红细胞血型及相关检测

冻干前后红细胞血型及生物活性指标的检测吴学忠;刘忠;吕蓉;李敏;李素萍;於娟;赵丹【摘要】目的检测冻干前、后红细胞血型抗原及其生物学活性,了解冻干前、后红细胞血型抗原及其生物学活性的变化情况.方法红细胞血型抗原的检测采用血型血清学方法,2,3-DPG和ATP用ELISA法.结果在ABO、Rh、MNSs、Kell、Duffy、P血型抗原中,冷冻前、冻干后红细胞血型抗原一致;在Lewis血型抗原中,冷冻前、冻干后红细胞血型抗原有变化.冷冻前、冻干后红细胞2,3-DPG和ATP含量均无明显变化.结论冷冻前、冻干后红细胞Lewis血型系统中的Lea和Leb血型抗原变化有明显差异;冷冻前、冻干后红细胞2,3-DPG和ATP含量变化无统计学意义.%Objective To detect the blood group antigens, the levels of 2,3-DPG and ATP of red blood cells (RBCs) before and after freeze-drying. Also the changes of blood group antigens and biological activity of RBCs beforeand after RBCs freeze-drying was observed. Methods The blood group antigens of RBCs were detected by the blood group serology, the levels of 2,3-DPG and ATP were detected by ELISA. Results The blood group antigens of RBCs were the same as before and after freeze-drying about ABO, Rh, MNSs, Kell, Duffy and P blood group systems. But the blood group antigens of RBCs of Lewis blood group systems were different before and after freeze-drying. The levels of 2,3-DPG and ATP of RBCs before and after freeze-drying didn't change significantly. Conclusion The Lea and Leb blood group antigens of RBCs before and after freeze-dryingof Lewis blood group systems have changed significantly. The levels of 2,3-DPG and ATP of RBCs before and after freeze-drying havn't chenged significantly.【期刊名称】《临床输血与检验》【年(卷),期】2011(013)004【总页数】4页(P316-319)【关键词】冷冻干燥;红细胞;血型;生物活性【作者】吴学忠;刘忠;吕蓉;李敏;李素萍;於娟;赵丹【作者单位】230031 安徽省合肥市中心血站;230031 安徽省合肥市中心血站;230031 安徽省合肥市中心血站;230031 安徽省合肥市中心血站;230031 安徽省合肥市中心血站;230031 安徽省合肥市中心血站;大连医科大学检验医学院【正文语种】中文【中图分类】R318.52;R331.1+41真空冷冻干燥保存是一种理想的红细胞保存方法,但该技术尚处于实验探索阶段。

3．ABO红细胞血型检测波片法原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B 型、AB型、及O型四种。

可利用红细胞凝集试验即用已知抗A或抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原.ABO抗体有天然和免疫两种。

天然抗体是指未经可察觉的抗原刺激而产生的抗体.人在出生前尚未产生抗体，一般在出生几个月后才开始形成自己的抗体;到5-6岁时,具有较高的效价.样本:在操作前应先看说明书，有的厂商推荐用全血,有的厂商指定用盐水、血清或血浆悬浮的浓度较低的红细胞悬浮液。

试剂:有卫生部颁发的生产许可证和批准文号的厂家生产的经中国药品生物制品检定所批批检定合格，并贴有防伪标签的试剂。

试剂盒组成：1．有生产许可证的单克隆或多克隆抗A抗原抗体。

2．有生产许可证的单克隆或多克隆抗B抗原抗体。

3．有生产许可证的单克隆或多克隆抗A、B抗原抗体.4．玻璃载波片或划分成小格的检测板。

5．蘸试剂棒。

操作步骤:1．取清洁玻片，标明抗A、抗B、抗A、B,2．在标记好的洁净波片上滴一滴抗-A3．在另一标记好的洁净波片上滴一滴抗-B。

4．在每一波片的试剂上滴一滴已混匀的要检测的红细胞悬浮液（在盐水、血清或血浆）。

5．每一块波片用一个洁净的试剂棒将试剂和红细胞充分混匀，使混合物的面积大约为20mm x 40mm。

6．轻微倾斜波片2分钟.不要把波片放于发热的表面上。

7．判断，解释并记录所有的反应结果。

结果判读：见表:红细胞的ABO定型正向定型结果判读抗A 抗B抗A，B---O+-+ A-++ B+++ AB有明显的凝集块为阳性结果，2分钟后仍为均匀的红细胞悬液则为阴性结果。

注意:1．波片法较试管法更易使操作者接触样本，工作人员必须阅读厂商说明书上的安全措施2．波片法不适用于患者和供者血清中的抗体。

红细胞血型原理与检测策略引言：红细胞血型是指红细胞表面的抗原和血清中的抗体的特异性反应。

根据不同的抗原和抗体的存在与否，可以将人类的红细胞血型分为A、B、AB和O型。

了解红细胞血型具有重要的临床意义，包括输血、器官移植和孕产妇管理等方面。

本文将介绍红细胞血型的原理以及常用的检测策略。

一、红细胞血型的原理红细胞血型是由红细胞表面的抗原和血清中的抗体决定的。

抗原是一种能够刺激机体产生抗体的物质，而抗体则是一种能够与抗原特异性结合的免疫球蛋白。

根据红细胞表面抗原的不同，人类的红细胞血型可分为A、B、AB和O型。

1. ABO血型系统：ABO血型系统是最常见和最重要的红细胞血型系统之一。

根据红细胞表面是否存在A抗原和B抗原，人类可以分为A型、B型、AB 型和O型。

A型红细胞表面有A抗原，B型红细胞表面有B抗原，AB型红细胞表面同时具有A抗原和B抗原，而O型红细胞表面则没有A抗原和B抗原。

2. Rh血型系统：Rh血型系统是另一个重要的红细胞血型系统。

Rh血型系统中最重要的抗原是Rh因子，也称为D抗原。

如果红细胞表面有Rh因子，则为Rh阳性；如果没有Rh因子，则为Rh阴性。

二、红细胞血型的检测策略红细胞血型的检测通常包括血型鉴定和抗体筛查两个方面。

1. 血型鉴定：血型鉴定是指确定个体的ABO血型和Rh血型。

常用的血型鉴定方法包括直接血细胞法和血清试剂法。

直接血细胞法是通过将被测血液与已知血型的抗血清混合，观察凝集反应来确定血型。

例如，将被测血液与抗A血清混合，如果出现凝集反应，则说明被测血液为A型；如果与抗B血清混合后出现凝集反应，则说明被测血液为B型。

血清试剂法是通过将被测血液与已知血型的红细胞混合，观察凝集反应来确定血型。

例如，将被测血液与A型红细胞混合，如果出现凝集反应，则说明被测血液为B型。

2. 抗体筛查：抗体筛查是为了检测血清中是否存在与红细胞抗原相对应的抗体，以避免输血引起的不良反应。

常用的抗体筛查方法包括交叉试验和抗人球蛋白试验。

输血科红细胞血型抗体筛查标准操作规程红细胞血型抗体筛查标准操作程序红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1．ABO血型鉴定发现受检者血清中有ABO血型以外的抗体时；2．供血者血清抗体筛检；3．输血前受血者血清抗体检查；4．输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时；5．孕妇血清的抗体检查；6．新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查；7．直接抗人球蛋白试验阳性红细胞上抗体检查。

筛查方法一、盐水介质法：【方法原理】有些抗体能凝集盐水混悬的红细胞。

这些抗体通常是IgM类抗体，其中许多在22℃下反应最好。

在室温下有活性而在37℃无活性的抗体是没有什么临床意义的。

对患者或供血者的血样不需要用这种方法。

在37℃下也有活性的样本(如抗Kell，抗D)是有临床意义的，而这些抗体通常可用抗人球蛋白试验和酶技术来检查。

【试剂】1．试剂红细胞：由血型参比实验室或血液中心提供，或由各血库从供血者或工作人员中进行普查得到。

筛查红细胞以2个或3个人抗原互补的不同的红细胞为1套，单独分开分装，因为单一的筛查红细胞较混红细胞提供较高的敏感性。

因为许多抗体同双倍量抗原(纯合子)的红细胞反应比同单倍量抗原(杂合子)的红细胞反应要强得多，而不可能得到的都是纯合子红细胞，因此，筛查红细胞的抗原组成必须是互补，经提供尽可能多的必要的抗原。

筛查红细胞大多不包括低频率抗原，所以不可能检出低频率抗体。

这种抗体只有在抗体鉴定时被测到，或在交叉配血时被发现，或在新生儿出生后出现黄疽时被发现。

每一组筛查红细胞中至少有常见的抗原，而且是互补的。

如果某种抗体只能与一种特定抗原的纯合子细胞起反应，而筛查红细胞上这种特定抗原是杂合子，则该抗体可能被漏检。

合适的纯合子表现型的供血者是很少的，为了提供有重要抗原的纯合子细胞，需要使用来自3个供血者的红细胞。

2．血清标本：虽然血清和血浆中存在相同的红细胞抗体，但一般都采用血清进行抗体检查。

因为：①如果血浆中的凝血系统发生部分激活，就可产生纤维蛋白，干扰对凝集的解释；②只有通过激活补体的作用才能证实的抗体，不能在血浆中检出；③常用的抗凝剂是结合Ca2+来防止凝固，而Ca2+对于补体的激活是必不可少的。

血型鉴定与输血不良反应的实验诊断(一)血型鉴定及交叉配血常用试验及其意义1.红细胞血型系统：(1)ABO血型系统1)ABO血型抗原及基因：2)ABO血型抗体IgM抗体：天然获得IgG抗体：后天免疫获得IgM与IgG抗体的特性(2)Rh血型系统1)Rh血型抗原：D抗原，临床检测Rh(D)，汉人≥99.7%C/E/c/e抗原：弱，不检测2)Rh血型抗体：IgG抗体：70%的Rh(-)者可通过免疫获得3)Rh血型的变异型：弱D型：有D抗原，但弱表达部分弱D型：部分D缺失，弱表达DEL：D抗原完全或大部分缺失，不表达2.白细胞血型（略）3.血小板血型(1)血小板非特异性抗原：相关抗原HLA抗原：HLA-I类抗原红细胞血型抗原：ABO血型抗原——血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness, PTR)：原因复杂，免疫/非免疫/未明确因素。

免疫因素中主要由HLA 抗原引起(2)血小板特异性抗原（Human Platelet Antigen,HPA)——输血后紫癜(post-transfusion purpura, PTP)：输血/怀孕史患者输血后5-10天突然出现的PLT减少。

文献报道多为HPA-1a 引起（欧美研究多）——新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAIT)：母体抗胎儿HPA IgG（来源于父方）。

原发性血小板减少性紫癜母亲的免疫性抗体引起(二)血型鉴定与交叉配血常用试验1.红细胞血型鉴定(1)ABO 血型鉴定正定型(forward grouping)：细胞定型反定型(reverse grouping)：血清定型1)吸收放散法可鉴定弱A或弱B型2)临床意义①输血：正反定型结果一致。

同型相输。

否则——急性溶血性输血反应②实体器官移植：ABO血型相同。

否则——超急性排斥反应③评估ABO新生儿溶血病患病风险(2)Rh血型鉴定1)RhD细胞定型：Rh(+) / Rh(-)2)临床意义输血：同型相输的原则，紧急时？——弱D供血者亦视为阳性预防新生儿溶血病(Rh-HDN)实体器官移植：超急性排斥反应(3)红细胞交叉配血试验1)主侧配血：受者血清+供者RBC2)次侧配血：供者血清+受者RBC 结果均为阴性——发现不规则抗体方可接受输血3) 自身对照：受者血清+受者RBC——发现自身抗体2.血小板血型鉴定(1)血小板抗原分型：HPA分型：血清法或分子生物学法HLA分型：分子生物学法(2)血小板抗体检测：ELISA法HLA抗体：在血小板同种抗体免疫中重要(＞79.9%)HPA抗体：与HLA抗体共同形成了血小板同种抗体(17.6%)(三)血型鉴定及交叉配血的主要临床应用1.临床输血主要相容：同型相输次要相容：必要时可接受的2.新生儿溶血病HDNABO血型不合：常见，程度较轻; Rh血型不合：少见，程度较重HDN发生原理：（以Rh-HDN为例）抗人球蛋白法检测HDN：IgG类抗体不发生肉眼可见凝集反应加入中间试剂：抗人IgG免疫球蛋白发生肉眼可见的凝集反应产前检查（不完全抗体、RBC、抗人球蛋白）[目的]预测夫妻间HDN发生的可能性[结果] 配合——不会发生HDN; 不配合——测抗体，阳性者测效价[正常范围]ABO抗体效价≥512，Rh抗体效价≥16→密切监控，Rh抗体效价≥32且有溶血史者考虑换血 产后检查：新生儿IgG抗体测定（检测新生儿血清中是否含有母源IgG抗体）直接抗球蛋白试验(direct antiglobulintest, DAT)：（不完全抗体、RBC、抗人球蛋白）检测新生儿RBC是否被母体IgG致敏游离抗体试验：亦称间接抗球蛋白试验(indirect antiglobulin test, IDAT)：（不完全抗体、RBC、抗人球蛋白）抗体释放试验：与DAT同，但敏感度高于DAT（不完全抗体、O型RBC/酶处理O型RBC、抗人球蛋白）——释放条件：热释放、冷释放、乙醚释放等——诊断HDN的最有力证据3.不规则抗体筛查与鉴定(1)概念：规则抗体(regular antibody)：——ABO系统中的抗-A、抗-B的IgM抗体不规则抗体(irregular antibody)：——除规则抗体之外的血型抗体(2)特点：抗体效价较弱，易漏检(3)筛查方法：受者血清+抗体筛选细胞(4)鉴定方法：筛查阳性者血清+谱细胞(5)意义：发现有临床意义的不规则抗体，确保输入合适的抗原阴性的血液三、不规则抗体筛查与鉴定(四)常见输血不良反应的实验诊断常见输血不良反应的发生率血小板输注无效特殊的输血不良反应，即指各种因素导致的输注血小板后无“适当反应”诊断标准：1h/24h血小板回收率(PPR)和血小板纠正值(CCI)为指标。

红细胞血型抗体是人体免疫系统产生的针对不同血型抗原的抗体。

这些抗体可以在特定情况下引起血型不合适的输血反应或妊娠并发症。

红细胞血型抗体通常根据它们对不同血型抗原的反应以及它们可能引起的输血反应类型进行分类。

以下是一些常见的红细胞血型抗体分类及检测方法：
1. IgM 类抗体：这些抗体属于较早产生的类型，通常在初始免疫应答时形成。

常见的IgM类抗体包括反A抗体（抗A抗体）和反B抗体（抗B抗体）。

2. IgG 类抗体：这些抗体属于较晚产生的类型，通常在再次暴露于特定抗原后产生。

这些抗体更小，能更容易进入胎盘，因此在妊娠期间可能引发问题。

例如，Rh（D）抗体是IgG类抗体，可能导致Rh血型不合适的妊娠并发症。

检测红细胞血型抗体的常见方法包括：
1. 凝集试验：将被测血清与已知血型抗原混合，观察是否出现凝集反应。

如果出现凝集，表示血清中存在相应抗体。

2. 间接抗人球蛋白试验（间接抗人球蛋白试验，IAT）：这是一种常用于检测患者血清中的抗体的方法。

患者的血清与已知血型的红细胞混合，然后添加抗人球蛋白血清，观察是否出现凝集反应。

3. 直接抗人球蛋白试验（直接抗人球蛋白试验，DAT）：这种方法用于检测已凝集在患者红细胞表面的抗体。

通常用于检测新生儿溶血性疾病。

4. 流式细胞术：这是一种现代化的方法，利用流式细胞仪对红细胞进行检测，可以精确地确定血液中的不同抗体。

这些方法在临床上常用于血型鉴定、输血前筛选和处理妊娠期间的血型不合适问题。

需要强调的是，红细胞血型抗体的分类和检测方法可能会随着医学科技的进步而有所变化，因此在实际操作中应遵循当前的标准和指南。

红细胞血型检测摘要】目前红细胞血型至少已发现有26个血型系统，400多种血型抗原。

ABO血型是最早发现的一个血型系统，也是对人类影响最大的一个系统。

本节重点介绍ABO和Rh两个血型系统。

【关键词】红细胞类型检验(一)ABO血型系统1.ABO血型的分类人类红细胞表面有两种抗原，分别为A抗原和B抗原，A型红细胞表面含A抗原；B型红细胞表面含B抗原，AB型红细胞表面含有A和B两种抗原，O型红细胞既不含有A抗原也不含有B抗原。

在人的血清中，存在着两种天然抗体，一种叫抗A抗体，一种叫抗B抗体，在A型人的血清中含有抗 B抗体，在B型人的血清中含有抗A抗体，在AB型人的血清中既不含有抗A抗体也不含有抗B抗体，O型人的血清中含有抗A和抗B两种抗体。

两种抗体可分别与相应的A或B抗原发生免疫反应。

2.ABO抗原与血型物质 ABO系统的血型抗原有A、B、H三种，它们属于多糖类抗原，主要存在于红细胞表面，与脂质、蛋白质结合在一起，不溶于水，可溶于乙醇，抗原成分由多糖和多肽组成。

多肽部分决定血型的抗原性，多糖部分决定血型的特异性，H抗原是A、B抗原基础物质。

ABO各型红细胞上都有H抗原，O型最多，其顺序分别为O>A2>A2 B>B>Al B。

ABH抗原在胎儿37天时便能检出，以后反应的敏感性不断增强，至出生时红细胞 ABH抗原的敏感性已是成人的20％，至20岁时达高峰，抗原性终生不变，所以，初生儿不易鉴定血型。

3.ABO血型抗体 ABO血型系统抗体若按产生的原因又分、为“天然抗体”和“免疫性抗体”。

(1)天然抗体：没有可以觉察的抗原刺激，在体内自然存在的抗体称为天然抗体，如人体血清中的抗A、抗B抗体，就属于天然抗体。

天然抗体大多数都是IgM，分子量100万，分子的长度为95 nm，由于分子量大，不能通过胎盘，不耐热，70℃加热l小时便破坏，能在等渗盐水中与含有相应抗原的红细胞发生凝集，因此，又叫凝集素或盐水抗体或完全抗体。