高压蒸汽灭菌法课件

高压蒸汽灭菌法的原理
高压蒸汽灭菌法的原理是利用高温高压条件下的蒸汽来杀灭微生物。

当蒸汽的温度和压力达到一定数值后，微生物的生理活动会受到抑制甚至被杀死。

高温高压蒸汽可以通过破坏微生物的细胞膜和核酸结构来达到灭菌的效果。

在高压蒸汽灭菌中，灭菌设备通常被装填有被灭菌物品的容器，并与高压蒸汽的产生装置相连。

当设备加热产生高温高压蒸汽后，它会通过一系列管道输送到容器中。

容器内的蒸汽会渗透进入物品，将微生物灭活。

高温高压蒸汽灭菌的原理是基于微生物对高温和高压的敏感性。

在高压下，微生物的细胞膜会受到压力的影响而破裂，导致细胞内容物外泄。

同时，高温会使微生物的核酸和蛋白质发生不可逆的变性和凝固，进一步引起细胞功能的丧失。

由于高压蒸汽灭菌法可以迅速达到高温高压的条件，因此它被广泛应用于医疗、生物制药、食品加工等领域的灭菌工艺中。

通过控制灭菌设备内的温度和压力，可以有效地杀灭物品表面和内部的细菌、病毒和真菌等微生物，保证产品质量和安全性。

高压蒸汽灭菌法的原理和注意事项高压蒸气灭菌法是一种迅速而有效的灭菌方法。

使用高压蒸气灭菌器，利用加热产生蒸气，随着蒸气压力不断增加，温度随之升高，通常压力在103.4kPa(相当旧制的15磅/吋 2 或1.05kg/cm 2 )时，器内温度可达121.3℃，维持15～3 0min，可杀灭包括芽胞在内的所有微生物。

此法常用于一般培养基、生理盐水、手术器械及敷料等耐湿和耐高温物品的灭菌。

高压蒸汽灭菌法的原理和注意事项。

高压蒸汽灭菌法的注意事项：第一，无菌包不宜过大(小于50cm×30cm×30cm)，不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹中央。

消毒前，打开贮槽或盒的通气孔，有利于蒸汽流通。

而且排气时使蒸汽能迅速排出，以保持物品干燥。

消毒灭菌完毕，关闭贮槽或盒的通气孔，以保持物品的无菌状态。

第二，布类物品应放在金属类物品上，否则蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。

阻碍蒸汽进入包裹中央，严重影响灭菌效果。

第三，定期检查灭菌效果。

经高压蒸汽灭菌的无菌包、无菌容器有效期以1周为宜。

高压蒸汽灭菌效果的监测：有以下三种方法。

第一种是工艺监测，又称程序监测。

根据安装在灭菌器上的量器(压力表、温度表、计时表)、图表、指示针、报警器等，指示灭菌设备工作正常与否。

此法能迅速指出灭菌器的故障，但不能确定待灭菌物品是否达到灭菌要求。

此法作为常规监测方法，每次灭菌均应进行。

第二种是化学指示监测。

利用化学指示剂在一定温度与作用时间条件下受热变色或变形的特点，以判断是否达到灭菌所需参数。

常用的有：自制测温管：将某些化学药物的晶体密封于小玻璃管内(长2cm,内径1～2m m)制成。

常用试剂有苯甲酸(熔点121-123℃)等。

灭菌时，当湿度上升至药物的熔点，管内的晶体即熔化，事后，虽冷却再凝固，其外形仍可与未熔化的晶体相区别，此法只能指示温度，不能指示热持续时间是否已达标，因此是最低标准。

主要用于各物品包装的中心情况的监测。

压力蒸汽灭菌法的原理
压力蒸汽灭菌法是一种常用的杀菌方法，在医疗保健行业和实验室中广泛应用。

其原理是利用高温下的湿热蒸汽，通过破坏微生物的生物大分子结构，达到灭菌的目的。

压力蒸汽灭菌法基于下述原理：在高压条件下，水的沸点增加，水蒸汽温度也随之升高。

利用蒸汽的渗透和热效应，结合高压力条件下的作用力，从而实现对微生物的彻底灭活。

蒸汽能够迅速渗透到容器中的每个角落，将微生物暴露于高温和湿度之中，使其失去生活力，无法生存和繁殖。

灭菌过程中，要求设备内部温度达到121℃以上，并保持该温
度持续一定时间，通常为15-30分钟，这样才能有效灭杀各种
病原微生物和细菌孢子。

高压蒸汽不仅可以击杀表面的微生物，还可以渗透物体内部，使需要灭菌的物品的各个部分都能受到有效的灭菌处理。

在压力蒸汽灭菌设备中，使用专门的高压锅或自动定时器等设备，控制温度和灭菌时间。

灭菌过程中，设备内部的压力会不断调节，确保温度恒定且达到灭菌所需的要求。

此外，灭菌前需要注意物品的摆放方式，以保证蒸汽在器具各个部位均匀分布，从而确保整个过程的有效性。

总之，压力蒸汽灭菌法通过高压湿热蒸汽的作用，在一定的温度和时间条件下，彻底灭活微生物和细菌孢子。

这种灭菌方法广泛应用于医疗设备、实验室器皿等各种场合，可以高效、可靠地保证物品的无菌状态。

医学微生物高压蒸汽灭菌的原理和方法医学微生物高压蒸汽灭菌是一种常见的消毒方法，其原理是通过高温高压的蒸汽将细菌、病毒等微生物灭活。

具体的方法是将物品放入灭菌器中，加入适量的水，利用加热系统将水加热至蒸汽状态，然后通过高压压力将蒸汽压缩入物品中，使物品中的微生物被高温高压的蒸汽彻底灭活。

需要注意的是，高压蒸汽灭菌需要控制好温度和时间，才能达到彻底消毒的效果。

此外，不同的物品需要采用不同的灭菌方法，以保证消毒的效果。

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高压蒸汽灭菌湿热灭菌常用的方法有常压蒸汽灭菌和高压蒸汽灭菌。

高压蒸汽灭菌的原理是在密闭容器里蒸汽不能扩散到外面去，而聚集在容器中，随着蒸汽的增加，压力升高，温度也相应增加，易使蛋白质变性。

多数细菌和真菌的营养细胞在60℃左右处理15min后即可杀死，酵母菌和真菌的胞子要耐热些，要用80℃以上的温度处理才能杀死，而细菌的芽胞更耐热，一般要在120℃下处理15min才能杀死。

为达到良好的灭菌效果，一般要求温度应达到121℃(压力为0.1MPa)，时间维持15-30min。

也可采用在较低的温度(115℃，即0.075MPa)下维持35min的方法。

高压蒸汽灭菌器的基本构造如下：1) 内外锅外锅或称“套层”，供贮存蒸汽用，连有用电加热的蒸汽发生器，并有水位玻管以标志盛水量。

内锅也叫灭菌室，是放置灭菌物的空间。

可配制铁蓖架以分放灭菌物。

目前大多数灭菌器内外锅是一体的。

3)压力表内外锅各装一只，老式的压力表上标明三种单位：公斤压力单位(kg/cm2)，英制压力单位(1b/in2)和温度单位(℃)，便于灭菌时参照。

现在的压力表用MPa表示。

4)温度计可分为两种，一种是直接插入式的水银温度计，装在密闭的铜管内，焊插在内锅中．另一种是感应式仪表温度计，其感应部分安装在内锅的排气管内，仪表安装于锅外顶部．便于观察。

5)排气阀一般外锅、内锅各一个，用于排除空气。

新型的灭菌器多在排气阀外装有汽液分离器(或称疏水阀)．内有由膨胀盒控制的活塞。

利用空气、冷凝水与蒸汽之间的温差控制开关，在灭菌过程中，可不断地自动排出空气和冷凝水。

6)安全阀或称保险阀．利用可调弹簧控制活塞，超过额定压力即自动放气减压。

通常调在额定压力之下，略高于使用压力。

安全阀只供超压时安全报警之用，不可在保温时用作自动减压装置。

7)加热源除直接引入锅炉蒸汽灭菌外，都具有加热装置。

近年来的产品以电热为主，即底部装有调控电热管，使用比较方便。

有些产品无电热装置，则附有打气煤油炉等。

高压蒸汽灭菌的原理
1.高温效应：高温可以破坏细菌、真菌和病毒的细胞膜结构和内部蛋
白质，使其失去活性。

一般来说，细菌在65-75摄氏度时就会失去活性，
而更高温度可以更快更彻底地灭杀微生物。

2.高压效应：高压可以提高蒸汽的温度，因为在高压下，蒸汽的沸点
会升高。

通过增加压力，可以将蒸汽的温度提高至121摄氏度或更高，从
而加速灭菌过程。

3.杀灭微生物的时间：高压蒸汽灭菌要求一定的时间来达到灭菌的效果。

一般来说，需要在蒸汽温度达到灭菌条件后持续保持一段时间，以确
保灭杀微生物的彻底性。

4.高温高压下的湿热效应：高压蒸汽灭菌实际上是一种湿热灭菌方法。

相比于干热灭菌，高温高压下的湿热条件更易使微生物失活。

湿热能够更
好地渗透物体内部，使得灭菌效果更为全面。

5.蒸汽传热效应：高压蒸汽能够快速传递热量，使灭菌温度能够迅速
均匀地分布到整个灭菌物体内部。

这种均匀加热的作用能够有效地杀灭微
生物，以避免局部区域温度不足而导致的灭菌不彻底的情况。

总的来说，高压蒸汽灭菌的原理主要基于高温高压所产生的湿热效应
和蒸汽传热效应，通过快速均匀地将高温高压的湿热条件传递给物体内部，以达到杀灭细菌、真菌和病毒的目的。

高压蒸汽灭菌通常应用于医疗器械、药品、食品等领域中，是一种常用且可靠的灭菌方法。

高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌是将物品放在密闭的高压蒸汽灭菌锅内，在一定的压力下保持15~30分钟进行灭菌。

此法适用于培养基、无菌水、工作服等物品的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。

将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅夹套间的水沸腾而产生蒸汽。

待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中排尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，获得高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

在相同的温度下，湿热灭菌的效果好于干热灭菌。

有三点原因：在湿热灭菌中菌体吸收水分，蛋白质容易凝固变性，蛋白质随着含水量的增加，所需凝固温度降低；湿热灭菌中蒸汽的穿透力比干燥空气大；蒸汽在被灭菌物体表面凝结，释放出大量的汽化潜热，能迅速提高灭菌物体表面的温度，从而增加灭菌效力。

实验室常用的灭菌锅有非自控手提式高压蒸汽灭菌锅和自控式灭菌锅，其结构和工作原理是相同的。

本实验介绍的是非自控手提式高压蒸汽灭菌锅，自控式灭菌锅的使用可参考厂家说明书。

具体操作步骤如下：1.加水：首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面没过加热蛇管，与三角搁架相平为宜。

切勿忘记检查水位，加水量过少，灭菌锅会发生烧干引起炸裂事故。

2.装料：放回内层锅，并装入待灭菌的物品。

注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。

装有培养基的容器放置时要防止液体溢出，三角瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包扎的纸而透入棉塞。

3.加盖：将盖上与排气孔相连的排气软管插入内层锅的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气，并打开排气阀。

4.排气：打开电源加热灭菌锅，将水煮沸，使锅内的冷空气和水蒸汽一起从排气孔中排出。

一般认为当排出的气流很强并有嘘声时，表明锅内的空气已排尽，沸腾后约需5分钟。

5.升压：冷空气完全排尽后，关闭排气阀，继续加热，锅内压力开始上升。

实验六高压蒸汽灭菌法一、实验目的1.了解高压灭菌器的种类及使用场所；2.学习高压蒸汽灭菌的基本原理；3.掌握高压蒸汽灭菌的操作方法。

二、实验原理高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内的水沸腾而产生蒸汽。

待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低（表6-1），二是湿热的穿透力比干热大（表6-2）；三是湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时可放出2.26kJ（千焦）的热量。

这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。

三、实验器材1.包扎好的玻璃器皿、各类器材；2.手轮式盖立式压力锅，安全锁式平盖压力锅四、实验步骤（一）手轮式立式高压蒸汽灭菌器的使用步骤：1.开盖。

向右旋转手轮数圈直至转到顶部。

将锅盖充分提起。

拉起左侧立柱上的保险销，推开锅盖。

2.接电加水。

接通电源将控制面板上的电源开关按至开，此时观察控制面板上的水位灯若高水位灯未亮起，则将纯水直接注入锅内。

观察控制面板上的高水位灯亮起时方可停止加水。

3.装锅。

放入需要灭菌的物品，把需要灭菌的物品放在灭菌筐内。

应留有一定间隙，这样有利于蒸汽穿透，提高灭菌效果。

不要贴靠内壁，防止吸入较多的冷凝水。

有条件，最好放入一张化学指示卡。

4.设定温度和时间。

将手轮向左旋转数圈，使锅盖向下加紧锅体。

按一下确认键。

按动增加键、减少键或换位键，将温度设定在121摄氏度。

再按一下确认键。

按动增加键减少键或换位键设定时间为20分钟，最后再按确认键，温度和时间设定完毕。

点击面板上的开始按键。

5.排气。

打开排气阀，完成上个步骤后加热开始，此时，打开灭菌器的排气阀。

高压蒸汽灭菌的原理
高压蒸汽灭菌是一种利用高压蒸汽的方法来有效杀灭细菌和其他微生物的灭菌技术。

高压蒸汽灭菌的原理是基于高温和高压对细菌的杀灭作用。

在高压蒸汽灭菌的过程中，将液体或物体置于密封的容器内，通过加热水或其他液体，使容器内的压力和温度升高到一定程度。

在高压蒸汽的作用下，细菌的细胞膜和细胞壁被破坏，细菌内部的蛋白质和核酸也会发生变性，从而导致细菌的死亡。

高压蒸汽灭菌的过程中，高温和高压两个因素起到了关键作用。

高温可以促进细菌内部的化学反应速率，加快细菌的杀灭过程。

高压能够增加蒸汽的温度，提高蒸汽中水分子的活动性，使其更容易渗透到细菌细胞内部，对细菌产生更强的杀灭效果。

值得注意的是，高压蒸汽灭菌需要严格控制时间、温度和压力等因素。

时间过短可能无法达到彻底灭菌的效果，时间过长可能对被灭菌物体造成不必要的损害。

温度和压力也需要在一定的范围内控制，过高会导致灭菌物体变形或损坏。

高压蒸汽灭菌技术在医疗、食品、制药等行业被广泛应用。

通过高压蒸汽灭菌，可以有效杀灭细菌、病毒、真菌和孢子等微生物，保证产品的无菌状态，从而提高产品的质量和安全性。

高压蒸汽灭菌湿热灭菌方法的一种。

是微生物培养中最重要的灭菌方法。

这种灭菌方法是基于水在煮沸时所形成的蒸汽不能扩散到外面去，而聚集在密封的容器中，在密闭的情况下，随着水的煮沸，蒸汽压力升高，温度也相应增高。

高压蒸汽是最有效的灭菌法，能迅速地达到完全彻底灭菌。

一般在15磅/英寸2压力下（121.6℃），15～30分钟，所有微生物包括芽孢在内都可杀死。

它适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌。

进行高压蒸汽灭菌的容器是高压蒸汽灭菌锅。

高压蒸汽灭菌锅是一个能耐压又可以密闭的金属锅，有立式与卧式两种。

热源可以用电热、煤气、蒸汽等。

锅上装有压力表，有的还装有温度计，能及时了解锅内压力及温度。

锅上还设有排气口，其作用是在密闭之前，利用蒸汽将锅内的冷空气排净，另外还装有安全活门，如果压力超过一定限度，活门即可自动打开，放出过多的蒸汽。

高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。

在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。

在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。

注意:完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底。

高压灭菌放气有几种不同的做法，但目的都是要排净空气，使锅内均匀升温，保证灭菌彻底。

常用方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到0.05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。

关阀再通电后，压力表上升达到0.1MPa时,开始计时，维持压力0.1～0.15MPa 20分钟。

到达保压时间后，即可切断电源，在压力降到0.5MPa，可缓慢放出蒸气，应注意不要使压力降低太快，以致引起激烈的减压沸腾，使容器中的液体四溢。

当压力降到零后，才能开盖，取出培养基，摆在平台上，以待冷凝。

不可久不放气，引起培养基成分变化，以至培养基无法摆斜面。

一旦放置过久，由于锅炉内有负压，盖子打不开，只要将放气阀打开，大气压入，内外压力平衡，盖子便易打开了。

高压蒸汽灭菌和干热灭菌方法！高压蒸汽灭菌和干热灭菌方法！一、原理高压蒸汽灭菌是实验室的灭菌方法，适用于培养基，生理盐水，各种缓冲液及玻璃器皿的灭菌。

常用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，灭菌锅有立式、卧式和手提式三种。

图11-1 所示常用手提式灭菌锅。

高压蒸汽灭菌的原理是通过提高灭菌锅内的蒸汽温度以达到灭菌目的，即，使灭菌锅夹层的水加热、沸腾，不断产生蒸汽，以排除冷空气，直至空气排净后（约排气10-15 分钟）关闭放气阀，使蒸汽锅密闭，这时随蒸汽压不断上升，锅内的温度也随之上升，当蒸汽压（饱和蒸汽压）升到1.05kg/cm2 时，锅内温度即达121.3℃，在该温度下保持20-30 分钟，可将所有微生物及芽孢杀死。

灭菌所需时间和温度取决于被灭培养基中营养物的耐热性、容器体积大小和装物量等因素。

若灭砂土、石蜡油或含菌量大的物品则应适当延长灭菌时间。

干热灭菌适用于玻璃器皿的灭菌。

常用电热烘箱进行，其结构如图11-2 所示。

干热灭菌主要是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到杀灭微生物的目的。

细胞内蛋白质凝固性与其本身含水量相关。

当菌体受热时，环境和细胞内含水量越大，蛋白质凝固就越快，反之则慢。

通常干热灭菌时预先将各种器皿用纸包好或装入金属制培养皿箱、移液管筒内，再放入电热烘箱，然后打开电源，加热升温至150-160℃，维持2 小时即可进行彻底灭菌。

二、仪器与材料1、仪器：立式高压蒸汽灭菌锅，手提式高压蒸汽灭菌锅，电热烘箱。

2、需灭菌的物品：培养基，无菌水，培养皿，用报纸包好的吸管等。

三、方法1、高压蒸汽灭菌（1）加水：向灭菌锅夹层加蒸馏水至适当水位刻度；（2）装料：放入需灭菌的物品；注意：装量适当，使瓶口或试管口向中心摆放，不要紧贴锅内壁，以防冷凝水沾湿棉塞！（3）加盖：盖好灭菌锅，对称拧好螺栓；（4）灭菌：通电加热，待灭菌锅排出大股水蒸汽时记时15 分钟后，关闭排气阀。

继续加热至所需条件，如压力达1.05kg/cm2 即121.3℃，维持20-30 分钟；（5）降压：灭菌后立即关闭电源，待压力降至0 时，打开排气阀，放空剩余蒸汽。

高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。

这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。

当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。

一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。

请注意高压蒸汽灭菌的原理：是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。

压力：100KPa，水蒸气的温度：115℃，时间：20min，各种微生物和它们的孢子压力：147KPa，水蒸气的温度：121℃，时间：15～30min ，各种微生物和它们的孢子或芽孢压力：156KPa，水蒸气的温度：180℃，时间：4h，热原质（Pyrogen）:热原质即菌体中的脂多糖压力：156KPa，水蒸气的温度：250℃，时间：45'，热原质（Pyrogen）:热原质即菌体中的脂多糖压力：156KPa，水蒸气的温度：650℃，时间：1'，热原质（Pyrogen）:热原质即菌体中的脂多糖温度越高，需时越短，热穿透能力越强。

一般认定115℃-121.3℃，对培养基的成分不产生破坏。

煌绿乳糖胆盐（BGLB)高压灭菌时间和温度）新的国标规定BGLB培养基灭菌时间和温度是121度；15磅；15分钟。

但是有同行反映，有时高压后的BGLB肉汤颜色变黄，为此查阅了原版的培养基手册《Hand of Microbiological Media》第3版，摘入有关此BGLB肉汤的消毒灭菌时间和温度供大家参考。

Autoclave for 12min (not longer than15min) at 15 psi pressure-121 度. After sterilization, cool the broth rapidly Medium is sensitive to light.这段话的意思高压灭菌温度121度；15磅，时间控制在12分钟，不要超过15分钟，灭菌后马上将培养基远离热源，使培养基快速变冷，肉汤应该是透明液体。