下载文档原格式
实验二花粉生活力的测定一实验目的掌握花粉生活力鉴定的方法和原理二实验材料羽衣甘蓝、矮牵牛、三色堇等植物的花粉三仪器及药品载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、标签、记号笔、显微镜、天平、烧杯、培养皿、玻璃棒、滴管、量筒、电炉、石棉网、烘箱蔗糖、琼脂、蒸馏水、磷酸二氢钾、磷酸二钠、TTC四实验原理花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少通常与其生活力密切相关，因此可利用花粉的形态观察过氧化物酶、脱氢酶活性的高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，主要有1 直接鉴定法2 形态观察法3 染色观察法4 培养基发芽法五实验步骤花粉生活力的测定染色观察法——TTC染色1 配置TTC染色液，称取0.5gTTC溶于100ml磷酸盐缓冲液中，装入棕色瓶2 制片：取少量花粉于载玻片上，滴入1~2滴0.5%TTC染色液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，于35~40°C条件静置15~20min。
3 观察统计：在显微镜下观察三个不同视野。
凡被染成红色或玫瑰色都是有生活力的花粉.培养基发芽法——固体培养基1 配制培养法：取1g琼脂，5g蔗糖，量94ml蒸馏水，装入烧杯，加热使琼脂溶化，配成5%浓度培养基。
同法配置10%、15%、20%浓度的培养基。
2 制片：用滴管吸取少量培养基，趁热滴在载玻片上，使放置凝固。
3播种花粉：少量的花粉均匀撒播4培养与观察：将制好的片子放在垫有湿润滤纸的培养皿内，于20—22℃温箱中培养。
待花粉萌发后于显微镜下观察，并统计发芽率，观察是每片随机取三个视野，统计花粉总数，计算平均发芽率。
六作业及思考题同种植物材料培养基法测得的花粉生活力较低染色法测得的花粉生活力较高原因：因为用染色法时，只要是有活力的花粉粒就会被染上颜色，而有活力的花粉粒却不一定会萌发。
实验一花粉贮藏及花粉生活力的测定花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。
为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。
因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术一、实验目的掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。
二、实验材料百合、金鱼草、菊花等花粉。
三、仪器及药品显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、吸水纸、TTC（2.3.5—氯化三苯基四唑）、KI-I2、蓝墨水。
四、实验原理花粉在低温（ 0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。
花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。
此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。
也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。
此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
3 ．染色观察法1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。
2 ） TTC 染色法：使用TTC测定花粉生命力的原理，主要是无色药液进入花粉遇到活组织里的脱氢酶，接受氢离子，还原成红色三苯基甲腊TTF，还原结果使有生命力的花粉染上红色，死花粉不着色；花粉生活力强弱有异，染色深浅也有不同。
实验三花粉的贮藏和生活力测定一、目的和要求在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活力。
花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。
从生产上来看，在选择相互授粉的品种时，也应考虑到品种的花粉发芽能力，凡是花粉发育不全的品种，其花粉的发芽率都很低。
因此不适宜做授粉品种。
本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的方法。
二、花粉及用具材料：桃或苹果树的花粉。
用具：显微镜、天平、盖玻片、凹式载玻片、培养皿、干燥器、试管、滴瓶、蒸馏水、凡士林、蔗糖、氯化钙、琼脂、联苯胺、α-奈酚、碳酸钠、过氧化氢等。
三、方法（一）花粉贮藏从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内，令其开裂，花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。
再把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。
（二）花粉生活力试验1、花粉发芽法人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱，此法的缺点是花粉发芽条件与实际不完全相符，所得的结果与实际有一定的差异，但操作方便，能测定出相对发芽率来。
（1）培养基的制作与接种一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。
加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用接种针或解剖针沾以少量花粉。
轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养基上，将载玻片放在垫有湿润棉花培养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签写明处理、种类、播种日期，将培养皿放于20℃的恒温箱中培养。
（2）观察记数在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过几个小时即可观察到已经发芽，慢的需24小时以上）若发现花粉已发芽时，便按一定方向，就同一视野中用记数器记录花粉粒总数和发芽数，观察记录3～5个显微镜视野的数字，求其平均数，即得出花粉发芽百分率。
