红细胞血型检测

血型鉴定操作规程一.玻片法〔仅适用于正定型〕1.原理：1.1根据红细胞上有无A抗原或〔和〕B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和。

型。

根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反响，可以鉴定ABQB 型。

1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反响，区分RhD阳性和RhD阳性。

2.标本采集：用EDTA抗凝管米集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。

紧急情况下可以使用抗凝动脉血。

婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。

3.标本运送与储存：米集好的标本与申请单同期尽快〔一般2小时内〕送往输血科。

标本米集后和检测后，应置于2~8C环境下。

检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。

4 .仪器与材料：抗-A/B血型定型试剂〔单克隆抗体〕、RhD 〔IgM〕血型定型试剂〔单克隆抗体〕、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。

5.操作步骤：5.1用标记笔在载玻片上划分成A、B D三个区域；5.2在标记好的玻片上分别加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型试剂；5.3再各加1滴10咐者红细胞悬:液〔该红细胞悬液可以是盐水悬:液，也可以是悬浮于自身血浆或血活中的红细胞〕；5.4用十净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物均匀涂开，使其覆盖大约直径20mm勺面积；5.5缓慢连倾斜摇动玻片1-2min,观察结果并记录。

6.结果判定：6.1凝集或发生溶血为阳性结果；6.2细胞混匀2min后仍呈悬:液状态的为阴性结果；6.3对结果有疑心，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。

二、纸板法1.原理：1.1根据红细胞上有无A抗原或〔和〕B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和。

型。

根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反响，可以鉴定ABQa型正定型。

A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。

用的A、B细胞检测被检者血活中有无相应的抗-A或抗-B抗体，即反定型。

综合正反定型结果确定受检标本ABQ血型。

3． ABO 红细胞血型检测波片法原理: 根据红细胞上有或无 A 抗原或/和 B 抗原,将血型 分为 A 型 、B 型 、 AB 型、及 O 型四种。

可利用红细胞凝集试验即用已知抗 A 或抗 B 分型血清来 测定红细胞上有无相应的 A 抗原或/和 B 抗原。

ABO 抗体有天然和免疫两种。

天然抗体是指未经 可察觉的抗原刺激 而产生的抗体。

人在出生前尚未产生抗体， 一般在出生几个月后才开始形成自己 的抗体；到 5-6 岁时，具有较高的效价。

样本：在操作前应先看说明书，有的厂商推荐用全血，有的厂商指定用盐水、血清 或血浆悬浮的浓度较低的红细胞悬浮液。

试剂：有卫生部颁发的生产许可证和批准文号的厂家生产的经中国药品生物制品检 定所批批检定合格，并贴有防伪标签的试剂。

试剂盒组成：有生产许可证的单克隆或多克隆抗 A 抗原抗体。

有生产许可证的单克隆或多克隆抗 B 抗原抗体。

有生产许可证的单克隆或多克隆抗 A 、B 抗原抗体。

玻璃载波片或划分成小格的检测板。

蘸试剂棒。

操作步骤：1． 取清洁玻片，标明抗 A 、抗 B 、抗 A 、B,2． 在标记好的洁净波片上滴一滴抗 -A3． 在另一标记好的洁净波片上滴一滴抗 -B 。

4． 在每一波片的试剂上滴一滴已混匀的要检测的红细胞悬浮液(在盐水、 血清或血浆) 。

5． 每一块波片用一个洁净的试剂棒将试剂和红细胞充分混匀， 使混合物的 面积大约为 20mm x 40mm 。

6． 轻微倾斜波片 2 分钟。

不要把波片放于发热的表面上。

7． 判断，解释并记录所有的反应结果。

结果判读 ：见表： 红细胞的 ABO 定型正向定型 抗 A 抗 B 抗 A,B 结果判读 +++ + + + + O A B AB有明显的凝集块为阳性结果， 2 分钟后仍为均匀的红细胞悬液则为阴 性结果。

注意：1． 2．3．4． 5．1．波片法较试管法更易使操作者接触样本，工作人员必须阅读厂商说明书上的安全措施2．波片法不适用于患者和供者血清中的抗体。

血型鉴定操作步骤
血型鉴定，主要是通过红细胞凝集试验来进行，操作步骤如下：
1、准备材料：包括清洁玻片、抗A和抗B血清、待测红细胞样本等。

2、划线分组：在玻片上用蜡笔划成几个区域，分别标明抗A、抗B等。

3、滴血清：在相应的区域滴上抗A、抗B血清。

4、加红细胞：在血清上滴上待测红细胞样本。

5、混合：用玻片轻轻转动，使血清与红细胞充分混合。

6、观察：静置一段时间后，观察红细胞是否发生凝集现象。

7、判断结果：根据红细胞凝集情况，判断血型。

此外还有试管法血型鉴定，其操作步骤类似，只是在观察凝集现象时使用试管代替玻片。

输血科红细胞血型抗体筛查标准操作规程红细胞血型抗体筛查标准操作程序红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1．ABO血型鉴定发现受检者血清中有ABO血型以外的抗体时；2．供血者血清抗体筛检；3．输血前受血者血清抗体检查；4．输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时；5．孕妇血清的抗体检查；6．新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查；7．直接抗人球蛋白试验阳性红细胞上抗体检查。

筛查方法一、盐水介质法：【方法原理】有些抗体能凝集盐水混悬的红细胞。

这些抗体通常是IgM类抗体，其中许多在22℃下反应最好。

在室温下有活性而在37℃无活性的抗体是没有什么临床意义的。

对患者或供血者的血样不需要用这种方法。

在37℃下也有活性的样本(如抗Kell，抗D)是有临床意义的，而这些抗体通常可用抗人球蛋白试验和酶技术来检查。

【试剂】1．试剂红细胞：由血型参比实验室或血液中心提供，或由各血库从供血者或工作人员中进行普查得到。

筛查红细胞以2个或3个人抗原互补的不同的红细胞为1套，单独分开分装，因为单一的筛查红细胞较混红细胞提供较高的敏感性。

因为许多抗体同双倍量抗原(纯合子)的红细胞反应比同单倍量抗原(杂合子)的红细胞反应要强得多，而不可能得到的都是纯合子红细胞，因此，筛查红细胞的抗原组成必须是互补，经提供尽可能多的必要的抗原。

筛查红细胞大多不包括低频率抗原，所以不可能检出低频率抗体。

这种抗体只有在抗体鉴定时被测到，或在交叉配血时被发现，或在新生儿出生后出现黄疽时被发现。

每一组筛查红细胞中至少有常见的抗原，而且是互补的。

如果某种抗体只能与一种特定抗原的纯合子细胞起反应，而筛查红细胞上这种特定抗原是杂合子，则该抗体可能被漏检。

合适的纯合子表现型的供血者是很少的，为了提供有重要抗原的纯合子细胞，需要使用来自3个供血者的红细胞。

2．血清标本：虽然血清和血浆中存在相同的红细胞抗体，但一般都采用血清进行抗体检查。

因为：①如果血浆中的凝血系统发生部分激活，就可产生纤维蛋白，干扰对凝集的解释；②只有通过激活补体的作用才能证实的抗体，不能在血浆中检出；③常用的抗凝剂是结合Ca2+来防止凝固，而Ca2+对于补体的激活是必不可少的。

红细胞ABO血型（反定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。

二、方法采用试管法检测红细胞ABO血型（反定型）。

三、原理用已知的A1、B、O标准红细胞测定被检者血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。

四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(反定型)确认。

五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；3、批准文号：国药准字S2*******；4、包装规格：A1、B、O试剂各1支， 10ml /支；5、贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻。

6、有效期：自检定合格之日起2个月；7、试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。

七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。

2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。

3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。

4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。

八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管3支，分别标明A1型细胞、B型细胞、O型细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴于试管，再分别用滴管加入A1、B、O型试剂红细胞悬液1滴。

2、，摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s。

3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。

如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

红细胞ABO血型（反定型）结果凝集强度判断对照表4、ABO血型（反定型）表现型反应格局表九、质量控制1、对新进批号的试剂应作亲和力与效价验定。

红细胞血型抗体效价测定标准操作规程本文介绍了红细胞血型抗体效价测定标准操作规程，以规范输血科医务科护理部的技术操作，并适用于评估母婴血型不合的新生儿溶血病的风险程度及产前检查等其他临床需要。

在材料和设备方面，需要3%～5%的A、B型反定型试剂红细胞、0.2 mol/L二巯基乙醇(2-Me)应用液、抗球蛋白试剂、待检者血标本、微柱凝胶抗球蛋白卡等。

在检测环境方面，室温应控制在18-27℃，湿度应控制在30%-70%。

在检测原理方面，对于IgM类红细胞血型抗体，将受检血清经连续倍比稀释后与表达检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，并根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分，完成对IgM类红细胞抗体效价的测定。

对于IgG类红细胞血型抗体，则先用巯基试剂2-Me裂解其中的IgM型抗体，经巯基试剂2-Me处理后再测定IgG类红细胞血型抗体。

在操作步骤方面，盐水介质法测定IgM类红细胞血型抗体效价。

具体操作为将受检血清加入一系列稀释盐水中，分别加入A、B型反定型试剂红细胞，静置30分钟后观察凝集情况，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，并根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分，完成对IgM类红细胞抗体效价的测定。

7.1.1.对12支试管进行排列编号，第2至第12管每管加入0.1ml生理盐水，第1管及第2管分别加入受检者血清0.1ml，混匀后吸出0.1ml移至第3管内，以此类推，连续倍比稀释至第12管（2048倍）。

7.1.2.在12支试管中，分别加入3%检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞50μl，轻摇试管架。

7.1.3.使用血型血清学专用离心机进行离心，离心速度为120g，离心时间为1min，观察并记录有无溶血及凝集情况。

7.1.4.结果判读：镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数即为检查目标抗体的效价，根据“红细胞凝集强度与评分标准”进行评分。

一、血凝试验指抗体和红细胞在液体介质中发生肉眼可见的凝集反应。

根据操作方法的不同,主要可以分为以下 3 种方法:①玻片法:根据标准抗体血清与待测红细胞(或标准红细胞与待测血清) 在干燥玻片上是否发生凝集反应来确定待测红细胞 (待测血清) 血型。

它仍然是目前临床常用的血型鉴定的初筛试验方法,具有操作简便,节省材料的优点。

但弱凝集反应需要借助显微镜观察确定。

②试管法:是交叉配血试验中最基础的实验方法之一,其与玻片法原理相同,只是借助试管更大的反应空间,并对待测红细胞予以一定浓度的稀释(通常是用生理盐水稀释红细胞至2 % ~ 5 %) 或加入更多的待测血清 ,通过低速离心后根据有无肉眼可见的凝集反应来判定结果。

由于待测红细胞经过稀释 ,在一定程度上减少了血液中非特异性抗体的浓度 ,从而提高了试验的敏感性。

相比玻片法具有更加准确可靠的优点。

③全自动微板法:检测技术产生于全自动血液样品系统以及用于凝聚实验的扫描酶标仪问世之后。

通过标准化加样、孵育、离心、悬浮、静止以及反应前后吸光度值增加数值的计算,从而达到对血型进行定型与反定型的目的。

应用 ABO 血型自动化检测方法进行正反定型试验,一次判读正确率在 99.8%以上,且能提高检测灵敏度,使弱凝集样本更易显现。

全自动微板法检测 ABO 血型改变了传统的手工操作 ,肉眼判读结果的检测方法 ,具有快速、准确、自动化程度高等优点 ,适合批量操作。

并且血型微量化检测具有节约大量昂贵抗血清、缩短检测时间、操作程序简单等优点 , 目前在各大采供血机构已得到广泛应用。

二、微柱凝胶试验采用凝胶技术进行抗球蛋白试验可提高试验的灵敏度及特异性。

目前微柱凝胶试验(MGT) 在国外输血领域已逐渐作为常规应用于 ABO 及 Rh 血型定型,未知血型抗体筛查以及直接抗球蛋白试验。

在微柱凝胶介质中,红细胞与相应的抗体结合,经过低速离心,凝集的红细胞悬浮于凝胶中,而未与相应抗体结合的红细胞沉到管底。

红细胞血型检测摘要】目前红细胞血型至少已发现有26个血型系统，400多种血型抗原。

ABO血型是最早发现的一个血型系统，也是对人类影响最大的一个系统。

本节重点介绍ABO和Rh两个血型系统。

【关键词】红细胞类型检验(一)ABO血型系统1.ABO血型的分类人类红细胞表面有两种抗原，分别为A抗原和B抗原，A型红细胞表面含A抗原；B型红细胞表面含B抗原，AB型红细胞表面含有A和B两种抗原，O型红细胞既不含有A抗原也不含有B抗原。

在人的血清中，存在着两种天然抗体，一种叫抗A抗体，一种叫抗B抗体，在A型人的血清中含有抗 B抗体，在B型人的血清中含有抗A抗体，在AB型人的血清中既不含有抗A抗体也不含有抗B抗体，O型人的血清中含有抗A和抗B两种抗体。

两种抗体可分别与相应的A或B抗原发生免疫反应。

2.ABO抗原与血型物质 ABO系统的血型抗原有A、B、H三种，它们属于多糖类抗原，主要存在于红细胞表面，与脂质、蛋白质结合在一起，不溶于水，可溶于乙醇，抗原成分由多糖和多肽组成。

多肽部分决定血型的抗原性，多糖部分决定血型的特异性，H抗原是A、B抗原基础物质。

ABO各型红细胞上都有H抗原，O型最多，其顺序分别为O>A2>A2 B>B>Al B。

ABH抗原在胎儿37天时便能检出，以后反应的敏感性不断增强，至出生时红细胞 ABH抗原的敏感性已是成人的20％，至20岁时达高峰，抗原性终生不变，所以，初生儿不易鉴定血型。

3.ABO血型抗体 ABO血型系统抗体若按产生的原因又分、为“天然抗体”和“免疫性抗体”。

(1)天然抗体：没有可以觉察的抗原刺激，在体内自然存在的抗体称为天然抗体，如人体血清中的抗A、抗B抗体，就属于天然抗体。

天然抗体大多数都是IgM，分子量100万，分子的长度为95 nm，由于分子量大，不能通过胎盘，不耐热，70℃加热l小时便破坏，能在等渗盐水中与含有相应抗原的红细胞发生凝集，因此，又叫凝集素或盐水抗体或完全抗体。

ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。

(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。

2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。

3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。

(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。

(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。

(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。

2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。

红细胞血型抗体是人体免疫系统产生的针对不同血型抗原的抗体。

这些抗体可以在特定情况下引起血型不合适的输血反应或妊娠并发症。

红细胞血型抗体通常根据它们对不同血型抗原的反应以及它们可能引起的输血反应类型进行分类。

以下是一些常见的红细胞血型抗体分类及检测方法：
1. IgM 类抗体：这些抗体属于较早产生的类型，通常在初始免疫应答时形成。

常见的IgM类抗体包括反A抗体（抗A抗体）和反B抗体（抗B抗体）。

2. IgG 类抗体：这些抗体属于较晚产生的类型，通常在再次暴露于特定抗原后产生。

这些抗体更小，能更容易进入胎盘，因此在妊娠期间可能引发问题。

例如，Rh（D）抗体是IgG类抗体，可能导致Rh血型不合适的妊娠并发症。

检测红细胞血型抗体的常见方法包括：
1. 凝集试验：将被测血清与已知血型抗原混合，观察是否出现凝集反应。

如果出现凝集，表示血清中存在相应抗体。

2. 间接抗人球蛋白试验（间接抗人球蛋白试验，IAT）：这是一种常用于检测患者血清中的抗体的方法。

患者的血清与已知血型的红细胞混合，然后添加抗人球蛋白血清，观察是否出现凝集反应。

3. 直接抗人球蛋白试验（直接抗人球蛋白试验，DAT）：这种方法用于检测已凝集在患者红细胞表面的抗体。

通常用于检测新生儿溶血性疾病。

4. 流式细胞术：这是一种现代化的方法，利用流式细胞仪对红细胞进行检测，可以精确地确定血液中的不同抗体。

这些方法在临床上常用于血型鉴定、输血前筛选和处理妊娠期间的血型不合适问题。

需要强调的是，红细胞血型抗体的分类和检测方法可能会随着医学科技的进步而有所变化，因此在实际操作中应遵循当前的标准和指南。

红细胞血型原理与检测策略引言：红细胞血型是指红细胞表面的抗原和血清中的抗体的特异性反应。

根据不同的抗原和抗体的存在与否，可以将人类的红细胞血型分为A、B、AB和O型。

了解红细胞血型具有重要的临床意义，包括输血、器官移植和孕产妇管理等方面。

本文将介绍红细胞血型的原理以及常用的检测策略。

一、红细胞血型的原理红细胞血型是由红细胞表面的抗原和血清中的抗体决定的。

抗原是一种能够刺激机体产生抗体的物质，而抗体则是一种能够与抗原特异性结合的免疫球蛋白。

根据红细胞表面抗原的不同，人类的红细胞血型可分为A、B、AB和O型。

1. ABO血型系统：ABO血型系统是最常见和最重要的红细胞血型系统之一。

根据红细胞表面是否存在A抗原和B抗原，人类可以分为A型、B型、AB 型和O型。

A型红细胞表面有A抗原，B型红细胞表面有B抗原，AB型红细胞表面同时具有A抗原和B抗原，而O型红细胞表面则没有A抗原和B抗原。

2. Rh血型系统：Rh血型系统是另一个重要的红细胞血型系统。

Rh血型系统中最重要的抗原是Rh因子，也称为D抗原。

如果红细胞表面有Rh因子，则为Rh阳性；如果没有Rh因子，则为Rh阴性。

二、红细胞血型的检测策略红细胞血型的检测通常包括血型鉴定和抗体筛查两个方面。

1. 血型鉴定：血型鉴定是指确定个体的ABO血型和Rh血型。

常用的血型鉴定方法包括直接血细胞法和血清试剂法。

直接血细胞法是通过将被测血液与已知血型的抗血清混合，观察凝集反应来确定血型。

例如，将被测血液与抗A血清混合，如果出现凝集反应，则说明被测血液为A型；如果与抗B血清混合后出现凝集反应，则说明被测血液为B型。

血清试剂法是通过将被测血液与已知血型的红细胞混合，观察凝集反应来确定血型。

例如，将被测血液与A型红细胞混合，如果出现凝集反应，则说明被测血液为B型。

2. 抗体筛查：抗体筛查是为了检测血清中是否存在与红细胞抗原相对应的抗体，以避免输血引起的不良反应。

常用的抗体筛查方法包括交叉试验和抗人球蛋白试验。