细胞油红O染色的操作步骤精修订

油红O染色
原理:利用染料易溶于脂质的性质证明组织脂质含量的多少试剂:
0.5%的油红O溶液
配方(100ml)：油红O 1.5g
70%乙醇 50ml
丙酮 50ml
异丙醇
乙醇
丙酮
苏木素（hematoxylin）
染色步骤:
1．将冰冻切片(厚度为4-8um)常温干燥15-20min. 2．100%异丙醇孵育5分钟（避免把水带入油红O）。

3．0.5%的油红O溶液孵育7-8分钟（在60 ºC烤箱）4．85%异丙醇溶液洗3分钟
5．双脱水洗。

6．苏木素染1-1.5min。

7．双脱水洗。

8．封片剂封片
结果: 脂质呈红色
细胞核呈淡蓝色
注意事项：
1 由于脂肪易溶于有机溶剂，所以一般用冰冻切片染色来显示。

2 作脂肪染色的冰冻切片不能太薄，过薄的切片常会使脂质丢失。

3 苏木素复染时间不能过长。

4 染色结果不能长期保存，应尽快观察及照相。

细胞油红O染色的操作步骤点击次数：348 发布时间：2011-4-11、10%中性甲醛的配制材料：中性甲醛(多聚甲醛) 密封瓶称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解。

配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存。

2、染色液的配制材料：油红染料棕色可密封瓶异丙醇研钵漏斗定性滤纸称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封(或锡箔纸包裹避光)4℃保存，为储存液，可长期保存。

用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完。

3、培养载体 3毫升培养瓶。

如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑。

4、.染色对象间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。

5、注意事项：脂肪油红染色，有的是动物/人体脂肪组织切片，或细胞爬片。

各有操作差异。

以下是各论坛方法小结，不全。

(1).完全成熟饱满的脂肪细胞，容易破裂，脂滴泄漏，所以压片，切片都要考虑到这个问题。

(2).细胞爬片细胞溶液脱落，特别是脂滴大的。

操作务要轻柔。

不要把细胞冲掉。

(3).如果做脂肪组织冰冻切片，冰冻温度比普通要低，切片厚度加厚。

6、染色步骤：(1) 先小心轻缓倒去培养夜。

(2) 用pbs轻缓漂洗(不洗没问题)。

(3)加10%中性甲醛固定30min(实际固定时间过夜都没问题。

固定液用95%酒精也可)。

固定的是细胞膜。

(4) 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min(除去一些杂质，染色结果更清晰)。

(5)染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml(实际染色时间1小时都可以)。

(6)脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料(实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少)。

(7) 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗(这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上)。

细胞油红O染色的操作步骤点击次数：348 发布时间：2011-4-11、10%中性甲醛的配制材料：中性甲醛(多聚甲醛) 密封瓶称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解。

配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存。

2、染色液的配制材料：油红染料棕色可密封瓶异丙醇研钵漏斗定性滤纸称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封(或锡箔纸包裹避光)4℃保存，为储存液，可长期保存。

用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完。

3、培养载体 3毫升培养瓶。

如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑。

4、.染色对象间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。

5、注意事项：脂肪油红染色，有的是动物/人体脂肪组织切片，或细胞爬片。

各有操作差异。

以下是各论坛方法小结，不全。

(1).完全成熟饱满的脂肪细胞，容易破裂，脂滴泄漏，所以压片，切片都要考虑到这个问题。

(2).细胞爬片细胞溶液脱落，特别是脂滴大的。

操作务要轻柔。

不要把细胞冲掉。

(3).如果做脂肪组织冰冻切片，冰冻温度比普通要低，切片厚度加厚。

6、染色步骤：(1) 先小心轻缓倒去培养夜。

(2) 用pbs轻缓漂洗(不洗没问题)。

(3)加10%中性甲醛固定30min(实际固定时间过夜都没问题。

固定液用95%酒精也可)。

固定的是细胞膜。

(4) 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min(除去一些杂质，染色结果更清晰)。

(5)染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml(实际染色时间1小时都可以)。

(6)脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料(实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少)。

(7) 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗(这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上)。

细胞油红O染色的操作步骤点击次数：348 发布时间：2011-4-11、10%中性甲醛的配制材料：中性甲醛(多聚甲醛) 密封瓶称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解。

配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存。

2、染色液的配制材料：油红染料棕色可密封瓶异丙醇研钵漏斗定性滤纸称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封(或锡箔纸包裹避光)4℃保存，为储存液，可长期保存。

用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完。

3、培养载体 3毫升培养瓶。

如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑。

4、.染色对象间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。

5、注意事项：脂肪油红染色，有的是动物/人体脂肪组织切片，或细胞爬片。

各有操作差异。

以下是各论坛方法小结，不全。

(1).完全成熟饱满的脂肪细胞，容易破裂，脂滴泄漏，所以压片，切片都要考虑到这个问题。

(2).细胞爬片细胞溶液脱落，特别是脂滴大的。

操作务要轻柔。

不要把细胞冲掉。

(3).如果做脂肪组织冰冻切片，冰冻温度比普通要低，切片厚度加厚。

6、染色步骤：(1) 先小心轻缓倒去培养夜。

(2) 用pbs轻缓漂洗(不洗没问题)。

(3)加10%中性甲醛固定30min(实际固定时间过夜都没问题。

固定液用95%酒精也可)。

固定的是细胞膜。

(4) 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min(除去一些杂质，染色结果更清晰)。

(5)染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml(实际染色时间1小时都可以)。

(6)脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料(实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少)。

(7) 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗(这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上)。

油红O染液的配制方法
油红 O属于偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，与甘油三酯结合呈小脂滴状。

脂溶性染料能溶于组织和细胞中的脂类，它在脂类中的溶解度比在溶剂中大。

当组织切片置人染液时，染料则离开染液而溶于组织内的脂质（如脂滴）中，使组织内的脂滴呈橘红色。

一、油红O染液的配制
1．oil red O 0.5 g/100 ml 异丙醇；
临用前取6 ml原液 + 4 ml dH2O-->静置5-10 min-->过滤后于2 hr内使用二、染色程序
1．切片用甲醛―钙(40% 甲醛溶液10 ml （确切的应该是40% 福尔马林溶液原液 + CaCl2 1 g + dH2O-->100 ml)固定10分钟；
2．蒸馏水洗；
3．60％异丙醇浸洗；
4．由红O染液10分钟（染液可回收再利用）；
5． 60％异丙醇分色至背景五色；
6．蒸馏水洗；
7．Mayer苏木精复染；
8．自来水洗（蓝化）1～3分钟；
9．蒸馏水洗；
10．甘油明胶封片。

结果：组织细胞中脂滴呈橘红色，核呈蓝色。

油红O染色说明书
产品简介
以油红O溶液染色是鉴定间充质干细胞向成脂细胞分化的一个重要指标。

用特定的成脂诱导培养基（货号：PH-B009）培养一段时间后，间充质干细胞可分化为成脂细胞，并在细胞中形成脂滴。

油红 O属于偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，与甘油三酯结合呈小脂滴状。

脂溶性染料能溶于细胞中的脂滴。

当染料加入细胞中，染料则离开染液而溶于细胞内的脂滴中，使细胞内的脂滴呈红色或橘红色。

包装组成成分
油红O染色操作规程：
所需材料：
菩禾生物油红O染色试剂盒
操作方法与步骤（以6孔板为例）
1.油红O工作液制备：油红染色液与染色稀释液按照3:2的比例进行稀释，混
匀后室温静置10min，滤纸过滤；
2.移除孔内培养基，每孔加入2ml洗涤液1号静置1min后移除，洗涤2次；
3.每孔加入2ml固定液，37℃（或室温）固定30min；
4.移除固定液，每孔加2ml洗涤液1号冲洗，洗涤2次；
5.每孔加入油红O工作液2ml，37℃（或室温）染色10-20min；
6.每孔加入洗涤液3号2ml，快速移除，根据染色背景情况可重复1-2次；
7.每孔加洗涤液2号2ml，洗2次后显微镜下观察
成脂细胞油红O染色图例：
产品保存及使用注意事项：
1.需避光保存。

2.请于保质期内使用。

3.为了您的健康，请在实验过程中穿上实验服，带好手套。

本产品仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。

油红O染色法
油红O染色法
试剂：
油红O液：
油红O（Oil red O)0.5克，异丙醇（Isopropanol )100毫升，倒入三角烧瓶内，水浴加热溶解，冷却后过滤。

用细口磨砂瓶保存。

用时取油红O液6毫升加蒸馏水4毫升，混合后静置10分钟，即可染色。

方法：
⑴组织用10%甲酸液固定
⑵冰冻切片厚6~10微米。

⑶用玻璃钩把切片捞入60%异丙醇，稍洗。

⑷油红O液加盖染色5~10分钟，60%异丙醇稍洗去多余的染液。

⑸蒸馏水洗。

⑹Mayer苏木精淡染细胞核。

⑺1%盐酸水溶液快速分化，水漂洗10分钟或于稀碳酸锂水溶液促蓝。

⑻贴于载玻片，把周围的水抹干。

⑼阿拉伯胶或甘油明胶封片。

结果：
中性脂肪呈深橙红色，细胞核蓝色。

细胞油红O染色的操作步骤1.准备工作-准备蜡块或切片的载玻片，确保干净无尘。

-准备所需的试剂和材料：油红O染色液、甘油、石蜡切片、显微镜玻璃片、显微镜、显微摄影设备等。

2.油红O染色液的制备- 准备0.5%油红O染色液。

将0.5g的油红O溶于100ml的乙醇中，充分溶解。

-过滤染色液以去除发生絮团的杂质，得到一个均匀混合溶液。

3.油红O染色液的使用- 取一个载玻片，将其轻轻插入显 microscopy 可见的草酸溶液中清洗，然后用蒸馏水清洗，并擦干。

-在载玻片上滴加一滴染色液，将油红O均匀分布在玻片上。

-取脱水后的石蜡切片，放入油红O染色液中，使其完全覆盖。

-在油红O染色液中浸泡的时间根据需要而定，一般约为15-30分钟。

-拿出石蜡切片，用蒸馏水冲洗数次，直到液体变为无色。

-轻轻擦干载玻片上的石蜡切片。

4.显微镜观察和摄影-将载玻片放置在显微镜上，用低倍镜或高倍镜观察样品。

-调整光源和焦距，找到合适的条件以观察和拍摄样品。

-用显微摄影设备拍摄所需的图像，根据需要进行保存和分析。

5.注意事项-油红O是有毒物质，使用时需佩戴手套并避免接触皮肤和吸入。

-操作时要注意避免样品受到空气中的灰尘、皮脂等污染。

-染色时间和沥青切片的浸泡时间可以根据实验需求进行调整。

-染色后及时清洗玻片和仪器，避免油红O污染其他实验物品。

-拍摄图像时，要调整曝光时间和对比度以获得清晰的图像。

总结：细胞油红O染色是一种简单且经典的染色方法，可用于研究细胞内的脂质结构和颗粒物质。

操作步骤包括准备工作、油红O染色液的制备和使用、显微镜观察和摄影等。

在操作过程中需要注意安全性，保持样品的干净和避免污染。

通过细胞油红O染色，可以获取清晰的图像以进一步研究细胞和组织的结构和功能。

油红O染⾊试剂盒染⾊结果及步骤介绍原理:油红o属于偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，与⽢油三酯结合呈⼩脂滴状。

脂溶性染料能溶于组织和细胞中的脂类，它在脂类中的溶解度⽐在溶剂中⼤。

当组织切⽚置⼈染液时，染料则离开染液⽽溶于组织内的脂质(如脂滴)中，使组织内的脂滴呈橘红⾊。

组织固定切⽚新鲜组织冰冻切⽚,切⽚厚度5-10um操作步骤1.染⾊前请取6ml油红О染⾊液,加4ml蒸馏⽔稀释成⼯作液,静置5-10min后过滤.⼀般稀释液要在1h内使⽤，2h后稀释液染⾊效果不佳;2.冰冻切⽚5-10um，漂在防脱⽚的载玻⽚上，吹⼲;3．蒸馏⽔稍洗;4.⽤60%异丙醇漂洗⼀次，20-30Sec;5．切⽚⼊油红О稀释液中染⾊10-15min;6.⽤60%异丙醇分化3-5Sec;7.⽔洗1-2min;8.⽤稀释⼀倍的明矾苏⽊素淡染细胞核1min;9.⽔洗返蓝，待稍⼲;10.⽢油明胶封固,显微镜观察。

结果分析脂类物质呈鲜红⾊或橘红⾊，细胞核淡蓝⾊。

注意事项：1.油红О稀释液现⽤现配，⽤多少配多少，1h后应丢弃;2．载玻⽚要⽤防脱⽚的载玻⽚，冰冻切⽚漂到载玻⽚后要吹⼲，防⽌脱⽚;3.为了你的健康请适当防护!⾼铁⼆胺-爱先蓝（HID-AB）染⾊液钙盐染⾊液酸性磷酸酶染⾊液幽门螺杆菌染⾊液铜盐染⾊液微⽣物染⾊液吉姆萨染⾊液瑞⽒-吉姆萨染⾊液抗酸染⾊液荚膜染⾊液异染颗粒染⾊液麦格⽒染⾊液⼄型肝炎病毒染⾊液(地⾐红型)鞭⽑染⾊液乳酸棉酚蓝染液芽孢染⾊液(Moeller型)细胞染⾊液上⽪组织染⾊液迪夫快速细胞染⾊液⽹织红细胞染⾊液组织固定液脱钙液脱蜡透明液浸腊脱蜡透明液瑞⽒吉姆萨染⾊试剂盒TIMM染⾊试剂盒甲苯胺蓝O (toluidine blue O)TBO染⾊液氯化⾦溶液Gomori ⽒改良醛复红阿尔⾟蓝染⾊试剂盒FAA固定液FAA固定液(原位杂交⽤）zzj 2021.3.26。