压力蒸汽灭菌讲义

实验二实验器具的灭菌一、实验目的1.学习并初步掌握和各种实验器具的包扎及高压蒸汽灭菌的方法。

2.了解其他灭菌方法。

二、基本原理高压蒸汽灭菌法可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，是灭菌效果最好、应用最广的灭菌方法。

其基本原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加，在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃，在此温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。

三、器材1、高压蒸汽灭菌锅2、牛皮纸3、棉绳4、仪器和其他用具四、操作步骤1、包扎将各种实验器具进行合理规范包扎后，要用牛皮纸覆盖，最后用棉绳系紧。

2、加热烧开待高压锅内的水烧开，将包扎好的器具放入锅内的桶内，最后放入高压锅。

3、升压完全排除锅内空气后，关闭放弃阀，待压力上升到0.1MPa时，开始计时，维持压力0.1~0.15MPa 20分钟。

4、减压，取出器具到达保压时间后，即可切断电源，压力降到0.5MPa时，可缓慢放出蒸汽，注意不要使压力降低太快，以致引起激烈的减压沸腾，使容器中的液体四溢。

当压力降到零后，才能开盖。

五、思考题（1）、你认为那些环节会影响高压灭菌的效果？如果影响，请简述其中最关节的环节是什麽？实验三牛肉膏蛋白胨培养基的配制—、目的要求1、明确培养基的配制原理2、通过对基础培养基的配制，掌握培植基的一般方法和步骤。

二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏 3.0g蛋白胨10.0gNaCI 5.0g水1000mIpH 7.4～7.6三、器材1、溶液和试剂牛肉膏，蛋白胨，NaCI,琼脂，1 moI/L NaOH, 1 moI/L HCI。

2、仪器和其他用品试管，三角瓶，烧杯，量筒，破棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸气灭菌锅，pH试纸（pH5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。

四、操作步骤1、称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨，NaCI放入烧杯中。

压力蒸汽灭菌1 适用范围: 用于耐高温、耐高湿的医疗器械和物品的灭菌。

不能用于凡士林等油类和粉剂的灭菌。

2压力蒸汽灭菌器: 根据排放冷空气的方式和程度不同，分为下排气式压力蒸汽灭菌器和预真空压力蒸汽灭菌器二大类。

3下排气式压力蒸汽灭菌器（1）灭菌原理: 利用重力置换原理，使热蒸汽在灭菌器中从上而下，将冷空气由下排气孔排出，排出的冷空气由饱和蒸汽取代，利用蒸汽释放的潜热使物品达到灭菌。

（2）灭菌方法：（2）灭菌方法：1）手提式压力蒸汽灭菌器灭菌方法：①在主体内加入适量的清水，将灭菌物品放入灭菌器内；②将顶盖上的排气软管插入内壁的方管中，盖好并拧紧顶盖；③将灭菌器的热源打开，开启排气阀排完空气后(约在水沸腾后10min～15min)关闭排气阀；④压力升至102.9kPa(1.05kg/cm2)，温度达121℃时，维持到规定时间(根据物品性质及有关情况确定，一般20min～30min)；⑤需要干燥的物品，打开排气阀，慢慢放汽，待压力恢复到零位后开盖取物；⑥液体类物品，待压力恢复到零位，自然冷却到60℃以下，再开盖取物。

2）卧式压力蒸汽灭菌器灭菌方法：①将待灭菌物品放入灭菌柜室内，关闭柜门并扣紧；②打开进气阀，将蒸汽通入夹层预热；③夹层压力达102.9kPa(1.05kg/cm2)时，调整控制阀到“灭菌”位置，蒸汽通入灭菌室内，柜内冷空气和冷凝水经柜室阻气器自动排出；④柜内压力达102.9kPa(1.05kg/cm2)，温度达121℃，维持20min～30min；⑤需要干燥的物品，灭菌后调整控制阀至“干燥”位置，蒸汽被抽出，柜室内呈负压，维持一定时间物品即达干燥要求。

⑥对液体类物品，应待自然冷却到60℃以下，再开门取物，不得使用快速排出蒸汽法，以防突然减压，液体剧烈沸腾或容器爆炸。

4 预真空压力蒸汽灭菌器（1）灭菌原理：利用机械抽真空的方法，使灭菌柜室内形成负压，蒸汽得以迅速穿透到物品内部进行灭菌。

蒸汽压力达205.8kPa(2.1kg/cm2)，温度达132℃或以上，开始灭菌，到达灭菌时间后，抽真空使灭菌物品迅速干燥。

压力蒸汽灭菌的使用及监测演示文稿第一部分：压力蒸汽灭菌的使用方法1.准备工作-确保灭菌器具完好无损，无泄露和渗漏现象；-检查灭菌器具的密封性，确保能够达到足够的压力；-清理器具内部，清除赘余物质；-准备好需要灭菌的物品，并正确摆放在灭菌器内。

2.灭菌参数设置-根据所需杀灭菌种的特点和要求，设置合适的温度、压力和时间参数；- 通常，灭菌温度为121℃，压力为1.1-1.3kg/cm²，时间为15-30分钟；- 对一些特殊菌种，如芽孢杆菌等，可采用高温高压（134℃、2.2kg/cm²、15分钟）进行灭菌。

3.开始灭菌-确保灭菌器具门完全关闭，并上锁；-打开进气阀，注入蒸汽，并排出残余空气；-当压力达到设定值时，记时开始；-灭菌结束后，关闭进气阀，排出蒸汽；-解除锁定，打开灭菌器具门，取出灭菌物品。

第二部分：压力蒸汽灭菌的注意事项1.物品选择-建议使用耐热性好，并能承受压力的材质制作的器皿。

如不锈钢、玻璃等；-尽量避免使用塑料制品，因为塑料可能会在高温下融化，导致灭菌失败。

2.装载方式-避免过密或过松的装载。

过密可能导致蒸汽无法渗透到物品的每一个角落，过松则可能影响灭菌效果；-建议将物品分装入小容积器具中，这样可以提高灭菌的效率。

3.蒸汽质量-使用蒸馏水或去离子水制备灭菌所需蒸汽；-防止水垢和油渍的附着，定期清洗和清理设备内部。

第三部分：压力蒸汽灭菌的监测要点1.灭菌效果监测-使用生物指示器检测灭菌器的灭菌效果，常见的指示器有热敏菌、单次使用生物指示器等；-按时定期检测，确保灭菌器的正常工作。

2.原辅材料监测-对使用的蒸汽源、灭菌器具等原辅材料进行监测；-确保原辅材料的质量符合相关标准。

3.环境监测-定期对灭菌器周围的环境进行监测；-保持环境的清洁和洁净。

总结：压力蒸汽灭菌作为一种有效的消毒方法，在医疗和食品安全等领域得到广泛应用。

使用时要注意器具的准备工作、灭菌参数的设置以及物品的选择和装载方式。

压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌法是灭菌中使用最普遍、效果最可靠的医院首选的灭菌方法。

压力蒸汽灭菌的三大因素是指作用时间、作用温度及饱和蒸汽。

压力蒸汽之所以有强大的杀菌作用，主要是因为处于一定压力之下的蒸汽能迅速穿透到物品的内部，同时蒸汽冷凝成水时，能释放潜伏热，使物体温度迅速升高，从而达到杀菌目的。

压力蒸汽灭菌方法的主要特点是杀菌谱广、杀菌作用强、效果可靠、作用迅速、无任何残余毒性，适用于包括液体在内的各种耐热物品的灭菌。

压力蒸汽灭菌可分为两种类型：下排汽式压力蒸汽灭菌器和预真空压力蒸汽灭菌器。

下排汽式压力蒸汽灭菌器下排汽式压力蒸汽灭菌器结构简单、造价低、适用范围广，其消毒原理是通过向灭菌器内送蒸汽，逐渐将冷空气由上而下挤压至下层排汽口排出。

但这种方式排气不彻底，会列留少量冷空气而影响灭菌效果。

1、下排汽式压力蒸汽灭菌器灭菌前准备：1、1 物品必须清洗与干燥，凡需灭菌的物品必须先清洗处理，达到除污染，除污垢、除热原目的，污染严重的物品应先消毒，达到安全、无害，再进行清洗。

清洁后的物品要晾干或烘干。

2、灭菌包的要求：2、1包裹材料：要求有良好的蒸汽穿透性，允许物品内部空气的排出和蒸汽的透入，能阻挡外界徽生物、有一定的强度和耐温性。

市售的普通铝饭盒与搪瓷盒不得用于装放灭菌的物品，应用自动启闭式或带通气孔的器具装放，常用的包装材料包括全棉平纹细布，纸（牛皮纸），一次性无纺布，一次性复合材料（如纸塑包装）；带孔的金属或玻璃容器等。

使用的一次性无纺布、一次性复合材料必须经过国家卫生行政部门批准。

新包装材料使用前应放在温度18℃~22℃，相对湿度35%~70%的条件下放置2小时，仔细检查有无残缺破损，布包装层数不少于2层。

2、2 灭菌包大小的要求：装载于下排式压力蒸汽灭菌器的物品包，体积不得超过30×30×25㎝，金属包的重量不超过7㎏，敷料包不超过5㎏，包裹封口，物品捆扎不宜过紧，外用化学指示胶带贴封，灭菌包每大包内和难灭菌部位的包内应放置化学指示物。