自动化平台通常并不用于最初的分析开发，这是因为分析开发者很少具有开发复杂自动化方案的经验。

相反，分析通常是采用湿式工作台相关技术进行开发，然后在自动化专家的帮助下移植到自动化平台。

采用 AssayMAP 肽段样品制备解决方案，无需掌握专门的技术也能实现自动化操作。

开发者可通过一个简单的软件用户界面和灵活的实验方案对关键实验变量进行完全控制，从而能够专注于科学分析研究。

如今，分析开发者、科学家或技术员无需具备自动化专业知识也能实现可扩展、精确的自动化操作。

采用 AssayMAP 平台，整个工作流程可直接在相同的硬件上进行开发，如需实现高通量样品前处理，也易于对硬件进行扩展，从而可减少或避免已有实验方案实现自动化所需的额外时间和资源。

本文将介绍发现（鸟枪法）蛋白组学研究的一种常规液质联用工作流程，包括溶液内酶解、反相肽段纯化，以及肽段的强阳离子交换分馏 (SCX)，所有这些操作均由 AssayMap Bravo 液体处理器完成。

采用 SCX 小柱通过增加 pH 或离子强度对大肠杆菌蛋白裂解液进行逐步洗脱，在六个 SCX 馏分中鉴定出 15000 多条特定肽段序列，其中 64-67% 的肽段可专属性地在其中一个馏分中得到鉴定。

自动化液质联用工作流程：采用 AssayMAP 技术进行溶液内蛋白酶解、肽段纯化以及肽段的强阳离子交换分馏应用简报作者Jason D. Russell 、Zachary Van Den Heuvel 、Michael Bovee 及 Steve Murphy 安捷伦科技有限公司 美国威斯康星州麦迪逊临床研究实现湿式工作台类型的分析开发。

白介素-11衍生物临床研究进展

白介素-11衍生物临床研究进展

长期毒性实验
– 猕猴皮下注射百杰依长毒研究 皮下给药给 猕猴皮下注射百杰依长毒研究:皮下给药给 药60天，100µg/kg/d组无明显毒副作用；300 天 组无明显毒副作用； 组无明显毒副作用 µg/kg/d组对动物的食欲、体重有一定影响， 组对动物的食欲、 组对动物的食欲 体重有一定影响， ALP、BUN、BI、Fe指标有所升高，表明该 指标有所升高， 、 、 、 指标有所升高 剂量有一定毒性； 剂量有一定毒性；1000 ukd组还可观察到心电 组还可观察到心电 图变化，为明显中毒剂量。 图变化，为明显中毒剂量。 – 大鼠皮下注射 大鼠皮下注射rhIL-11衍生物长毒研究 皮下 衍生物长毒研究:皮下 衍生物长毒研究 给药45天 为安全剂量;450ukd可 给药 天.150µg/kg/d为安全剂量 为安全剂量 可 出现轻度毒性； 出现轻度毒性；1350µg/kg/d能使动物产生明 能使动物产生明 显毒性反应， 显毒性反应，故为该药的中毒剂量 – 各组指标的变化在停药后可恢复正常
189.38±54.27 ± 115±10 ± 277.10±40.79 ± 242±19 ±
5.14±0.92 ± 8.0±2.1 ± 6.33±0.76 ± 8.1±0.5 ±
国外白介素-11 25µg/kg 国外白介素
百杰皮下注射40µg/kg 百杰皮下注射
国外白介素-11 50µg/kg 国外白介素
项目
Tmax(hr)
Cmax(ng/ml)
AUC (ng×hr/ml) ×
T1/2(hr)
百杰依皮下注射25µg/kg 百杰依皮下注射
2.49±1.20 ± 3.0±1.0 ± 1.76±0.80 ± 2.7±1.2 ±
18.28±5.82 ± 8.1±1.3 ± 25.50±4.98 ± 19.0±3.2 ±

抗人TNF-α单克隆抗体液质联用肽图分析方法的建立及验证

抗人TNF-α单克隆抗体液质联用肽图分析方法的建立及验证

生物检定抗人TNF-α单克隆抗体液质联用肽图分析方法的建立及验证*桂芳，杨兰兰，潘勇兵，张雅婷，张银川**（武汉生物制品研究所有限责任公司，武汉430207）摘要　目的：建立液相色谱-质谱联用肽图分析方法，用于抗人肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor alpha，TNF-α）单抗的专属性鉴别。

方法：TNF-α单抗样品经盐酸胍变性、还原，释放出的游离半胱氨酸残基进行烷化，还原剂中和过量的烷化剂。

超滤置换酶切缓冲液后进行胰酶酶切并终止。

色谱条件：采用Waters UPLC BEH 300 C18（2.1 mm×150 mm，1.7 μm）色谱柱，以0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸乙腈溶液（B）为流动相，梯度洗脱（5~120 min，2%B→45%B），流速为0.2 mL·min-1，检测波长为214 nm；质谱条件：采用电喷雾离子源及正离子模式，数据采集范围m/z为100~1 990。

结果：TNF-α单抗重链及轻链的6个互补决定区（CDR）对应肽段由质谱鉴定出，HC CDR2及HC CDR3在色谱峰图中共流出；利妥昔单抗用于评估本方法的专属性，结果显示本方法专属性强，且不受基质的干扰；选定m/z 1 344（M+5）的色谱峰为参考峰，根据CDR 的相对保留时间考察该方法的变异程度，5次重复测定CDR相对保留时间的RSD在0.57%~1.19%之间；中间精密度考察测定的相对保留时间的RSD在0.00%~1.08%之间；胰酶酶切比例在20∶1~30∶1，酶切时间在17~23 h范围内变化时，相对保留时间的均较小，符合方法耐用性的要求；样品消化后在8 ℃储存24 h以及-20 ℃储存5 d的稳定性良好。

结论：基于CDR相关肽段鉴别的液质联用肽图分析方法可定性鉴定出TNF-α单抗，方法学验证结果显示该方法适用于抗人TNF-α单抗的专属性鉴别，可用于其质量控制及批检验放行。

肽图分析在重组人甲状旁腺素1_34产品质量控制中的应用_曾文珊

肽图分析在重组人甲状旁腺素1_34产品质量控制中的应用_曾文珊

作者简介:曾文珊,女,硕士研究生,副主任药师 Tel :(020)26282594 E -mail :zengwenshan @ 肽图分析在重组人甲状旁腺素1-34产品质量控制中的应用曾文珊2,廖海明1,杨仲元2,徐康森1(1.中国药品生物制品检定所,北京100050;2.广州市药品检验所,广州510160)摘要:目的　通过肽图谱分析,鉴定重组人甲状旁腺素1-34产品一级结构的完整性和准确性。

方法　采用胰蛋白酶裂解-反相高效液相色谱法测定肽图;用LC -MS /MS 和N 端氨基酸测序鉴定产品氨基酸序列。

结果　建立重组人甲状旁腺素1-34产品肽图测定法,并鉴定出肽图异常产品的氨基酸序列。

结论　肽图分析能有效地控制重组人甲状旁腺素1-34产品一级结构的完整性和准确性,对该产品的质量控制具有重要意义。

关键词:肽图谱分析;重组人甲状旁腺素1-34;胰蛋白酶裂解-反相高效液相色谱法;液相色谱-质谱联用;氨基酸序列中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:1001-2494(2006)13-1020-03Significance of Peptide Mapping in the Qu ality C ontrol of Recombinant Human Parathyriod Horm one 1-34ProductsZE NG Wen -shan 2,LIAO Hai -ming 1,YANG Zhong -yuan 2,XU Kang -sen 1(1.Natio nal Ins titute for the Control o f Phar maceutical and Biological Products ,Beijing 100050,China ;2.Guang zhou Institute for D ru g Co ntr ol ,Guang zhou 510160,China )ABSTRACT :OBJEC TIVE To identify the integrity and accuracy of the primary structure of Recombinant Human Parathyriod Hormone 1-34(rhPTH1-34)products by peptide mapp ing analysis .METHODS The peptide mapping was analyzed by trypsin digestion and RP -HPLC analysis .The amino acid seq uences of product were measured by LC -MS /MS and N -terminal sequence determination .RESULTS The pep -tide mapping analysis of rhPTH1-34products was establis hed .The amino acid sequences of rhPTH1-34product with a different peptide mappin g were measured .C ONCLUSION The peptide mappin g anal ysis can be used for the control of the integrity and accuracy of the primary struc -ture of rhPTH1-34products effectivel y .It has an important significance for the quality control of the products .KEY WORDS :peptide mapping analysis ;rhPTH1-34;trypsin digestion and RP -HPLC anal y s is ;LC -MS /MS ;amino acid sequences 肽图谱(peptide mapping )分析系通过蛋白酶或化学物质裂解蛋白质,采用适宜的分析方法鉴定蛋白质一级结构的完整性和准确性,它作为基因重组药物一级结构确证及质量控制的重要组成部分已用于许多重组DNA 产品的质量控制[1-4]。

重组人白细胞介素-11对化疗后口腔粘膜炎的疗效观察

重组人白细胞介素-11对化疗后口腔粘膜炎的疗效观察

ｒ ｇ ｌｒｙ ｅ ｕ ａ ｌ ．Ｒｅ ｕ ｔ ：Ｇｅ ｅ ａ ｅ ｆ ｃ ｉｅ ｒ ｔ ｆＩ ｓ ｌｓ ｎ ｒ ｌ ｆｅ ｔ ａ ｅｏ Ｌ一１ ｒ ｕ ｓ ７ ． ｖ ｇｏｐｉ ８ １ １
， ａ ｉｎ ｆｃ ｎ ｉ ｅ ｅ ｃ ｏ ａ ｅ ｔ ｒ ｕ ｒ ａ ｅ ｅ ｕ ａ ｌ （ ｈ ｄ ｓ ｉｉａ ｔｄｆ ｒ ｎ ｅｃ ｍｐ ｒ ｏ ｇ ｏ ｐ ｔｅ ｔ ｄ ｒｇ ｌ ｒｙ Ｐ＜ ０ Ｏ ） ｇ ｆ ． １ ．Ｃｏ ｅ ｕ ｎ ｌ—
重 组人 白细胞 介 素 一 １ １对 化 疗 后 口腔 粘 膜 炎 的疗 效 观 察
黄 小 红 周 娟 周 斌
【 要 】目 的 ： 察 重 组 人 白 细 胞 介 素 一 １ 摘 观 １对 化 疗 后 口 腔 粘 膜 炎 的 疗 效 方 法 ： ６ 对 ４例 化 疗 后 出现 口腔 粘 膜 炎 患 者 随机 分 为 两 组 ， 疗 组 接 受 重 组 治 人 白 细胞介 素 一ｌ １吉 巨芬 治 疗 （ ２例 ） 对 照 组 接 受 接 受 常 规 治 疗 （ ２例 ） 结 果 ： 疗 结 束 时 评 价 显 效 、 转 和 无 效 的 治 疗 组 患 者 分 别 为 ９例 ， ６例 和 ３ ， ３ 。 治 好 １
ｓｏ ： Ｉ ｉ ｎ Ｌ一 １ ａ ｉｎ ｆｃ ｎ ｎ ｅ ｔｉ ｈ ｒ ｐ ｕ ｉ ｆｅ ｔ ｎ ｏ ａ ｕ ｉ ｓｉ ｄ ｃ ｄ ｂ ｈ ｍ ｏ ｈ ｒ ｐ ． １ ｈ ｓ ｓ ｉ ａ ｔａ ｄ ｃ ｒａｎ ｔ ｅ ａ ｅ ｔ ｅｆ ｃ ｓｏ ｒ ｌｍ ｃｔ ｎ ｕ ｅ ｙ ｃ ｅ ｔ ｅ ａ ｙ ｇ ｉ ｃ ｉ
临床 医学
２ １年１月 第２卷 第１期 ００２ ３ ２
医学 信 息
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白介素-11衍生物临床研究进展资料讲解

白介素-11衍生物临床研究进展资料讲解

试验结论
– 初步疗效观察：在10、25、40、60µg/kg/d 四个剂量水平均有效病例。血 小板恢复正常的时间在3-11天，中位时间为5天，而且恢复正常后连续复查， 血小板未再降低，而国外白介素-11血小板恢复正常所需时间为10-14天，在
大于25μg/kg时才有效，因此本实验初步显示采用的注射用重组人白介素-11
国外白介素-11与百杰依（白介素-11衍生物）比较
项目 有效剂量
MTD DLT 出现疗效时间 有无高凝病例
白介素-11 (n=16)
百杰依 (n=16)
>25μg/kg
>10μg/kg
75μg/kg
60μg/kg
肌肉关节疼痛
肌肉关节疼痛和乏力
10-14天(median:12) 3-11天 (median:5)
1991年IL-11在美国基因克隆成功，并转入大肠杆菌成功表达
1992年12月在美国进入Ⅰ期临床研究
1993年12月进入Ⅱ期临床研究
1995年11月进入Ⅲ期临床研究
1997年美国GI(Genetics Institute)公司白介素-11（Neumega）获得
在美国上市。截止目前，美国FDA批准的唯一升高血小板的药物
人体内的白介素-11由原始骨髓基 质细胞系产生。
白介素-11的结构特征：由4个α螺 旋结构组成，对热稳定，但在酸性 条件下易被水解灭活。
百杰依—升血小板更快、用药更安全的国家一类新药
rhIL-11衍生物—预防和治疗化疗后血小板减少症
百杰依结构特点
项目
人白介素-11
来源
骨髓基质细胞产生
氨基酸数
178
百杰依—升血小板更快、用药更安全的国家一类新药

重组人白细胞介素-11对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

重组人白细胞介素-11对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

重组人白细胞介素-11对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响肖荣;康马飞;骆梅青;董翠梅;刘秀丽【摘要】目的观察重组人白细胞介素-11(rhIL-11)对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并初步探讨其影响机制.方法分别以0、10、20、50、100μg/L 终浓度的rhIL-11作用于A549细胞,MTT法测定A549细胞增殖程度;用0、10、40、80μg/L终浓度的rhIL-11作用于A549细胞,划痕实验和Transwell侵袭实验测定A549细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白水平的表达.结果 rhIL-11对A549细胞增殖能力无影响;rhIL-11作用于A549细胞后,细胞的迁移和侵袭能力显著增强;rhIL-11能显著上调MMP-2和MMP-9的表达,且表达随rhIL-11浓度的增高而增高(P<0.05).结论 rhIL-11能够促进A549细胞的迁移和侵袭,促进MMP-2、MMP-9上调为其可能的机制之一.%Objective To observe the effects of recombinant human interleukin 11(rhIL-11) on proliferation, migration and invasion of A549 cells, and the mechanism thereof. Methods Final concentrations of 0, 10, 20, 50 and 100μg/L rhIL-11 were added into pulmonary adenocarcinoma A549 cells. The cell proliferation was detected by MTT. The wound-healing, transwell migration assay were used to validate the capability of the migration and invasion of A549 cells. Matrix metallopro-teinases (MMP)-2 and MMP-9 protein expressions were revealed by Western blot assay. Results The proliferation of A549 cells was not significantly changed by rhIL-11. The cell capability to migrate and invade was significantly increased 24 h af-ter treatment with rhIL-11 (P<0.05). The expression levels of MMP-2 andMMP-9 were significantly un-regulated, and which were increased with the increased concentrations of rhIL-11 (P<0.05). Conclusion rhIL-11 can promote the migra-tion and invasion of A549 cells, and the up-regulationof MMP-2 and MMP-9 expression might be one of the mechanisms.【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2016(044)001【总页数】4页(P46-49)【关键词】白细胞介素11;癌,非小细胞肺;细胞迁移分析;肿瘤侵润;基质金属蛋白酶2;基质金属蛋白酶9;重组人白细胞介素11【作者】肖荣;康马飞;骆梅青;董翠梅;刘秀丽【作者单位】桂林医学院附属医院肿瘤内科 541001;桂林医学院附属医院肿瘤内科 541001;桂林医学院附属医院肿瘤内科 541001;桂林医学院附属医院肿瘤内科541001;桂林医学院附属医院肿瘤内科 541001【正文语种】中文【中图分类】R734.2白细胞介素（IL）-11属于IL -6因子家族，是一种由人骨髓基质细胞及间质细胞分泌的多功能细胞因子。

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药学学报 9NVD +’D&FDNBRVGND .GJGND >##? ， <" （=） ： 6$? ; 6?#
液质联用分析重组人白细胞介素 !"" 的肽图
杨! 英，饶春明，王! 威，韩春梅，王军志 !
（ 中国药品生物制品检定所，北京 "###$# ） （ &’()%"" ） 的肽图。方法 ! 用胰蛋白酶酶解 &’()% 摘要：目的 ! 用液质联用技术分析鉴定重组人白细胞介素%"" "" ， 采用 *+), 测定肽图， 用电喷雾%四极杆%飞行时间质谱 （ -.(%/%012 3 4.） 技术分析肽段的精确相对分子质量， 通过 串联质谱 （ 4. 3 4.） 测定肽段的氨基酸序列。结果! 根据肽段的色谱保留时间、 相对分子质量及对其碰撞诱导解离 质谱的解析结果， 归属出肽图中各肽段所在的色谱峰， 已检出肽段的总覆盖率为 567 。结论 ! 液质联用研究肽图是 验证和分析蛋白质结构的高效准确的方法。 关键词：液相色谱%质谱联用；重组人白细胞介素%"" ；相对分子质量；肽图；氨基酸序列 中图分类号：85"6! ! ! 文献标识码：9! ! ! 文章编号： #$": ; <=6# （ >##? ） #= ; #6$? ; #$
［ :］ 结果 。此外， 近年来发展的串联质谱仪 （ 4. 3 4.） ，
使质谱用于生物分子结构分析的功能进一步增强， 它能快速灵敏地测定肽段的部分氨基酸序列， 使得 肽段的确认更加准确， 极大地提高了蛋白质鉴定的
［ <］ 。 准确性
万方数据
杨( 英等： 液质联用分析重组人白细胞介素!"" 的肽图
・ ,F,・
重组人白细胞介素!"" （ #$%&!"" ） 为血小板生长 因子， 可刺激造血干细胞和巨核细胞母细胞的增殖， 并诱导巨核细胞的成熟， 从而增加血小板的生成。 本文在文献 ［"］ 的基础上， 用液质联用技术对重组 人白细胞介素!"" 经胰蛋白酶裂解后的肽图进行研 究， 可以更快速、 直接和准确地判断出每个洗脱峰的 肽段归属， 而不仅仅是对 ’ 端的判定， 为其质量分 析和控制提供了依据。
结果和讨论
!" 理论酶切结果分析 经 -./0 处理的胰蛋白酶专一性酶切位点在肽 链中赖氨酸 （ 0， &24 ） 和精氨酸 （ Z， >#8 ） 的羧基端。 #$%&!"" 理论氨基酸全序列见图 " ， 共有 ",, 个氨基 酸， 胰蛋白酶完全水解后理论上可以产生 )) 个肽段 或氨基酸。图 " 中 -" U -)) 为 )) 个肽段的编号及 所在位置， 标在每个肽段的羧基端。 #" $%&’()*+(,(-./ 0 1* 对肽段相对分子质量的 测定 胰蛋白酶酶切过的肽段， 经过 X.&/ 的分离后 依次进入质谱进行检测。每一个洗脱峰均可获得相 应组分的相对分子质量信息。例如色谱洗脱时间为 )CN <+ 956 的肽段在 W7%!H!-L= Y G7 中产生的特征
（ !"#$%&"’ (&)#$#*#+ ,%- #.+ /%&#-%’ %, 0."-1"2+*#$2"’ "&3 4$%’%5$2"’ 0-%3*2#)，4+$6$&5 788898 ，/.$&"）
E4/&2*3& ：E’)! 0M DJDCHUB V’B WBWVGXB FDWWGJK MY &BNMFZGJDJV ’RFDJ GJVB&CBR[GJ%""（ &’()%"" ）ZH *+),%-.(%/%012 3 4. \WBNV&MFBV&H@ D$&50(/! 0’B V&HW\GJ XGKB\VBX &’()%"" DV :6 ] M^B& JGK’V，DJX V’B WBWVGXB FDWWGJK _D\ WB&YM&FBX ZH *+),@ 0’B &BCDVG^B FMCBNRCD& _BGK’V MY V’B WBWVGXB\ Y&DKFBJV\ _D\ FBD\R&BX ZH -.(%/%012 3 4. ，DJX DFGJM DNGX \B‘RBJNB _D\ DJDCHUBX ZH 4. 3 4.@ F$/6-&/ ! 0’B WBWVGXB Y&DKFBJV\ MY &’()%"" GJ V’B WBWVGXB FDWWGJK _B&B D\\GKJBX ZH DJDCHUGJK V’B &BVDGJ VGFB，&BCDVG^B FMCBNRCD& _BGK’V DJX DFGJM DNGX \B‘RBJNB@ 9JX 567 MY V’B BEWBNVBX WBWVGXB\ _B&B XBVBNVBX GJ V’G\ _DH@ ;0+3-6/’0+! 0’B \VRXH W&M^B\ V’DV *+),%-.(%/%012 3 4. G\ D KMMX FBV’MX VM DJDCHUB WBWVGXB FDWWGJK MY W&MVBGJ _GV’ V’B DX^DJVDKB MY \BJ\GVG^GVH ，’GK’ \WBBX DJX DNNR&DNH@ G$. 802(/：*+),%-.(%/%012 3 4.；&’()%"" ；&BCDVG^B FMCBNRCD& _BGK’V；WBWVGXB FDWWGJK；DFGJM DNGX \B‘RBJNB ! ! 蛋白质的肽图分析， 是鉴定蛋白质一级结构的 完整性和准确性的重要方法。在传统方法中， 蛋白 质经酶解后， 用 *+), 分离后得到肽图。但它只能 给出肽段的分离图谱， 而无法确认每一个洗脱峰代 表了蛋白质中的哪一个肽段。在以往对重组人白介 素%"" 的肽图研究中， 要判断哪个洗脱峰是 P 端， 需 要另外收集肽段洗脱峰用氨基酸测序仪进行序列分
收稿日期： >##$%">%#6@ 基 金 项 目：国 家 高 技 术 研 究 发 展 计 划 （ =?: 计 划） 资助项目 （ >##:99>A:<=# ） @ ! 通讯作者! 0BC： =? ; "# ; ?6#5$$=? ， 2DE： =? ; "# ; ?6#$"5"> ， -%FDGC：HIHGJKI66L HD’MM@ NMF@ NJ
[ 峰见图 ) 。图 )> 是单电荷峰 ［ G [ X］ ， 相邻两个
材料和方法
材料( #$%&!"" （ 供试品， 批号 )**+*,*" ） ， -./0 处理的胰蛋白酶 （ -./0!1#23456， 7589: -;<+) ） ， 甲酸 （ =>， =?@A: B+C"; ） ， 三氟乙酸 （ -=>， -DE5: -7+)BF ） ， 色谱纯乙腈 （ >/’， 7589: 公司） ， 实验用水为 G5??5!H 超纯水， 其他试剂均为分析纯。 仪器和设备( 美国 I:1D#4 >??5:6JD 高效液相系 统 )<BF 型 和 二 极 管 阵 列 检 测 器 )BB< 型， 英国 G5J#K9:44 公司的 H!-L= 95J#K 质谱仪， 美国 I:1D#4 G:44?26M +N * 液 质 联 用 分 析 软 件，美 国 I:1D#4 7299D1#2 C** /"; 色谱柱。 胰蛋白酶酶切条件 ( 参 照 文 献 ［"］ 报道的方 法， 取质量浓度为 C 98 ・ 9& O " 的 #$%&!"" 样品 +** 对 "P 碳酸氢铵溶液进行充分透析， 然后取透析 !&， O" 样品 )F* !&， 加入 " 98・9& -./0 处理的胰蛋白 酶 C !&， C, Q 水浴 )* $ 进行酶解。"** Q 煮沸 C 956 终止酶解反应， 离心收集上清液作为肽图测定 的样品溶液。 色谱条件 ( 采用 I:1D#4 7299D1#2 C** /"; （ "F* 99 R CN B 99 %S， F !9 ） 色谱柱， 流动相 > 液为含 *N "P 三氟乙酸的水溶液， T 液为含 *N "P 三氟乙酸 的乙腈溶液， 洗脱梯度
/34567 ! ( >956K :J5E 4D]@D6JD J$:56 K^ #$%&!"" :6E 3D315ED ^#:89D614 _2 1#23456 E58D415K6
万方数据
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