HE(苏木素-伊红)染色试剂盒

苏木素-伊红染色液(H-E)说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液(H-E）【型号】苏木素染色液分别为：Mayer型、改良Harris型、型改良Lillie-Mayer型；伊红染色液分别为：水溶型、醇溶型。

【包装规格】货号：DH0006单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml；每套/盒包装规格分别为：2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。

【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。

【检验原理】苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合主要用于对细胞组织进行染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛，苏木素-伊红染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必不可少的最基本的染色方法，在病理诊断、教学与科研中广泛应用，具有重要价值，细胞中的细胞核是由酸性物质组成，它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强；细胞浆则相反，它所含的碱性物质与酸性染料(伊红)的亲和力较大。

因此细胞或组织切片经苏木素-伊红染色液染色后，细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色，细胞浆、肌纤维、胶元纤维等呈不同程度的红色，红细胞则呈橙红色。

【主要组成成分】试剂组成主要成分苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)或苏木素染色液(改良Harris)或木素染色液(Mayer) 苏木色精伊红染色液(水溶)或伊红染色液(醇溶) 伊红【储存条件及有效期】5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为18个月，在有效期内的已开封染色建议在开封后6个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

【样本要求】涂片和切片必须充分固定，石蜡切片要充分脱蜡。

【检验方法】l、石蜡切片于二甲苯I、II中脱蜡；2、经无水乙醇和95%乙醇，经8O%乙醇，自来水冲洗；3、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer或改良Harris)染色，自来水洗；或苏木素染色液(Mayer)染色；4、苏木素染色后用l%盐酸乙醇溶液分化数秒(l%盐酸乙醇溶液配制：99m1 75%乙醇加1ml浓盐酸）；若用苏木素染色液(Mayer)染色后则不需分化；5、自来水冲洗返蓝；亦可用碳酸锂水溶液返蓝，自来水洗；6、入伊红染色液(水溶)染色，稍洗；若用伊红染液(醇溶），切片应先经80%乙醇脱水后，再入伊红染液(醇溶)染色(忌水洗）；7、95%乙醇I、II中调色；8、无水乙醇I、II中脱水，二甲苯I、II中透明；9、封片胶封片，镜检。

苏木素伊红(HE)染色试剂盒北京华越洋----------------------------------------------------------------------------------------- -产品简介：Ø华越洋生物生产的苏木素伊红(HE)染色试剂盒(Hematoxylin and eosin staining kit)综合了多种经典的HE染色方法，例如Harris法、Mayer法等，简化了操作步骤，缩短了操作时间，并且染色液内不使用汞、甲醇等有毒试剂。

可以用于组织切片或培养细胞的染色。

Ø 苏木素伊红染色后细胞核呈现蓝色，细胞浆呈现粉红色或红色。

Ø 本试剂盒可以和免疫荧光染色配合使用。

使用的苏木素伊红染色试剂盒，染色后可以进行免疫荧光染色或其它染料的染色。

Ø 染色液可以重复使用，直至认为效果不佳时再换用新的染色液。

本试剂盒至少可以染色300个样品。

包装清单：苏木素染色液: 200毫升伊红染色液:200毫升说明书:1份保存条件：室温保存，至少一年有效。

注意事项：Ø 需自备4%多聚甲醛、70%乙醇和95%乙醇。

如果需要脱水、透明和封片处理，还需自备二甲苯、中性树胶或其它封片剂。

如果样品是石蜡切片，需自备90％乙醇、无水乙醇以及二甲苯。

Ø 染色液可以重复使用多次，认为效果不佳时再更换新的染色液。

样品数量很多时，可以使用碧云天生产的染色架和染色缸，便于操作。

Ø 第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。

Ø 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：1.样品处理a) 对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟。

换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟。

无水乙醇5分钟。

90%乙醇2分钟。

70%乙醇2分钟蒸馏水2分钟。

b) 对于冰冻切片：蒸馏水2分钟。

c) 对于培养细胞：用4%多聚甲醛固定10分钟以上。

苏木素-伊红（H-E）染色液产品说明书【产品名称】通用名称：苏木素-伊红（H-E）染色液英文名称：Hemaxytolin-Eosin(HE)Staining kit【包装规格】500mL/瓶，5瓶/盒【预期用途】用于对石蜡切片和冰冻切片的细胞组织进行染色。

【检验原理】苏木素经过氧化变成酸性染料苏木红，苏木红与三价铝离子结合形成带正电荷的蓝色色精，便可与细胞中带负电荷的脱氧核糖核酸结合。

苏木素染液主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红Y为酸性胞质性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

【主要组成成份】每套苏木素-伊红（HE）染色液试剂盒是由高清恒定液（A液）、苏木素染液（B液）、分化液（C液）、返蓝液（D液）、伊红染液（E液）组成。

每套苏木素-伊红（HE）染色液试剂盒的主要成分为：1)高清恒定液（A液），由专用稳定剂等成分组成；2)苏木素染液（B液），主要由苏木素、乙二醇、硫酸铝钾等成分组成；3)分化液（C液），主要由酒石酸等成分组成；4)返蓝液（D液），主要由Tris、氯化钠和防腐剂等成分组成；5)伊红染液（E液），主要由伊红二钠Y和乙醇等成分组成。

【储存条件及有效期】试剂盒应存放于室温（15-30℃），有效期为12个月，在有效期内的已开封试剂使用期限为3个月。

每次用后应及时盖上盖子，以免挥发或变质。

【适用仪器】手动常规染色和全自动染色机染色。

【样本要求】病理组织经取材，福尔马林固定，脱水处理，用石蜡包埋后制成蜡块，用切片机切成2-5μm厚度的组织切片采集到载玻片上（有些特殊类型的组织可能要求不同的切片厚度）。

之后将载玻片放置于烤片机上65℃（±5℃）下烤片10-30分钟，即可染色。

【检验方法】1、二甲苯I、II、III脱蜡各2-4min；2、无水乙醇I、II、III各2min；3、95%乙醇15s；4、75%乙醇15s；5、水洗1min；6、高清恒定液30s-60s；7、苏木素染液3-5min；8、水洗1min；9、分化液3-15s；10、水洗1min；11、返蓝液1-2min；12、水洗1min；13、95%乙醇30-60s；14、伊红染液20-60s；15、无水乙醇I、II、III各2min；16、二甲苯I、II、III各2min。

苏木素伊红(HE)染色试剂盒货号：AG1120规格：3×10ml/3×100ml保存：常温保存，复检期至少1年。

注意：环境温度低时，分化液可能会结晶析出，将分化液37℃水浴融化后即可，不影响使用。

产品说明：苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining )，简称HE 染色法，是病理学常规制片中最基本的染色方法。

苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

染色过程需要优化，着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。

例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。

胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。

本产品所包含试剂均为工作液，可直接使用。

操作说明（以下步骤仅供参考）：（一）石蜡组织切片染色。

1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，切片。

2．石蜡切片脱蜡水化：①二甲苯（I ）中脱蜡5min 。

②换用新鲜的二甲苯（Ⅱ），再脱蜡5min 。

③无水乙醇5min 。

④95%乙醇2min 。

⑤80％乙醇2min⑥70%乙醇2min 。

⑦蒸馏水2min 。

3．苏木素染液染色5-20min(具体时间根据染色结果和实验要求调整)，自来水冲洗。

4．分化液分化30s 。

5．自来水浸泡15min 或温水（约50℃）5min 。

6．置伊红染液几秒-2min(具体时间根据染色结果和实验要求调整)，自来水冲洗。

7．自来水浸泡1-2min 。

8．脱水，透明，封片：①95％乙醇（I ）1min②95％乙醇（Ⅱ）1min③100％乙醇（I ）1min 产品内容AG1120-10AG1120-100苏木素染液10ml 100ml 分化液10ml 100ml 伊红染液10ml 100mlShanghai Acmec Biochemical Co.,Ltd.Tel ：400-900-4166WEB ：④100％乙醇（Ⅱ）1min⑤二甲苯石炭酸（3：1）1min⑥二甲苯（I）1min⑦二甲苯（Ⅱ）1min⑧中性树胶封固，镜下观察。

石蜡切片制作(苏木精-伊红对染法)实验原理：石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。

苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。

这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。

经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。

一、器材及试剂：1. 器材：切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀，解剖剪，解剖盘，培养皿，镊子，单面刀片，毛笔，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。

切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。

2．试剂：中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液， 1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。

卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。

3. 材料：鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。

二、实验原理：石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。

苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。

这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。

经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。

三、试剂配法：1．中性甲醛固定液：甲醛（37%-40%，市售，本所购买即为此浓度） 100mL磷酸氢二钠 6.5磷酸二氢钾（钠） 4g双蒸水 900mL 2．苏木精、伊红染色液为碧云天产品3．1%盐酸乙醇液盐酸 1份70%酒精 100份4．甘油蛋白贴片剂：蛋白 50 ml甘油 50 ml水杨酸钠（防腐剂） 1g配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中，去蛋黄留下蛋白，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋白液。

HE染⾊操作流程H E染⾊操作流程HE染⾊，即是苏⽊精-伊红染⾊法，是形态学最常⽤的染⾊⽅法，在质量较佳的HE染⾊切⽚上，各种组织或细胞的⼀般形态结特点都可以观察到。

苏⽊精染液为碱性，主要使细胞核内的染⾊质与胞质内的核糖体着紫蓝⾊；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红⾊。

[试剂材料]1.试剂：0.5%醇溶性伊红染液，改良的哈瑞（Harris）苏⽊素，0.5%盐酸酒精溶液1.1 伊红：配制⽅法：中性红0.5g，80%酒精100ml,将伊红溶于酒精内搅拌，全部溶解后即可使⽤。

1.2苏⽊精：配制⽅法：A液：苏⽊素1g，⽆⽔酒精10mlB液：硫酸铝钾20g，蒸馏⽔200ml两液分别溶解后混合，加热煮沸后，慢慢加⼊红⾊氧化汞0.5g，此时有⼤量⽓泡产⽣，故容器要⼤，以防液体溢出，然后将染液迅速冷却，冷却后过滤，并每100ml加⼊冰醋酸6ml，⽢油10ml。

1.3 0.7%盐酸酒精溶液配制⽅法：盐酸0.7ml，70%酒精100ml2.材料：⽯蜡切⽚[操作流程]1.将⽯蜡切⽚置于烘箱中60℃烤1～2h；2.⽯蜡切⽚常规⼆甲苯，⼄醇脱蜡⾄⽔，3.苏⽊素染10分钟，4.流⽔冲洗，去余⾊，5.0.7%盐酸⼄醇分化数秒钟，6.流⽔冲洗，切⽚变蓝约15分钟，7.95%⼄醇30秒钟，8.酒精性伊红染30秒，9.I 95%⼄醇30秒钟，10.II 95%⼄醇30秒钟，11.I 100%⼄醇30秒钟，12.II100%⼄醇30秒钟，13.⽯碳酸⼆甲苯30秒钟，（1：4⽯碳酸1-⼆甲苯4）14.I⼆甲苯30秒钟，15.II⼆甲苯30秒钟，16.中性树胶封⽚。

[实验结果]：镜下观察细胞核呈蓝⾊；细胞浆⼀般呈红⾊；胶原纤维呈不同程度的红⾊，红细胞呈亮红⾊；粘蛋⽩呈浅蓝⾊；钙化组织呈深蓝⾊等。

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苏木素-伊红染色液（H-E）说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液（H-E）H&E Staining System【产品编号】HE-500ml,HE-1000ml,HE-2500ml【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml2500ml；伊红染色液500ml、1000ml 2500ml；返蓝染色液500ml、1000ml2500ml。

【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。

【检验原理】苏木素-伊红染色液（H-E）由3部分组成：苏木素染色液、伊红染色液和返蓝染色液。

苏木素氧化后与金属媒染剂作用，可形成不可替代的细胞核颜料。

带有正电荷的苏木素-金属媒染剂复合体，易与细胞核内DNA上带负电荷的磷酸基团结合，因而使细胞核染色形成特定的蓝色。

伊红染色液是一种广泛用于组织学染色中与苏木素染色形成对比的染料（HE染色法）。

此染色法可观察到清晰的细胞结构。

样本中细胞核可经苏木素染色呈蓝色，细胞质经伊红染色呈粉红色。

伊红是一种阴离子染料，可将红细胞染成亮红色，同样也可对其他基本的细胞组分（细胞质，胶原及肌纤维）进行染色。

返蓝染色液为组织学染色试剂，可替代水洗，快速使核染色质和核膜显现蓝色。

由于其坚硬度和碱性，水冲洗后改变苏木素染核后的颜色。

使用BioGnost 返蓝染色液，粘附在玻片上的样本不会发生像使用其他返蓝染色液时发生降解。

【主要组成成分】苏木素：乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝；伊红：伊红、乙醇；返蓝染色液：碳酸锂。

【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C和+25°C 之间。

保持储存环境干燥，不要放置于寒冷的环境中，不要冷冻产品，避免直接阳光直射。

产品使用效期为2年，具体效期见标签。

【适用仪器】不适用【样本要求】使用合适的设备仪器收集组织样本，并标记清楚，根据操作说明进行实验。

为避免发生错误，染色及诊断过程最好由具相关专业知识的技术人员操作。

根据标准医疗诊断实验室标准镜检诊断。

苏木素-伊红染色液(H-E)说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液(H-E）【型号】苏木素染色液分别为：Mayer型、改良Harris型、型改良Lillie-Mayer型；伊红染色液分别为：水溶型、醇溶型。

【包装规格】货号：DH0006单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml；每套/盒包装规格分别为：2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。

【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。

【检验原理】苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合主要用于对细胞组织进行染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛，苏木素-伊红染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必不可少的最基本的染色方法，在病理诊断、教学与科研中广泛应用，具有重要价值，细胞中的细胞核是由酸性物质组成，它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强；细胞浆则相反，它所含的碱性物质与酸性染料(伊红)的亲和力较大。

因此细胞或组织切片经苏木素-伊红染色液染色后，细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色，细胞浆、肌纤维、胶元纤维等呈不同程度的红色，红细胞则呈橙红色。

【主要组成成分】试剂组成主要成分苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)或苏木素染色液(改良Harris)或木素染色液(Mayer) 苏木色精伊红染色液(水溶)或伊红染色液(醇溶) 伊红【储存条件及有效期】5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为18个月，在有效期内的已开封染色建议在开封后6个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

【样本要求】涂片和切片必须充分固定，石蜡切片要充分脱蜡。

【检验方法】l、石蜡切片于二甲苯I、II中脱蜡；2、经无水乙醇和95%乙醇，经8O%乙醇，自来水冲洗；3、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer或改良Harris)染色，自来水洗；或苏木素染色液(Mayer)染色；4、苏木素染色后用l%盐酸乙醇溶液分化数秒(l%盐酸乙醇溶液配制：99m1 75%乙醇加1ml浓盐酸）；若用苏木素染色液(Mayer)染色后则不需分化；5、自来水冲洗返蓝；亦可用碳酸锂水溶液返蓝，自来水洗；6、入伊红染色液(水溶)染色，稍洗；若用伊红染液(醇溶），切片应先经80%乙醇脱水后，再入伊红染液(醇溶)染色(忌水洗）；7、95%乙醇I、II中调色；8、无水乙醇I、II中脱水，二甲苯I、II中透明；9、封片胶封片，镜检。

苏木素伊红(HE)染色试剂盒产品简介：苏木素(Hematoxylin)和伊红( Eosin)染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用机器广泛。

苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。

在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。

对于确定或鉴别病变组织、细胞中出现的某些异常物质与特殊成分，而需要采用的特殊染色方法、酶组织化学方法、免疫组织化学方法等也均是在观察HE染色组织切片的基础上进行的。

在HE染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。

Leagene苏木素伊红染色试剂盒中，苏木素染色液采用进口的高纯度苏木精、硫酸铝钾、甘油等组成，不含氧化汞、甲醇等有害物质，对细胞核染色效果好。

其特点：长期保存，不易产生沉淀和金属; 应用范围广，可以用于人、动物、畜牧、水产等领域，可以用于组织石蜡切片、冰冻切片和组织细胞的染色等；苏木素染色液可以重复使用。

染色原理：1、细胞核染色的原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。

细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA 双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。

苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

2、细胞浆染色的原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。

细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。

当染液的pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。

伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。

常规苏木素－伊红（HE）染色操作规程染色步骤：1、二甲苯Ⅰ：5－10min2、二甲苯Ⅱ：5－10min3、二甲苯Ⅲ：5－10min4、无水乙醇Ⅰ：1－3min5、无水乙醇Ⅱ：1－3min6、95%乙醇：1－3min7、80%乙醇:：1－3min8、水洗：1min9、苏木素：3－10min10、流水冲洗：1min11、酸乙醇分化：1－3S12、水洗：30S13、40%氨水或温水（40度左右）返蓝1min14、0.5%伊红液染色：1－3min15、水洗：10S16、80%乙醇：10S17、95%乙醇：1－3min18、无水乙醇Ⅰ：1－3min19、无水乙醇Ⅱ：1－3min20、二甲苯Ⅰ：3－5min21、二甲苯Ⅱ：3－5min22、二甲苯Ⅲ：3－5min中性树胶封固（湿封）以上1、2、3中二甲苯的作用：石蜡切片的常规染色必须先用二甲苯脱去切片中的石蜡，其作用是二甲苯可以溶解切片中的石蜡，以使染料易于进入细胞和组织，石蜡的存在妨碍水和染料进入细胞。

以上4、5、6、7中酒精的作用：酒精用于苏木素染色前由高浓度向低浓度逐渐下降处理切片，是为了洗脱用于脱蜡的二甲苯，使水能进入细胞和组织中，因为纯酒精可以中和二甲苯互溶，二甲苯经过二次纯酒精的洗涤，完全被除去，再经过95%、80%酒精使水分逐渐进入切片，以免引起细胞形太结构改变。

此时水洗作用：洗去未与切片结合的染液。

此时分化的作用：苏木素染色之后，用水洗去未结合在切片中的染液，但是在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用分化液0.5~1%盐酸酒精脱去，才能保证细胞核和细胞浆染色的分明，把这个过程称为染色的分化作用，因酸能破苏木素的醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。

此时水洗的作用：为了除去分化液和脱下的染料中止分化作用。

此时水洗的作用：用水洗去未结合的染液，以防止大量伊红染液进入脱水的酒精中。

以上16、17、18、19中酒精的作用：为二甲苯进入细胞创造条件，这时必须彻底脱水，否则二甲苯不能进入细胞组织切片透明度达不到光符显微镜观察时透光度的要求，在显微镜下能显示清晰的细胞和组织结构。

常用染色步骤HE,马松,糖原联系人:周昌斌137******** 133********苏木素伊红染色液一.苏木素伊红染色液套装组合:Harris苏木素染色液50ml水溶性伊红染色液50ml苏木素染色分化液50ml苏木素染色返兰液50ml概述:苏木素伊红染色是组织病理学经典的常规染色方法,历经上百年的应用历史至今仍无可替代。

因此,苏木素伊红染色是病理切片制作中极为重要的技术环节。

二.染色方法:1. 切片脱蜡二甲苯I 5分钟,2. 切片脱蜡二甲苯II 5分钟,3. 100%1、100%2、95%1、95%2、70%梯度乙醇各30,秒钟,4. 自来水流水冲洗1分钟,5. 苏木素染色5—8分钟(依染液新旧调整染色时间),6. 自来水流水冲洗1分钟,7. 进入分化液分化数秒钟,8. 自来水流水冲洗1分钟,9. 进入返兰液处理5—10秒钟,10. 自来水流水冲洗2分钟,11. 进入伊红染色液1-3分钟,12. 自来水冲洗30—60秒钟,13. 75%I、75%II乙醇脱水分色各10秒钟,14. 95%乙醇1、95%乙醇2各脱水10秒钟,15. 100%乙醇1、100%2脱水30-60秒钟,16. 二甲苯1、二甲苯2透明各1分钟,17. 中性树胶封固。

三.染色技术要点:苏木素染色液在静止由于时染液表面于空气中的氧分子接触极液体代表面水分蒸发会产生氧化作用并形成氧化膜。

因此,在使用前应使用滤纸吸附去除氧化膜以免污染切片。

一般情况下应建立良好的使用习惯,每隔2~3天将苏木素染液彻底过滤一次。

为保证HE切片的恒定染色质量建议每500ml苏木素染色液染1200~1500张切片为宜。

苏木素染色液在用于免疫组织化学染色的的复染时应注意调控染色时间,核染色过浅不易辨识组织结构而核染色过深则喧宾夺主,一般复染的时间应控在10-30秒以内。

此外,复染后的分化和返兰步骤不应省略否则将造成整张切片呈淡蓝色,使DAB呈现土黄色。

分化和返兰步骤是HE染色关键点,应在染色实践中依据分化液和返兰液的新旧调整分化和返兰的处理时间。

一、常规染色技术（HE 染色）苏木素—伊红染色简称HE 染色,是最常用的染色方法，苏木素是一种碱性染料,可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，伊红是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色。

HE 染色可以显示肾小球的细胞增生、炎细胞浸润.还能很好的显示肾小管上皮细胞的损伤和肾间质水肿情况。

(一）需要试剂①苏木素染液；② 1% 盐酸乙醇液；③氨水；④ 1% 伊红液。

（二）具体染色步骤1.切片常规脱蜡入水。

2.苏木素染细胞核1 ～ 2 min，水洗。

3。

入1％盐酸乙醇分化数秒，水洗。

4.氨水返蓝数秒.5。

流水冲洗,镜下观察细胞核成蓝色。

6。

1％伊红染数秒，水洗。

7.梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。

染色结果：胞核呈蓝色，胞浆呈红色，红细胞呈橘红色，其他成分呈深浅不同红色。

(三）注意事项1.组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则组织无法着色，影响观察.2.伊红染色的时间需严格控制。

过长胞浆染色红色过深.3。

染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。

二、特殊染色技术(一)过碘酸- 希夫氏染色（PAS 染色）PAS 染色可以显示肾小球内的细胞增生、浸润和系膜基质等，并能很好地显示基底膜，是显示糖原和糖蛋白的基本染色。

1。

需要试剂① 1% 过碘酸；② schiff 氏液染；③苏木素染液；④氨水。

2。

具体染色步骤(1）切片常规脱蜡入水。

（2）入1％过碘酸氧化10 ~ 15 min,水洗。

（3）入schiff 氏液染10 ～ 30 min，水洗。

（4)苏木素染细胞核1 ～ 2 min,水洗。

（5）入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗.（6)氨水返蓝数秒。

（7）流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色，基底膜染成粉红色。

（8）梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。

3。

染色结果PAS 阳性物质（多糖和糖原)呈红色，核呈蓝色。

4.注意事项（1）组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则组织无法着色。

(2)Schiff 氏液染色的时间需严格控制.时间过长标本基底膜着色过深,时间过短标本基底膜着色淡.(3）入1% 盐酸乙醇分化时间要短,时间长容易使标本退色.（4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。

常规苏木精-伊红HE染色与环保试剂HE染色的效果对比郑建华;金玉兰;邹泽阳【摘要】目的:探讨使用不同试剂对病理组织进行苏木精-伊红染色(HE)染色处理的效果.方法:选取使用传统试剂已经进行过HE染色处理的100例片子纳入对照组,选取使用环保试剂进行HE染色处理的100例片子纳入观察组.分析对比两组病理组织的染色色彩、对比度、色彩渗透力、呈现图像的速度及图像结构清晰程度;比较相同病理组织在不同染色试剂下的HE染色效果.结果:观察组各种病理组织的HE 染色效果色彩较为鲜艳,但两组在Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级切片中的色彩比较,差异均无统计学意义(x2=0.604,x2=0.533,x2=0.785;P>0.05);两组HE染色的对比度、色彩渗透力、图像呈现速度和图像结构清晰程度比较,差异均无统计学意义[对比度(x2=0.324,x2=0.001,x2=0.546;P>0.05);色彩渗透力(x2=0.529,x2=0.001,x2=0.631;P>0.05);图像呈现速度(x2=0.312,x2=0.268,x2=0.721;P>0.05);图像结构清晰程度(x2=0.692,x2=279,x2=0.301;P>0.05)].结论:新型环保试剂应用于病理组织的HE 染色,其效果与传统试剂一致,同时具有环保、无毒、无害等特点,值得推广使用.【期刊名称】《中国医学装备》【年(卷),期】2019(016)004【总页数】4页(P99-102)【关键词】病理组织;环保试剂;对比;HE染色【作者】郑建华;金玉兰;邹泽阳【作者单位】首都医科大学附属北京妇产医院病理科北京 100006;首都医科大学附属北京妇产医院病理科北京 100006;首都医科大学附属北京妇产医院病理科北京 100006【正文语种】中文【中图分类】R445.4目前的临床病理组织苏木精-伊红染色(hematoxylin eosin，HE)染色处理时，通常采用含有二甲苯、含汞苏木素的传统试剂染色套液，但该试剂具有强烈的刺激性气味和毒害性，人体表皮在接触以后，会出现皮肤病，长期接触会引发癌症、呼吸道感染、智力严重衰退、肠胃溃疡、腹泻、呕吐、神志错乱、呼吸道衰竭、肺水肿等病害，导致人体产生易怒、焦虑、四肢抖动及思想难以集中等不良情绪[1-2]。

组织病理切片以及HE染色（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。

（二）实验步骤：一、制作切片1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。

2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。

脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。

组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。

在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。

组织染色后也要进行透明。

最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。

组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。

用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。

为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。

一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃。

组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。

这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。

石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。

用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。

但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。

3、切片、制片石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。

切片厚度一般为3-5μm。

切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。

也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。

二、HE染色1. 二甲苯脱蜡2×10 min；2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min；3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min；5. 1％盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min；6. 1％稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏水洗1min；7. 伊红染色90s；8. 80％乙醇脱水10s，95％酒精10s，无水乙醇5min；9. 无水乙醇10min；10.二甲苯2×10 min；11.中性树胶或加拿大树胶封片。