实验一 花粉生活力的测定

实验一花粉收集、贮藏及花粉生活力测定一、实验目的1.掌握鲜花粉收集、储藏的方法及原理。

2.观察花粉在人工配制的培养基上的萌发情况，认识花粉萌发形成花粉管的外形和伸长过程，为理解植物的生殖过程奠定基础。

二、实验原理花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过延长花期解决，有的不得不进行花粉储藏，花粉贮藏对某些园林植物杂交育种具有重要的意义。

通过花粉贮藏，它可以使一些迟开花的园林植物和早开花的园林植物进行杂交，或到较远的地方给母本授粉，花粉的贮藏与运输可以打破杂交育种中双亲时间上和空间上的隔离，扩大育种的范围。

花粉在贮藏期间的稳定性，与花粉壁外层（外壁）的性质和贮藏期间花粉原生质的代谢有关。

在贮藏期间代谢调较少可溶性糖类和有机酸的花粉能够在较长期间保持其活力。

花粉贮藏的原理在于创造一定的条件，使花粉降低代谢强度，延长花粉的寿命。

花粉寿命的长短，因植物种类不同而异。

在自然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能存活几小时，几天或几个星期。

如一般木本植物花粉寿命很长，如在干燥凉爽的条件下，柑橘花粉能存活40～50d，椴树45d，苹果10～70d，樱桃30～100d，麻栎一年，叶培忠教授试验发现杉木的花粉可存活17年之久；而在草本植物中，如棉属花粉采下后24h存活只有65％，超过24h 很少存活；多数禾本科植物的存活时间不超过一天，如玉米1～2d，水稻花粉在田间条件下3min就有50％丧失生活力，5min后几乎全部死亡，是寿命最短的例子。

一般在自然条件下自花授粉植物花粉寿命比常异花、异花授粉植物为短。

花粉的类型和生活力也表现了相关性，通常三胞花粉的寿命要比二胞花粉短，如水稻等禾本科植物为三胞花粉，寿命都是比较短的。

花粉寿命的长短除了上述因种遗传性的差异以外，还与温度、湿度有密切的关系。

通常高温高湿下花粉呼吸旺盛，会很快失去生命力，但在极干燥的条件下，花粉失去水分，也不利于保存。

据亚达姆斯试验，苹果花粉在干燥状态下，可保存3个月；如放在2～8℃，湿度80％的条件下，经过5个星期即失去生活力。

实验一花粉贮藏及花粉生活力的测定花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。

为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。

因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术一、实验目的掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。

二、实验材料百合、金鱼草、菊花等花粉。

三、仪器及药品显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、吸水纸、TTC（2.3.5—氯化三苯基四唑）、KI-I2、蓝墨水。

四、实验原理花粉在低温（ 0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。

花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。

鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。

此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。

也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。

2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。

此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。

3 ．染色观察法1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。

2 ） TTC 染色法：使用TTC测定花粉生命力的原理，主要是无色药液进入花粉遇到活组织里的脱氢酶，接受氢离子，还原成红色三苯基甲腊TTF，还原结果使有生命力的花粉染上红色，死花粉不着色；花粉生活力强弱有异，染色深浅也有不同。

花粉生活力测定方法花粉生活力测定方法是一种评估人们对花粉过敏的程度和生活质量的指标。

它通过采用定量和定性的方法来测定人体对花粉的反应和影响，以便为患者提供相应的治疗和干预措施。

下面我将详细介绍花粉生活力测定方法的原理和步骤。

首先，花粉生活力测定方法需要进行花粉源的采集和制备。

花粉源可以是空气中的自然环境采集或人工培养的花粉。

采集后，需要将花粉样本进行处理和制备，包括去除杂质和保持花粉的活力。

其次，花粉生活力测定方法中常用的技术是皮试和血清学检测。

皮试是一种常用的检测方法，主要通过在患者皮肤表面划一道小口，然后将一定浓度的花粉溶液滴在皮肤上，观察皮肤是否出现过敏反应，如红肿、瘙痒等。

这种方法简单快捷，可以初步筛查患者的过敏反应。

血清学检测是通过采集患者的血液样本，检测血清中花粉特异性IgE抗体水平来评估过敏反应的程度。

常用的检测方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光试验（IFA），这些方法可以检测到血液中特定花粉过敏原的抗体水平，并根据抗体浓度的高低来评估患者的过敏程度。

除了皮试和血清学检测，还可以进行生活质量评估。

这是一种主观的方法，通常通过问卷调查的方式，询问患者对花粉过敏的影响程度和日常生活质量的变化。

问卷通常包括患者的症状、疾病活动、工作和学习能力、社交活动和睡眠质量等方面的评估，以便评估花粉过敏对患者生活的影响。

最后，花粉生活力测定方法可以通过统计分析和数据处理来得出评估结果。

根据皮试和血清学检测的结果、生活质量评估和患者的症状表现等，可以综合评估花粉过敏的程度和生活质量的变化。

这些评估结果可以帮助医生为患者制定个性化的治疗方案，包括药物治疗、免疫疗法和生活调整等。

综上所述，花粉生活力测定方法是评估人们对花粉过敏的程度和生活质量的一种指标。

通过采用皮试和血清学检测、生活质量评估等方法，可以全面分析患者的过敏反应和生活质量的变化，为患者提供针对性的治疗和干预措施。

这种方法对于花粉过敏的预防和管理具有重要的临床意义。

花粉的形态观察及⽣活⼒测定实验⼀花粉贮藏及花粉⽣活⼒的测定花期不遇给杂交⼯作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进⾏花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。

为了避免杂交⼯作失误，在使⽤外地寄来的花粉或经过⼀段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的⽣活⼒进⾏检测，以便对杂交结果进⾏分析与研究。

因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉⽣活⼒测定的原理和技术⼀、实验⽬的掌握花粉贮藏及花粉⽣命⼒鉴定的⽅法和原理。

⼆、实验材料百合、⾦鱼草、菊花等花粉。

三、仪器及药品显微镜、载玻⽚、盖玻⽚、镊⼦、解剖针、吸⽔纸、TTC（2.3.5—氯化三苯基四唑）、KI-I2、蓝墨⽔。

四、实验原理花粉在低温（ 0 ～ 2 ℃）、⼲燥、⿊暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从⽽延长花粉的寿命。

花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其⽣活⼒密切相关，因此可以利⽤花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性⾼低、淀粉的含量以及在⼈⼯培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉⽣活⼒⾼低的标准。

鉴定花粉⽣活⼒的⽅法很多，概括起来主要有如下⼏种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。

此法最准确，但需时较长，且实验结果易受⽓候条件的影响。

也可在授粉后隔⼀定时间切下柱头，在显微镜下压⽚检查花粉的萌发情况，根据萌发率的⾼低来鉴定花粉的⽣活⼒。

2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的⼤⼩、形状、⾊泽等）判断花粉的⽣活⼒，即形态正常的花粉有⽣活⼒，⽽⼀些⼩的、皱缩的、畸形的花粉不具有⽣活⼒。

此法简便易⾏但准确性差，⼀般只⽤于测定新鲜花粉的⽣活⼒。

3 ．染⾊观察法1 ）碘－碘化钾染⾊法：以碘－碘化钾溶液（ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏⽔）染⾊后于显微镜下观察，花粉被染成蓝⾊者表⽰具有⽣活⼒，花粉呈黄褐⾊者不具有⽣活⼒。

2 ） TTC 染⾊法：使⽤TTC测定花粉⽣命⼒的原理，主要是⽆⾊药液进⼊花粉遇到活组织⾥的脱氢酶，接受氢离⼦，还原成红⾊三苯基甲腊TTF，还原结果使有⽣命⼒的花粉染上红⾊，死花粉不着⾊；花粉⽣活⼒强弱有异，染⾊深浅也有不同。

花粉活力测定一、实验原理：TTC染色法——TTC（2，3，5－三苯基氯化四氮唑）的氧化态是无色的，可被氢还原成不溶性的红色三苯甲潛（TTF）。

用TTC的水溶液浸泡花粉，使之渗入花粉内，如果花粉具有生命力，其中的脱氢酶就可以将TTC作为受氢体使之还原成为红色的TTF；如果花粉死亡便不能染色；花粉生命力衰退或部分丧失生活力则染色较浅或局部被染色。

因此，可以根据花粉染色的深浅程度可鉴定花粉的生命力。

培养基萌发法——常的成熟花粉粒具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。

二、实验仪器：载玻片、盖玻片、显微镜、镊子、毛笔、滤纸、培养皿、三角瓶、天平、烧杯、恒温箱、量筒、吸管三、实验药品：0.5%TTC溶液、琼脂、硼酸、氯化钙、蒸馏水、蔗糖（浓度分别为5%、10%、15%、20%）四、实验步骤：TTC法：将采集到的花粉（虞美人、三色堇），取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，并用清水做对照，置37℃恒温箱中，30min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。

每片取3个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。

培养基萌发法： 1.将培养基熔化后，用吸管蘸少许，涂布在载玻片上 2.将花粉（虞美人、三色堇）洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，置于25℃左右的恒温箱中，24小时后在显微镜镜检，每片取3个视野，统计其萌发率。

五、实验结果：TTC 法：虞美人花粉活力——26.1% 三色堇花粉活力——23% 培养基萌发法：蔗糖浓度5% 10% 15% 20% 虞美人花粉活力 1.3% 0.79% 2.2% 9.6% 三色堇花粉活力8.7% 22.2% 46.9% 32.8% 六、结果分析：1、TTC法：三色堇花粉染色在30分钟时观察时基本没有染色，50分钟左右观察，才有明显染色的划分出现，原因可能是花粉对TTC的敏感度不同2、培养基萌发法：不同糖浓度下花粉的萌发率不同，虞美人花粉在20%的糖浓度下活力最强，三色堇花粉在15%的糖浓度下活力最强。

花粉生活力测定方法
花粉生活力是指花粉颗粒的活力和生长能力，是衡量植物繁殖成功的重要指标。

花粉生活力测定方法是一种用来评估花粉质量和活力的技术手段，对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。

传统的花粉生活力测定方法主要包括花粉染色观察法、花粉萌发率测定法和花
粉活力染色法。

花粉染色观察法是将花粉染色后在显微镜下观察其形态和数量，从而评估花粉的活力和质量。

花粉萌发率测定法则是将花粉培养在适宜的培养基上，观察其萌发情况以评估花粉的活力。

花粉活力染色法则是利用染色技术来观察花粉内部的活力指标，如线粒体和细胞核的活跃程度。

随着科学技术的发展，现代的花粉生活力测定方法也在不断完善和创新。

比如，利用生物技术手段对花粉进行基因测序和分析，可以更准确地评估花粉的生活力和遗传信息。

同时，利用先进的显微镜和成像技术，可以对花粉的微观结构和形态进行更精细的观察和分析。

花粉生活力测定方法的发展不仅有助于科学家和植物育种者更好地了解植物的
繁殖机制和生长规律，也为农业生产和生态保护提供了重要的技术支持。

通过准确评估花粉的生活力，可以选择出高质量的花粉进行人工授粉或者种子生产，从而提高植物的繁殖成功率和产量。

此外，对花粉生活力的准确测定也有助于保护植物遗传资源，促进植物多样性的保护和利用。

总之，花粉生活力测定方法是一项重要的植物科学技术，它为我们深入了解植
物繁殖机制和提高农业生产效率提供了重要的技术手段和支持。

随着科学技术的不断进步，相信花粉生活力测定方法将会在未来发挥更加重要的作用。

花粉生活力测定方法
花粉生活力是指花粉颗粒在一定条件下能够完成受精和发育的能力。

花粉生活力的测定对于植物的研究和育种具有重要意义。

下面将介绍几种常用的花粉生活力测定方法。

首先，最常用的方法是离体花粉萌发法。

这种方法是将收集到的花粉在一定的培养基上进行培养，观察花粉颗粒是否萌发。

通过观察花粉管的生长情况和数量，可以初步判断花粉的生活力。

这种方法简单易行，可以在实验室条件下进行。

其次，还有花粉染色法。

这种方法是将花粉颗粒染色后观察其形态和结构，从而判断花粉的生活力。

通过观察染色后的花粉颗粒的形态、颜色和内部结构，可以初步判断花粉的生活力。

这种方法需要借助显微镜进行观察，对实验条件要求较高。

另外，还有花粉活力染色法。

这种方法是利用活性染料对花粉颗粒进行染色，观察染色后的花粉颗粒的颜色和形态，从而判断其生活力。

这种方法对于花粉的活力有较高的敏感性，可以较准确地判断花粉的生活力。

最后，还有花粉酶活性法。

这种方法是通过检测花粉中的酶活性来判断其生活力。

通过测定花粉中的酶活性，可以间接地反映出花粉的生活力。

这种方法需要借助生化实验室进行，对实验条件和仪器设备要求较高。

综上所述，花粉生活力的测定方法有多种，每种方法都有其特点和适用范围。

在实际应用中，可以根据具体的研究目的和实验条件选择合适的方法进行花粉生活力的测定。

通过准确测定花粉的生活力，可以为植物的研究和育种提供重要的参考依据。

植物花粉保存与花粉生活力的测定一、实验目的了解花粉生活力测定的一般方法，并掌握培养法测花粉生活力。

二、实验原理不同的植物成熟花粉的生命力长短不一，在自然状态下，成熟花粉有些存活仅数小时，有的课长达1个多月。

通过在干燥、低温、密封等的条件下保存，花粉的呼吸作用被抑制，生活力得以延长。

进行杂交人工授粉前，常对父母本花粉尤其是经过保存的花粉进行生活力测定。

其方法有：形态鉴定、TTC染色法鉴定、花芽萌芽鉴定等。

（1）形态鉴定除饱满、圆形的正常外，其他都不正常。

（2）TTC染色法鉴定脱氢辅酶存在于活的细胞内，当TTC渗透进入细胞内作为受体被脱氢辅酶上的氢还原，便由无色的TTC变为红色的三苯基甲（TTE)。

当细胞死亡后，NADH会迅速被降解，不会发生相应的颜色反应，故TTC染色法可显示细胞是否存活。

（3）花芽萌发鉴定将花粉置于合适的培养基上进行培养，花粉即可萌发出花粉管，发芽率可作为花粉生活力的检测指标三、实验材料、药品和器具1、实验材料兰花毛豌豆和葛藤正在开放的花2、药品和器具显微镜、凹式载玻片、培养皿、盖玻片、镊子、解剖针、蔗糖硼酸悬浮培养基四、实验内容1、花粉的保存（1）短期保存：低于4°C，冰壶中保存长期保存：（2）长期保存：干燥器中干燥24h，自由水含量低于1%，用石蜡封口，低于1°C的冰箱中保存2、花粉生活力的测定（花粉萌发鉴定法或称培养法）（1）用滴管滴1小滴蔗糖硼酸悬浮培养基于盖玻片上，注意不要滴到边缘，以免与载玻片凹面边缘接触。

(2)取兰花毛豌豆和葛藤正在开放的花的雄蕊，将雄蕊在培养基里反复涂抹几次，让花粉散落在培养基表面。

(3)迅速将盖玻片翻转，放置于凹式载玻片上，让培养基悬浮在凹式载玻片的凹面处，注意不要让培养基接触凹面边缘。

(4)每一个植物做两个重复，放置在显微镜下观察花粉形态。

20min后，观察并花粉发芽状况。

五、实验结果将实验结果填入花粉生活力测定实验记录表处理重复视野Ⅰ视野Ⅱ合计花粉粒数发芽粒数发芽率/%花粉粒数发芽粒数发芽率/%花粉粒数发芽粒数发芽率/%兰花毛豌豆重复Ⅰ70 65 92.8 65 60 92.3 135 125 92.6 重复Ⅱ80 76 95.0 74 70 94.6 154 146 94.8 合计150 141 94.0 139 130 93.5 289 271 93.8葛藤重复Ⅰ40 35 87.5 35 30 85.7 75 65 86.7 重复Ⅱ42 36 85.7 38 31 81.6 80 67 83.8合计82 71 86.6 73 61 83.6 155 137 88.4六、注意事项1、用滴管向盖玻片滴培养基时，要尽量滴在盖玻片中央，要避免液体培养基接触载玻片凹面边缘部分。