ABO血型检测(玻片法)

#### 一、实验目的1. 掌握ABO血型鉴定的基本原理和方法。

2. 通过实验操作，学会使用玻片法进行血型鉴定。

3. 了解血型鉴定在临床医学、输血等领域的应用价值。

#### 二、实验原理人类的ABO血型系统由A、B、O三个基因决定，分别产生A、B、O三种抗原。

根据红细胞膜上抗原的种类和血清中抗体的种类，将血型分为A型、B型、AB型、O型四种。

在本实验中，利用玻片法观察红细胞与标准血清之间的凝集反应，从而判断受试者的血型。

#### 三、实验材料1. 受试者血液样本2. A型标准血清3. B型标准血清4. 载玻片5. 滴管6. 生理盐水7. 75%乙醇8. 消毒棉签9. 抗A和抗B血清#### 四、实验步骤1. 准备工作：将载玻片擦干净，用75%乙醇消毒，放置在实验台上。

2. 滴加血清：在载玻片两端分别滴一滴A型标准血清和B型标准血清。

3. 制备红细胞悬液：用消毒棉签在受试者指尖或耳垂处取血，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，制成约5%的红细胞悬液。

4. 滴加红细胞悬液：用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。

5. 混合：用竹签两头分别混合，搅匀。

6. 观察结果：10～30分钟后观察结果，观察有无凝集现象。

7. 记录结果：记录凝集现象，并根据结果判断受试者的血型。

#### 五、实验结果与分析1. 实验结果：- 若加入A型标准血清时出现凝集，而加入B型标准血清时无凝集，则受试者为A型血。

- 若加入B型标准血清时出现凝集，而加入A型标准血清时无凝集，则受试者为B型血。

- 若加入A型、B型标准血清时均出现凝集，则受试者为AB型血。

- 若加入A型、B型标准血清时均无凝集，则受试者为O型血。

2. 实验分析：- 通过观察红细胞与标准血清之间的凝集反应，可以判断受试者的血型。

- 实验过程中，需要注意操作规范，避免污染和误差。

#### 六、实验结论本实验成功利用玻片法对受试者的血型进行了鉴定，验证了ABO血型鉴定原理的正确性。

3．ABO红细胞血型检测波片法原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B 型、AB型、及O型四种。

可利用红细胞凝集试验即用已知抗A或抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原.ABO抗体有天然和免疫两种。

天然抗体是指未经可察觉的抗原刺激而产生的抗体.人在出生前尚未产生抗体，一般在出生几个月后才开始形成自己的抗体;到5-6岁时,具有较高的效价.样本:在操作前应先看说明书，有的厂商推荐用全血,有的厂商指定用盐水、血清或血浆悬浮的浓度较低的红细胞悬浮液。

试剂:有卫生部颁发的生产许可证和批准文号的厂家生产的经中国药品生物制品检定所批批检定合格，并贴有防伪标签的试剂。

试剂盒组成：1．有生产许可证的单克隆或多克隆抗A抗原抗体。

2．有生产许可证的单克隆或多克隆抗B抗原抗体。

3．有生产许可证的单克隆或多克隆抗A、B抗原抗体.4．玻璃载波片或划分成小格的检测板。

5．蘸试剂棒。

操作步骤:1．取清洁玻片，标明抗A、抗B、抗A、B,2．在标记好的洁净波片上滴一滴抗-A3．在另一标记好的洁净波片上滴一滴抗-B。

4．在每一波片的试剂上滴一滴已混匀的要检测的红细胞悬浮液（在盐水、血清或血浆）。

5．每一块波片用一个洁净的试剂棒将试剂和红细胞充分混匀，使混合物的面积大约为20mm x 40mm。

6．轻微倾斜波片2分钟.不要把波片放于发热的表面上。

7．判断，解释并记录所有的反应结果。

结果判读：见表:红细胞的ABO定型正向定型结果判读抗A 抗B抗A，B---O+-+ A-++ B+++ AB有明显的凝集块为阳性结果，2分钟后仍为均匀的红细胞悬液则为阴性结果。

注意:1．波片法较试管法更易使操作者接触样本，工作人员必须阅读厂商说明书上的安全措施2．波片法不适用于患者和供者血清中的抗体。

ABO血型鉴定标准操作规程1.检验原理：根据红细胞上有或无A抗原或／和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。

可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。

所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或／和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或／和抗—B。

2.试剂和材料：1、抗—A（B型血）、抗—B（A型血）及抗—A十B（O型血）分型血清，2、5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。

3、受检者血清；4、受检者5％红细胞盐水悬液。

3.方法3.1.试管法（1）取洁净小试管（内径10mm×60mm）3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。

分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混合。

（2）另取洁净小试管（内径10mm×60mm）3支，分别标明A、B和O细胞。

用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混合。

（3）立即以1000r／min离心lmin。

（4）将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。

如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

（5）观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。

（6）凝集强度判断标准4十红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。

3十红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。

2十红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。

1十肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞土镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞MF 混合凝集外观（mixed field）是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。

一表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

3.2.玻片法（1）取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔画成方格，标明抗-A、抗-B 和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混合。

ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项一.原理根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。

可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。

所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或抗—B。

二.试剂和材料1．抗—A(B型血)、抗—B(A型血)及抗—A十B(O型血)分型血清（制备方法见本节附注）2．5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3．受检者血清；4．受检者5％红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。

三.方法1．试管法(1)取洁净小试管3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。

分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。

(2)另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。

用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混和。

(3)立即以1000r／min离心1min。

(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。

如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

(5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。

(6)凝集强度判断标准凝集强度判断标准4+红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。

3+红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。

2+红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。

1+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细+-胞混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝MF集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。

-表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

2.玻片法（1）取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混和。

ABO血型鉴定
【实验目的】学习用标准血清测定ABO血型的方法；掌握鉴定的原理；观察红细胞凝集现象；根据测定结果确定血型。

【实验原理】血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。

血型不相容的血液混合，红细胞会凝集成团，称红细胞凝集反应。

血型鉴定是将受试者的红细胞分别加入A型标准血清（含有抗B）与B型标准血清（含有抗A）中，根据是否发生红细胞凝集反应来确定受试者红细胞膜上有无A或B抗原。

【实验对象与用品】人，双凹玻片、采血针、消毒牙签、A型和B型标准血清、小试管、75％酒精等。

【实验步骤与结果】
1．取干净双凹玻片一块，在玻片两端标明A或B。

在A端、B端凹面中央分别滴入A型和B型标准血清各一滴。

2．用75％酒精棉球消毒指端或耳垂皮肤后，用无菌采血针刺破皮肤，挤1～2滴血于盛有1ml生理盐水的小试管中摇动混匀，制成红细胞悬液。

3.用牙签的两端各取红细胞悬液1～2滴分别放入A和B标准血清中，搅匀（竹签一端去混匀一侧就不能去接触另一侧）。

4．室温下静置10～15min后观察结果。

如有凝集反应肉眼可见到朱红色颗粒状或细砂状沉淀，且液体变得清亮。

5．判断血型：根据被试者红细胞是否被A、B型标准血清所凝集，判断其血型。

抗原和血型的关系
红细胞膜上所含的抗原血型无A和B O
A A
B B
A和B AB
【注意事项】
1.所用双凹玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。

2.混匀用的牙签两端只能专用，两种标准血清绝对不能相混。

【思考题】
1.怎样判断受试者是什么血型？
2.红细胞凝固、凝集、聚集三者有何不同？
图示：玻片法鉴定ABO血型。

宁晋县中西医结合医院ABO血型鉴定操作规程
一．项目名称ABO 血型鉴定（正定型）
二．方法玻片法
三．检验原理根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A或（和）抗B抗体，可以将红细胞血型分为A型、B型、O型和AB型。

根据抗A和抗B抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，可以鉴定ABO血型。

四．试剂上海血液生物医药有限公司
抗A血型定型试剂和抗B血型定型试剂（单克隆抗体）
五．标本采集抗凝或不抗凝的末梢血或静脉血均可，用生理盐水做成10%红细胞悬液六．操作
1 取洁净的玻片一张，用记号笔将玻片分为左右两部分，分别标注抗A和抗B。

2 分别滴加抗A和抗B试剂一滴于玻片的抗A和抗B处。

3 再加一滴做好的10%的红细胞悬液在玻片的抗A和抗B处。

4 缓慢摇晃玻片，使试剂与10%的红细胞悬液充分混合，2分钟左右用肉眼判读结果，
并记录。

5 检验结果的解释
ABO血型反应格局表
正定型
血型抗A试剂抗B试剂
+ - A
- + B
- - O
+ + AB
七．检验方法的局限性
与反定型一起进行，正反定型不一致须进一步检查。

八．注意事项
1 对含有较多自身冷凝剂素的受检者，需要37℃的生理盐水溶液洗涤受检者红细胞2-3
次，去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后在鉴定血型。

2 新生儿的血样中抗体含量较低，抗原发育不完全。

同时可能含有母亲血液中的抗A
或抗B抗体，可能导致假阳性或假阴性的出现。

3 出现ABO正反定型不符，须查明原因并解决问题后在记录结果。

ABO血型的测定（直接凝集玻片法)
（一)实验目的了解ABO血型鉴定的原理；掌握玻片凝集试验的方法。

（二)实验原理已发现人类红细胞有20多种血型系统，其中ABO血型系统在输血中最为重要，必须血型相合才能输血。

血型鉴定是根据人类红细胞表面有不同的血型抗原，故用已知的抗A、抗B单克隆抗体作直接玻片凝集试验，可测定血型。

（三)实验材料
1、诊断用抗A及抗B单克隆抗体试剂各一支。

2、玻片、无菌刺血针、消毒用碘酒、酒精、无菌棉签、牙签，记号笔等
（四)实验方法
1、取洁净玻片一张用蜡笔分成两半，分别标记A、B，然后A侧滴一滴抗A抗体（蓝色)，B侧滴一滴抗B抗体（黄色)
2、被检者耳垂或手指用碘酒消毒，酒精脱碘并凉干后，用刺血针刺血。

3、用牙签刮取两滴血液充分与两种抗体混匀，即可观察结果
;
（五)实验结果
血型鉴定结果
（六)注意事项
1、A、B两侧不能混，否则结果不可靠。

2、无菌观念：消毒按一定方向，以一点为中心，由内向外；注意酒精脱碘，否则损伤皮肤、色素沉着；酒精脱碘后，要晾干，否则进针会有烧灼疼痛；。

实验一凝集反应（ABO血型的鉴定）[实验目的]1．掌握凝集反应的原理，玻片法和试管法凝集实验的实验方法和结果分析。

2．了解凝集反应基本类型及血型鉴定的各种方法包括正、反定型，血型板鉴定法和血型卡鉴定法。

[实验原理]在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。

人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。

据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。

[实验器材]1．器材：光学学显微镜，消毒缸2．材料：消毒干棉球，一次性采血针，载玻片，玻璃试管，一次性带刻度朔料吸管，医用黄色垃圾袋3．试剂：75%医用酒精，0.9%NaCl注射液，抗血清试剂抗A、抗B[内容与方法](一)玻片法凝集实验1.用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。

滴1至2滴血液于含有1ml生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。

用干棉球止血。

2．取洁净载玻片1块，在中间用蜡笔画一条竖线，将抗A、B分型试剂分别加1滴于载玻片两端。

3. 用毛细吸管吸取血球悬液，在白瓷板的两个圆孔内各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。

4.肉眼观察红细胞有无凝集发生。

如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。

若肉眼观察不明显，可在显微镜下观察是否存在微小凝集5.记录凝集情况，判定受检者的血型。

（二）试管法凝集实验1．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。

滴1至2滴血液于含有生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。

用干棉球止血。

2．取洁净试管2支，分别标记上A、B字样，将抗A、B分型试剂分别加1滴于相应标记的试管中3．用一次性吸管吸取血球悬液，在2支标记试管中各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。

血型玻片法操作方法血型玻片法是一种用于鉴定和分类人类血型的常见实验方法。

以下是血型玻片法的操作步骤：1. 准备血型玻片材料：包括标准血型抗血清(A、B、AB和O型)，抗人免疫球蛋白(Anti-Human Globulin, AHG)，已知血型的供试者的血清，和已知类型的红细胞悬液。

2. 将玻片清洗干净，并确保完全干燥。

3. 在玻片上标记每个区域。

通常需要标记供试者血清、A型抗血清、B型抗血清、AB型抗血清和O型抗血清的区域。

4. 在每个区域上滴加一滴血清或抗血清，然后在这些血清或抗血清上滴加一滴已知血型的供试者红细胞悬液。

注意不要混合不同的血清或抗血清和红细胞。

5. 使用棉签将血清或抗血清和红细胞悬液轻轻混合，确保彻底混合。

6. 玻片倾斜，观察血型反应。

对于凝集反应，可以观察到红细胞的聚集。

如果红细胞在某个区域内发生凝集，表示该供试者可能具有该特定血型抗体，或者该抗血清对该区域的抗原有反应。

7. 对每个区域重复步骤3-6，直到所有的反应都被观察并记录下来。

8. 在完成所有测试之后，对于阴性反应（没有凝集），加入一滴AHG。

再次倾斜玻片，并观察有无凝集反应。

如果发生凝集，表示供试者红细胞与抗体相互结合。

9. 根据观察到的凝集反应和操作步骤的结果，确定供试者的血型。

10. 记录所有的反应，并根据凝集反应来确定供试者属于A型、B型、AB型或O型血型。

注意事项：- 操作过程中应遵循严格的无菌操作，以避免污染和交叉反应。

- 确保使用正确稀释的血清和抗血清，并在适当的温度和时间条件下进行反应。

- 仔细观察和记录每个反应，以确保准确结果的分析。