花粉生命力的测定与形态观察

3 ．染色观察法 （3）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 原理：凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程 中都有氧化还原反应，而无生活力的花粉则无此反 应，因此当TTC渗入有生活力的花粉时，花粉中的 脱氢酶在催化去氢过程中与TTC结合，使无色的 TTC变成三苯基甲（TTF）而呈红色。 步骤和方法：取少量花粉放在载玻片上，在花粉 上滴1～2滴TTC溶液，用镊子使其混匀后，盖上盖 玻片。将此载玻片上置于恒温箱中（35～40℃）约 15～20分钟，在显微镜（100倍）下观察。凡有生 活力的花粉粒呈红色，其次呈淡红色，失去生活力 的和不育的花粉粒表现无色。
六、作业及思考题： １、按下表统计实验结果。 ２、绘一幅花粉粒发芽形态图。 染色法测定结果记载表
各视野中花粉粒数量及生活力
花 粉 来 源 平 均 其中 生 生 活 红 黄 活 力 色 色 力 (％)
其中 花 粉 生 红 黄 总 活 色 色 数 力
花 粉 总 数
其中
红 黄 鲜
培 养 基 法 测 定 结 果 记 载 表
花 粉 来 源
各视野中花粉粒数量及发芽率 培养 基浓 度 1 发芽数/ 总数 发芽 率 2 发芽数/ 总数 发芽 率 3 发芽数/ 总数 发芽 率 平均 生活 力(％)
0% 5% 贮 藏 10% 15% 20%
新 鲜
配制对二萘氧基联苯胺: a．0.2克联苯胺溶于100毫升50%的酒精溶液； b．0.15克a-萘酚溶于100毫升50%酒精溶液； c．0.25克的碳酸钠溶解在100毫升的蒸馏水中。 以上三种溶液分别放入棕色瓶中备用，使用 时将这三种溶液等量配成试剂Ⅰ，放入棕色滴瓶 中备用，在使用前准备好0.3%的过氧化氢水溶 液作为试剂Ⅱ。
２．花粉生活力的测定： （１）染色观察法 ——TTC 和KI染色法 ① 分别配制 TTC 和KI染色液各100ml，装入棕 色瓶中备用。 ② 制片：取少量花粉于载玻片上，滴入 1 ～ 2 滴 0.5 ％ TTC 或KI染色液，用镊子搅拌均匀，盖上 盖玻片，于 35 ～ 40℃ 条件下净置 15 ～ 20min 。 ③ 观察统计：在显微镜下观察三个不同的视野， 凡被TTC染成红色或玫瑰红的都是有生活力的花粉， 黄色或不着色者为没有生活力的花粉；被KI染成蓝色 者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。

花粉生活力测定方法花粉是植物生殖过程中非常重要的一环，其生活力的测定对于植物繁殖和生长具有重要意义。

花粉生活力测定方法是通过一系列的实验和观察，来评估花粉的生长和发育能力，从而为植物的繁殖提供科学依据。

本文将介绍几种常见的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和爱好者有所帮助。

首先，传统的花粉生活力测定方法是通过染色观察花粉管的生长情况。

首先，将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察花粉管在一定时间内的生长情况，通过显微镜观察花粉管的长度和形态，从而评估花粉的生活力。

这种方法简单直观，但需要显微镜等设备，且操作较为繁琐。

其次，现代的花粉生活力测定方法中，常用的是荧光显微镜观察法。

通过将花粉与特定的荧光染料结合，使花粉在荧光显微镜下呈现出特定的荧光信号，从而可以清晰地观察花粉管的生长情况。

这种方法操作简便，观察效果明显，对于大规模的花粉生活力测定具有很大的优势。

另外，还有一种常见的花粉生活力测定方法是通过花粉萌发率来评估花粉的生活力。

这种方法是将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察一定时间内花粉的萌发情况，通过统计萌发的花粉数量来评估花粉的生活力。

这种方法简单易行，可以在较短的时间内获取较为准确的结果。

除了上述几种方法外，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，如分子生物学技术的应用、电子显微镜的观察等，这些方法在花粉生活力测定领域也取得了一些重要的进展。

综上所述，花粉生活力测定是植物繁殖和生长研究中的重要内容，而花粉生活力的准确测定则需要科学、准确的方法。

不同的方法各有优劣，研究者可以根据具体的实验目的和条件选择适合的方法进行花粉生活力的测定，从而为植物繁殖和生长研究提供可靠的数据支持。

希望本文介绍的几种常见的花粉生活力测定方法对相关领域的研究者和爱好者有所帮助，也希望在未来的研究中能够有更多更准确的花粉生活力测定方法被发展和应用。

一、实验目的1. 了解花粉形态学的基本知识，掌握花粉形态观察的实验技能。

2. 通过观察不同植物花粉的形态结构，加深对植物分类学、系统发育和传粉方式的认识。

3. 培养实验操作能力和科学思维。

二、实验原理花粉是植物的雄性生殖细胞，具有多种形态和结构，对植物的传粉和分类具有重要意义。

通过光学显微镜和扫描电子显微镜观察花粉的形态和结构，可以了解花粉的多样性及其与传粉方式的关系。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：不同植物的花粉样品（如小麦、玉米、大豆等）。

2. 试剂与耗材：冰乙酸、乙酸酐、浓硫酸、甘油、石炭酸、加拿大树胶、蒸馏水、酒精等。

3. 仪器：光学显微镜、扫描电子显微镜、水浴锅、离心机、小试管、镊子、解剖针、细铜网、载玻片、盖玻片、双面透明胶带、酒精灯、目镜测微尺。

四、实验步骤1. 准备花粉样品：将采集到的花粉样品放入干燥器中，待花粉干燥后取出，用解剖针挑取适量花粉，放入装有冰乙酸的试管中。

2. 制片：将花粉样品在冰乙酸中浸泡一段时间，取出后滴加少量加拿大树胶，将花粉粘附在载玻片上，用盖玻片覆盖。

3. 光学显微镜观察：将制片放入光学显微镜下观察花粉的形态、大小、形状、纹饰等特征。

4. 扫描电子显微镜观察：将制片放入扫描电子显微镜下观察花粉的表面结构，如纹饰、突起等。

5. 记录数据：根据观察结果，记录花粉的形态、大小、形状、纹饰等特征，并计算花粉的长度、宽度、面积等参数。

五、实验结果与分析1. 光学显微镜观察结果：小麦花粉为长椭圆形，长度约为30-40微米，宽度约为15-20微米，表面具有网状纹饰；玉米花粉为圆形，直径约为20-30微米，表面具有突起；大豆花粉为长椭圆形，长度约为40-50微米，宽度约为20-30微米，表面具有网状纹饰。

2. 扫描电子显微镜观察结果：小麦花粉表面具有明显的网状纹饰，纹饰大小不一；玉米花粉表面具有突起，突起高度不一；大豆花粉表面具有网状纹饰，纹饰大小不一。

3. 结果分析：通过观察不同植物花粉的形态和结构，可以看出花粉在大小、形状、纹饰等方面存在差异，这些差异可能与植物的传粉方式和适应性有关。

2 染色观察法 （1）碘-碘化钾染色法 先称取0.3g碘和1.3g碘化钾溶于100mL的蒸馏水 中，即成碘-碘化钾溶液。取少量花粉振播到用棉 球擦净的普通载玻片上，然后加水一滴，使花粉 散开，再加一滴碘-碘化钾溶液，盖上盖玻片，置 于显微镜下观察不同的三个视野，凡花粉粒被染 成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活 力的花粉（淀粉遇碘变蓝是淀粉的特性）。 （2）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有 氧化还原作用，而无生活力的花粉则无此反应， 因此当TTC渗入有生活力的花粉时，其脱氢酶在 催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成 TTF而成红色。

通常花粉的形态、花粉中酶的活性以及积 累淀粉（淀粉质花粉）的多少与花粉生活 力密切相关，因此可以利用花粉的形态观 察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀 扮的含量以及在人工培养基上花粉管萌发 的情况作为确定花粉生活力高低的标准。
【实验材料、主要仪器及试剂】 1 实验材料 各种园林植物的花粉。如百合、牡丹、凤仙花、 柳树、菊花、月季、凤仙花、紫茉莉等植物的花 粉。 2 主要仪器 载玻片、凹玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、棉球、 显微镜、恒温温箱、瓷盘、镊子、培养皿、玻璃 棒、玻璃铅笔、凡士林、标签、冰箱。 3主要试剂 碘-碘化钾、氯化三苯基四氮唑、 Na2HPO4· 2H2O、KH2PO4、蔗糖或葡萄糖溶液、 H3BO3，Ca（NO3）2，MgSO掌握用形态法、染色法、发芽 法测定花粉生活力的具体技术和方法。 2 观察花粉在人工配制的培养基上的萌 发情况，认识花粉萌发形成花粉管的 外形和伸长过程，为理解植物的生殖 过程奠定基础。


【实验原理】 花粉的生活力因植物种类不同而差异很大。在自 然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能 存活几小时，几天或几个星期。一般木本植物花 粉的寿命比草本植物的长，如在干燥、凉爽的条 件下，柑桔花粉能存活40～50天，椴树45天，苹 果10～70天，樱桃30～100天，麻栎一年。而在 草本植物中，如棉属花粉采下后24小时存活只有 65％，超过24小时很少存活；多数禾本科植物的 存活时间不超过一天，如玉米1～2天，水稻花粉 在田间条件下经3分钟就有50％丧失生活力，5分 钟后几乎全部死亡，是寿命最短的例子。花粉粒 的类型和生活力也表现了相关性，通常三胞花粉 的寿命较二胞花粉短，如水稻等禾本科植物为三 胞花粉，寿命都是比较短的。

实验三花粉生命力的测定与形态观察花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过催延花期解决，有的则不得不进行花粉贮藏，为此我们必须掌握花粉贮藏的原理与技术。

为了避免杂交工作失误，在使用远地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉生命力进行鉴定，以便对杂交成果进行分析与研究。

一、实验目的掌握了解花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法及原理。

二、实验材料芙蓉花的花粉。

三、仪器及药品载玻片、盖玻片、标签、标记笔、显微镜、蔗糖、蒸馏水、联苯胺、 -萘酚、酒精、碳酸钠、过氧化氢、琼脂。

四、实验原理在园艺植物有性杂交工作中，常因杂交亲本间花期不遇，或父本植株栽在异处(地)而必须预先收集花粉。

花粉贮藏在低温(0～4℃)、干燥(相对湿度0～40％)、黑暗的环境下，代谢降低，可以较长时间地保持花粉生活力，但其贮藏期长短对花粉生活力的影响因品种而不同。

在授粉之前，对贮藏的或外地采来的花粉必须预先测定花粉的生活力，以确定哪些花粉不能用于杂交，这对取得杂交效果有直接影响。

一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。

此法的缺点是需时间较长，且实验结果易受气候条件的影响；二是将待测粉受到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生命力；三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。

将花粉播种在特定的培养基上，并在一定的环境条件下来测定其发芽能力的方法。

培养基常用蔗糖、琼脂(1％)和蒸馏水配制而成。

不同植物的花粉，对蔗糖浓度要求不同，如柑桔花粉要求25％左右，苹果和梨10～15％，桃10％左右为宜。

蔗糖浓度高低可调节培养基的渗透压，以防止花粉在培养基上破裂。

培养基以微酸性为宜，一般在pH5.2～6之间。

发芽温度在20～25℃左右，并需要空气和湿度，为了促进花粉发芽，在培养基中还可加入少量的硼酸和维生素B1。

利用花粉发芽试验测定花粉生活力是一种直接的测定方法，其结果也最可靠，但操作较麻烦，要有一定设备和一定时间。

实验七花粉生活力的观察技能目标掌握鉴定花粉生活力的几种常用方法。

一、花粉萌发测定法( 一 ) 原理正常成熟花粉粒具有较强的活力, 在适宜的培养条件下能萌发和生长在显微镜下可直接观察与计数萌发个数, 计算其萌发率, 以确定其活力。

( 二 ) 器材与用具显微镜、恒温箱、培养皿、载玻片、玻棒、滤纸。

培养基（10%蔗糖，10mg·L-1硼酸，0.5%琼脂）：称10g蔗糖，1mg硼酸，0.5g琼脂与90ml水放入烧杯中，在100℃水浴中溶化，冷却后加水至100ml备用。

（三）方法与步骤1．培养花粉。

将培养基熔化后，用玻璃棒蘸少许，涂布在载玻片上，放入垫有湿润滤纸的培养皿中，保湿备用。

采集丝瓜、南瓜或其它葫芦科植物刚开放的成熟花朵，将花粉洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在25℃左右的恒温箱(或室温 20 ℃ ) 下培养5～10min。

2. 观察。

用显微镜检查5个视野, 统计萌发花粉个数。

二、碘—碘化钾染色测定法（一 ) 原理大多植株正常成熟的花粉呈圆球形, 积累着较多的淀粉, 用碘—碘化钾溶液染色时,呈深蓝色。

发育不良的花粉往往由于不含淀粉或积累淀粉较少, 碘—碘化钾溶液染色时呈黄褐色。

故可用碘—碘化钾榕液染色法来测定花粉活力。

( 二 ) 器材与用具显微镜、天平、载玻片与盖被片、镊子、烧杯、量筒、棕色试剂瓶。

碘—碘化钾溶液:取2g碘化钾溶于 5～10ml蒸溜水中,加人1g碘,充分搅拌使完全溶解后, 再加蒸溜水300ml时, 摇匀贮于棕色试剂瓶中备用。

( 三 ) 方法与步骤1. 制片与染色。

采集水稻、小麦或玉米可育和不育植株的成熟花药 , 取一花药于载玻片,加1滴蒸溜水,用慑子将花药捣碎, 使花粉粒释放。

再加1-2滴碘—碘化钾溶液 , 盖上盖玻片。

2. 观察。

观察2-3张片子, 每片取5个视野, 统计花粉的染色率, 以染色率表示花粉的育性。

三、氯化三苯基四氮唑法 (TTC 法 )( 一 ) 原理具有活力的花粉呼吸作用较强, 其产生的NADH或 NADPH能将无色的TTC 还原成红色的TTC而使花粉本身着色。

花粉生活力测定方法
花粉是植物生殖的重要组成部分，其生活力的测定对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。

本文将介绍几种常用的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和生产者有所帮助。

首先，最常见的花粉生活力测定方法是离体培养法。

这种方法首先需要收集新鲜的花药，然后在适当的培养基上进行培养，观察花粉的萌发情况来判断其生活力。

离体培养法的优点是操作简单，结果可靠，因此被广泛应用于植物育种和种子生产中。

其次，荧光显微镜法也是一种常用的花粉生活力测定方法。

这种方法利用荧光显微镜观察花粉颗粒的形态和结构，通过判断其内部结构的完整性来评估花粉的生活力。

荧光显微镜法对花粉的观察更加直观，能够提供更多的信息，但需要专业的设备和操作技能。

另外，还有一种叫做染色法的花粉生活力测定方法。

这种方法通过在花粉颗粒上涂抹特定的染料，然后观察染色情况来判断花粉的生活力。

染色法简单易行，可以快速得到结果，但对染料的选择和浓度有一定要求。

除了上述方法，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，比如电子显微镜法、流式细胞仪法等。

这些方法在技术上更加先进，能够提供更为精细的数据，但也需要更高的成本和专业的操作技能。

综上所述，花粉生活力的测定对于植物育种和种子生产具有重要意义，而不同的方法各有优劣。

在选择具体的测定方法时，需要根据实际情况和研究目的进行综合考虑，以便选择最适合的方法。

希望本文介绍的内容能够对相关领域的研究者和生产者有所启发，推动相关领域的科研工作和生产实践取得更好的成果。

实验一花粉生命力测定目的在经过一段时间储藏的花粉或使用远地花粉时,则必须测定,便于杂交成果的分析与研究。

通过实验, 要求学生掌握花粉生命力测定的方法。

药品及用具测微尺、显微镜、毛笔、载玻片、盖玻片、恒温箱、玻璃铅笔、蔗糖、蒸馏水、硼酸液、联苯胺、苯酚、酒精、碳酸钠、过氧化氢、琼脂。

方法步骤1、方法可分三类: 间接法、直接法、染色法。

2、直接法（1）原理（2）将花粉直接在清洁的同种植物的柱头上, 并且作好隔离工作, 然后观察其雌花之发育, 如果胚珠能够正常发育成种子, 则说明花粉具有生命力,否则, 就没有生命力。

（3）步骤第一步: 将花粉直接授在清洁的同种另一植株花的柱头上, 并作好隔离。

隔1--3天采集已授过粉的柱头, 固定于开水或F.A.A液中。

第二步：染色剂的配置:配置1%苯胺兰溶液、配置0.5%苯胺兰乳酸酚。

A．染色镜检3、花柱固定在开水中, 并于水中煮烂, 而后放在1%苯胺兰水溶液或0.5%苯胺兰乳酚中染色24小时,把花柱撕开,盖上盖玻片,用大姆指轻压。

镜检,若花粉具有生命力,即可观察到花粉管伸入柱头组织,若花粉不具生命力,即无花粉管伸入柱头组织.4、间接法（1）原理（2）借人为创造的特定条件使花粉萌发, 鉴定花粉生命力。

（3）硼酸液培养法配置10、50PPM的硼酸溶液。

用毛笔取少量花粉播入已盛硼酸的清洁小瓶并加盖, 放入恒温箱内培养。

5、取出小瓶充分摇动均匀, 用吸管吸一滴于载玻片凹槽内, 迅速盖上盖玻片固定花粉粒, 然后至于显微镜下观察。

6、观察2-----4个载玻片, 每凹面随机观察5个视野计算发芽率。

7、染色法过氧化物酶测定法（1）原理（2）这是借助于测定花粉内过氧化氢酶活性强弱来确定花粉生命力的方法, 在活的花粉内过氧化氢酶存在, 它可以促进过氧化物放氧分解, 这些刚被放出来的活性氧容易使还原剂氧化, 在本实验中所用的无色的联苯胺和苯酚都是还原剂, 但它们被氧化后确表现红色或玫瑰红色, 如果花粉是活的, 那么这个反应很快, 则花粉都被染成红色或玫瑰红色, 如果花粉是死的, 则这一反应迟迟不能进行, 花粉也就保持原色。

天竺葵柱头上的花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
蒂氏荚蒾花粉（灰色) 其中一个已开始萌发
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
勿忘草的花粉 最小的花粉粒之一，直径只有0.005毫米
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花锦葵属植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
桦树的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
柳树花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片

染色者为发育不良、生活力弱的花粉。观察3~4个视野，
五、方法步骤：


（三）花粉生活力试验
3.取另一载玻片，加少量同种待测花粉，然后在花
粉上滴试剂Ⅰ和试剂Ⅱ各一滴，仔细搅匀，盖上盖
玻片，用镊子轻轻压实。经3～4分钟后，放在显微
镜下检查。

有生活力的花粉呈红色或玫瑰色，无生活力的 花粉为黄色或无色，连续观察3～4个视野，分别记 录有生活力及无生活力的花粉数。
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
凤梨科植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片

花粉生活力测定方法
花粉生活力是指花粉颗粒的活力和生长能力，是衡量植物繁殖成功的重要指标。

花粉生活力测定方法是一种用来评估花粉质量和活力的技术手段，对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。

传统的花粉生活力测定方法主要包括花粉染色观察法、花粉萌发率测定法和花
粉活力染色法。

花粉染色观察法是将花粉染色后在显微镜下观察其形态和数量，从而评估花粉的活力和质量。

花粉萌发率测定法则是将花粉培养在适宜的培养基上，观察其萌发情况以评估花粉的活力。

花粉活力染色法则是利用染色技术来观察花粉内部的活力指标，如线粒体和细胞核的活跃程度。

随着科学技术的发展，现代的花粉生活力测定方法也在不断完善和创新。

比如，利用生物技术手段对花粉进行基因测序和分析，可以更准确地评估花粉的生活力和遗传信息。

同时，利用先进的显微镜和成像技术，可以对花粉的微观结构和形态进行更精细的观察和分析。

花粉生活力测定方法的发展不仅有助于科学家和植物育种者更好地了解植物的
繁殖机制和生长规律，也为农业生产和生态保护提供了重要的技术支持。

通过准确评估花粉的生活力，可以选择出高质量的花粉进行人工授粉或者种子生产，从而提高植物的繁殖成功率和产量。

此外，对花粉生活力的准确测定也有助于保护植物遗传资源，促进植物多样性的保护和利用。

总之，花粉生活力测定方法是一项重要的植物科学技术，它为我们深入了解植
物繁殖机制和提高农业生产效率提供了重要的技术手段和支持。

随着科学技术的不断进步，相信花粉生活力测定方法将会在未来发挥更加重要的作用。

花粉的采集与保存、形态观察及生活力测定1.上述方法是否适合于所有植物花粉活力的测定？答：否。

形态观察法只适用于测定新鲜花粉的生活力，不适用于测定贮藏的花粉，体积较小的花粉和形态结构不规则的花粉，这都会影响实验结果。

染色观察法不适用于测定花粉颜色与染色结果相近的植物花粉活力，会对观察有一定的干扰。

另外，碘－碘化钾染色法不能准确表示花粉的活力，也不适用-KI 于研究某一处理对花粉活力的影响。

因为核期退化的花粉已有淀粉积累，遇I2呈蓝色反应。

另外，含有淀粉而被杀死的花粒遇I-KI也呈蓝色。

2培养基发芽法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定，不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发。

不同种类植物花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。

2.哪种方法更能准确反应花粉的活力？答：个人认为发芽实验法更能准确反应花粉活力，虽然发芽试验法更为麻烦一些，但其结果更接近花粉的自然生活力，能较为直接的反应花粉的萌发率。

3.还有哪些方法可以用来检测植物花粉活力？答：①醋酸洋红染色法。

此法的染色原理是靠花粉中的脱氢辅酶而染色，有活力的花粉被染成红色，部分失去活力的呈现粉红色，而无活力或不育的花粉无色。

②过氧化物酶染色法。

此法又称联苯胺染色法,是根据花粉中过氧化物酶的活性来判断花粉的活力。

由于有活力的花粉含有活跃的过氧化物酶，所用试剂与过氧化物酶发生氧化反应而染色，有活力的花粉被染成红色，无活力的花粉则呈现黄色或无色透明。

③MTT染色法。

MTT染色法是根据花粉粒中脱氢酶的活性判断花粉生活力，镜检时,花粉呈现蓝色表明花粉有活力。

④FCR染色法。

此法也叫荧光染料反应法，其基本原理是荧光染料本身不产生荧光，无极性，并能自由地透过完整的原生质膜。

当此种染料进入原生质后，即被醋酶作用形成一种能产生荧光的极性物质一荧光素。

由于荧光素不能自由地出人原生质膜，而只在细胞内积累，因此可以根据花粉产生荧光的情况来判断花粉的生活。

三、作业思考题
1．测定花粉生活力的意义有哪些？ 2．分析在实验中出现的问题，并找出原因所在。 3．将四种方法的结果分别记载于表中，并比较结果是否一致，如不一致，分析其原因。Fra bibliotek表 1－6
供试 花粉收集 测定 第一视野
品种 日期 日期
第二视野
具有生活力 第三视野
的花粉%
备注
直接鉴定法
TTC 染色法
发芽测定法 形态鉴定法
1．外地采集来的花粉或杂交时父本花期早于母本时都要将花粉进行短暂贮藏； 2．自交或远缘杂交时，为了分析结实率或不结实原因时； 3．为了鉴定雄性不育系时； 4．了解某些杂交技术时，如测定花粉的刺激等作用，测定受精选择性等。 因此，要根据各种植物花粉的特点，采取适当的保存方法。花粉生活力的测定方法很多， 其中发芽试验手续较复杂，设备要求较高，需时也较长。为了简易而迅速的测定花粉生活力， 也常采用化学染色的方法，但是此法也有缺点，就是染上色的花粉不一定都具有生活力，因 为染上色的花粉中也包括了那些生活力弱不能正常发芽的花粉，所以一般常用而且较为可靠 的方法仍然是采用花粉发芽实验。要是要求不严格对新采集的花粉还有一个较简便的鉴定方 法——形态鉴定法。 本实验目的是学习花粉生活力测定的方法，进而研究花粉寿命长短与环境条件的关系， 以探求保存花粉的合适方法。
（2）TTC 溶液：称取 0.02～0.05 克（不同植物所用的量是不同的）的 TTC 溶解在 10ml 的磷酸缓冲液中，溶液配好后装入棕色滴瓶内，置入暗处，因氯化三苯基四唑有毒，操作时 要注意安全。
2．操作步骤： （1）取少量花粉放在载玻片上，并在花粉上滴上 1～2 滴配制液，用玻璃棒混合后盖上 盖玻片。 （2）将载玻片置于恒温箱中（35～40℃）约 15～20min。 （3）在显微镜（10×10）下观察：凡具有生活力的花粉呈红色，部分丧失生活力的呈 淡红色，无色的是死的和不育的花粉粒。 3．观察和测定结果：每片观察 3 个视野，并统计具有生活力花粉的百分率，填入表 1 －6。 （三）发芽测定法（培养基培养法） 1．培养基的配制 常用的花粉发芽培养基有液体和固体两种。以前者最为简便。本实验选用前者。其有效 成分主要有：蔗糖、硼酸、柠檬酸、赤霉素等。不同的植物所用的蔗糖培养液的浓度是不同 的，配制 3～30%的蔗糖培养液：在 100ml 水中，加糖 3～30g，加热溶解后，再加 0.1%硼 酸数滴。 2．制片 取双凹载玻片，滴 2 滴培养液于槽中，用解剖针挑少许花粉均匀撒于培养液的表面（注 意不必搅拌，以防花粉混于液体中因缺少空气而影响发芽，又因花粉深浅不一而在显微镜检 查时因光线折射而不易观察。）处理好后，放于一下部添有少量蒸馏水、内有两根玻璃棒的 培养皿中（注意不要使水没过载玻片），放到恒温为 25℃左右的恒温箱中或室内 2h。 3．镜检 将放置 2h 后的载玻片取出，放在显微镜下观察三个视野，统计总花粉数与发芽的花粉 数，然后计算比例，填入下面的表格中。 （四）形态鉴定法 对于新采集的花粉来说，还有一个更为简便的鉴定方法——形态鉴定法。将花粉用解剖 针播于一般载玻片上，然后直接放到显微镜下观察，根据形态特征，判断花粉的生活力状况， 一般来说，畸形、皱缩、小形化等均为无生活力花粉，而有光泽、饱满、具有本品种花粉典 型特征等性状的均为有生活力花粉。将观察的结果统计一下填写下表格。

实验一花粉贮藏及花粉生活力的测定花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。

为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。

因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术一、实验目的掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。

二、实验材料百合、金鱼草、菊花等花粉。

三、仪器及药品显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、吸水纸、TTC（2.3.5—氯化三苯基四唑）、KI-I2、蓝墨水。

四、实验原理花粉在低温（ 0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。

花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。

鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。

此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。

也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。

2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。

此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。

3 ．染色观察法1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。

2 ） TTC 染色法：使用TTC测定花粉生命力的原理，主要是无色药液进入花粉遇到活组织里的脱氢酶，接受氢离子，还原成红色三苯基甲腊TTF，还原结果使有生命力的花粉染上红色，死花粉不着色；花粉生活力强弱有异，染色深浅也有不同。

花粉生活力测定方法
花粉是植物繁殖的重要媒介，其生活力的测定对于植物繁殖和生长具有重要意义。

近年来，随着科学技术的不断发展，花粉生活力测定方法也得到了不断的改进和完善。

传统的花粉生活力测定方法主要包括离体花粉萌发试验、花粉染色观察、花粉活力染色观察等。

这些方法虽然可以初步判断花粉的生活力，但存在着操作繁琐、结果不稳定、时间周期长等问题，限制了其在实际应用中的发展。

近年来，随着生物技术和显微镜技术的不断进步，新型的花粉生活力测定方法逐渐被引入。

比如，利用荧光显微镜观察花粉萌发情况，结合数字图像处理技术进行分析，可以快速、准确地测定花粉的生活力。

另外，利用生物标记技术对花粉进行标记，然后观察其在植物受精过程中的行为，也可以对花粉的生活力进行评估。

除了显微镜技术和生物标记技术，分子生物学技术在花粉生活力测定中也发挥了重要作用。

通过分析花粉中的基因表达情况、蛋白质组成等，可以更直观地了解花粉的生活力情况，为植物繁殖提供更准确的数据支持。

综上所述，随着科学技术的不断发展，花粉生活力测定方法也在不断完善和创新。

新型的测定方法不仅提高了测定的准确性和稳定性，同时也为植物繁殖和生长研究提供了更多的可能性。

相信随着科学技术的不断进步，花粉生活力测定方法将会更加完善，为植物繁殖和生长研究带来更多的突破和进展。

竭诚为您提供优质文档/双击可除花粉鉴定法怎么用篇一：实验四、花粉生活力的测定实验四、花粉生活力的测定一、实验目的：通过实验掌握花粉生活力测定的具体技术和方法。

二、实验原理：花粉生活力是指在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力。

花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。

三、实验材料：苹果花粉四、实验用具与试剂：指形管、显微镜、载玻片、盖玻片、凹式载玻片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、玻璃棒、微波炉、滤纸、水浴锅、计数器、镊子；碘化钾（KI）、碘、蓝墨水、蒸馏水、蔗糖、琼脂、硼酸等。

五、实验步骤常用的测定花粉生活力的方法：形态观察法、碘-碘化钾染色法、蓝墨水染色法和培养基发芽法。

1.形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。

具体方法：将花粉置于载玻片上，在显微镜下观察3个不同视野，要求被检查的花粉粒总数达到100粒以上，计算正常花粉粒占总数的比率。

此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。

2.染色法(1)碘-碘化钾染色法①原理：正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则少。

据此，可用化学物质染色，根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。

通常正常花粉用(:花粉鉴定法怎么用)I-KI染色后呈蓝色，而发育不良畸形花粉则不积累淀粉，当I-KI染色时呈黄褐色。

②I-KI溶液：取2.0gKI溶于5～10mL蒸馏水中，然后加入1.0gI2待全部溶解后，再加蒸馏水至200mL，贮于棕色瓶中备用。

③具体方法：取少量花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一滴I-KI溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察。

凡被染色呈蓝色表示具有生活力，呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉。

花粉生活力测定方法花粉生活力是指花粉颗粒在一定条件下保持生活状态并完成受精的能力。

花粉生活力的测定对于植物的繁殖和育种具有重要意义。

下面将介绍几种常用的花粉生活力测定方法。

1. 离体培养法。

离体培养法是一种常用的花粉生活力测定方法。

首先需要收集新鲜花朵，取出花药，然后将花药中的花粉颗粒悬浮在含有营养物质的培养基上进行培养。

在适宜的温度和湿度条件下，观察花粉颗粒的萌发和生长情况，从而判断花粉的生活力。

这种方法简单易行，能够直观地观察花粉的生活状态。

2. 着色法。

着色法是另一种常用的花粉生活力测定方法。

该方法使用活性染料或染色剂对花粉颗粒进行染色，然后观察染色后的花粉颗粒对染色剂的反应情况。

通过观察染色颗粒的颜色变化和形态特征，可以判断花粉颗粒的生活力。

这种方法操作简便，结果直观，适用于大规模的花粉生活力测定。

3. 离体染色法。

离体染色法是一种较为精细的花粉生活力测定方法。

该方法首先将花粉颗粒置于含有染色剂的培养基中进行染色，然后观察染色颗粒的颜色变化和形态特征。

通过观察染色颗粒的反应情况，可以准确地判断花粉颗粒的生活力。

这种方法需要较为精细的操作和观察，但结果准确可靠。

4. 离体培养-染色法。

离体培养-染色法是一种结合了离体培养和染色法的花粉生活力测定方法。

该方法首先将花粉颗粒进行离体培养，然后在培养基中加入染色剂进行染色，最后观察染色颗粒的反应情况。

通过结合离体培养和染色的方法，可以更准确地判断花粉颗粒的生活力。

这种方法需要较为复杂的操作，但结果具有较高的准确性。

总结。

花粉生活力的测定对于植物的繁殖和育种具有重要意义，而不同的测定方法各有优劣。

离体培养法简单易行，适用于初步的花粉生活力测定；着色法操作简便，适用于大规模的花粉生活力测定；离体染色法结果准确可靠，适用于精细的花粉生活力测定；离体培养-染色法结合了离体培养和染色的优点，结果具有较高的准确性。

选择合适的花粉生活力测定方法，可以为植物的育种工作提供有力的支持。

不同时间萌发率图
时间 冰箱保存 3 6 65.60% 49.60%
平均萌发率
常温保存 48.90% 39.40%
9 12
15 18 21 24 27 30
47% 45.40%
37% 30.10% 26.90% 22% 16.20% 10.20%
33.20% 29.50%
29.30% 21.50% 15.20% 10.30% 9.60% 8.23%
三、实验用品
1、材料 正在开花的植株花粉（大樱桃 美早） 2、器具 盖、载玻片 凹式载玻片 培养皿 滴管 镊子 吸 水纸 恒温箱 天平 烧杯 玻棒 电炉 普通显微镜 3、药品 蒸馏水 硼酸 蔗糖 琼脂 六偏磷酸钠
四、内容与方法（花粉萌发）
（一）培养法： 1、配置培养基 取100ml蒸馏水中，加1~2g（即1%~2%）琼脂煮开， 使之溶解，然后再加入一定量的蔗糖或葡萄糖和0.01g 硼酸，制成不同浓度（5%、10%、15%、20%）的蔗 糖琼脂培养基。 2、制片 用玻棒蘸少许培养基，趁热滴入凹形载玻片，放置片 刻，待凝固后，撒上少许花粉粒。注意要均匀，不可 过多，否则，在显微镜下，不易分清数目。 3、培养 将制好的玻片放于培养皿，下面垫有滤纸，加入少量 水，以保持湿度。将培养皿盖好，置于20~25℃恒温 箱中。22 ℃
谢谢大家！
六 结论
柱状图：不同温度保存相同时间下，冰箱 保存的萌发率高于常温保存 随时间增长两者萌发率都呈下降趋势 折线图：3-6天内冰箱保存萌发率下降较快 出现平缓的趋势，可能是实验存在误差 没有达到预期的效果，冰箱保存应该生活 力时间更长
六 实验的不足之处
文献查阅检准率和检全率不够 试验方案不完备 存放花粉时存在外围环境影响 试验时散花粉太多，计数时误差太大 数据记录不规范