医学形态与机能实验技术实验报告中山医学院09393184 林永东一：实验综述本次实验包括2个实验：家兔急性呼吸衰竭实验和肝性脑病实验，通过制作兔的闭合性气胸及开放性气胸，复制呼吸衰竭模型。
做气管内插管并连接呼吸传感设置，记录家兔呼吸运动的变化，以及记录注射不同剂量的氯化铵对家兔的影响，结合组织制片和显微照相等技术，从器官层次到细胞层次了解肺，肝急性衰竭前后结构组织变化的情况。
二：目的和原理1：呼吸衰竭是指由于外呼吸功能的严重障碍，以致动脉血氧分压低于正常范围，伴有或不伴有二氧化碳分压增高的病理过程。
肺通气障碍或（和）肺换气功能障碍都可引起呼吸衰竭。
本实验通过复制呼吸衰竭病理模型，观察呼吸和血气的变化并分析其机制，学习动脉采血的方法，了解血气测定方法。
2：正常情况下，血氨的来源与清除保持动态平衡，而氨在肝脏中合成尿素是维持此平衡的关键。
通过结扎大部分肝脏造成急性肝功能不全，然后经消化道输入碱性氯化铵溶液，导致肠道中氨生成增多并吸收入血，引起实验动物血氨迅速升高，出现震颤、抽搐、昏迷等类似肝性脑病症状，证明氨在肝性脑病发病机制中起主要作用。
本次实验的目的是学习复制急性肝功能不全造成急性肝功能不全模型的方法，了解氨在肝性脑病发病机制中的作用，通过制作组织切片了解肝组织损伤的形态学改变。
三：实验对象家兔四：手术器材和药品兔手术台、实验手术器械一套、气管插管（两侧管套有橡皮管）、连接静脉插管的输液装置、连接三通的动脉插管、注射器（1ml、2ml、10ml、50ml）、软木塞、滤纸、血气酸碱分析仪。
离心机、分光光度计、水浴锅、电炉、注射器（5ml）、输液瓶、胶管、螺旋夹、滴管、吸管、离心管、试管、试管夹、试管架、酒精灯、手术器械一套、输尿管塑料插管、显微镜、玻片。
20％乌拉坦、1％肝素生理盐水溶液、生理盐水、0.1％肾上腺素，2.5%氯化铵，1%普鲁卡。
五：实验步骤肺衰竭：1．取家兔一只，称重，从耳缘静脉注射20％乌拉坦溶液5ml/kg。
将家兔仰卧固定于兔台上。
2．沿颈部正中切开皮肤，分离气管，插入气管插管。
分离左侧颈总动脉，插入充满肝素生理盐水的动脉插管。
分离右侧颈外静脉，插入静脉插管，连接输液装置，并缓慢输入生理盐水（4～5滴/min）。
3．用注射器抽出动脉插管内的死腔液，然后用充有肝素生理盐水溶液的注射器与动脉插管相连，让血液自动流入注射器内（切勿进入气泡），取血2ml，迅速套上带软木塞的针头，作血气分析，同时观察家兔的呼吸频率及深度。
4．打开胸腔，观察家兔的呼吸频率和深度。
5：用止血钳夹住气管，处死动物，打开胸腔，在气管分叉处结扎气管以防止水肿液流出，取出一部分肺组织。
注意事项：1、穿刺胸腔时，针头应与胸壁垂直，顺肋骨上缘插入以免损伤肋间动脉，注意不要插得太深或太浅（0.5cm左右）进针时不可用力够猛以免穿破胸膜脏层。
肝衰竭：1：取兔一只，称重后仰卧固定于兔台上，剪去腹部正中兔毛，在上腹部正中用1%普鲁卡因作浸润性局麻。
2：从胸骨剑突起作上腹部正中切口（长约5-6cm），打开腹腔后，即可见到肝脏。
用手轻轻向下压肝脏，切断肝与横膈之间的镰状韧带。
3：将肝脏各叶向上翻，除与胃连接紧密的肝尾叶外，用粗棉线自根部将其余各部结扎。
4：顺着胃幽门部找出十二指肠，在其表面作一荷包缝合。
用眼科剪剪一小口，插入一导尿管，结扎固定，然后关闭腹腔，然后关闭腹腔，松绑，放于实验桌上进行观察和实验。
5：观察家兔的一般情况，角膜反射及对刺激的反应。
6：每隔5min向十二指肠内注入2.5%氯化铵混合液5ml。
仔细观察动物的一般情况、角膜反射及对刺激反应的变化。
注意有无反应性增高，直至出现痉挛发作为止。
记录从给药开始到痉挛抽搐发作时间以及用药总量。
7：切下一小块肝尾叶组织和一小块之前结扎的正常肝脏组织，制成组织切片并进行观察。
注意事项：1、勿将药液漏入腹腔。
2、用生理盐水纱布覆盖伤口，避免体热及水分丢失。
3、手术操作要轻，因肝脏软易破。
切断镰状韧带时要小心勿损伤其后方的下腔静脉。
4、动物行局麻时，有时会挣扎，要与氨引起的强直性痉挛相区别。
六：实验结果肺呼吸衰竭（一）呼吸曲线描记1.正常呼吸2.闭合性气胸呼吸幅度降低3.闭合性气胸抢救后4.开放性气胸呼吸曲线很快便接近一条直线（二）病理切片气胸模型肺组织的组织切片10*10倍肺整体支气管腔内空气充满40*10倍支气管腔支气管腔增大40*10倍可见肺脏萎缩肝急性衰竭（一）、每隔5min注入5ml的氯化铵混合液，并观察兔子的一般情况，角膜反射，刺激反应等，记录结果如下：次数时间一般情况角膜反射刺激反应10min正常存在（+++）灵敏（+++）25min正常存在（+++）灵敏（+++）310min正常存在（+++）灵敏（+++）415min正常存在（++）灵敏（++）520min从21min开始抽搐，22min出现角弓反张（二）、病理切片1、肝尾叶10倍肝小叶中央静脉可见部分肝细胞呈空泡样门管区有炎症细胞浸润40倍肝尾叶肝细胞部分肝细胞受损，肝细胞肿胀呈球形有些可见炎症细胞肝窦内淤血门管区2、正常的肝组织切片七：实验讨论肺呼吸衰竭本实验以兔子为实验对象，分别制作兔子闭合性气胸、开放性气胸导致急性呼吸衰竭以观察兔子的呼吸曲线变化。
从呼吸曲线可以看出，对兔子进行闭合性气胸后，呼吸幅度降低，频率减慢，直至接近直线，抽气抢救成功后，呼吸曲线逐渐恢复到接近原来状态；对兔子进行开放性气胸，可观察到呼吸曲线很快便接近一条直线，呼吸衰竭模型制作成功。
肝急性衰竭肝性脑病（hepatic encephalopathy，he）是由严重肝病引起的，以代谢紊乱为基础、中枢神经系统功能失调的综合征。
临床表现为意识障碍、行为失常和昏迷。
可以从开始的情绪或行为改变、衣着不整和大脑反应迟钝，发展至昏迷及深度昏迷。
病因大部分肝性脑病是由各型肝硬化（病毒性肝炎肝硬化最多见）和门体分流手术引起，包括如经颈静脉肝内门体分流术（tips），如果连轻微肝性脑病也计算在内，则肝硬化发生肝性脑病者可达70%.小部分肝性脑病见于重症病毒性肝炎、中毒性肝炎和药物性肝病的急性或暴发性肝功能衰竭阶段。
其余见于原发性肝癌、妊娠期急性脂肪肝、严重胆道感染等。
引起肝性脑病的诱因可归纳为三方面：①增加氨等含氮物质及其他毒物的来源，如进过量的蛋白质、消化道大出血、氮质血症、口服铵盐、尿素、蛋氨酸等。
便秘也是不利的因素，使有毒物质排出减慢。
②低钾碱中毒时，nh4+容易变成nh3，导致氨中毒，常由于大量利尿或放腹水引起。
③加重对肝细胞的损害，使肝功能进一步减退。
例如手术、麻醉、镇静剂、某些抗痨药物、感染和缺氧等。
在慢性肝病时，大约半数病例可发现肝性脑病的诱因。
发病机制肝性脑病的发病机制未完全明确。
一般认为产生肝性脑病的病理生理基础是肝细胞功能衰竭和门腔静脉之间有手术造成的或自然形成的侧支分流。
主要是来自肠道的许多毒性代谢产物，未被肝解毒和清除，经侧支进入体循环，透过血脑屏障而至脑部，引起大脑功能紊乱。
血吸虫病性肝纤维化虽有侧支循环，但由于肝功能较好，很少发生肝性脑病。
有关肝性脑病发病机制有许多学说，其中以氨中毒理论的研究最多，最确实有据。
暴发性肝功能衰竭所致的肝性脑病与门一体性肝性脑病的发病机制不尽相同。
氨中毒学说氨代谢紊乱引起的氨中毒是肝性脑病，特别是门体分流性脑病的重要发病机制。
与氨中毒有关的脑病又称为氮性脑病（nitrogenous encephalopathy）。
（一）氨的形成和代谢血氨主要来自肠道、肾和骨髓肌生成的氨，但胃肠道是氨进入身体的主要门户。
正常人胃肠道每日可产氨4g ，大部分是由尿素经肠道细菌的尿素酶分解产生，小部分是食物中的蛋白质被肠道细菌的氨基酸氧化酶分解产生。
氨在肠道的吸收主要以非离子型氨（nh3）弥散进入肠膜，其吸收率比离子型铵（nh 4 ）高得多。
游离的nh 3 有毒性，且能透过血脑屏障；nh 4 呈盐类形式存在，相对无毒，不能透过血脑屏障。
nh 3 与nh 4 的互相转化受ph 梯度改变的影响。
当结肠内ph>6 时，nh 3 大量弥散入血；ph<6 时，则nh 3 从血液转至肠腔，随粪排泄。
肾产氨是通过谷氨酰胺酶分解谷氨酰胺为氨，亦受肾小管液ph 的影响。
此外，骨髓肌和心肌在运动时也能产氨。
机体清除血氨的主要途径为：①尿素合成，绝大部分来自肠道的氨在肝中经鸟氨酸代谢环转变为尿素；②脑、肝、肾等组织在三磷酸腺昔（atp）的供能条件下，利用和消耗氨以合成谷氨酸和谷氨酰胺；③肾是排泄氨的主要场所，除排出大量尿素外，在排酸的同时，也以nh 4 的形式排除大量的氨；④血氨过高时可从肺部少量呼出。
（二）肝性脑病时血氨增高的原因血氨增高主要是由于生成过多和（或）代谢清除过少。
在肝功能衰竭时，肝将氨合成为尿素的能力减退，门体分流存在时，肠道的氨未经肝解毒而直接进入体循环，使血氨增高。
许多诱发肝性脑病的因素能影响血氨进入脑组织的量，和（或）改变脑组织对氨的敏感性。
诊断肝性脑病的临床表现主要诊断依据为：①严重肝病（或）广泛门体侧支循环；②精神紊乱、昏睡或昏迷；③肝性脑病的诱因；④明显肝功能损害或血氨增高。
扑翼（击）样震颤和典型的脑电图改变有重要参考价值。
对肝硬化患者进行数字连接试验和心理智能测验可发现轻微肝性脑病。
鉴别诊断肝性脑病应与精神病及可引起昏迷的其他疾病，如脑血管意外、糖尿病、低血糖、尿毒症、脑部感染和镇静药过量等相鉴别。
进一步追问肝病病史，检查肝脾大小、肝功能、血氨、脑电图等将有助于诊断与鉴别诊断。
八：课程及实验感想这次选修了《医学形态与机能实验技术》课程，学到了相当多实用的实验室技术，包括组织切片中包埋，染色，切片，冰冻切片制作，以及实验生理学的麻醉，切口，插管，取材和显微照相等步骤。
其中学习的时间相当紧凑，也加深了对实验室技术的理解。
初步能自主完成简单实验的全部步骤以及制作组织切片，显微照相的全过程，可谓收获甚丰。
感谢余建平，邱灿华，林文健，梁天文等老师的指导。
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