红细胞血型血清学检测技术规范

检验科ABO及RH血型标准操作规程1.【目的】确保红细胞ABO及RH(D)血型鉴定试验的准确性，防止误定型，特制定本规程。

2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：EDTA -K2抗凝管采集血液2ml (标本应新鲜，注意避免污染)3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。

3.3容器添加剂类型：EDTA -K2抗凝管3.4实验试剂：1.ABO： 1. 1抗A、抗B和抗AB血型定型试剂。

1.25%A、B及O型试剂红细胞悬液。

1.3受检者血清。

1.4受检者5%红细胞盐水悬液。

2.RH 2.1IgG型抗D标准血清。

2.25%D阳性红细胞生理悬液。

2.3 5%D阴性红细胞生理悬液。

4.【测定原理】ABO血型鉴定：生理盐水凝集法一试管法常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。

常用的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。

②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。

结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。

RH鉴定：红细胞RH表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清来鉴定。

虽然Rh血型系不能在盐水介不能在盐水介质中与红统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。

Rh(D)抗体属于IgG类，细胞发生凝集，因此必须采用低离子强度盐水试验或酶介质法。

5.【操作步骤】ABO鉴定步骤：1.试管架每一竖排准备2只试管，分别为抗A，抗B试管。

2.标本接收后进行标号，对应相应的试管标号。

3.分别加入A，B型标准血清和受试者的红细胞悬液各两滴，混匀后离心2分钟。

4.取出试管后用手指轻弹试管底，若沉淀物成团漂起，表示发生凝聚现象；若试管内沉淀物恢复悬液状态，表示无凝集现象。

血型鉴定标准操作规程1.目的为规范各血型系统血型鉴定的技术操作，保证鉴定结果准确及临床输血安全有效，特制定本规程。

2.适用范围适用于输血科（血库）进行各血型系统血型鉴定。

3.职责输血科（血库）技术人员负责各血型系统血型鉴定。

4.所需设备和试剂设备普通离心机，血型血清学专用离心机，普通显微镜。

试剂各血型系统单克隆血型试剂，3%-5%的A、B、O型试剂红细胞。

5.检测环境条件室温应控制在18-27℃，湿度应保持30%-70%。

6.项目及方法ABO血型鉴定ABO血型鉴定原理红细胞上具有A抗原，而血清中含有抗B抗体者为A型；红细胞上有B抗原，而血清中含有抗A抗体者为B型；红细胞上没有A和B抗原，而血清中含有抗A、B抗体者为O 型；红细胞上有A和B抗原，而血清中没有相应抗体者为AB型，见表1。

表1.试剂血清、红细胞鉴定血型（一）玻板法实验操作（1）洁静的玻板，用记号笔在正定型一侧注明抗A、抗B、抗A（B）,反定型一侧孔中注明A细胞、B细胞、O细胞。

（2）在正定型一侧孔中先加入相应试剂血清1滴,再加入待检者20%红细胞悬液1滴；在反定型一侧先加入待检者血清2滴,再加入相应20%试剂红细胞(为3-5人份的混合红细胞)1滴。

（3）摇动玻板数次,5min后观察凝集现象，判断并报告检测结果。

如有怀疑者,须做试管法对照。

（4）报告方式:通过计算机信息系统发布正式血型结果。

注意事项（1）操作者必须认真细致,严格查对,准确报告血型结果。

（2）鉴定血型时,室内温度宜在18-27℃,以免产生假阳性。

遇有可疑冷凝集时 (1)先将玻板放在日光灯处加热3-5分钟后观察 (2)将待检者红细胞用37℃生理盐水洗涤2-3次后，再做血型鉴定。

（3）抗A、抗B、抗A(B)试剂血清，效价不低于256，亲和力在15s以内出现凝集，3min 时凝块不小于1mm2，冷凝集等效价在1:4以下。

（4）应另备有一套合格的试剂的血清作对照。

（5）所有待检者的血型均应做正、反定型，防止误定血型。

红细胞血型抗体效价测定标准操作规程本文介绍了红细胞血型抗体效价测定标准操作规程，以规范输血科医务科护理部的技术操作，并适用于评估母婴血型不合的新生儿溶血病的风险程度及产前检查等其他临床需要。

在材料和设备方面，需要3%～5%的A、B型反定型试剂红细胞、0.2 mol/L二巯基乙醇(2-Me)应用液、抗球蛋白试剂、待检者血标本、微柱凝胶抗球蛋白卡等。

在检测环境方面，室温应控制在18-27℃，湿度应控制在30%-70%。

在检测原理方面，对于IgM类红细胞血型抗体，将受检血清经连续倍比稀释后与表达检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，并根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分，完成对IgM类红细胞抗体效价的测定。

对于IgG类红细胞血型抗体，则先用巯基试剂2-Me裂解其中的IgM型抗体，经巯基试剂2-Me处理后再测定IgG类红细胞血型抗体。

在操作步骤方面，盐水介质法测定IgM类红细胞血型抗体效价。

具体操作为将受检血清加入一系列稀释盐水中，分别加入A、B型反定型试剂红细胞，静置30分钟后观察凝集情况，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，并根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分，完成对IgM类红细胞抗体效价的测定。

7.1.1.对12支试管进行排列编号，第2至第12管每管加入0.1ml生理盐水，第1管及第2管分别加入受检者血清0.1ml，混匀后吸出0.1ml移至第3管内，以此类推，连续倍比稀释至第12管（2048倍）。

7.1.2.在12支试管中，分别加入3%检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞50μl，轻摇试管架。

7.1.3.使用血型血清学专用离心机进行离心，离心速度为120g，离心时间为1min，观察并记录有无溶血及凝集情况。

7.1.4.结果判读：镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数即为检查目标抗体的效价，根据“红细胞凝集强度与评分标准”进行评分。

血型鉴定标准操作规程1 目的规范血型鉴定，提升输血工作从业人员技术水平，保证血型鉴定检测质量，保障临床输血安全。

2 职责输血科(血库)岗位工作人员负责血型鉴定检测全过程。

3 适用范围适用于输血科(血库)工作人员从事血型鉴定检测。

4 生物安全要求血型鉴定检测标本，存在潜在的生物安全危害,所有标本的操作过程必须遵守：被血液污染的物品必须放入医疗专用垃圾袋，损伤性废弃物放入利器盒。

5 设备和材料5.1 标本: 采血EDTA抗凝标本(紫色长管)。

5.2 试剂：抗A、抗B血型定型试剂、RhD血型定型试剂、2%～5%A、B、O标准试剂红细胞、标准Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号不规则抗体筛选红细胞、凝聚胺（低离子强度溶液（LIM）、凝聚胺溶液、悬浮液）、生理盐水等。

5.3设备：输血科（血库）血型血清学专用离心机、标本离心机、显微镜、试管架等。

5.4 耗材：清洁干燥一次性塑料试管(5ml)、清洁干燥一次性塑料吸管(1ml)、清洁干燥载玻片、速干手消毒液/消毒纸巾、污物桶、利器盒、医疗废弃物专用袋、医疗废弃物处置标签、一次性橡胶手套、干净工作服、口罩等。

6 环境血型鉴定检测环境要求宽敞明亮、干燥通风、安全卫生、整洁有序。

7 操作步骤7.1 ABO血型鉴定操作规程7.1.1 方法试管法。

7.1.2 原理根据红细胞上有或无A抗原和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。

利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO 血型。

正定型就是用已知抗A和抗B血型抗体来测定红细胞A抗原或/和B抗原；反定型就是用已知A红细胞和B红细胞来测定血清/血浆中有无相应的抗A 或/和抗B。

7.1.3 标本种类：受检者血清/血浆、2%～5%受检者红细胞盐水悬液。

7.1.4 试剂及器材：抗A、抗B 血型抗体；2%～5%A、B、O标准试剂红细胞；生理盐水；试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；血库专用离心机。

7.1.5 操作步骤7.1.5.1 检查所用试剂的批号、外观、有效期及相应的器材。

红细胞血型抗体鉴定操作规程 SXYJ-GZ-02161目的规范红细胞血型抗体鉴定的操作，发现有临床意义的不规则抗体，确保红细胞血型抗体鉴定的准确性。

2适用范围适用于疑为抗体筛选阳性者，如交叉配血、输血反应和新生儿溶血病等的检测。

3职责检测者负责依据此程序进行红细胞血型抗体鉴定操作。

4材料与设备抗体筛选细胞、混合筛选细胞、谱细胞、IgG抗-D血清、3%RhD阳性红细胞盐水悬液、1%木瓜酶试剂、抗人球蛋白试剂、0.9%无菌生理盐水；一次性使用滴管、试管、玻片；KUBOTA KA-2200型离心机、S648型电热恒温水温箱（37℃）、HH.W21.600型电热恒温水温箱（56℃）等。

5操作方法5.1待检标本的准备及要求5.1.1待检标本准备两管血样，一管用EDTA抗凝，另一管不抗凝血清：待检的不抗凝标本应退缩充分，用离心机离心并分离出血清；5.1.2细胞：从待检的抗凝标本中吸出一滴红细胞，用0.9%生理盐水充分洗涤三遍，配制成3%红细胞盐水悬液。

5.2盐水介质法5.2.1加受检者血清2滴于标好的试管中；5.2.2加3%试剂红细胞悬液1滴于每个试管中混合；5.2.3离心3400转15秒（KA-2200型离心机Ⅱ档），观察溶血和凝集反应，记录结果；5.2.4按需要置4℃、室温（18-25℃）、37℃孵育15-30分钟；5.2.5离心观察溶血和凝集，并记录结果，溶血或凝集都是阳性结果。

5.3间接抗人球蛋白法：方法参见SXYJ-GZ-0211。

5.4木瓜酶法：方法参见SXYJ-GZ-0215。

5.5吸收试验：根据初步判断抗体的性质选择相应的方法（参见SXXJ-GZ-0208）。

5.6放散试验：根据初步判断抗体的性质选择相应的方法（参见SXXJ-GZ-0209）。

6结果判定根据凝集强度和溶血现象(方法参见SXYJ-GZ-0202:5.2.1.6)，对结果进行判读。

根据细胞谱反应格局确定抗体特异性。

7注意事项7.1对所有疑为抗体筛选阳性的样本均进行此项鉴定，常规筛选使用1、2、3号筛选细胞或混合筛选细胞，抗体特异性鉴定使用谱细胞。

ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。

(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。

2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。

3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。

(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。

(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。

(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。

2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。

红细胞血型血清学技术综述血型是人类血液的主要特征之一，表达了血液各种成分的遗传多态性。

人类红细胞血型抗原是研究最早的抗原，1901年奥地利维也纳大学的Kar Landsteiner发现人类第一个血型——ABO血型后，迄今发现的血型系统已接近30个，包括ABO、MNS、P、RH、Lutheran、Kell等。

1 红细胞血型鉴定1.1 ABO血型鉴定1.1.1原理根据红细胞上和血清（或血浆）中有或无A抗原或/和B抗原及其抗体，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。

可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。

正定型是用已知抗-A或抗-B定型试剂来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；反定型是用已知A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。

应用筛选红细胞检测鉴定标本的血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，以确定抗体的特异性。

1.1.2 结果判读细胞均匀无凝集者为阴性（-），细胞有凝集者或反应中红细胞溶血者为阳性（+）。

1.2.1 原理Rh血型系统是继ABO血型系统之后又一重要的血型系统，与ABO血型系统不同的是，在没有相应的抗原免疫的情况下，一般不会产生Rh抗体[1] 。

红细胞表面存在正常D抗原，则该细胞与抗D（IgM）试剂发生直接凝集，与抗D （IgG ）试剂发生间接凝集，该细胞Rh血型为阳性；若红细胞表面D抗原位点数减少或抗原结构产生变异，则该细胞与抗D（IgM）试剂不发生直接凝集，与抗D（IgG ）试剂发生间接凝集，该细胞Rh血型为D弱反应型；红细胞无论在间接凝集试验还是在直接凝集试验中发生凝集都应为RhD阳性。

若不存在D抗原，则该细胞无论在间接凝集试验还是在直接凝集试验中均不发生凝集，该细胞Rh血型为阴性。

用抗C、抗c、抗E、抗e這4种Rh定型试剂通过血凝试验来检查红细胞上是否存在相应抗原。

用筛选红细胞检测RhD阴性确证血清中是否存在不规则抗体，如果存在用谱细胞进行抗体鉴定，以确定抗体的特异性。

红细胞血型血清学试验安徽省合肥市第一人民医院输血科林正民江建锋陈玲梁晓浏IgG抗A（B）测定【原理】血清以巯基乙醇（2-mercaptoethanol,简称2-me）处理后，IgM抗体分子裂解为6-7 S 亚单位。

此种亚单位虽然仍保持与抗原结合的能力，但已失去与相应红细胞凝集的作用。

IgG 抗体分子则不被2-me灭活，保持与相应红细胞致敏的血清学特性。

IgA抗体分子可部分被灭活（7S亚单体不受影响，9 S及11 S多聚体被灭活）。

【试剂】1、0.2mol/L 2-巯基乙醇应用液取巯基乙醇1.6ml以pH 7.4 PBS（KH2PO4 1.73g, Na2HPO4·12H2O 19.35g, NaCl 8g加蒸馏水至100ml）稀释到100ml，分装安瓿，每支1ml或2ml,冰箱保存备用。

2、受检者血清。

3、5%A型和B型红细胞PBS（或生理盐水）悬液。

4、抗人球蛋白血清。

【操作】1、吸取受检者血清0.4ml，加2-me应用液0.4ml，混合，将试管口塞紧，置37℃水浴中2h。

2、排列小试管（10mm×60mm）两排，每排10支，第一排每管各加pH 7.4的PBS 0.4ml。

3、第1排第1管加2-me处理血清0.4ml，混合，吸出0.6ml，移0.2ml至第2排第1管内，其余0.4ml移入第1排第2管内，混合。

以此类推，作倍量稀释至第10管，每管内留有1:2, 1:4, …1:1024不同稀释度的血清各0.2ml。

4、第1排每管各加5%A型红细胞悬液0.2ml，第2排每管各加5%B型红细胞悬液0.2ml，置37℃水浴温育1h。

5、结果观察如在前几管内发现有红细胞凝集者，是由于高效价IgG抗A(B)或IgA抗A(B)所引起，称为“盐水效价”。

6、其余红细胞未见凝集的试管，再以pH 7.4 PBS洗涤3次，除去洗涤液，留取压实红细胞。

7、每管各加pH 7.4的PBS 2滴，混合。

红细胞ABO血型（正定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。

二、方法采用试管法检测红细胞ABO血型（正定型）。

三、原理用已知抗A、抗B标准血清（单克隆抗体）测定被检者红细胞上有无相应的A或B抗原，结合反定型结果判断ABO血型。

四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(正定型)确认。

五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限责任公司；3、批准文号：国药准字S1*******；4、包装规格：抗A、抗B试剂各1支， 10ml /支；5、贮藏条件；2-8℃避光保存。

6、有效期：自检定合格之日起2年；7、试剂性能：试剂单克隆抗体效价：抗A效价≥128；抗B效价≥128；特异性试验合格。

七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。

2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。

3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。

4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。

八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管2支，分别标明抗A、抗B，用滴管分别加入受检者5%红细胞悬液1滴于试管，再分别在对应管中加入抗A、抗B标准血清1滴。

2、摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s或室温静臵1小时。

3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。

如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

4、ABO血型（正定型）表现型反应格局表受检者血型受检者红细胞+试剂标准血清抗A 抗BA + -B - +O - -AB + +5、红细胞ABO血型（正定型）结果凝集强度判断对照表红细胞凝集反应描述凝集强度混合凝集外观镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布溶血，上清液中有游离血红蛋白溶血红细胞凝集成一大块，血清清晰透明4+红细胞凝集成数小块，血清尚清晰3+红细胞凝块分散成许多小块，周围可见到游离红细胞2+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞1+镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞±镜下未见凝集，红细胞均匀分布阴性九、质量控制1、对新进批号的试剂应作抗体效价验定。