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小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法的改进刘庆军;孙永君【摘要】我们在细胞生物学实验教学中对小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法实验操作做了一些改进:由传统的取小鼠后腿骨改为取四肢骨,提高了实验材料的利用率；由注射器法收集骨髓细胞改为震荡器法收集骨髓细胞,使收集细胞的实验操作更加简便、安全,而且大大提高了骨髓细胞的收得率,同时明显增加染色体中期分裂相的细胞数,由对照组中的每视野中的中期分裂相细胞2～4个提高到5～9个,极大提高了实验教学的效果.【期刊名称】《山东轻工业学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(026)004【总页数】2页(P64-65)【关键词】小鼠;骨髓细胞染色体;标本;改进【作者】刘庆军;孙永君【作者单位】山东轻工业学院食品与生物工程学院,山东济南250353;山东轻工业学院食品与生物工程学院,山东济南250353【正文语种】中文【中图分类】Q2-06小鼠骨髓细胞染色体标本制备是细胞生物学实验教学中一个经典而常规的实验教学项目，染色体是细胞分裂时期(体细胞的有丝分裂和生殖细胞的减数分裂)遗传物质存在的特定形式，是染色质紧密包装的结果。
染色体是有机体遗传信息的载体，对染色体的研究在生物进化、发育、遗传传和变异中有十分重要的作用。
处于分裂期的细胞经秋水仙素或秋水仙胺处理，由于阻断了纺锤丝微管的组装，使细胞分裂停止于中期，此时染色体达到最大收缩，具有典型的形态［1］。
本实验所用的小鼠骨髓细胞有高度的分裂活性并且数量非常多，经秋水仙素处理后，可使分裂的细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗、固定、浸片染色等处理，便可制作较好的小鼠骨髓细胞染色体标本。
1 实验用品1.1 器材解剖板、解剖剪、大小镊子、吸管、离心管、培养皿、量筒、预冷载玻片、酒精灯、普通天平、擦镜纸、HZS－H型恒温水浴箱、TDL－5型离心机、SK－1型振荡混匀器。
1.2 试剂秋水仙素200 μg/mL、0.075 mol/L KCl低渗液、甲醇乙酸(3∶1)固定液、Giemsa 染液、0.85% 生理盐水、香柏油、香柏油清洗剂(无水乙醇:无水乙醚=1∶1)1.3 材料小白鼠(KM洁净级，约25 g)2 实验方法［2，3］2.1 秋水仙素处理取骨髓前3 h先给小鼠腹腔注入秋水仙素，每只小鼠注射200 μg/mL浓度的秋水仙素0.4 mL。
【实验题目】染色体标本制作与观察【实验目的】1、掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。
2、了解常用实验动物染色体的数目及特点。
3、认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。
【实验材料与用品】1.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯等2.材料：小鼠3. 试剂：蒸馏水、0.9%NaCl溶液、0.3%KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素【实验原理】一、制作染色体标本的先决条件①细胞具有旺盛的分裂能力：选择活跃的组织，如胸腺、骨髓、睾丸、小肠；或施加药物使细胞分裂（PHA）②设法得到大量的分裂中期细胞：利用秋水仙素二、染色体染色体是基因的载体。
真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传特性之一。
制备染色体标本是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。
染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞、、和组织培养的细胞中制备染色体。
本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。
染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断的运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体形态最典型、最易辨认和区分。
因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。
染色体特征：数目、长度（绝对长度、相对长度）、着丝粒位置（M/SM/ST/T)、随体与次缢痕的数目大小和位置、带型分析描述染色体的四个参数：①相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100，相对长度可以用来表示每条染色体的长度。
②臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度)，臂指数可以用来确定臂的长度。
③着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100，着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位置。
④染色体臂数（NF），根据着丝粒的位置来确定。
三、操作原理小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可）利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但基本程序并不复杂。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。
实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。
在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。
为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。
实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。
2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。
3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。
4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。
5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。
实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。
通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。
同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。
结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。
观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。
同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。
小白鼠染色体的标本制备和观察实验是细胞生物学和遗传学研究中非常重要的一环。
通过观察小白鼠染色体的结构和数量，可以更好地了解其遗传特性和遗传变异。
然而，在现有的研究中，我们发现了一些实验中存在的不足之处，这些问题可能会影响实验结果的准确性和可靠性。
有必要对现有的标本制备和观察实验进行深入的评估和改进。
以下是小白鼠染色体标本制备和观察实验中存在的一些不足之处：1. 标本制备不规范：在研究中，染色体标本的制备非常重要，影响着后续的观察和分析结果。
然而，在一些实验中，我们发现染色体标本的制备过程存在一些不规范的情况，比如处理时间过长、温度控制不当等问题，这些问题可能会影响细胞的完整性和染色体的展开情况。
2. 染色体观察方法不精准：在染色体观察实验中，常用的方法包括显微镜观察和染色体计数。
然而，在一些实验中，我们发现染色体观察的方法不够精准，特别是在染色体计数过程中存在误差较大的情况，可能会影响实验结果的可靠性。
3. 样本数量不足：在一些研究中，由于样本数量有限，可能导致实验结果的稳定性和代表性不足，不能充分反映小白鼠染色体的遗传特性和变异情况。
针对以上问题，我们提出了一些改进方案：1. 规范标本制备流程：在染色体标本制备过程中，需要严格控制处理时间和温度，确保细胞的完整性和染色体的展开情况，可以采用标准的化学方法或酶切方法来提高染色体的展开度和清晰度。
2. 优化染色体观察方法：在染色体观察实验中，可以采用先进的显微镜技术和染色体计数工具，提高观察结果的准确性和精准度，也可以结合计算机图像分析技术来进行数据处理和统计分析，减少人为误差的影响。
3. 增加样本数量：为了提高实验结果的稳定性和代表性，可以增加样本的数量，尽可能覆盖不同个体和不同遗传背景的小白鼠，从而更全面地了解染色体的遗传特性和变异情况。
通过改进小白鼠染色体标本制备和观察实验中存在的不足之处，可以提高实验结果的准确性和可靠性，为细胞生物学和遗传学研究提供更可靠的数据支持。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
通过制备动物骨髓细胞染色体标本，进一步了解细胞染色体的形态和结构，以及染色体在遗传学研究中的应用。
实验原理
动物骨髓细胞是一种快速分裂细胞，其中染色体数目和结构较为清晰，因此通常用于染色体分析和遗传学研究。
为了制备动物骨髓细胞染色体标本，需要经过细胞取样、细胞处理与固定、染色和镜检等几个步骤。
实验步骤
1. 取样：在实验动物体内取出一小段骨髓组织，置于离心管中，加入10ml生理盐水，轻轻摇晃，使细胞均匀分散。
2. 细胞处理和固定：取出适量的细胞液，加入等体积的去离子水后进行处理。
将细胞液滴于预先贴有载玻片上的正常细胞培养液中，使其渐渐均匀分散。
将玻片放置在室温下，使细胞贴附在玻片上并进行细胞固定。
细胞固定可用10%甲醛或70%乙醇，也可用50%醋酸处理。
3. 染色：将固定的细胞标本先置于1%琼脂糖中5～10分钟，用注射器吸取琼
脂糖，并把细胞标本冲洗干净，然后用生理盐水洗净。
若要染色，则滴上适量的霉素酚-吡啶溶液或可以染细胞核者，如吉姆萨红溶液或乙酰苯胺-三甲胺水溶液等，等颜色形成后即可洗净。
4. 镜检：放入顶匣，用显微镜观察染色后细胞形态和染色体。
如果需要拍照，则可利用显微摄影技术，对样本进行记录。
实验结果
通过实验可以观察到动物骨髓细胞染色体的形态、数量和结构，进一步了解染色体在遗传学研究中的应用。
同时，该实验对熟悉细胞培养和染色技术也有一定帮助。
实验结论
通过本次实验，我们可以获得动物骨髓细胞染色体标本，并学习了细胞处理、固定、染色和镜检等关键步骤。
实验结果可以为生物学研究提供相关实验基础。
动物染色体标本的制备
一、实验目的
1. 了解染色体标本制备的基本原理
2. 掌握滴片法制备染色体标本的一般步骤
二、实验原理
每一物种的细胞一般都具有一定数目、形状和大小的染色体，在秋水仙素的作用下可使分裂细胞阻断在中期，此时染色体形态最典型，然后通过低渗、固定、染色等步骤，便可在显微镜下呈现出其形态。
三、实验用品
器具：显微镜、培养皿、手术剪、镊子、冷冻载片、滴管
试剂：秋水仙素、生理盐水、甲醇、冰醋酸、低渗液、PH6.8磷酸缓冲液、Giemsa染色液
材料：蟾蜍
四、实验方法步骤
1. 前处理实验前3－4小时，按每克体重3ug剂量给蟾蜍的腹腔注射秋水仙素；
2. 取材打开蟾蜍腹腔，截取1－2cm长的一段小肠（以十二直肠为好），用见到剖开成片状，在生理盐水中洗净；
3. 低渗将洗净的小肠投入到盛有5mL低渗液的小试管中，在37℃水浴下处理30分钟以上；
4. 固定弃去低渗液，加入新配制的甲醇（3）：冰乙酸（1）固定液约5ml，静止固定40分钟左右；
5. 解离弃去固定液，加入约2ml60％的冰乙酸，轻轻摇动，使解离的细胞充分散开，5分钟后弃去小肠，即得细胞悬浮液；
6. 滴片吸取少许细胞悬浮液，在适当的高度滴3－4滴于冰冷的载片上，迅速吹斜气；
7. 干燥滴片自然风干或吹风机吹干；
8. 染色在载片上滴十滴磷酸缓冲液，再滴一滴Giemsa染液，橡皮球轻轻吹均匀，染色30分钟左右；
9. 观察吹干后在显微镜下观察。
文章编号:1000-2235(2002)02-0228-02
动物细胞染色体制备实验的改进
林 颖,姜 芬
关键词: 蛙,牛;染色体;标本制备
中图分类号: R 394.22 文献标识码: B
动物细胞染色体的制备和观察是细胞生物学教学中的重要实验,主要训练学生掌握制备动物细胞染色体的技术原理,熟悉制备程序要点,能够自己动手制备动物细胞染色体,并对染色体进行形态观察、分析和计数。
目前,许多实验手册中都是用小白鼠骨髓细胞来制备动物细胞染色体。
笔者根据本实验室的具体情况,参考相关资料,在实验材料和实验方法等方面进行改进,报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料 牛蛙(市场购买),淀粉肉汤(牛肉膏0.3g ,蛋白
胨1.0g ,Na Cl 0.5g ,蒸馏水100ml ,可溶性淀粉6.0g ,煮沸灭菌,置4℃冰箱保存,用时水浴融化),秋水仙素,固定液(甲醇∶冰醋酸(V /V )=3∶1)。
1.2 方法
1.2.1 预处理 实验前牛蛙腹腔注射淀粉肉汤1ml,或在背部剪去1cm ×1cm 皮肤,或将蛙脚趾剪去3～5mm 。
处死前3～4h 腹腔注射秋水仙素4μg /g (体重)。
1.2.2 收集细胞 用脊髓穿刺法将蛙处死,取股骨,剪掉两端股骨头,用针筒吸取0.075mo l /L K Cl 低渗溶液1.5ml,冲洗股骨,将骨髓洗出,于高速离心管中将骨髓用吸管吹打制成骨髓细胞悬液。
1.2.3 低渗 置37℃水浴中低渗处理20min [1]。
1.2.4 固定和离心 加固定液0.1ml,混匀,盖紧管盖,置高速台式离心机中以7000r /min 离心30s,弃上清,向沉淀加入固定液1ml ,用吸管吹打混匀,静置10min ,重复离心一次[2]。
1.2.5 制片 吸去上清,加固定液约0.5ml,吸管吹打混匀,常规滴片,烤片,Giemsa 染色。
2 结 果
显微镜下,可以清晰地见到被染成蓝色的牛蛙间期细胞核以及分散在它们之间的许多中期分裂相。
中期分裂相可见染色体被染成蓝色,呈X 形,染色体总数(共2n =26),染色体较长,较大,分散程度较佳(附图)。
附图 牛蛙染色体中期分裂相(×1000)
3 讨 论
以往动物细胞染色体制备实验通常用小白鼠骨髓细胞制备染色体,由于小白鼠骨髓细胞染色体数目多(2n =40),且染色体呈U 形,形态小,不易进行形态观察和计数。
现改用牛蛙作为实验材料,牛蛙骨髓细胞染色体数目较少(2n=26),且染色体呈X 形,形态较长,较大,易于进行形态观察和计数。
牛蛙可随时从市场上购买,材料易得,且骨髓量较多,实验成功率高。
在实验过程中也尝试使用野生蟾蜍作为实验材料,由于蟾蜍染色体组较小(2n=22),染色体形态与牛蛙染色体相近,也能获得与牛蛙染色体相同的实验效果,但野生蟾蜍受季节影响不易获得,且无法从市场购得,故将牛蛙作为最佳实验材料。
实验前通过对牛蛙腹腔注射淀粉肉汤或对背部皮肤或脚趾进行损伤,以刺激牛蛙的免疫系统,使白细胞数量增加,提高骨髓细胞分裂相,相应的中期细胞分裂相也增多。
该方法简便易行,效果明显,有助于学生在显微镜下寻找和观察分裂相及计数。
以往进行细胞离心时多采用低速离心机离心,每次离心用时需5～10min,现改用高速离心机离心,只需30s,大大缩短时间,提高实验效率,可以避免由于学生人数增加,上课时间缩短,对实验效果造成的不良影响。
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J ou rnal of Fujian M edical University Vol.36 No.2 J un e,2002
参考文献:
[1] 蒋伟宏,林 炜.细胞与分子生物学实验指导[M ].上海:上海
医科大学出版社,1997.38～39.
[2] 倪 岚,余从年.人类染色体标本制备改进[J ].生物学通报,
2000,35(2):33.
文章编号:1000-2235(2002)02-0229-01
富含脂肪组织标本制片方法的改进
高美钦,袁芳平,万 榕
关键词: 脂肪组织;石蜡包埋
中图分类号: R 361.2 文献标识码: B
在病理制片过程中,发现富含脂肪组织的标本按常规的脱水程序处理所制取的包埋块,切片不顺利,经常出现破碎、挤压或切片不完整等现象,甚至经脱脂处理的标本切片仍出现上述问题。
因此,笔者对这类标本的制片方法进行摸索与改进,使这类组织切片的质量得以提高,介绍如下。
1 材料与方法
1.1 材料 10%福尔马林液固定的脂肪瘤组织标本8例,每例取材6块,大小为
2.5cm ×2cm ×0.3cm,并分为6组。
德国莱卡T P 1020型全自动脱水机。
1.2 方法
1.2.1 组织按常规方法脱水透明。
1.2.2 石蜡(熔点为56～58℃)60℃1h ×3。
1.2.3 组织从脱水机取出,将其中1组的组织常规包埋,其他5组的组织块移到60℃恒温箱中的浸蜡杯内继续浸蜡,其时间分别为2,4,6,8,9h 。
1.2.4 按浸蜡时间顺序先后进行常规石蜡包埋、切片、HE
染色。
2 结 果
继续浸蜡时间为9h 的实验组脂肪瘤组织石蜡浸透彻底,包埋块硬度适中,切割性能良好,切片平整,不易破碎。
镜下组织结构完整,脂肪细胞框架清晰,无细胞塌陷和重叠现象(附图)。
其他组的组织随着浸蜡时间的缩短石蜡浸透的效果就越差,切片质量也越差。
与常规标本浸透时间相同的实验组组织切片困难。
3 讨 论
脂肪组织在常规的脱水程序处理过程中,脂肪不容易被脱水剂完全溶解,影响了石蜡的浸透速度,以常规的浸蜡时
附图 脂肪瘤组织 HE ×200
间,不足以使脂肪组织完全被浸透,石蜡起不到支撑组织的作用,造成切片困难。
因此,在传统的脂肪组织制片过程中常用丙酮脱脂,然后进行常规脱水、包埋等处理。
但笔者在实践中发现丙酮脱脂存在着以下缺点:组织经丙酮脱脂时间太长,产生明显的收缩,甚至变脆,影响切片质量,进而影响组织结构的观察;脱脂时间太短,脱脂不彻底,造成切片困难。
有报道以汽油代替二甲苯使用,具有脱脂与溶蜡的双重作用[1],但汽油是一种易挥发易燃气体,存在一定的实验室安全隐患,此外,脂肪组织需另行处理,比较麻烦、费时。
本方法主要是通过延长组织的浸蜡时间,使脂肪组织得以充分的浸透,明显地改善了脂肪组织包埋块的切割性能。
在方法上有以下优点:(1)可以省去脱脂的步骤;(2)可以同其他标本一起按常规脱水程序同时脱水;(3)组织浸透充分,容易切片;(4)方法简便,效果满意,值得推广应用。
本方法尤其适用于脂肪瘤标本,也适用于富含脂肪的组织标本如乳腺等;或因丙酮等脱脂时间不足造成切片因难时也可通过延长浸蜡时间来补救。
参考文献:
229
福建医科大学学报 2002年6月 第36卷 第2期。
