乳及乳制品中亚硝酸盐含量的测定(精)

分光光度法测定生鲜乳及乳粉中亚硝酸盐方法优化摘要：亚硝酸盐是致癌物质，检测食品中的亚硝酸盐，对食品安全的意义尤为重要。

其中乳及其乳制品的检测方法，目前主要以GB 5009.33的检测方法为主，其中第二法分光光度法术以使用广泛，但国标法中分光光度法测定亚硝酸盐存在取样量大，批量操作过程复杂情况。

本课题主要针对以上问题，用分光光度法对生鲜乳及乳粉中的亚硝酸盐含量测定过程进行优化。

优化后，样品取样量生鲜乳为18mL,奶粉为2g，加标回收实验回收率达到88%以上；RSD值为1.06%~1.93%，与国标法回收率90%；RSD值为0.66%~1.44%。

从回收率及RSD可以得出，优化后的方法数据准确度与国标法相当。

操作过程中使用高速离心机，能更好分离提取溶液，能很好的提升工作效率并保证实验的准确性，具有较好的操作性。

关键词：亚硝酸盐；分光光度法；乳制品1.引言亚硝酸盐是自然界环境中最普遍存在的含氮化合物之一[1]，是自然界常见的有害化学成分。

因其具有作为发色剂、防腐剂以及增强产品的风味的作用而被添加到食品中来。

牛奶及其制品因其中含有丰富而全面的营养物质，中国居民膳食指南推荐每日摄入300g及以上牛奶或其制品，是人们日常生活中重要的日常食品。

事实上天然牛奶中一般不含或含极有少量的亚硝酸盐，一般不会危害人体健康。

牛奶中出现较高的亚硝酸盐可能的来源主要有：来源一是草料在喂养奶牛后，在其消化系统消化过程中产生，来源二是在饲喂过程产生，来源三是生产用水中存在，来源四是为了延长牛奶的保质期人为添加[2] 。

由于亚硝酸盐对人体健康有如此严重的危害，而牛奶及其奶制品与我们生活息息相关，因此，检测其在乳及乳制品中的含量和可能被人体摄入量应引起高度重视。

目前国内外测定食品中亚硝酸盐含量的方法主要有荧光法、分光光度计法、离子色谱法及催化光度法等。

分光光度法由于实用性强，设备常用，因此为国内外测定食品中亚硝酸盐时常见选择的方法[3]。

乳及乳制品亚硝酸盐、硝酸盐的检验方法摘要研究了乳及乳制品中亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸重氮化后再与α-萘胺偶合成紫红色；乳及乳制品中的硝酸盐在还原剂的作用下，被还原成亚硝酸盐后，在硝酸盐试纸条上显紫红色，根据颜色的深浅判定乳品中亚硝酸盐、硝酸盐的含量。

同时方法操作简单，结果准确，适用于乳品企业硝酸盐含量的快速检测。

关键词乳及乳制品；亚硝酸盐、硝酸盐；颜色中图分类号 r155.5 文献标识码 a 文章编号 1673-9671-（2013）012-0132-01亚硝酸盐是一类无机化合物的总称。

主要指亚硝酸钠，亚硝酸钠为白色至淡黄色粉末或颗粒状，味微咸，易溶于水。

硝酸盐是由金属离子或铵根离子与硝酸根离子组成的盐类。

目前关于乳及乳制品中亚硝酸盐、硝酸盐的检测，离子色谱法成本高，人员专业技能要求高；定量法检测时间长，结果滞后，不能及时快速的控制乳及乳制品的亚硝酸盐、硝酸盐质量，不能满足实际需求。

研究乳及乳制品中亚硝酸盐、硝酸盐能够直接通过颜色判断，操作方便，人员要求低，用于乳及乳制品的亚硝酸盐、硝酸盐的检测。

1 材料与方法1.1 主要材料与试剂1.1.1 材料50ml 离心管，2ml刻度吸管，1ml刻度吸管，高速冷冻离心机离心机。

1.1.2 试剂德国默克公司的硝酸盐试纸条1（1 给出这一信息是为了方便本方法的使用者，并不表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。

）显色剂：准确称取 0.1g α-萘酚，0.2gα-萘胺，0.6 g 无水对氨基苯磺酸，先加入 200ml 煮沸冷却的蒸馏水溶解，溶解后再加入 200 ml 冰乙酸，充分混匀配制好后置冰箱中保存。

1.2 检测方法1.2.1 试样的处理亚硝酸盐发酵乳样品：取适量样品置于 50ml 离心管中，在高速离心机 4000转/min 离心 30min（或高速冷冻离心机 10000 转/min 离心15min）。

硝酸盐发酵乳（不含果粒产品）样品：取适量的发酵乳置于50ml 离心管中，在高速离心机（4000转/min）中离心30min，取部分上清液于10ml的小离心管中，待测。

乳及乳制品中亚硝酸盐的测定（亚硝酸盐的测定方法很多，公认的测定方法为盐酸萘乙二胺法。

） 1．原理样品经处理、沉淀蛋白质，去除脂肪后，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸在弱酸条件下重氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合，形成紫红色偶氮染料，在538nm处有最大的吸收，测定吸光度以定量。

2．试剂(1)亚铁氰化钾溶液称取106g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H20]，溶于水并稀释至1000mL。

(2)乙酸锌溶液称取220g乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O], 加30mL冰醋酸溶解，用蒸馏水稀释至1000mL。

(3)饱和硼砂溶液称取5g硼酸钠(Na2B4O7·1OH20)溶于100mL热水中，冷却后备用。

(4)4g／L对氨基苯磺酸溶液称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于lOOmL 20％(体积分数)盐酸中，避光保存。

(5)2g／L盐酸萘乙二胺溶液称取0.2g盐酸萘乙二胺，以水稀释至100mL，避光保存。

(6)亚硝酸钠标准液精密称取0.1000g亚硝酸钠(事先于硅胶干燥器中干燥24h)，用重蒸馏水溶解并定容至500mL。

此液的质量浓度为200µg／mL。

(7)亚硝酸钠标准使用液吸取标准液5.00mL于200mL容量瓶中，用重蒸馏水定容。

此液的质量浓度为5 µg／mL。

临用时配制。

3．仪器：1)分光光度计。

2)50mL比色管。

4．测定方法(1)样品处理称取5.0g混匀的样品置于50mL烧杯中，加12.5mL硼砂饱和液，搅拌均匀；以300mL 70℃的水将样品洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温；然后边转动边加人5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀；再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质；加水至刻度，摇匀，放置30min。

，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，所得滤液备用。

(2)标准曲线绘制吸取0.00、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL,1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL亚硝酸钠标准使用液，分别置于50mL比色管中，加入2.0mL 4g／L对氨基苯磺酸溶液，混匀；静置3～5min后，各加人1.0mL 2g／L盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀；静置15min，用2cm 比色皿，以空白调零，于分光光度计538n m波长处测定吸光度，绘制标准曲线。

乳与乳制品常规理化指标检验硝酸盐亚硝酸盐的检测 YLNB 2.111.范围本方法规定了采用镉还原和光度分析法测定硝酸盐和亚硝酸盐的方法。

本方法适用于乳粉、液体奶、乳清粉及婴儿配方粉中硝酸盐和亚硝酸盐的测定。

本方法的检出极限分别为：硝酸盐1.5mg/kg；亚硝酸盐0.2mg/kg。

2.原理将样品溶解于水中，沉淀脂肪和蛋白后，进行过滤。

用镀铜镉粒使部分滤液中的硝酸盐还原为亚硝酸盐。

在未还原的滤液和已还原的滤液中，加入磺胺和N-1萘基-乙二胺二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光光度计在538nm波长下测其吸光度。

将测得的吸光度与亚硝酸钠标准系列溶液的吸光度进行比较，就可计算出样品中的亚硝酸盐含量和硝酸盐还原后的亚硝酸盐总量，从两者之间的差值可以计算出硝酸盐的含量。

3.试剂测定用水应是不含硝酸盐和亚硝酸盐的蒸馏水或去离子水。

注：为避免镀铜镉粒（4.10）中混入小气泡，柱制备（5.1）、柱还原能力的检查（5.2）和柱的再生（5.3）时所用的蒸馏水或去离子水，最好是刚煮沸过并冷却至室温的。

3.1 镀铜镉粒：直径0.3-0.8mm。

也可下述方法制备。

将适量的锌棒放入烧杯中，用40g/L的硫酸镉（CdSO4 8H2O）溶液浸没锌棒。

在24h之内，不断将锌棒的海绵状镉刮下来。

取出锌棒，滗出烧杯中多余的溶液，剩下的溶液能浸没镉即可。

用蒸馏水冲洗海绵状镉2-3次，然后把镉移入小型搅拌器中，同时加入400ml 0.1mol/L的盐酸搅拌几秒钟，以得到所需粒度的颗粒。

将搅拌器中的镉粒连同溶液一起倒回烧杯中，静置几小时，这期间要搅拌几次以除掉气泡。

倾出大部分溶液，立即按5.1.1至5.1.8中叙述的方法镀铜。

3.2 硫酸铜溶液：溶解20g五水硫酸铜（CuSO4 5H2O）于水中，稀释至1000ml。

3.3 盐酸-氨水缓冲溶液：pH9.60-9.70。

用600ml水稀释75ml 浓盐酸[ρ201.19g/mL，质量分数约为38%]。

鲜奶中亚硝酸盐的测定1:试剂盐酸-氨水缓冲溶液：pH9.60—9.70。

用600ml水稀释75ml浓盐酸（质量分数36％--38％），混匀后，再加入135ml浓氨水（质量分数为25％的新鲜氨水），水定容1000ml。

pH计调pH值为9.60—9.70。

硫酸锌溶液：将53.5g七水硫酸锌溶于水中，水定容100ml。

亚铁氰化钾溶液：将17.2g三水亚铁氰化钾溶于水中，水定容100ml。

显色液1：体积比为450:550的盐酸。

将450ml浓盐酸（质量分数36％--38％）加入550ml水中，冷却后装入试剂瓶中。

显色液2：5g/L的磺胺溶液。

在75ml水中加入5ml浓盐酸（质量分数36％--38％），水浴加热，用其溶解0.5g磺胺。

冷却至室温后水定容100ml。

必要时过滤。

显色液3：1g/L的萘胺盐酸盐溶液。

将0.1g的N-1-萘基-乙二胺二盐酸盐溶于水，水定容100ml。

必要时过滤。

注：少量配制，装于密封棕色瓶中，2℃--5℃保存。

2：标准溶液标准品：100mg/L（0.1mg/ml）（亚硝酸根计），介质：纯水。

取1ml标准品，2ml缓冲溶液水定容100ml。

得到1 mg/L（μg/ml）标准使用液。

3：标准曲线分别移取标准使用液0 ml、2ml、4ml、（6ml、8ml、10ml、12ml、16ml和20ml可以不作）各置于100ml容量瓶中。

每个容量瓶中加水，使其体积约为60ml。

注意：1、标液使用前摇动数下，用移液管移液结束时吹尽残留液。

2、用于定容的纯水超声5分钟去除气泡。

每个容量瓶中先加入6ml显色液1，边加边混；再加5ml显色液2，小心混合溶液，室温静止5min，避免直射阳光。

加入2ml显色液3，小心混合，室温静止5min，避免直射阳光。

水定容至刻度，混匀。

15min内，用538nm波长，以0ml标液为对照测定其他溶液吸光度。

亚硝酸根的质量浓度（单位μg/100ml）为横坐标，吸光度为纵坐标。

二、乳与乳制品中亚硝酸盐的测定：亚硝酸盐广泛存在于自然界，在乳与乳制品中都有一定的含量。

现已证明，亚硝酸盐与食品中固有的胺类化合物是产生致癌物质-亚硝胺的前体物质，是潜在的致癌物质，亚硝酸盐含量过高会引起高铁蛋白症。

因此，对乳与乳制品亚硝酸盐含量的检测和控制是非常有必要的。

在乳与乳制品测定亚硝酸盐的过程中，将样品沉淀脂肪和蛋白质后，进行过滤。

在滤液中加入磺胺和N-1-萘基-乙二胺二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光光度计在其最大吸收波长538nm下测定其吸光度。

将测得的吸光度与亚硝酸钠标准系列溶液的吸光度进行比较定量。

1 主要试剂和仪器1.1仪器：UV-2550型紫外可见分光光度计（岛津有限公司）1.2试剂：标准亚硝酸盐溶液：GBW（E）0802230504水中亚硝酸盐-氮,浓度：100mg/mL,并逐级稀释为0.9857μg/mL的标准贮备液；硫酸锌溶液：535g/L;亚铁氰化钾溶液：172g/L;盐酸-氨水缓冲溶液：pH9.6~9.7；显色液1：盐酸：水= 450：550（V：V）盐酸溶液；显色液2：5g/L磺胺溶液；显色液3：1g/L萘胺盐酸盐溶液。

试验中所用试剂均为分析纯，所用水为去离子水。

2 试验方法2.1入射光波长的选择国标《GB/T5413.32-1997 乳粉硝酸盐、亚硝酸盐的测定》中规定最大吸收波长为538nm，但在实验过程中，做光谱扫描时，最大吸收波长往往因为样品的不同而发生变化，发上红移或蓝移的现象。

考虑到测定的灵敏度，应采用最大吸收波长作为入射光波长。

所以，在进行定量分析之前，应先才用光谱扫描进行峰形和峰位的确认。

以表1的仪器条件，对亚硝酸盐标准系列进行扫描，光谱图如图1。

图1中曲线均比较平滑，为了消除干扰组分的吸收，采用“吸收最大，干扰最小”的原则，即所选择的测定波长处待测组分的吸收最大，但干扰组分的吸收最小；从消除非单色光引起的对郎伯比尔定律的偏离角度考虑，应选用吸收曲线比较平坦部分对应波长的光作为入射光波长。

二、乳与乳制品中亚硝酸盐的测定：亚硝酸盐广泛存在于自然界，在乳与乳制品中都有一定的含量。

现已证明，亚硝酸盐与食品中固有的胺类化合物是产生致癌物质-亚硝胺的前体物质，是潜在的致癌物质，亚硝酸盐含量过高会引起高铁蛋白症。

因此，对乳与乳制品亚硝酸盐含量的检测和控制是非常有必要的。

在乳与乳制品测定亚硝酸盐的过程中，将样品沉淀脂肪和蛋白质后，进行过滤。

在滤液中加入磺胺和N-1-萘基-乙二胺二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光光度计在其最大吸收波长538nm下测定其吸光度。

将测得的吸光度与亚硝酸钠标准系列溶液的吸光度进行比较定量。

1 主要试剂和仪器1.1仪器：UV-2550型紫外可见分光光度计（岛津有限公司）1.2试剂：标准亚硝酸盐溶液：GBW（E）0802230504水中亚硝酸盐-氮,浓度：100mg/mL,并逐级稀释为0.9857μg/mL的标准贮备液；硫酸锌溶液：535g/L;亚铁氰化钾溶液：172g/L;盐酸-氨水缓冲溶液：pH9.6~9.7；显色液1：盐酸：水= 450：550（V：V）盐酸溶液；显色液2：5g/L磺胺溶液；显色液3：1g/L萘胺盐酸盐溶液。

试验中所用试剂均为分析纯，所用水为去离子水。

2 试验方法2.1入射光波长的选择国标《GB/T5413.32-1997 乳粉硝酸盐、亚硝酸盐的测定》中规定最大吸收波长为538nm，但在实验过程中，做光谱扫描时，最大吸收波长往往因为样品的不同而发生变化，发上红移或蓝移的现象。

考虑到测定的灵敏度，应采用最大吸收波长作为入射光波长。

所以，在进行定量分析之前，应先才用光谱扫描进行峰形和峰位的确认。

以表1的仪器条件，对亚硝酸盐标准系列进行扫描，光谱图如图1。

图1中曲线均比较平滑，为了消除干扰组分的吸收，采用“吸收最大，干扰最小”的原则，即所选择的测定波长处待测组分的吸收最大，但干扰组分的吸收最小；从消除非单色光引起的对郎伯比尔定律的偏离角度考虑，应选用吸收曲线比较平坦部分对应波长的光作为入射光波长。

离子色谱两种检测器测定乳制品中亚硝酸盐和硝酸盐方法比较文/梁 晨* 郑秀瑾 金晓晓 张锦梅 张苗苗（青岛盛瀚色谱技术有限公司）摘要：分别用离子色谱-电导法（IC-CD）和离子色谱-紫外法（IC-UV）测定乳制品中的亚硝酸盐和硝酸盐的含量，奶粉用乙酸沉淀，固相萃取柱净化，进样分析。

以8 mmol/L氢氧化钾为流动相，选用SH-AC-11分析柱进行色谱分析，用紫外检测器（UV）和电导检测器（CD）检测，对两种检测器的实用性进行比较。

结果表明，两种方法待测离子的质量浓度都在一定范围内与其峰面积呈良好线性关系（r＞0.999）。

其中IC-CD的亚硝酸盐和硝酸盐检出限（3S/N）分别为5.858 μg/L、1.616 μg/L；IC-UV的亚硝酸盐和硝酸盐检出限（3S/N）分别为10.470 μg/L、6.460 μg/L。

以奶粉为基质，对同一样品用IC-CD与IC-UV分别测得各分析组分的加标回收率为85.00%～92.42%（n=6）和95.00%～96.27%（n=6）之间，基质与加标样测定值的相对标准偏差（n=6）均小于4.00%。

结果表明，两种方法均可以用于乳制品中亚硝酸盐和硝酸盐检测。

其中IC-CD检出限相对较低，IC-UV分离效果更好，可根据实际需求选择。

关键词：电导检测器；紫外检测器；乳制品；离子色谱；亚硝酸盐；硝酸盐亚硝酸盐和硝酸盐广泛存在于自然界中，亚硝酸盐可与食物中的仲胺、叔胺和酰胺等胺类反应结合成强致癌物亚硝胺，同时人体内有一类细菌叫硝酸还原菌，它可使硝酸盐还原成亚硝酸盐，因此硝酸盐往往表现亚硝酸盐的毒性[1～3]。

乳制品中的亚硝酸与硝酸盐的含量往往是痕量的，但是新生婴儿对两种污染物特别敏感，食用亚硝酸盐或含有硝酸盐浓度高的食品可能导致高铁血红蛋白症，表现为紫绀，甚至死亡。

因此，国家标准对婴儿配方奶粉中这类物质的含量有严格的规定，其中亚硝酸盐的含量不得超过100.0 mg/kg，硝酸盐的含量应小于2.0 mg/kg[4～6]。

牛奶和奶制品. 硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定方法牛奶和奶制品含有丰富的营养素，如蛋白质、钙、维生素等，对人体健康有很大的好处。

然而，在这些食品中也会存在着一些潜在的危害物质，如硝酸盐和亚硝酸盐，这些物质的含量如果过高，会对人体健康带来潜在的危害。

因此，需要对这些物质的含量进行准确的测定和监控，以保障食品安全和人体健康。

硝酸盐和亚硝酸盐分别是硝酸根离子和亚硝酸根离子的盐。

在牛奶和奶制品中，硝酸盐和亚硝酸盐的含量主要来自于饲料添加剂和生产过程中的化学处理。

如何准确测定硝酸盐和亚硝酸盐的含量是硬任务，需要复杂的分析技术和方法。

一种常见的测定硝酸盐和亚硝酸盐含量的方法是高效液相色谱法（HPLC）。

这种方法基于样品中硝酸根离子和亚硝酸根离子与荧光物质的反应，通过检测荧光光谱来得出硝酸盐和亚硝酸盐的含量。

这种方法具有检测速度快、准确性高的优点，但是需要具备高昂的设备和仪器。

另外一种测定硝酸盐和亚硝酸盐含量的方法是标准加入法。

这种方法是将已知硝酸盐和亚硝酸盐的量逐步加入测定样品中，然后根据加入前后样品的分析结果，通过回归分析来得到硝酸盐和亚硝酸盐的含量。

这种方法需要较高的分析技能和实验操作技能，但是相对于HPLC方法要简单一些。

除了以上两种主要的方法外，还有一些其他的方法也可以用于测定硝酸盐和亚硝酸盐的含量，如电化学法、光谱学法等。

无论何种测定方法，准确性和可靠性都是非常重要的，对于每一种方法都需要严格的质控和误差分析，以保证测定结果的准确性和精度。

总的来说，测定牛奶和奶制品中硝酸盐和亚硝酸盐的含量是一项重要的任务，这对于保障食品安全和人体健康有着至关重要的作用。

准确测定硝酸盐和亚硝酸盐含量的方法是多种多样的，现在还有一些新的技术和方法在不断发展和改进中，未来的监测和测定技术将会越来越完善和高效。

乳及乳制品中硝酸盐、亚硝酸盐测定方法改进中国卫生检验杂志2Oo7年9月第l7卷第9期Chin~Jou丌Ial0fHealtllLabomto~Tl 黜hnology,s叩2007;Vd17No91705乳及乳制品中硝酸盐,亚硝酸盐测定方法改进【经验交流】.杨彦国,叶桦,李瑞忠,张丽英(1_云南大理州疾病预防控制中心,云南大理~1000;2.新希望集团邓川奶粉厂,云南洱源671200)[关键词]乳及乳制品;硝酸盐;亚硝酸盐;测定方法;改进[中图分类号]R155.5+7[文献标识码]c[文章编号]1004—8685(2007)o9一l705-02 硝酸盐,亚硝酸盐是乳制品样品中强制性卫生检验指标,GB/~413.32—1997是测定乳及乳制品专用方法,广泛用于卫生检验机构及乳制品企业的产品质量监测.在实际工作中,其操作复杂,条件难控制,一般检验人员不易掌握,结果重现性差.我们根据方法原理,对原法中部分操作过程进行改进,与同行们交流探讨,现报告如下.1材料与方法1.1原理样品经沉淀蛋白质,除去脂肪后,进行过滤,用镀铜镉柱使部分滤液中的硝酸盐还原为亚硝酸盐,在酸性条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后,再与N—l萘基乙二胺偶合形成红色染料,用分光光度计测定其吸光度值,与标准比较定量.测得亚硝酸盐总量,由总量减去亚硝酸盐含量即得硝酸盐含量….1.2试剂与仪器亚硝酸钠标准溶液,lIIll=l_0mg,原法中以亚硝酸根计算,但在各类乳制品检验报告结果中以亚硝酸钠为计算单位, 标准溶液用亚硝酸钠作为应用液,便于结果计算.盐酸一氨缓冲溶液,pH值必须精确,因氨在空气中易挥发,一般冰箱贮放,保存期限不超过20d.如pH值小于9.2 时,在还原硝酸盐时出现样品混浊现象,造成吸光度值偏大, 结果偏高(其余试剂同原法).原法中脂肪和蛋白质去除过程中,分别采用500IIll容量瓶,接收还原液100IIll容量瓶,本法分别改用250IIll容量瓶和50IIll容量瓶,可节约试剂和分析用水,便于操作.硝酸盐还原装置,原法中采用专用硝酸盐还原装置,由u型接头管,直式玻璃管和u型橡胶管连接成,需要两个固定台才能固定,占用实验台面过大,不易操作.本法采用50IIll玻璃滴定管,滴定管下端装放玻璃石棉高约2.0cm等填充,以防止细镉粒堵塞尖端,再装入镉粒,高约25～30cm,上端装放玻璃棉厚约2cm,顶端放置一个小漏斗,即可固定在滴定管夹上,便于摘取和冲洗镉柱,用滴定管活塞控制还原液流速较原装置灵敏,操作者易控制还原速度.装放镉粒总量增多可提高还原效率,节约还原时间.镉粒制备应采用分析纯硫酸镉,锌片表面无腐蚀,置换出的海锦状镉,应用手工捏合成0.8～1.0l/I//l体积的均匀小颗粒,不必用搅拌器粉碎,最后用40目分样筛,分出镉粉.用[作者简介]杨彦国(1957一),男,主管检验技师,主要从事理化检验研究.0.2moL/L盐酸浸泡2h后反复冲洗(按照原法镀铜)备用.镉粒大,表面积增大,还原效率提高,镉柱内流量增大有效地防止镉柱堵塞,减少清洗镉柱时间.1.3样品前处理1.3.1奶粉,乳清奶等固体样品取5.00g,液体乳样取40.0og,置于250IIll容量瓶中,加l00IIll65℃～70℃水.取样量与原法相比减少半量,因在测定时用量只需20IIll,即使多次重复测定也能满足需要.1.3.2脂肪蛋白质的去除,按顺序加入530L的硫酸锌溶液10.0IIll,172g/L亚铁氰化钾溶液l0IIll,盐酸一氨缓冲溶液20IIll,3种试剂加入量与原法相比减少半量,加每一种试剂时应缓慢加入,边加边摇,静置沉淀10Illin,观察上清液是否混浊,如有混浊时,则脂肪,蛋白质未完全沉淀,应补加以上3 种试剂各l～3IIll,至上清液透明,再定容至刻度.有些液奶特别是果奶饮料过滤中有颜色,应根据滤液量每l00IIll加2g 的活性炭脱色,不影响测定结果.l_3.3硝酸盐还原为亚硝酸盐,每次还原样品前必须进行镉柱再生,再生时流速可达10ml/min.检查镉柱还原能力,还原能力小于95%时应镉柱再生.批量样品还原时,乳制品中含有钙,镁等其它离子沉积吸附在镉粒表面,使还原效率逐渐降低,连续还原l0个样品后应再生一次,以保证样品中硝酸盐完全还原为亚硝酸盐,取过滤液20IIll,按原法过镉柱还原, 还原液收集于50IIll容量瓶中,控制流速8ml/~n左右,应注意样品全部收集于容量瓶中(收集液大约在42IIl1),取下容量瓶,待测.1.3.4样品测定取过滤液20IIll于50IIll容量瓶中,配制亚硝酸钠标准系列,硝酸盐收集液按原法同时测定,绘制标准曲线或相关回归线Y=A+BE.1.4结果计算因标准溶液以亚硝酸钠计算,取样品时以重量单位计.计算公式由原法的4种换算公式简便为以下公式.样品由曲线能得亚硝酸钠含量(oe/kg)C=A+BE(1)式中:c一样品查曲线能得亚硝酸钠含量,0,g/kgA一相关回归值B一斜率E-吸光度值样品亚硝酸钠含量(mg/kg)(下转第171l页)中国卫生检验杂志2007年9月第17卷第9期ChineseJournalofHealthI_a~mtoryTechnology,Sep2007;V ol17No91711102.5%之间,平均为96.7%(见表3).表3样品回收率实验结果2.5仪器奈件的选择负高压:随着负高压的增大,荧光强度增大,但噪声也随之增大,负高压过低,荧光强度也不稳定.实验表明,负高压在280～300V荧光强度重现性最好.灯电流:随着灯电流的增大,荧光强度增大,灯电流低,荧光强度低且不稳定.实验表明,对于铅元素,测定灯电流在45mA左右荧光强度重现性最好,我们选择加mA.炉高:原子化器增高,荧光强度增大,过高时,会出现严重干扰,背景噪声过大,选择8cm为宜.载气,屏蔽气:载气过大,荧光强度减小,载气过小,火焰不稳定,采用400ml/min左右,屏蔽气影响火焰宽窄,采用1000ml/min左右.2.6样品量微波消解样品量宜控制≤1.0ml(见微波消解仪注意事项),酸用量以HNO<8.0ml为宜,逐级升压,时间360s,以防爆溅,损坏消解仪,消解完成后,样液清沏透明.2.7载流的选择实验发现HCI,HNO,,H:SO3种介质测得的荧光强度排列顺序为:HCI>HNO3>H2SO,为与样品消解介质一致,本文选择硝酸作为测定载流.HNO,浓度在1O,2o,3O,40L时,荧光强度基本一致,因此选择硝酸浓度20g/L为载流液.2.8氧化剂氧化剂溶液中铅一般以二价状态存在,故一般需要加入氧化剂K3re(CN),既可以提高测定灵敏度,又可以抑制cu"的干扰,H2C:O可掩蔽铁,钼等元素的干扰.3小结我们采用AFS一2202E双道原子荧光光度计,建立了氢化物原子荧光与微波消解仪联合检测血铅方法,在选定的条件下该方法操作简便,灵敏度高,干扰小,线性好,能满足血中铅测定要求,经应用于作业场所工人血铅测定取得了满意的效果,为以后修改国家标准检测方法积累了一定的经验.[参考文献][1]GBZ37—2002.职业性慢性铅中毒诊断标准[s].[2]徐伯洪,闫慧芳.工作场所有害物质检测方法[M].北京:中国人民公安大学出版社,2003.5.[3]GB/T5009.12-2003.食品卫生检验方法理化部分(一)[s]. (收稿日期:2007—05—10)(上接第1705页)C×Vll—W×V式中:C.一样品亚硝酸钠含量,pc/ksw一样品质量,gV.一样品前处理定容体积,IIllV:一测定用滤液体积样品还原液亚硝酸盐含量(oe,/s)C2=A+BE式中:C:一样品还原液中亚硝酸盐含量A,B一同式(1)E一还原液吸光度值样品中硝酸钠含量(mg/kg)(C2一C)×VI×1.232———一式中:1.232一亚硝酸盐换算为硝酸盐系数r—镉柱还原效率,%(2)(3)(3)2结果2.1精密度试验按本法试验,对0.50pC/ha亚硝酸钠标准溶液连续测定6次,均值为0.48,标准差为o.023,相对标准偏差为0.5%.2.2样品回收率测定结果取4份不同浓度乳制品样,加入标准溶液进行回收率试验,测定结果回收率,硝酸盐在94%～98%之间,亚硝酸盐在95%一98%之间.见表1.表1回收率测定结果3讨论与小结乳制品含有丰富的脂肪蛋白,测定中样品处理的关键在于如何完全除去脂肪蛋白,且不影响测定结果.我们在沉淀脂肪蛋白时,采用分步观察沉淀法,确保过滤液透明,以消除干扰;硝酸盐测定的难点在于如何将硝酸盐完全还原为亚硝酸盐.本法采用大颗粒镉粒替代镉粉,增加镉柱填充量,在连续还原多个样品时,能保持镉柱还原效率达95%以上,以减少结果误差.综上所述,本文对GB/T5413.32—1997乳制品中硝酸盐,亚硝酸盐测定方法中的部分试剂配制,使用仪器,镉柱制备,样品前处理,样品还原,测定,结果计算等作试验改进和优化. 在乳制品硝酸盐,亚硝酸盐测定中有快速,简便,条件易控制, 节约试剂,节省分析时间等优点.经精密度试验,标准差o.021,变异系数4.27%,回收率测定结果,硝酸盐在94%～98%之间,亚硝酸盐在95%～98%之间,适用于基层卫生检验机构及乳制品企业化验室对产品监测.[参考文献][1]GB/T5009.33-2003.食品卫生检验方法理化部分[s].(收稿日期:2007—06—04)。

乳与乳制品常规理化指标检验硝酸盐亚硝酸盐的检测 YLNB 2.111.范围本方法规定了采用镉还原和光度分析法测定硝酸盐和亚硝酸盐的方法。

本方法适用于乳粉、液体奶、乳清粉及婴儿配方粉中硝酸盐和亚硝酸盐的测定。

本方法的检出极限分别为：硝酸盐1.5mg/kg；亚硝酸盐0.2mg/kg。

2.原理将样品溶解于水中，沉淀脂肪和蛋白后，进行过滤。

用镀铜镉粒使部分滤液中的硝酸盐还原为亚硝酸盐。

在未还原的滤液和已还原的滤液中，加入磺胺和N-1萘基-乙二胺二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光光度计在538nm波长下测其吸光度。

将测得的吸光度与亚硝酸钠标准系列溶液的吸光度进行比较，就可计算出样品中的亚硝酸盐含量和硝酸盐还原后的亚硝酸盐总量，从两者之间的差值可以计算出硝酸盐的含量。

3.试剂测定用水应是不含硝酸盐和亚硝酸盐的蒸馏水或去离子水。

注：为避免镀铜镉粒（4.10）中混入小气泡，柱制备（5.1）、柱还原能力的检查（5.2）和柱的再生（5.3）时所用的蒸馏水或去离子水，最好是刚煮沸过并冷却至室温的。

3.1 镀铜镉粒：直径0.3-0.8mm。

也可下述方法制备。

将适量的锌棒放入烧杯中，用40g/L的硫酸镉（CdSO4 8H2O）溶液浸没锌棒。

在24h之内，不断将锌棒的海绵状镉刮下来。

取出锌棒，滗出烧杯中多余的溶液，剩下的溶液能浸没镉即可。

用蒸馏水冲洗海绵状镉2-3次，然后把镉移入小型搅拌器中，同时加入400ml 0.1mol/L的盐酸搅拌几秒钟，以得到所需粒度的颗粒。

将搅拌器中的镉粒连同溶液一起倒回烧杯中，静置几小时，这期间要搅拌几次以除掉气泡。

倾出大部分溶液，立即按5.1.1至5.1.8中叙述的方法镀铜。

3.2 硫酸铜溶液：溶解20g五水硫酸铜（CuSO4 5H2O）于水中，稀释至1000ml。

3.3 盐酸-氨水缓冲溶液：pH9.60-9.70。

用600ml水稀释75ml 浓盐酸[ρ201.19g/mL，质量分数约为38%]。

原奶中亚硝酸盐加标回收实验步骤亚硝酸盐广泛存在于自然界，在乳与乳制品中都有一定的含量。

现已证明，亚硝酸盐与食品中固有的胺类化合物是产生致癌物质-亚硝胺的前体物质，是潜在的致癌物质，亚硝酸盐含量过高会引起高铁蛋白症。

因此，对乳与乳制品亚硝酸盐含量的检测和控制是非常有必要的。

在乳与乳制品测定亚硝酸盐的过程中，将样品沉淀脂肪和蛋白质后，进行过滤。

在滤液中加入磺胺和N-1-萘基-乙二胺二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光光度计在其最大吸收波长538m下测定其吸光度。

将测得的吸光度与亚硝酸钠标准系列溶液的吸光度进行比较定量。

1、主要试剂和仪器1.1仪器UV-2550型紫外可见分光光度计1.2试剂标准亚硝酸盐溶液：GBW(E)0802230504水中亚硝酸盐-氮，浓度：100mgmL,并逐级稀释为0.9857μg/mL的标准贮备液；硫酸锌溶液：535g/L;亚铁氰化钾溶液：172gL;盐酸-氨水缓冲溶液：pH9.6~9.7:显色液1：盐酸：水=450：550(V:V)盐酸溶液：显色液2：5gL磺胺溶液：显色液3：1g/L萘胺盐酸盐溶液。

试验中所用试剂均为分析纯，所用水为去离子水。

2、试验方法2.1入射光波长的选择国标《GBT5413.32-1997乳粉硝酸盐、亚硝酸盐的测定》中规定最大吸收波长为538nm,但在实验过程中，做光谱扫描时，最大吸收波长往往因为样品的不同而发生变化，发上红移或蓝移的现象。

考虑到测定的灵敏度，应采用最大吸收波长作为入射光波长。

所以，在进行定量分析之前，应先才用光谱扫描进行峰形和峰位的确认。

以的仪器条件，对亚硝酸盐标准系列进行扫描。

曲线均比较平滑，为了消除干扰组分的吸收，采用“吸收最大，干扰最小”的原则，即所选择的测定波长处待测组分的吸收最大，但干扰组分的吸收最小；从消除非单色光引起的对郎伯比尔定律的偏离角度考虑，应选用吸收曲线比较平坦部分对应波长的光作为入射光波长。