微生物基础知识和无菌操作2017年

微生物检测基础知识大全微生物检测涉及多行业和领域，在实验室检测中有着重要的地位，今天和大家一起对微生物检测中的一些基础操作进行汇总和梳理！接种将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

接种和分离工具1.接种针2.接种环3.接种钩4.5.玻璃涂棒6.接种圈7.接种锄8.小解剖刀常用的接种方法有以下几种：1、划线接种这是最常用的接种方法。

即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。

常用的接种工具有接种环，接种针等。

在斜面接种和平板划线中就常用此法。

２、三点接种在研究霉菌形态时常用此法。

此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。

除三点外，也有一点或多点进行接种的。

３、穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。

做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。

用的培养基一般是半固体培养基。

它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。

４、浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45℃左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。

待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。

５、涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。

６、液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。

７、注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。

８、活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。

食品微生物检测基础知识汇总一、微生物基础知识1、微生物的概念：微生物是一群体形细小，构造简单的微小生物的总称。

即凡是肉眼看不见的生物通称为微生物。

2、微生物的特点：个体小、结构简单、分布广、繁殖快、容易发生变异。

3、细菌生长的四个时期：平缓期、对数期、延滞期、衰老期。

4、微生物繁殖需要的条件：(1).充足的营养(2).合适的酸碱度(3).适宜的温度(4).必要的气候环境。

5、常用检验方法镜检接种培养二、无菌操作1、微生物操作要求迅速，结果正确且不污染周围环境。

因此，操作必须在无菌室内进行，使用的培养基及各种器材需经灭菌处理，整个过程还要符合无菌要求。

2、无菌室的要求工作室应矮小、平整，面积4平方米，采光面积宜大，周围需设缓冲走廊，无菌室缓冲间应有供消毒空气用的紫外灯。

3、无菌室的使用与管理（1）无菌室应保持清洁整齐，室内仅放最必须的检验用具。

每2-3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、门及地面，然后用3%石碳酸水溶液消毒空气，最后紫外灯杀菌半小时。

（2）无菌室杀菌前，应将所有物品置于操作台，然后打开紫外灯杀菌30min。

进入无菌室前，必须清洁双手，在缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽、工作鞋。

（3）操作应严格按照无菌操作规定进行，操作中少说话，以保持环境的无菌状态。

4、器材及场所的灭菌消毒高压蒸汽灭菌工作服、口罩、培养基稀、释液等，置高压杀菌锅内，一般采用121℃灭菌半小时，不同的培养基有不同的要求，应分别处理。

不能随便改变杀菌温度，温度过低，达不到杀菌效果，灭菌效果以芽孢是否杀死为判断标准。

温度过低，芽孢未被杀死，温度过高，则营养成分损失，状态也较差。

高温能杀死细菌的原因：细菌细胞基本是蛋白质，蛋白质不耐高温，生物催化剂-酶也是蛋白质，蛋白质受高温结构严重破坏，发生凝固便会死亡。

湿热比干热更容易杀菌的原因是：蛋白质含水越多，加热时越容易凝固，湿热作用的水蒸气传导力和穿透力都较强，更容易破坏蛋白质，从而更容易杀死细菌。

微生物基础知识及洁净区微生物控制培训内容简介一、 微生物简介二、微生物的分布三、微生物的作用及危害四、微生物的形态结构五、微生物污染及消毒灭菌六、 洁净区微生物的控制一、微生物简介1、微生物的定义(microorganism, microbe):微生物是存在于自然界中的个体微小，结构简单、肉眼看不见，必须借助于显微镜才能看清它们外形的一群低等的、原始的微小生物，如细菌，病毒等。

2、微生物的分类(按其结构、化学组成可分为)Ø原核生物:细胞核无核膜包裹，只存在称作核区的裸露DNA的原始单细胞生物。

它包括细菌、放线菌、立克次氏体、衣原体、支原体、蓝细菌和古细菌等。

Ø真核生物:细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体, 细胞器完整。

如真菌(酵母菌和霉菌)、原生动物、藻类。

Ø非细胞类:结构最简单和最小的微生物，能通过除菌滤器，没有典型的细胞结构，无产生能量的酶系统，只能在宿主活细胞内生长增殖的微生物。

如病毒和朊病毒。

非细胞细胞生物生物3 .微生物的五大特点：3 .微生物的五大特点：①体积小、比表面积大：微生物的大小以μm计，但比表面积（表面积/体积）大，必然有一个巨大的营养吸收，代谢废物排泄和环境信息接受面。

这一特点也是微生物与一切大型生物相区别的关键所在。

②吸收多、转化快：这一特性为高速生长繁殖和产生大量代谢物提供了充分的物质基础。

③生长旺、繁殖快：生长繁殖率极高，如大肠杆菌在20-30分钟内分裂一次，如果连续分裂，48小时内2.2*10^43个细菌数量增加，营养消耗、代谢积累和限制生长速度。

这种特性可以在短时间内将大量的基板转化为有用的产品，缩短研究周期。

还有一些缺点，如疾病、粮食霉变。

④分布广,种类多（10万多种）：自然界中到处都有，如水、空气、土壤等，土壤中的数量最多。

⑤适应性强，易变异：在紫外线辐射、生物诱变剂和环境中的一些营养因子的变化中，微生物自觉地、强制性地改变其遗传结构，导致变异。

无菌知识与无菌操作注意事项目录：1、微生物基本知识2、无菌的基本知识3、GMP中关于洁净区管理的基本要求4、洁净区人员卫生规范5、洁净区人员行为规范6、具体工作中的注意事项具体内容：1、微生物基本知识1.1微生物包括：细菌、真菌、放线菌、蓝线菌、立克次氏体、支原体、衣原体、病毒。

1.2细菌的特点：体积小、面积大；吸收多、转化快；生产旺、繁殖快；适应性强；分布广、种类多1.3细菌的形态：○1球菌○2杆菌○3螺旋菌1.4细菌的结构：○1基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞核、核质体○2特殊构造：鞭毛、菌毛、芽孢、美膜、气泡1.5芽孢：某些细菌在其生产的一定阶段，于营养细胞内形成一个圆形或卵圆形的内生孢子，是细菌的休眼体。

特点：含水量低、壁原而致密，对热、化学剂、辐射、压力、抵抗力强。

1.6常见污染药物的菌体都是一些生命力强的菌体，如葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草杆菌以及一些霉菌等。

2、无菌的基本知识按照无菌的最严格的定义，只有完全没有活微生物的样品才认为是无菌的。

但由于检查有一定的限度，它属于小概率事件，不可能破坏所有的药品，所以对于整批药品而言，实际上不能证明绝对无菌。

因此，声称无菌的一批产品的无菌情况是按照概率来定义的。

所以不能仅靠无菌检查来保证产品的无菌，而应通过全过程的无菌管理来保证产品的无菌。

我公司生产的产品主要用于注射剂的原料，因此要严格控制其无菌和澄明度。

如果使用了染菌的针剂，若是非致病菌，可能回引起局部的炎症，而若是致病菌，就可能会引起相应的疾病，染菌严重的药品若用于输液，会引起脓毒症、败血症甚至死亡。

较大的微粒可造成局部循环障碍，引起血管栓塞；微粒过多，造成局部堵塞和供血不足，组织缺氧而产生水肿和静脉炎；异物侵入组织，由于巨噬细胞的包围和增殖引起的肉芽肿。

此外，威力还可引起过敏反应、热原样反应。

灭菌与消毒灭菌方法：物理灭菌法（干热灭菌、湿热灭菌、辐射灭菌、过滤除菌）；化学灭菌法（化学药剂杀菌法、气体灭菌法）2.1化学消毒：2.2物理灭菌紫外线是一种比可见的紫外光波长还要短的不可见电磁波，它的波长范围是100~380nm，微生物体内都含有核酸，而核酸吸收紫外线照射的辐射能后可引起光化破坏作用，从而杀死微生物。

微生物及无菌基础知识一．前言我们所生活的环境中，到处都存在着大量的微生物。

在一般空气中，微生物达800~3500个/m3，在土壤中达1~500×108个/g，在严重污染的水中可达107个/ml。

（饮用水要求细菌总数≤100个/ml，大肠杆菌≤3个/ml。

经水塔或贮水池贮存后，短期内可繁殖至105~106个/ml。

）人的头皮上有140万个/cm2，两手上约有4~40万个，1g指甲污垢有38亿个，1g粪便可达10~1000亿个。

可以说微生物是无处不在，无处不有。

许多以前被人们认为是极端（高温、高压、强酸、强碱、低温等）甚至是致死的环境，现在已发现生活着各种类型的微生物（称为极端微生物）。

事实说明，微生物有特别顽强的生存、繁殖和变异能力来适应环境。

微生物种类繁多，有的对人有益，有的有害，有的无益也无害。

但在药品生产过程中，不可能对环境中的各种微生物加以区别对待，为保证药品的安全有效，需要对其进行控制。

空气中的微生物多数附着在灰尘上，或以芽孢形式悬浮于空气中，1μm以下者处于悬浮状态，10μm以上者会逐渐沉下来而形成菌尘。

所以也要对尘粒进行控制。

大量临床资料表明，注射剂（尤其是静脉注射剂）如污染了7~12μm的尘粒，可导致热原反应、肺动脉炎、微血栓或异物肉芽肿等，严重的还会致人死命。

而如果污染了细菌，轻则局部红肿化脓，重则引起全身细菌性感染。

因此，对微生物和尘粒进行更加严格的控制对于针剂生产洁净室非常重要。

人是洁净室最大的污染源，占90%左右。

一般男性每人每分钟向周围排放1000个以上的含菌粒子，女性为750个以上。

穿无菌服时，静止时的发菌量为10~300个/min，一般活动时发菌量为150~1000个/min，行走时发菌量为900~2500个/min。

咳嗽一次发菌量为70~700个/min，喷嚏一次为4000~60000个/min。

所以在洁净室中，人的数量和活动应有特别严格的限制。

二．微生物简介微生物是广泛存在于自然界的一群体形微小（直径小于1mm）、结构简单、肉眼看不见，必须藉助光学或电子显微镜放大数百至数万倍才能观察到的生物。

一、无菌操作技术1、定义是指在执行实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法；无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。

2、内容无菌操作技术主要包括两方面：1）创造无菌的培养环境。

包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等；2）在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。

包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。

3、无菌操作原则1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，接种时必须穿工作服、戴工作帽，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净；2）在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。

严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等；3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边；4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒；5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处；6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。

倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。

二、无菌操作的环境要求1、无菌室（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；（2）无菌室的消毒和防污染•每日（使用前）紫外线照射（0.5~1小时）；•每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒；•每季度用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时），特殊情况下可增加熏蒸频次。

（3）无菌室使用要求①无菌室内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作台面，不得存放与实验无关的物品；②无菌室使用前后应将门关紧，打开紫外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响；③处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。