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花粉生活力测定方法花粉是植物生殖过程中非常重要的一环，其生活力的测定对于植物繁殖和生长具有重要意义。
花粉生活力测定方法是通过一系列的实验和观察，来评估花粉的生长和发育能力，从而为植物的繁殖提供科学依据。
本文将介绍几种常见的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和爱好者有所帮助。
首先，传统的花粉生活力测定方法是通过染色观察花粉管的生长情况。
首先，将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察花粉管在一定时间内的生长情况，通过显微镜观察花粉管的长度和形态，从而评估花粉的生活力。
这种方法简单直观，但需要显微镜等设备，且操作较为繁琐。
其次，现代的花粉生活力测定方法中，常用的是荧光显微镜观察法。
通过将花粉与特定的荧光染料结合，使花粉在荧光显微镜下呈现出特定的荧光信号，从而可以清晰地观察花粉管的生长情况。
这种方法操作简便，观察效果明显，对于大规模的花粉生活力测定具有很大的优势。
另外，还有一种常见的花粉生活力测定方法是通过花粉萌发率来评估花粉的生活力。
这种方法是将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察一定时间内花粉的萌发情况，通过统计萌发的花粉数量来评估花粉的生活力。
这种方法简单易行，可以在较短的时间内获取较为准确的结果。
除了上述几种方法外，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，如分子生物学技术的应用、电子显微镜的观察等，这些方法在花粉生活力测定领域也取得了一些重要的进展。
综上所述，花粉生活力测定是植物繁殖和生长研究中的重要内容，而花粉生活力的准确测定则需要科学、准确的方法。
不同的方法各有优劣，研究者可以根据具体的实验目的和条件选择适合的方法进行花粉生活力的测定，从而为植物繁殖和生长研究提供可靠的数据支持。
希望本文介绍的几种常见的花粉生活力测定方法对相关领域的研究者和爱好者有所帮助，也希望在未来的研究中能够有更多更准确的花粉生活力测定方法被发展和应用。
花粉生活力测定方法研究进展摘要：总结了花粉活力测定的染色法、离体萌发法以及田间授粉法等的原理和应用并分析了各种方法的优缺点。
关键词：花粉花粉活力测定方法花粉是高等植物的雄性配子体，在有性繁殖过程中起到传递雄性亲本的遗传信息。
花粉不仅是植物遗传、育种、进化、生殖的重要研究对象，也是孢粉分析、蜂群培育、药物制造、医疗及生理实验的重要材料。
花粉活力是花粉具有生长、萌发、或发育的能力。
在农业生产及农业常规杂交育种的中，研究花粉的生活力和育性是不可缺少的基础性工作。
农业生产和育种工作通常会遇到花期不一致带来的困难，为解决这一难题，保存花粉的活力成为重要手段，而在贮藏花粉之前必须先检测花粉的活力。
不同种类植物花粉的自然寿命、适宜的贮藏方式及花粉活力适宜的测定方法不同。
因此，掌握花粉活力的检测方法对提高育种效率有较高的作用和意义。
综合前人的研究结果，花粉生活力的检测方法可以分为四大类：①染色法；②萌发测定法；③田间授粉检测法；④形态测定法、无机酸检测法。
1染色法1.1TTC染色法TTC即2,3,5-氯代三苯基四氮唑，它是一种氧化还原染料，水溶液无色。
基本原理是[1]：当TTC渗入细胞后，遇到活细胞里的脱氢酶接受氢离子，由无色的氧化型变成红色还原型不溶于水的化合物，由此来判断花粉的生活力。
具体操作步骤：①配制PH为7.17的磷酸缓冲液。
称取0.832克磷酸氢二钠和0.273克的磷酸二氢钾溶于100ml的蒸馏水中，调整pH为7.17。
②TTC溶液配制。
依据不同植物称取0.02～1.0g的TTC溶于100ml的磷酸缓冲液中，于棕色瓶中黑暗处保存。
③染色。
取少量花粉置于载玻片上，加上一滴TTC溶液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，然后放置于35℃的恒温箱中染色15～20min。
④镜检。
于10×10倍镜下观察，凡具有活力的花粉被染成红色，部分丧失活力的呈现粉红色，无色的是的或不育的花粉粒。
凌春英,肖恩等的研究[2]得出常温、黑暗条件下用TTC染色12h可达到较好的观察效果，并认为TTC法是大花蕙兰和墨兰花粉活力测定便捷、有效的方法。
花粉生活力测定方法
花粉是植物生殖的重要组成部分，其生活力的测定对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。
本文将介绍几种常用的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和生产者有所帮助。
首先，最常见的花粉生活力测定方法是离体培养法。
这种方法首先需要收集新鲜的花药，然后在适当的培养基上进行培养，观察花粉的萌发情况来判断其生活力。
离体培养法的优点是操作简单，结果可靠，因此被广泛应用于植物育种和种子生产中。
其次，荧光显微镜法也是一种常用的花粉生活力测定方法。
这种方法利用荧光显微镜观察花粉颗粒的形态和结构，通过判断其内部结构的完整性来评估花粉的生活力。
荧光显微镜法对花粉的观察更加直观，能够提供更多的信息，但需要专业的设备和操作技能。
另外，还有一种叫做染色法的花粉生活力测定方法。
这种方法通过在花粉颗粒上涂抹特定的染料，然后观察染色情况来判断花粉的生活力。
染色法简单易行，可以快速得到结果，但对染料的选择和浓度有一定要求。
除了上述方法，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，比如电子显微镜法、流式细胞仪法等。
这些方法在技术上更加先进，能够提供更为精细的数据，但也需要更高的成本和专业的操作技能。
综上所述，花粉生活力的测定对于植物育种和种子生产具有重要意义，而不同的方法各有优劣。
在选择具体的测定方法时，需要根据实际情况和研究目的进行综合考虑，以便选择最适合的方法。
希望本文介绍的内容能够对相关领域的研究者和生产者有所启发，推动相关领域的科研工作和生产实践取得更好的成果。
花粉生活力测定方法
花粉生活力是指花粉颗粒的活力和生长能力，是衡量植物繁殖成功的重要指标。
花粉生活力测定方法是一种用来评估花粉质量和活力的技术手段，对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。
传统的花粉生活力测定方法主要包括花粉染色观察法、花粉萌发率测定法和花
粉活力染色法。
花粉染色观察法是将花粉染色后在显微镜下观察其形态和数量，从而评估花粉的活力和质量。
花粉萌发率测定法则是将花粉培养在适宜的培养基上，观察其萌发情况以评估花粉的活力。
花粉活力染色法则是利用染色技术来观察花粉内部的活力指标，如线粒体和细胞核的活跃程度。
随着科学技术的发展，现代的花粉生活力测定方法也在不断完善和创新。
比如，利用生物技术手段对花粉进行基因测序和分析，可以更准确地评估花粉的生活力和遗传信息。
同时，利用先进的显微镜和成像技术，可以对花粉的微观结构和形态进行更精细的观察和分析。
花粉生活力测定方法的发展不仅有助于科学家和植物育种者更好地了解植物的
繁殖机制和生长规律，也为农业生产和生态保护提供了重要的技术支持。
通过准确评估花粉的生活力，可以选择出高质量的花粉进行人工授粉或者种子生产，从而提高植物的繁殖成功率和产量。
此外，对花粉生活力的准确测定也有助于保护植物遗传资源，促进植物多样性的保护和利用。
总之，花粉生活力测定方法是一项重要的植物科学技术，它为我们深入了解植
物繁殖机制和提高农业生产效率提供了重要的技术手段和支持。
随着科学技术的不断进步，相信花粉生活力测定方法将会在未来发挥更加重要的作用。
实验二花粉生活力的测定一实验目的掌握花粉生活力鉴定的方法和原理二实验材料羽衣甘蓝、矮牵牛、三色堇等植物的花粉三仪器及药品载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、标签、记号笔、显微镜、天平、烧杯、培养皿、玻璃棒、滴管、量筒、电炉、石棉网、烘箱蔗糖、琼脂、蒸馏水、磷酸二氢钾、磷酸二钠、TTC四实验原理花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少通常与其生活力密切相关，因此可利用花粉的形态观察过氧化物酶、脱氢酶活性的高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，主要有1 直接鉴定法2 形态观察法3 染色观察法4 培养基发芽法五实验步骤花粉生活力的测定染色观察法——TTC染色1 配置TTC染色液，称取0.5gTTC溶于100ml磷酸盐缓冲液中，装入棕色瓶2 制片：取少量花粉于载玻片上，滴入1~2滴0.5%TTC染色液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，于35~40°C条件静置15~20min。
3 观察统计：在显微镜下观察三个不同视野。
凡被染成红色或玫瑰色都是有生活力的花粉.培养基发芽法——固体培养基1 配制培养法：取1g琼脂，5g蔗糖，量94ml蒸馏水，装入烧杯，加热使琼脂溶化，配成5%浓度培养基。
同法配置10%、15%、20%浓度的培养基。
2 制片：用滴管吸取少量培养基，趁热滴在载玻片上，使放置凝固。
3播种花粉：少量的花粉均匀撒播4培养与观察：将制好的片子放在垫有湿润滤纸的培养皿内，于20—22℃温箱中培养。
待花粉萌发后于显微镜下观察，并统计发芽率，观察是每片随机取三个视野，统计花粉总数，计算平均发芽率。
六作业及思考题同种植物材料培养基法测得的花粉生活力较低染色法测得的花粉生活力较高原因：因为用染色法时，只要是有活力的花粉粒就会被染上颜色，而有活力的花粉粒却不一定会萌发。
10个菊花品种花粉生活力测定和贮藏方法研究作者：李亚军黄河牛雅静李霞来源：《福建农业学报》2020年第03期摘要：[目的]筛选菊花花粉离体培养生活力测定的最佳培养基配方，探究花粉贮藏的最适温度和耐贮藏时间，并挑选出较耐贮藏的菊花品种，为菊花新品种选育和种质资源保存提供参考。
[方法]以10个菊花品种盛花期花粉为试验材料，通过离体萌发测定法筛选菊花花粉萌发最适培养基，以该培养基测定花粉在4℃、-20℃和-80℃3种温度下进行60d或120d贮藏周期的生活力变化趋势观测，每隔15d取样检测1次;对贮藏120d的花粉进行授粉，统计结实率。
[结果]培养基为ME3+200g·L-1PEG4000+6g·L-1琼脂的处理，10种花粉都能萌发，且萌发率较其他培养基有显著差异;花粉贮藏60d后，所有花粉生活力均下降，其中‘5’‘52’‘64’和‘85’4个品种花粉生活力下降较缓慢;4种花粉贮藏120d后，在-80℃贮藏的花粉生活力较高，花粉授粉后均能够结实，且品种‘5’花粉授粉结实率最高，平均每个授粉花序结实8粒。
[结论]花粉萌发培养基、植物品种基因型、贮藏温度和贮藏时间都会影响菊花花粉生活力。
本文研究表明，菊花花粉最适贮藏温度为-80℃，品种‘5’花粉可贮藏120d保持较高的授粉结实率，在杂交育种中可优先考虑。
关键词：菊花，花粉生活力，贮藏，授粉中图分类号：S682.1+1文献标志码：A 文章编号：1008-0384（2020）03-0295-080 引言（研究意义）花粉是植物遗传信息的载体和交流工具，花粉贮藏是保存种质资源最简洁、高效的途径。
在杂交育种工作中，花粉贮藏能够解决亲本花期不遇和远距离杂交问题，打破杂交亲本的空间和时间隔离。
菊花（Chrysanthemum X morifolium Ramat.）是菊科菊属植物，在世界各地园艺造景中广泛应用，杂交育种是培育菊花新品种的主要手段。
因而探讨菊花花粉最佳贮藏条件对于解决菊花近缘属间杂交以及品种间杂交所面临的花期不遇或远距离杂交等问题具有重要意义，同时在使用贮存花粉之前，选择合适的方法对花粉生活力进行测定，可确保选择了最优花粉进行人工授粉而得到性状优良的后代。
收稿日期:2011-06-20作者简介:刘程宏(1987-),女,河南鹤壁人,在读硕士研究生,研究方向:果树生理及生物技术。
E -mail:H ong -pengpeng @y aho o.co *通讯作者:宋尚伟(1965-),男,河南滑县人,副教授,主要从事果树生理及生物技术研究。
E -mail:so ng shw 959@果树花粉生活力检测研究进展刘程宏,宋尚伟*,张芳明(河南农业大学园艺学院,河南郑州450002)摘要:果树花粉生活力检测的方法有染色法、萌发法、授粉结实检测法及其他一些方法,常用的染色法有联苯胺染色法、T TC 染色法、I 2-KI 染色法、FCR 染色法等,萌发法又包括离体萌发法和活体萌发法。
掌握花粉生活力检测方法对于提高杂交育种效率具有较高的实际应用价值,为此,对上述各种方法及其应用研究进展进行了综述,并对各方法的检测效果进行了评价和比较。
关键词:果树;花粉;生活力;检测方法;检测效果中图分类号:S66 文献标识码:A 文章编号:1004-3268(2011)10-0013-04Progress on T est M ethods of Pollen Viability in Fruit T reesLIU Cheng -hong,SONG Shang -w ei *,ZH ANG Fang -m ing(Colleg e of H ort iculture,H enan A g ricult ur al U niv ersity ,Zhengzho u 450002,China)Abstract:T esting the viability of fruit tr ee po llen contained dy eing,germ inatio n,pollination and som e other m ethods.Dyeing method often includes diam inobipheny l dyeing ,T TC dy eing,I 2-KI dyeing,FCR dyeing,etc.Germ inatio n method includes g er mination in v itr o and germ inatio n in vi-v o .This paper summ ar ized the various methods of testing fruit tree po llen viability and thier ap -plication,and compar ed the detectio n results of each method.Key words:Fruit tree;Pollen;Viability;T est m ethods;Detection r esult 花粉是高等植物的雄配子体,在育种上可用来解决不同果树品种开花期不遇和异地果树品种杂交困难问题。
花粉生活力测定方法
花粉是植物繁殖的重要媒介，其生活力的测定对于植物繁殖和生长具有重要意义。
近年来，随着科学技术的不断发展，花粉生活力测定方法也得到了不断的改进和完善。
传统的花粉生活力测定方法主要包括离体花粉萌发试验、花粉染色观察、花粉活力染色观察等。
这些方法虽然可以初步判断花粉的生活力，但存在着操作繁琐、结果不稳定、时间周期长等问题，限制了其在实际应用中的发展。
近年来，随着生物技术和显微镜技术的不断进步，新型的花粉生活力测定方法逐渐被引入。
比如，利用荧光显微镜观察花粉萌发情况，结合数字图像处理技术进行分析，可以快速、准确地测定花粉的生活力。
另外，利用生物标记技术对花粉进行标记，然后观察其在植物受精过程中的行为，也可以对花粉的生活力进行评估。
除了显微镜技术和生物标记技术，分子生物学技术在花粉生活力测定中也发挥了重要作用。
通过分析花粉中的基因表达情况、蛋白质组成等，可以更直观地了解花粉的生活力情况，为植物繁殖提供更准确的数据支持。
综上所述，随着科学技术的不断发展，花粉生活力测定方法也在不断完善和创新。
新型的测定方法不仅提高了测定的准确性和稳定性，同时也为植物繁殖和生长研究提供了更多的可能性。
相信随着科学技术的不断进步，花粉生活力测定方法将会更加完善，为植物繁殖和生长研究带来更多的突破和进展。
花粉生活力测定方法研究进展摘要:总结了花粉活力测定的染色法、离体萌发法以及田间授粉法等的原理和应用并分析了各种方法的优缺点。
关键词:花粉花粉活力测定方法花粉是高等植物的雄性配子体,在有性繁殖过程中起到传递雄性亲本的遗传信息。
花粉不仅是植物遗传、育种、进化、生殖的重要研究对象,也是孢粉分析、蜂群培育、药物制造、医疗及生理实验的重要材料。
花粉活力是花粉具有生长、萌发、或发育的能力。
在农业生产及农业常规杂交育种的中,研究花粉的生活力和育性是不可缺少的基础性工作。
农业生产和育种工作通常会遇到花期不一致带来的困难,为解决这一难题,保存花粉的活力成为重要手段,而在贮藏花粉之前必须先检测花粉的活力。
不同种类植物花粉的自然寿命、适宜的贮藏方式及花粉活力适宜的测定方法不同。
因此,掌握花粉活力的检测方法对提高育种效率有较高的作用和意义。
综合前人的研究结果,花粉生活力的检测方法可以分为四大类:①染色法;②萌发测定法;③田间授粉检测法;④形态测定法、无机酸检测法。
1染色法1.1TTC 染色法TTC 即 2,3,5-氯代三苯基四氮唑,它是一种氧化还原染料,水溶液无色。
基本原理是 [1]:当 TTC 渗入细胞后, 遇到活细胞里的脱氢酶接受氢离子,由无色的氧化型变成红色还原型不溶于水的化合物,由此来判断花粉的生活力。
具体操作步骤:①配制 PH 为 7.17的磷酸缓冲液。
称取 0.832克磷酸氢二钠和0.273克的磷酸二氢钾溶于 100ml 的蒸馏水中,调整 pH 为 7.17。
② TTC 溶液配制。
依据不同植物称取 0.02~1.0g 的 TTC 溶于 100ml 的磷酸缓冲液中, 于棕色瓶中黑暗处保存。
③染色。
取少量花粉置于载玻片上,加上一滴 TTC 溶液,用镊子搅拌均匀,盖上盖玻片,然后放置于 35℃的恒温箱中染色 15~20min 。
④镜检。
于 10×10倍镜下观察,凡具有活力的花粉被染成红色,部分丧失活力的呈现粉红色,无色的是的或不育的花粉粒。
凌春英 , 肖恩等的研究 [2]得出常温、黑暗条件下用 TTC 染色 12h 可达到较好的观察效果,并认为 TTC 法是大花蕙兰和墨兰花粉活力测定便捷、有效的方法。
程伟[3]在研究西南桦花粉时通过与离体培养法比较认为 TTC 法是快速检测西南桦花粉生活力的最适宜方法,并得出 TTC 的适宜 pH 值为 7.0。
胡君艳,李云,孙宇涵 [4]认为 TTC 法测得银杏花粉的活力相对于 I-KI 法、过氧化物酶法, 最接近离体萌发法测得的花粉活力, 一种较为准确的测定银杏花粉生活力的染色法,且染色 5min 的效果最好。
魏佳 [5]在研究百子莲属五个品种的花粉活力时得出 TTC 法不适合百莲子属花粉活力的检测。
另外该法还应用于葫芦科 [6]、当归 [7]、番木瓜 [8]、连翘[9]、人心果 [10]、一串红 [11]、月季 [12]等花粉活力的检测。
但是该法染色后的花粉颜色差别小,有活力的花粉边缘被染成红色,中间呈现黄褐色,而无活力的花粉整个呈现黄褐色,在显微镜下不易分辨 [13;14]。
1.2醋酸洋红染色法醋酸洋红染色法的染色原理是靠花粉中的脱氢辅酶而染色, 有活力的花粉被染成红色,部分失去活力的呈现粉红色,而无活力或不育的花粉无色 [15;16]。
邢虎成、揭雨成、周清明用醋酸洋红对 15种苎麻花粉生活力测定时, 发现只有一份的花粉活力为 58%, 其他的活力都在 85%以上,而用离体培养得出萌发率最高的为 50%,通过对比认为醋酸洋红发不适合苎麻花粉生活力的快速检测 [17]。
许利彩、李海真、沈火林认为醋酸洋红法不适合西葫芦花粉活力的测定 [16];郭庆、王德斌等用醋酸洋红法测定海棠藤花粉活力,所得效果不理想,可能是与海棠藤特殊的花粉块结构有关 [15], 该法在鸢尾属花粉上效果不明显,结果不稳定 [18]。
然而该法在澳洲坚果 [19]、胡萝卜 [20]、马铃薯 [21]等花粉生活力快速检测上得到广泛的应用。
2I-KI 染色法I2-KI 染色法的基本原理是 :根据淀粉遇碘变蓝的特性 , 根据蓝色的深浅程度来判断花粉粒中淀粉的含量 , 从而确定花粉粒活性的高低。
但在无活力的花粉中也会存在淀粉, 这就使得该法测出来的值偏高,对淀粉含量低的花粉不适用,如菊属植物[22]。
秦贺兰、贾宗锴等研究 [23]温室内栽培的万寿菊花粉时,发现 I2-KI 染色法与 TTC 染色法所得结果相似, 综合两种方法所用试剂的特点, 认为 I2-KI 染色法更适合万寿菊花粉活力的速测。
经过研究得出,该法在防风 [14]、穿龙薯蓣 [13]、玉米 [24]、西南桦 [3]等植物花粉上的速测效果比不上其他的染色方式。
另外该速测方法也在刚竹属 [25]、水稻 [26]、苜蓿 [27]、辣椒 [28]等的花粉速测上得到应用。
2.1过氧化物酶染色法过氧化物酶染色法又称联苯胺染色法, 是根据花粉中过氧化物酶的活性来判断花粉的活力。
由于有活力的花粉含有活跃的过氧化物酶,所用试剂与过氧化物酶发生氧化反应而染色,有活力的花粉被染成红色,无活力的花粉则呈现黄色或无色透明。
胡君艳、李云、孙宇涵等在研究 [4]银杏花粉活力时,发现染色界限不明显,且染色液中的双氧水使溶液产生许多小气泡,不利于观察计数,测得结果偏低,不适合银杏花粉生活力的检测。
王苗苗、唐灿明 [29]在研究高温逆境对棉花花粉的影响时,得出的结论是,过氧化物酶法适合在非逆境下花粉活力的检测,而不适合检测高温逆境下的花粉活力,因为高温下花粉内的过氧化物酶活性降低。
而在其他的研究中,则得出的结论是过氧化物酶法适合蒙古扁桃花粉 [30]、台湾恺木花粉 [31]、野生樱桃李花粉 [32]的检测,该染色法优于其他的染色法,与萌发法的结果最接近。
2.2MTT 染色法MTT 染色法是根据花粉粒中脱氢酶的活性判断花粉生活力,适用试剂是四唑盐类染料, 染料的配制方法为 :1% 2,5-联苯四唑溴化物 (MTT或噻唑兰溶于 5%蔗糖[33]。
镜检时, 花粉呈现蓝色表明花粉有活力。
张妍 [13]等比较多种方法测定穿龙薯蓣花粉的活力,得出 MTT 法是适宜于穿龙薯蓣花粉活力的检测。
蒲高忠 [34]等用该法测定桂林唇柱苣苔和百寿唇柱苣苔的花粉活力,得到明显的效果,刘黎明 [35]等应用该法检测新疆野杏花粉活力, 也得到同样的结果。
而姜雪婷 [36]等应用多种方法测定梨的 43个品种, 经过比较认为 MTT 法不适合梨花粉活力的检测,测定值显著偏高。
2.3FCR 染色法也叫荧光染料反应法,其基本原理是荧光染料本身不产生荧光,无极性,并能自由地透过完整的原生质膜。
当此种染料进入原生质后,即被醋酶作用形成一种能产生荧光的极性物质—荧光素。
由于荧光素不能自由地出人原生质膜,而只在细胞内积累,因此可以根据花粉产生荧光的情况来判断花粉的生活。
国内这一方面的研究较少, 左丹丹 [33]等在总结植物花粉生活力检测方法中, 得出 FCR 法不适合芜菁芸苔属花粉生活力、橡树花粉生活力及迷迭香花粉活力的测定。
2.4FDA 染色法是荧光反应法的一种,使用的荧光素为二醋酸酯,原理 [1]与 FCR 法相同。
操作方式为:(1配制 FDA 母液 :将 2mgFD 人溶于 1ml 的丙酮中作为保存液,贮藏在冰箱中备用。
(2配制 FDA 使用液 :使用前将 FDA 母液用一定浓度的蔗糖液稀释至 O.01%,蔗糖浓度决定于供试花粉本身要求的渗透压浓度 , 可预先试验确定一个不使花粉爆裂的最低浓度 ,0.5M 的蔗糖浓度对许多花粉是合适的。
(3将鉴定的花粉泡浸在 FDA 液中, (可用凹玻璃片 ,在开始 1小时内,对生活的花粉,荧光强度随着时间直线增加。
一般抱浸 15-20分钟。
(4染色至足够的时间后,用 FDA 液封片。
(5镜检 :在荧光显微镜下,以短蓝光合适〔激发光滤片用 B(IF-490、双分色镜用B ,阻挡光滤片用 0530是合适的〕。
生活的花粉发出黄绿色的荧光,无生活力的花粉无荧光。
生活力弱的花粉荧光弱。
可用物理或化学的方法杀死的花粉作对照。
许利彩 [16]等曾用无机酸测西葫芦的花粉活力,得出的结论是该法不适合西葫芦花粉的检测。
赵元杰研究 [37]结果表明, FDA 染色法法用于芒花粉初始生活力测定的结果与花粉离体萌发法的测定结果是基本一致的,此方法的分析步骤简单,效率高,适合用于花粉初始生活力的大规模普查分析,但不宜作为跟踪测定芒花粉生活力变化的方法。
2.5其他方法2.5.1P-苯二胺法 [38]其基本原理是 , 通过检测一种新的过氧化物酶的存在与否来判断花粉生活力,有活力的花粉通常被完全染成黑色。
具体操作为 :(1染液的配制和保存:把一小管过氧化物酶指示剂 ((包括 25mgp-苯二胺双盐酸和50mg 邻苯二酚, Sigma 390-1和200μl 3%的 H 2 O2(用 pH7.4的磷酸缓冲液配制 ,加入到 37℃预热的 50 ml稀释的 Trizmal 6.3缓冲液中 (用 Trizmal 6.3浓缩液和去离子水 1∶ 9混合。
染液在冰箱中能保存 15~20d ,这期间若发现染液颜色由浅棕色变为深棕色或黑色,说明染液已失效。
(2测定时,取少量 37℃预热的染液滴到待测的花粉样品上, 10~15分钟后观察, 如果花粉变黑,说明花粉具生活力。
2.5.2孔雀绿一酸性品红一桔红 G 混合试剂染色法该混合试剂将有活力的花粉染成红色,无活力的花粉为绿色,在试验中将少许花粉埋入染色剂中,保持湿度,在室温放置 7— 8 h ,再镜检 [39]。
该方法曾用在牡丹[40]、百合 [39]花粉活力的检测上,但结果都偏高,随着牡丹花粉贮藏时间的推移花粉活力并没有明显的变化,甚至 80℃高温处理,染色率也没有明显下降。
3萌发测定法3.1离体萌发法花粉离体萌发测定花粉的活力是普遍用到的方法,检测效果最为准确,广泛地应用于各种植物中。
取适量的花粉散在培养基上, 在 25℃气温下培养一段时间, 然后再显微镜下观察花粉的萌发,一花粉管大于或等于花粉直径为标准确定花粉的活力。
常用的培养基有业态和固态两种,固态培养基就是多加了琼脂,其他的成分一样。
培养基的基本成分为蔗糖和硼酸,蔗糖的作用是提供渗透压和花粉管萌发时所需的能量,浓度根据不同的植物而不同,一般为 10%~20%,山楂最适宜的蔗糖浓度为10%[41],桉树的最适宜浓度是 20%[42],风信子的最浓度为 15%[43]。
硼酸的作用是促进花粉管的萌发,浓度不同的植物也差别较大, 木麻黄的适宜硼酸浓度为250mg.kg -1[46], 金银花 [47]、仙客来 [48]以 0.01%硼酸浓度最好,茄子则以 10mg.L 为适宜浓度 [49]。
