微生物知识及无菌操作注意事项共81页文档

微生物检查中无菌操作注意事项一、关于采用酒精棉球消毒的注意事项1.用酒精棉球擦拭双手，包括手掌、手背，尤其是手指，更换一个酒精棉球擦拭酒精灯附近（约10cm）桌面。

2.点燃酒精灯，在酒精灯附近拆器皿包装，并对器皿做相应标记。

3.用酒精棉球再次擦拭双手，开始实验操作。

4.消毒用酒精棉球湿度以不挤压出酒精为宜。

二、关于酒精灯正确使用的注意事项1.酒精量以大于1/3，小于2/3为正确量。

2.防风罩应小口朝上放置于酒精灯上，反过来放置会导致氧气没有充分燃烧。

3.使用酒精灯前要检查灯芯帽是否盖得太紧，以防酒精不能上升，影响酒精灯燃烧。

点燃酒精灯时严禁两个酒精灯对点。

4.熄灭酒精灯方法：先用灯芯帽扣压并熄灭火焰，再揭帽重新扣压一次。

这样可防止蒸汽倒吸灯帽，再次使用酒精灯时难以揭开灯帽。

5.做样品稀释及从试管取样实验时，酒精灯应放在操作人员和试管架之间，便于无菌操作。

三、关于吸量管使用的注意事项1.左手拿洗耳球，右手持吸量管，用右手食指平按住吸量管的顶部。

2.吸取样品后进行定量时，吸量管吸液口应贴附于试管内壁；放样时，吸量管吸液口也应贴附于试管约1/2内壁，不应贴附在管口处放液。

吸量管应尽可能垂直放液。

3.用吸量管往空平皿加入1ml溶液时，吸量管应贴附于平皿底部中央位置放液；用吸量管在平板上加入溶液做涂布接种时，吸量管应垂直、悬空放液于平板中央。

4.因吸量管拆封包装后应马上使用，故无须对吸量管吸液口过火焰消毒。

5.整个取样放样的过程应尽可能保证试管口或锥瓶口靠近酒精灯火焰附近。

四、关于样品梯度稀释的注意事项1.从试管架上取出所需试管于酒精灯火焰附近拔出试管塞，并在火焰外焰处对试管口过火焰进行消毒。

2.将试管放回试管架后用吸量管进行取样，然后取出该试管于火焰附近调节吸量管内溶液体积。

3.取样完成后对试管口再次消毒并塞上试管塞，将试管放回试管架原处。

4.从试管架上取出所需加样的试管于火焰附近进行加样放液操作。

五、关于培养皿记号的注意事项1.标记统一写在平皿底部边缘，以“字数少、字体小、清晰、明确”为原则。

微生物实验室无菌操作技术手册1. 引言本手册旨在介绍一种常见的微生物实验室中使用的无菌操作技术，以确保实验结果的可靠性和正确性。

正确的无菌操作可以防止微生物污染，保护实验人员的安全，并促进实验的顺利进行。

2. 无菌操作基础无菌操作是指在无菌条件下进行实验操作，避免微生物的污染和传播。

下面是一些无菌操作的基本原则：- 实验器材和培养基应经过严格的消毒和灭菌处理。

- 实验操作需要在洁净的操作台上进行，操作台上的工具和材料要经过消毒处理。

- 实验人员需要穿戴合适的个人防护装备，如实验服、手套、面罩等。

3. 无菌操作步骤3.1 准备工作- 检查实验室中的消毒设备是否正常运作。

- 检查实验器材和培养基的灭菌情况。

- 穿戴个人防护装备。

3.2 操作台准备- 在操作台上放置消毒过的工具和材料。

- 操作台表面用消毒液擦拭，保持干燥。

3.3 实验器材处理- 使用灭菌钳夹取所需的实验器材，在火焰中烧毁细菌和病毒。

- 使用经过灭菌处理的培养基。

3.4 实验操作- 取出所需的实验器材，避免直接接触无菌物品的非无菌表面。

- 操作时尽量避免产生细菌和病毒的飞溅和浮尘。

- 操作完成后，将实验器材进行消毒处理。

4. 操作注意事项- 所有实验操作都需在无菌条件下进行，尽量避免外界微生物的污染。

- 实验人员要对无菌操作的原则和步骤有清楚的了解，并遵循相应的规定和程序。

- 实验室要定期进行环境监测，确保无菌操作条件的可靠性。

5. 总结无菌操作技术是微生物实验室中非常重要的技术之一。

通过正确的无菌操作，可以保证实验结果的准确性和可重复性，并提高实验的成功率。

实验人员需要掌握无菌操作的基本原则和步骤，并严格遵守相关的操作规范和要求。

微生物实验室无菌操作技术规范目的：规范无菌操作流程，减少及避免染菌现象出现。

使用范围：无菌室及洁净区的操作。

无菌操作技术原则：1.环境要清洁，每次无菌操作结束后都需要对环境进行清理、清洗，避免操作前进行清扫。

2.做好个人卫生，进入无菌室前需修剪指甲、洗手，穿好无菌服，帽子需遮住所有头发，口罩遮住口鼻。

3.在无菌操作时，不可讲话、打喷嚏，对怀疑染菌的无菌物品不可使用。

内容：1.1 准备：工作人员着装整洁，洗手、戴口罩、修剪指甲，备齐用物（如接种针、接种环、酒精灯、斜面、平皿、摇瓶、75%酒精棉、无菌水等），核对无菌用品、接种菌种的种类、型号。

1.2 所有实验使用的物品都需要进行消毒、灭杀，在进入洁净区前需要经传递窗进行紫外表面消毒30分钟以上。

1.3 开始实验前需要打开超净台的紫外灯，消毒半个小时以上。

超净台避免放入过多的物品，一般只放入当次实验所有的物品。

所使用的试剂和耗材都需事先进行灭菌，灭菌日期超过4天的需重新消毒。

1.4 进入洁净区前关闭紫外灯，并打开风机，等待半个小时以上，使臭氧尽量排放干净。

1.5 除去手腕等部位的饰品，穿好无菌服，戴好头套、口罩，做到“三不漏”：不暴漏头发、不暴漏口鼻、不暴漏躯干皮肤和衣物。

1.6 双手要进行清洗、消毒。

1.7 要经风淋室风淋30秒后再进入洁净室。

1.8 在局部百级区域操作要戴一次性无菌手套。

1.9 实验操作过程中应尽量减少进入洁净区的人员（不超过4人/间），并尽量减少人员走动。

1.10 所有要放入超净工作台的物品都需经过消毒液喷洒擦拭消毒。

1.11 无菌物品若取离超净台则视为已污染，不得放回再用。

无菌液体在取离超净台前必须密封其开口。

密封的无菌液体在放入超净台后，对其开口前须对开口在酒精灯火焰上烧烤。

1.12 在拆开任何一次性无菌使用耗材的包装时都要在超净台内完成，并须同时保证与细菌直接接触的使用端/面不得与超净台内的任何物品发生触碰。

1.13 工作台面上的用品要放置有序、布局合理，一般说酒精灯（当工作不需要时也可不用）在中间，右手使用的物品在右侧，左手使用的物品在左侧。

微生物实验操作中常见注意事项汇总一、无菌操作要求1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。

2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。

3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。

4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。

5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。

6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。

7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。

8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。

二、无菌间使用要求1、无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7平方米的小窗，以备进入无菌间后传递物品。

2、无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。

3、无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30 W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。

4、处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。

5、在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。

三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。

（一）样品的处理和稀释：1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。

固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。

用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。

另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。

2．无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。

所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。

样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。

操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。

琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。

3．采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。

固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。

4．样品稀释误差：为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸管。

在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。

为减少稀释误差，SN标准采用取10mL稀释液，注入90mL缓冲液中。

5．稀释液：样品稀释液主要是灭菌生理盐水，有的采用磷酸盐缓冲液（或0.1％蛋白胨水），后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。

如对含盐量较高的食品（如酱油）进行稀释，可以采用灭菌蒸馏水。

（二）倾注培养1．操作方法：根据标准要求或对污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。

微生物实验操作注意事项
1.实验室准备：
在进行微生物实验前，需要确保实验室环境的清洁、整齐和符合实验
的要求。

实验室桌面、培养皿和仪器设备等都应该进行消毒和清洁，并且
要检查培养基、试剂和培养物等材料的储存和保存情况，确认其适用性。

2.实验操作：
在进行微生物实验的操作中需要严格遵守操作规程，按照实验方案进
行实施。

操作过程中要注意仪器仪表的正确使用和操作方法的规范性，保
证实验的准确性和可重复性。

3.个人卫生：
个人卫生在微生物实验中尤为重要，操作人员应该严格按照实验室卫
生操作规程进行操作，包括佩戴实验服、手套、口罩和护目镜等防护装备，保持皮肤的干燥和清洁，及时剪指甲，防止微生物的交叉污染。

4.微生物菌种的选择、储存和传代：
在进行微生物实验前，应该对微生物菌种进行合理选择，并妥善保存。

菌种的储存应遵循适当的方法和条件，例如在低温下保存，使用无菌的条
件和培养基等。

同时，传代的方法和周期也需要根据实验的需要进行合理
安排，以保证菌种的生长和稳定性。

5.消毒和废物处理：
6.数据记录和分析：
7.安全意识：
在微生物实验中，操作人员应具备良好的安全意识，遵守实验室安全
规定，正确使用实验器材和试剂。

如果发生意外或者突发情况，要及时报
告并寻求专业的帮助。

总之，微生物实验操作需要严格遵守操作规程，保持良好的操作技巧
和实验室卫生，确保实验的可靠性和安全性。

同时，要具备科学精神和严
谨的态度，进行数据的准确记录和分析，为科学研究提供可靠的实验依据。

微生物检查中无菌操作注意事项无菌操作是在微生物实验室中进行微生物检查的关键步骤，目的是避免实验样本被外界的微生物污染，确保实验结果的准确性和可靠性。

下面是无菌操作时需要注意的事项：1.消毒和准备工作：（1）实验室的台面、仪器、试剂瓶等必须经过充分的消毒，可以使用酒精或消毒液进行彻底擦拭。

（2）培养器具，如试管、移液器、培养皿等要经过高温高压灭菌或使用紫外线灭菌箱进行灭菌处理。

（3）实验人员需要穿戴好无菌实验服、手套，并使用无菌技术进行消毒。

2.操作环境：（1）无菌操作应在高洁净实验室中进行，可以利用洁净工作台或操作隔离器进行操作。

（2）在操作过程中，应保持操作区域内无风或微风，以避免空气中的微生物进入实验物品。

3.无菌技术：（1）经验培养物的传代应在无菌条件下进行，以避免可能存在的细菌、真菌或病毒的污染。

（2）操作时，要将试管或培养皿口向火焰吹热，以杀灭外界的微生物。

（3）要合理选择各种工具并进行正确使用，如使用无菌注射器取样、移液器吸取培养基等。

（4）在操作中尽量避免开盖时间过长，以防止空气中的微生物进入操作区域。

（5）使用完后，必须将工具进行高温高压灭菌处理，以杀灭残留的微生物。

4.操作技巧：（1）在进行移液操作时，务必注意吸液的速度，避免引起气泡，从而使空气中的微生物进入试验物品。

（2）在移液过程中，避免吸液器底部接触到实验物品，以防细菌污染。

（3）在进行接种操作时，应将培养皿或试管倾斜45度角，以避免细菌通过空气附着到试验物品上。

（4）接种时尽量避免接触到培养基表面，避免污染培养基。

5.废弃物处理：（1）实验过程中产生的废弃物，如培养皿、试管、移液器等，都需要进行合理处理。

（2）废弃物应放入无菌塑料袋中，并用高温高压灭菌处理，防止废弃物中的微生物扩散到其他地方。

总之，无菌操作是微生物检查中至关重要的环节，需要实验人员具备严谨的实验态度和操作技巧。

通过严格遵守无菌操作的注意事项，可以有效地保证微生物检查的准确性和可靠性。

微生物检查中无菌操作注意事项一、关于采用酒精棉球消毒的注意事项1.用酒精棉球擦拭双手，包括手掌、手背，尤其是手指，更换一个酒精棉球擦拭酒精灯附近（约10cm）桌面。

2.点燃酒精灯，在酒精灯附近拆器皿包装，并对器皿做相应标记。

3.用酒精棉球再次擦拭双手，开始实验操作。

4.消毒用酒精棉球湿度以不挤压出酒精为宜。

二、关于酒精灯正确使用的注意事项1.酒精量以大于1/3，小于2/3为正确量。

2.防风罩应小口朝上放置于酒精灯上，反过来放置会导致氧气没有充分燃烧。

3.使用酒精灯前要检查灯芯帽是否盖得太紧，以防酒精不能上升，影响酒精灯燃烧。

点燃酒精灯时严禁两个酒精灯对点。

4.熄灭酒精灯方法：先用灯芯帽扣压并熄灭火焰，再揭帽重新扣压一次。

这样可防止蒸汽倒吸灯帽，再次使用酒精灯时难以揭开灯帽。

5.做样品稀释及从试管取样实验时，酒精灯应放在操作人员和试管架之间，便于无菌操作。

三、关于吸量管使用的注意事项1.左手拿洗耳球，右手持吸量管，用右手食指平按住吸量管的顶部。

2.吸取样品后进行定量时，吸量管吸液口应贴附于试管内壁；放样时，吸量管吸液口也应贴附于试管约1/2内壁，不应贴附在管口处放液。

吸量管应尽可能垂直放液。

3.用吸量管往空平皿加入1ml溶液时，吸量管应贴附于平皿底部中央位置放液；用吸量管在平板上加入溶液做涂布接种时，吸量管应垂直、悬空放液于平板中央。

4.因吸量管拆封包装后应马上使用，故无须对吸量管吸液口过火焰消毒。

5.整个取样放样的过程应尽可能保证试管口或锥瓶口靠近酒精灯火焰附近。

四、关于样品梯度稀释的注意事项1.从试管架上取出所需试管于酒精灯火焰附近拔出试管塞，并在火焰外焰处对试管口过火焰进行消毒。

2.将试管放回试管架后用吸量管进行取样，然后取出该试管于火焰附近调节吸量管内溶液体积。

3.取样完成后对试管口再次消毒并塞上试管塞，将试管放回试管架原处。

4.从试管架上取出所需加样的试管于火焰附近进行加样放液操作。

五、关于培养皿记号的注意事项1.标记统一写在平皿底部边缘，以“字数少、字体小、清晰、明确”为原则。

无菌知识与无菌操作注意事项目录：1、微生物基本知识2、无菌的基本知识3、GMP中关于洁净区管理的基本要求4、洁净区人员卫生规范5、洁净区人员行为规范6、具体工作中的注意事项具体内容：1、微生物基本知识1.1微生物包括：细菌、真菌、放线菌、蓝线菌、立克次氏体、支原体、衣原体、病毒。

1.2细菌的特点：体积小、面积大；吸收多、转化快；生产旺、繁殖快；适应性强；分布广、种类多1.3细菌的形态：○1球菌○2杆菌○3螺旋菌1.4细菌的结构：○1基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞核、核质体○2特殊构造：鞭毛、菌毛、芽孢、美膜、气泡1.5芽孢：某些细菌在其生产的一定阶段，于营养细胞内形成一个圆形或卵圆形的内生孢子，是细菌的休眼体。

特点：含水量低、壁原而致密，对热、化学剂、辐射、压力、抵抗力强。

1.6常见污染药物的菌体都是一些生命力强的菌体，如葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草杆菌以及一些霉菌等。

2、无菌的基本知识按照无菌的最严格的定义，只有完全没有活微生物的样品才认为是无菌的。

但由于检查有一定的限度，它属于小概率事件，不可能破坏所有的药品，所以对于整批药品而言，实际上不能证明绝对无菌。

因此，声称无菌的一批产品的无菌情况是按照概率来定义的。

所以不能仅靠无菌检查来保证产品的无菌，而应通过全过程的无菌管理来保证产品的无菌。

我公司生产的产品主要用于注射剂的原料，因此要严格控制其无菌和澄明度。

如果使用了染菌的针剂，若是非致病菌，可能回引起局部的炎症，而若是致病菌，就可能会引起相应的疾病，染菌严重的药品若用于输液，会引起脓毒症、败血症甚至死亡。

较大的微粒可造成局部循环障碍，引起血管栓塞；微粒过多，造成局部堵塞和供血不足，组织缺氧而产生水肿和静脉炎；异物侵入组织，由于巨噬细胞的包围和增殖引起的肉芽肿。

此外，威力还可引起过敏反应、热原样反应。

灭菌与消毒灭菌方法：物理灭菌法（干热灭菌、湿热灭菌、辐射灭菌、过滤除菌）；化学灭菌法（化学药剂杀菌法、气体灭菌法）2.1化学消毒：2.2物理灭菌紫外线是一种比可见的紫外光波长还要短的不可见电磁波，它的波长范围是100~380nm，微生物体内都含有核酸，而核酸吸收紫外线照射的辐射能后可引起光化破坏作用，从而杀死微生物。

实验室无菌操作注意事项1. 简介实验室无菌操作是保证实验样品和培养基等无微生物污染的重要环节，它对实验结果的准确性和可重复性有着至关重要的影响。

本文将详细介绍实验室无菌操作的基本原则、注意事项和操作流程，以帮助实验人员正确进行无菌操作，保证实验结果的准确性和可靠性。

2. 无菌操作的基本原则无菌操作的基本原则包括：消毒、隔离、无菌环境、低菌液体、无菌操作器具等。

在进行实验室无菌操作时，必须始终遵守以下基本原则：2.1 消毒实验室无菌操作前，必须彻底清洁并消毒实验台面、操作器具、试剂瓶盖等可能接触到的物品。

消毒可以使用物理方法，如高温加热、紫外线辐射，也可以使用化学消毒剂，如酒精、次氯酸钠等。

2.2 隔离实验室无菌操作应在密闭的无菌环境中进行，例如无菌工作台或无菌室。

这样可以有效地防止外界微生物对实验样品的污染，并保证操作过程的无菌性。

2.3 无菌环境无菌环境的维护是实验室无菌操作的重要保证，主要包括空气净化、操作区域的无菌处理、操作工具和培养基的无菌处理等。

在无菌环境中，必须遵守严格的操作规范，避免任何可能引入微生物的行为。

2.4 低菌液体在无菌操作中，必须使用低菌液体，尽量避免微生物的存在。

低菌液体可以通过过滤、高温灭菌等方法得到，确保实验样品不被外源性微生物污染。

2.5 无菌操作器具实验室无菌操作中所使用的器具必须经过严格的无菌处理，如高温灭菌或化学消毒。

同时，操作工具在使用过程中要避免与非无菌物品接触，以防止被污染。

3. 实验室无菌操作的注意事项3.1 个人卫生在进行无菌操作前，必须正确佩戴洁净的实验服，戴上帽子、口罩和手套，保持个人卫生。

手套应定期更换，避免污染实验样品。

3.2 操作区域准备在进入无菌操作区域前，需要对操作区域进行彻底清洁和消毒，确保无菌环境的净化程度符合要求。

可以使用专业的无菌消毒剂进行操作区域的消毒，再用无菌酒精擦拭表面。

3.3 实验器具的处理实验室无菌操作中使用的器具必须经过高温灭菌或化学消毒处理，以保证无菌状态。