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生物有机肥料的国家标准及各个指标的检测方法简介：本文介绍了生物有机肥肥料的国家标准，以及各个指标的检测方法。
具体包括：有效活菌数，有机质，水分，PH，粪类大肠菌群数，蛔虫卵死亡率，N，P5O2，K2O,重金属等指标的测定方法和流程。
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一．各个指标的标准1.各个技术指标项目指标要求有效活菌数≧0.2亿/g有机质（以干计）≧45%水分≦30%PH 5.5-8.5粪大肠菌群数≦100个/g蛔虫卵死亡率≧95%≧5%总养分质量分数（N+P5O2+K2O，以烘干计）2.重金属指标项目指标要求总AS ≦15mg/kg总Cd ≦3mg/kg总Pb ≦50mg/kg总Cr ≦150mg/kg总Hg ≦2mg/kg二．各个指标检测方法1.有效活菌数的测定（1）稀释称取固体样品10g，加入带玻璃珠的100ml的无菌水中，静置20分钟，在旋转式摇床上200r/min充分震荡30分钟，即成母液菌悬液。
用5ml无菌转液管分别吸取5ml上述母液菌悬液加入45ml无菌水中，按1比10进行系列稀释，分别得到10-1,10-2,10-3、、、稀释倍数的菌悬液。
（2）加样及培养每个样品取3个连续适宜稀释度，用0.5ml无菌移液管分别吸取不同稀释度菌悬液0.1ml，加至预先制备好的固体培养基平板上，分别用无菌玻璃刮刀将不同稀释度的菌悬液均匀地涂布于琼脂表面。
每一稀释度重复3次，同时以无菌水作空白对照，于适宜的条件下培养。
（3）菌落识别根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。
当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应该重做。
（4）菌落计数以出现20-30个菌落数的稀释度的平板为计数标准，（丝状真菌为10-150个菌落数），分别统计有效活菌数目和杂菌数目。
当只有一个稀释度，其有效菌平均菌落数在20-300个之间时，则以该菌落数计算。
GB/ 肥料中粪大肠菌群的测定1 范围本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。
2 定义粪大肠菌群 fecal coliforms系指一群在℃±℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
粪大肠菌群数为每克（毫升）肥料样品中粪大肠菌群的最可能数（MPN）。
3 设备和材料（内容略）4 培养基和试剂培养基：遵照附录A的规定。
革兰氏染色液：遵照附录B的规定（略）。
5 检验步骤样品稀释在无菌操作下称取样品g或吸取样品10mL，加入到带玻璃珠的90 mL无菌水中，置于摇床上200 r/min 充分振荡30min，即成10-1稀释液。
用无菌移液管吸取 mL上述稀释液加入到45 mL无菌水中，混匀成10-2稀释液。
这样依次稀释，分别得到10-3，10-4等浓度稀释液（每个稀释度须更换无菌移液管）。
乳糖发酵试验选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液mL加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3支发酵管，置℃±℃恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24h±2h。
如果所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性；如果有产酸产气或只产酸的发酵管，则按进行。
分离培养从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置36℃±1℃条件下培养18h～24h。
证实试验从分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色。
染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置℃±℃条件下培养24h ±2h。
观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性；产气为粪大肠菌群阳性。
结果证实实验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克（毫升）肥料样品中的粪大肠菌群数。
附录 A（规范性附录）培养基乳糖胆盐发酵培养基蛋白胨g猪胆盐g乳糖g%溴甲酚紫水溶液m L蒸馏水1000m LpH值～制法：将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中，校正pH，加入溴甲酚紫水溶液，然后分装试管，每管9mL，并放入一支倒置的小套管，高压灭菌115℃15min。
粪大肠菌群的测定1 卫生学意义粪大肠菌群测定的卫生学意义：一、与大肠菌群相比，粪大肠菌群在人和动物粪便中所占的比例较大，而且在自然界容易死亡。
因此，粪大肠菌群的存在表明食品近期内可能直接或间接的受到了粪便的污染；二、作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性；三、常用做贝类和贝类养殖用水的卫生指标。
2 检验方法2.1 术语与定义一群在44.5 °C培养24h-48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。
卫生学概念，又称为耐热大肠菌群，主要是大肠杆菌，但也包括克雷伯氏菌属等。
2.2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：(1)恒温培养箱：36C±1C。
(2)冰箱：2C〜5C。
( 3)恒温水浴箱：46C±1C。
( 4)天平：感量0.1g 。
(5)无菌吸管：1mL(具0.01m该U度)、10mL(具0.1m该U度)或微量移液器及吸头。
( 6)无菌锥形瓶：容量500mL。
( 7)无菌培养皿：直径90mm。
(8) pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2.3 培养基和试剂(1)月桂基硫酸盐胰蛋白胨(Lauryl Sulfate Tryptose , LST)肉汤：1) 成分：胰蛋白胨或胰酪胨：20.0g ;氯化钠：5.0g ;乳糖：5.0g ;磷酸氢二钾(KHPO): 2.75g ;磷酸二氢钾(KHPQ): 2.75g ;月桂基硫酸钠：0.1g ; 蒸馏水：1000mL; pH：6.8±0.22) 制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。
分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。
121 C高压灭菌15 min。
(2)EC肉汤(E.coli , BGLB :1)成分：胰蛋白胨或胰酪胨：20.0 g; 3号胆盐或混合胆盐：1.5 g；乳糖:5.0g ;磷酸氢二钾(K2HPQ) : 4.0g ;磷酸二氢钾(KHPQ) : 1.5g ;氯化钠：5.0g ; 蒸馏水：1000mL pH:6.9 ± 0.1。
粪大肠菌群的测定1、半个月前配好初、复发酵所需培养液2、采样时用500ml 广口玻璃瓶分开采样，牛皮纸封口3、操作（1） 培养液初发酵 单倍乳糖蛋白胨培养液：蛋白胨 10 g牛肉浸膏 3 g乳糖 5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml调节PH 为7.2—7.4（NaOH ）6%溴甲基紫乙醇溶液 1 ml 充分混匀后 10ml （三倍是5ml ）分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。
单月13个地表水（每个水样需10个单倍，5个三倍），2个创业（每个水样需15个单倍）。
共190个（1900ml ）单倍，65个三倍（325ml ）。
双月10个地表水，2个创业。
共130个（1600ml ）单倍，50个三倍（250ml ）。
创业的水一个月采两次水样复发酵 EC 培养液胰胨 20 g乳糖 5 g胆盐三号 1.5 g磷酸氢二钾 4 g磷酸二氢钾 1.5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml充分混匀后 10ml 分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。
三倍乳糖蛋白胨培养液： 蛋白胨 30 g 牛肉浸膏 9 g 乳糖 15 g 氯化钠 15 g 蒸馏水 1000ml 溴甲基紫乙醇溶液 3 ml（2）做样初发酵：地表水15根管为一个水样。
5根为一组。
第一排为5ml三倍培养液，加10ml水样；第二排为10ml单倍培养液，加1ml水样；第三排为10ml单倍培养液，取1ml水样稀释至10ml后再从中取1ml至装有培养液的试管。
（10、1、0.1的取样量）创业，每个水样15根单倍。
同上逐级稀释，取样量为0.1、0.01、0.001ml。
将初发酵管放入培养箱中培养，温度为37℃±0.5℃，时间为24h±2h。
观察：产酸产气为阳性，即变色且有气泡产生，可轻击试管查气泡。
复发酵：呈阳性的试管进行接种后，做复发酵。
粪大肠菌群的测定1、半个月前配好初、复发酵所需培养液2、采样时用500ml 广口玻璃瓶分开采样，牛皮纸封口3、操作（1） 培养液初发酵 单倍乳糖蛋白胨培养液：蛋白胨 10 g牛肉浸膏 3 g乳糖 5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml调节PH 为7.2—7.4（NaOH ）6%溴甲基紫乙醇溶液 1 ml 充分混匀后 10ml （三倍是5ml ）分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。
单月13个地表水（每个水样需10个单倍，5个三倍），2个创业（每个水样需15个单倍）。
共190个（1900ml ）单倍，65个三倍（325ml ）。
双月10个地表水，2个创业。
共130个（1600ml ）单倍，50个三倍（250ml ）。
创业的水一个月采两次水样复发酵 EC 培养液胰胨 20 g乳糖 5 g胆盐三号 1.5 g磷酸氢二钾 4 g磷酸二氢钾 1.5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml充分混匀后 10ml 分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。
三倍乳糖蛋白胨培养液： 蛋白胨 30 g 牛肉浸膏 9 g 乳糖 15 g 氯化钠 15 g 蒸馏水 1000ml 溴甲基紫乙醇溶液 3 ml（2）做样初发酵：地表水15根管为一个水样。
5根为一组。
第一排为5ml三倍培养液，加10ml水样；第二排为10ml单倍培养液，加1ml水样；第三排为10ml单倍培养液，取1ml水样稀释至10ml后再从中取1ml至装有培养液的试管。
（10、1、0.1的取样量）创业，每个水样15根单倍。
同上逐级稀释，取样量为0.1、0.01、0.001ml。
将初发酵管放入培养箱中培养，温度为37℃±0.5℃，时间为24h±2h。
观察：产酸产气为阳性，即变色且有气泡产生，可轻击试管查气泡。
复发酵：呈阳性的试管进行接种后，做复发酵。
粪大肠菌群检测方法粪大肠菌群检测是指对人体粪便中的大肠菌群进行检测分析，以了解肠道微生态的状况。
粪大肠菌群的平衡与人体健康密切相关，因此对其进行检测具有重要意义。
目前，有多种方法可用于粪大肠菌群检测，本文将对常见的几种方法进行介绍和比较。
首先，传统的培养法是一种常见的粪大肠菌群检测方法。
该方法通过在特定培养基上培养粪便样本中的细菌，然后根据形态、生理生化特性进行鉴定和计数。
这种方法简单易行，能够得到各种细菌的数量和种类，但是需要较长的培养周期，且无法培养一些难以培养的菌种，因此在一定程度上存在局限性。
其次，分子生物学方法在粪大肠菌群检测中得到了广泛应用。
其中，16SrRNA基因测序是一种常用的方法，通过对粪便样本中的细菌DNA进行测序，可以得到细菌的种类和数量信息。
这种方法具有高通量、高灵敏度的特点，能够检测到微生物群落的整体结构，但是需要较高的技术水平和设备支持。
另外，代谢组学方法也被应用于粪大肠菌群检测。
这种方法通过检测粪便样本中的代谢产物，了解肠道微生物的代谢活动情况，从而推断微生物群落的组成和功能。
代谢组学方法能够直观地反映微生物群落的代谢活动，但是受到代谢产物的多样性和复杂性的限制，需要较高的分析技术和数据处理能力。
此外，基于人工智能的分析方法也逐渐应用于粪大肠菌群检测。
这种方法通过建立粪便微生物组的数据库和模型，利用人工智能算法对样本数据进行分析和预测，从而实现对微生物群落的快速、准确的检测。
人工智能方法具有高效、自动化的特点，但是需要大量的数据支持和算法优化。
综上所述，粪大肠菌群检测方法多种多样，各有优缺点。
在实际应用中，可以根据具体需求和条件选择合适的方法进行检测。
随着科技的不断发展，相信粪大肠菌群检测方法会越来越完善，为人体健康提供更多的帮助。
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测是一项非常重要的检测方法，可以帮助医生了解肠道菌群的健
康状况，对于一些肠道疾病的诊断和治疗具有重要的指导意义。
目前，常见的粪大肠菌群检测方法主要包括传统培养法、分子生物学方法和代谢产物分析法。
传统培养法是最早被使用的检测方法之一，其原理是将粪便样本在特定的培养
基上进行培养，然后观察和计数不同菌种的数量。
这种方法简单易行，但是存在着检测时间长、无法培养一些难以培养的菌种等缺点。
分子生物学方法是近年来得到广泛应用的一种检测方法，其原理是通过PCR
扩增、测序等技术，对粪便样本中的微生物DNA进行检测和分析。
这种方法可以
快速、准确地获取肠道微生物的信息，但是需要专业的设备和技术人员进行操作，成本较高。
代谢产物分析法是一种新兴的检测方法，其原理是通过检测粪便中微生物代谢
产物的种类和含量，来推断肠道微生物的组成和功能状态。
这种方法无需培养微生物，可以直接反映微生物的活动情况，但是目前仍处于研究阶段，需要更多的临床验证。
除了以上几种方法外，近年来还出现了一些新的粪大肠菌群检测技术，如16S rRNA测序技术、宏基因组测序技术等，这些新技术在提高检测灵敏度、准确性和
全面性方面具有一定优势，但是也存在着技术门槛高、设备昂贵等问题。
总的来说，粪大肠菌群检测方法在不断地发展和完善，不同的方法各有优缺点，应根据具体的临床需求和实际情况选择合适的检测方法。
未来随着技术的不断进步，相信粪大肠菌群检测方法会更加快速、准确、全面，为肠道健康的评估和疾病的诊断治疗提供更好的帮助。
G B T肥料中粪大肠菌群的测定Document serial number【LGGKGB-LGG98YT-LGGT8CB-LGUT-GB/ 肥料中粪大肠菌群的测定1 范围本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。
2 定义粪大肠菌群 fecal coliforms系指一群在℃±℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
粪大肠菌群数为每克（毫升）肥料样品中粪大肠菌群的最可能数（MPN）。
3 设备和材料（内容略）4 培养基和试剂培养基：遵照附录A的规定。
革兰氏染色液：遵照附录B的规定（略）。
5 检验步骤样品稀释在无菌操作下称取样品g或吸取样品10mL，加入到带玻璃珠的90 mL无菌水中，置于摇床上200r/min充分振荡30min，即成10-1稀释液。
用无菌移液管吸取 mL上述稀释液加入到45 mL无菌水中，混匀成10-2稀释液。
这样依次稀释，分别得到10-3，10-4等浓度稀释液（每个稀释度须更换无菌移液管）。
乳糖发酵试验选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液mL加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3支发酵管，置℃±℃恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24h±2h。
如果所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性；如果有产酸产气或只产酸的发酵管，则按进行。
分离培养从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置36℃±1℃条件下培养18h～24h。
证实试验从分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色。
染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置℃±℃条件下培养24h ±2h。
观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性；产气为粪大肠菌群阳性。
结果证实实验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克（毫升）肥料样品中的粪大肠菌群数。
粪大肠菌群检测标准
粪大肠菌群检测是评价消化道微生物菌群组成和功能的重要指标，常用于评估肠道健康和消化功能。
以下是一般粪大肠菌群检测的参考标准：
1. 总菌群量：正常情况下，粪便样本中的大肠菌群数量应该在10^7~10^9 CFU/g之间。
2. 菌群多样性指数：通常使用菌群多样性指数（如Shannon指数）评估菌群的多样性程度。
正常情况下，指数应该在较高水平。
3. 优势菌群和病原菌：粪大肠菌群检测还可以确定主要的优势菌群种类和比例，以及是否存在潜在的病原菌。
正常情况下，优势菌群应该是益生菌（如双歧杆菌、乳酸菌等），而病原菌应该是少量或不存在。
4. 菌群平衡和稳定性：正常的粪大肠菌群应该具有良好的平衡和稳定性。
如果菌群失调或不稳定，可能会导致肠道问题和消化不良等症状。
需要注意的是，粪大肠菌群检测的标准可能因不同的实验室和研究领域而有所差异。
因此，具体的标准应根据实验室或临床医生的建议进行参考。
粪大肠菌群的测定（多管发酵法）一、检测限二、试剂(均为分析纯)1、配制单倍乳糖蛋白胨培养液（1份量）(因有固体培养基，以下配置方法仅做参考)单倍乳糖蛋白胨培养液成分：蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、乳糖5g、氯化钠5g、1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL、碳酸钠10.6g。
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液（1mL）：称取溴甲酚紫1.6g倒入小烧杯，用少量95%乙醇溶解，移至100mL容量瓶，用95%乙醇多次洗小烧杯，洗液移入容量瓶，最后用95%乙醇定容至100mL，摇匀备用。
（滤纸、100mL小烧杯2只、100mL容量瓶1只、95%乙醇、玻璃棒、药匙、天平、滴管、溴甲酚紫）碳酸钠（10.6g）：称取10.6g碳酸钠溶于蒸馏水，并定容到100mL。
（100mL容量瓶1个、100mL小烧杯2只、碳酸钠）将单倍乳糖蛋白胨培养液成分蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、乳糖5g、氯化钠5g加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节pH为7.2~7.4（用10%碳酸钠调节），再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管(10mL左右)中，于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用（冰箱中可存放3个月）。
(>1L锥形瓶1只、1mL移液管1根、pH计、电炉、倒置的小玻璃管的试管60套（小试管(12x150mm ）+小套管（杜氏小管）（约6mm × 36mm )）、高压蒸汽灭菌器、试管架（10只入）、纱布和棉花)2、三倍配制单倍乳糖蛋白胨培养液：制法同上，除蒸馏水外，其余配方比例三倍。
3、EC培养液（1份量）将EC培养液所需成分胰胨20g、乳糖5g、胆盐三号1.5g、磷酸氢二钾（K2HPO4）4g、磷酸二氢钾（KH2PO4）1.5g、氯化钠5g，加热溶解于1L烧杯中，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。
用10%Na2CO3调节pH以防止培养基灭菌后pH上升0.2左右（确定值需要前期在实验室寻找规律）。
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测是一种常用的微生物检测方法，用于评估肠道内大肠埃希杆菌等菌群的数量和组成。
以下介绍几种常见的粪大肠菌群检测方法：
1. 传统培养法：该方法通过将粪便样本接种在含有特定培养基的培养皿中，利用培养皿中的营养物质、温度等条件，使大肠菌群等菌种在培养基上生长。
然后通过观察培养皿中的菌落形态、颜色等特征，或进行进一步的生化试验，来鉴定和计数菌群。
这种方法操作简便，但需要较长时间（通常需要2-3天）。
2. PCR法：PCR（聚合酶链反应）是一种快速、高效的核酸扩增技术，可用于检测微生物的DNA或RNA。
在粪大肠菌群检测中，可以选择一种或多种特异引物，通过PCR扩增粪便样
本中的大肠菌群DNA片段。
扩增后的产物可以进行电泳分析，根据特定的条带模式来鉴定和计数菌群。
相比传统培养法，PCR法的优势在于快速、高灵敏度和特异性。
3. 16S rRNA测序法：16S rRNA是细菌基因组中高保守的区域，其序列具有物种特异性。
基于16S rRNA序列的差异，可以通
过测序技术快速准确地鉴定粪大肠菌群的组成。
该方法可通过提取粪便样本中的总DNA，进行PCR扩增和纯化后，进行高
通量测序。
测序结果可以使用相应的数据库比对，识别和计数样本中的各种大肠菌群。
总结来说，传统培养法、PCR法和16S rRNA测序法是常见的
粪大肠菌群检测方法。
其中，PCR法和16S rRNA测序法更加
快速、准确，逐渐成为主流的检测方法。
这些方法的应用有助于揭示肠道微生物群落的组成和功能，为相关疾病的诊断和治疗提供依据。
《资源节约与环保》2019年第4期1方法原理在特定温度下培养特定的时间，粪大肠菌群能产生酶底物法采用大肠菌群细菌能产生β-半乳糖苷酶，将选择性培养基中的无色底物邻硝基苯β-D-吡喃半乳甘糖分解黄色的邻硝基苯酚，在紫外灯照射下产生荧光。
统计阳性反应出现的数量，查MPN图表，在将其计算出样品中粪大肠菌群的浓度值。
其酶底物法检出限是10MPN/L。
2实验室用水实验室用水为无菌水，取来适量的纯净水，放在烧杯中，经过121摄氏度，高压蒸汽灭菌，需要20分钟。
3采样瓶的清洗准备（1）是新购买的500ml具旋帽或者是磨口塞得广口玻璃瓶，应在百分之二的盐酸中浸泡几个小时，还需要用自来水冲洗干净，再用纯净水清洗1-2次，控干，备用。
（2）将清洗干净干燥的采样器，用专用的纸包裹起来，放入恒温干燥箱内，将温度设置到121摄氏度，灭菌20分钟，烘干。
灭菌完成后，还需要关闭实验室电源待温度降到50摄氏度以下时，方可开门取样品瓶，不然，玻璃瓶会因为操作不当爆裂。
4样品的采集及保存（1）单独采样，优先采样。
使用已经准备好的采样瓶，采样。
在采样的过程中产样瓶不用再进行冲洗。
（2）在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行采样，以免不同层次的搅扰。
（3）水样的保存条件及时间：水样应在10摄氏度以下冷藏保存；应尽快分析，最长时间不能超过6个小时。
（4）化验员接样后，不能立即检测，应将样品与4摄氏度以下冷藏并在2小时内检测。
5分析样品5.1样品稀释需要根据样品污染程度确定接种量，避免接种样品培养后97孔定量盘出现全部阳性或全部阴性。
在接种量小于100ml的时候，应稀释样品后再进行接种试验，接种量为10ml的时候，取10ml样品加入到90ml无菌水的三角瓶中混合均匀制成1:10的稀释样品，其他接种量的稀释样品依次类推。
在未知样品，可选用多个接种量进行检测。
5.2接种量取100ml样品或是稀释样品与灭菌后的三角瓶，再加入2.7克+-0.5克培养基粉末，在充分搅拌混匀，等完全溶解，在将其全部倒入97孔定量盘内，以手扶平97孔定量盘背面，赶出孔内气泡，然后，用程控定量封口机封口。
GB/ 肥料中粪大肠菌群的测定1 范围本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。
2 定义粪大肠菌群 fecal coliforms系指一群在℃±℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
粪大肠菌群数为每克（毫升）肥料样品中粪大肠菌群的最可能数（MPN）。
3 设备和材料（内容略）4 培养基和试剂培养基：遵照附录A的规定。
革兰氏染色液：遵照附录B的规定（略）。
5 检验步骤样品稀释在无菌操作下称取样品g或吸取样品10mL，加入到带玻璃珠的90 mL无菌水中，置于摇床上200 r/min 充分振荡30min，即成10-1稀释液。
用无菌移液管吸取 mL上述稀释液加入到45 mL无菌水中，混匀成10-2稀释液。
这样依次稀释，分别得到10-3，10-4等浓度稀释液（每个稀释度须更换无菌移液管）。
乳糖发酵试验选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液mL加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3支发酵管，置℃±℃恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24h±2h。
如果所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性；如果有产酸产气或只产酸的发酵管，则按进行。
分离培养从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置36℃±1℃条件下培养18h～24h。
证实试验从分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色。
染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置℃±℃条件下培养24h ±2h。
观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性；产气为粪大肠菌群阳性。
结果证实实验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克（毫升）肥料样品中的粪大肠菌群数。
附录 A（规范性附录）培养基乳糖胆盐发酵培养基蛋白胨g猪胆盐g乳糖g%溴甲酚紫水溶液m L蒸馏水1000m LpH值～制法：将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中，校正pH，加入溴甲酚紫水溶液，然后分装试管，每管9mL，并放入一支倒置的小套管，高压灭菌115℃15min。
G B T肥料中粪大肠菌群的测定集团标准化工作小组 #Q8QGGQT-GX8G08Q8-GNQGJ8-MHHGN#GB/ 肥料中粪大肠菌群的测定1 范围本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。
2 定义粪大肠菌群 fecal coliforms系指一群在℃±℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
粪大肠菌群数为每克（毫升）肥料样品中粪大肠菌群的最可能数（MPN）。
3 设备和材料（内容略）4 培养基和试剂培养基：遵照附录A的规定。
革兰氏染色液：遵照附录B的规定（略）。
5 检验步骤样品稀释在无菌操作下称取样品g或吸取样品10mL，加入到带玻璃珠的90 mL无菌水中，置于摇床上200r/min充分振荡30min，即成10-1稀释液。
用无菌移液管吸取 mL上述稀释液加入到45 mL无菌水中，混匀成10-2稀释液。
这样依次稀释，分别得到10-3，10-4等浓度稀释液（每个稀释度须更换无菌移液管）。
乳糖发酵试验选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液mL加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3支发酵管，置℃±℃恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24h±2h。
如果所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性；如果有产酸产气或只产酸的发酵管，则按进行。
分离培养从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置36℃±1℃条件下培养18h～24h。
证实试验从分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色。
染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置℃±℃条件下培养24h ±2h。
观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性；产气为粪大肠菌群阳性。
结果证实实验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克（毫升）肥料样品中的粪大肠菌群数。
附录 A（规范性附录）培养基乳糖胆盐发酵培养基蛋白胨g猪胆盐g乳糖g%溴甲酚紫水溶液m L蒸馏水1000m LpH值～制法：将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中，校正pH，加入溴甲酚紫水溶液，然后分装试管，每管9mL，并放入一支倒置的小套管，高压灭菌115℃15min。
肥料中粪大肠菌群的测定说到肥料中的粪大肠菌群，这可是一个让人又爱又恨的话题。
大家知道，肥料是农田的命，没了肥料，庄稼就像是没水的鱼，干巴巴的。
但是，肥料里那些看不见的小家伙们，真的是个谜。
你可能会想，粪大肠菌群，这不是粪便里的细菌吗？对的，就是它们！可千万别小看这些细菌，虽然它们的名字听起来不怎么好听，但其实它们在土壤中的角色可重要了。
嘿，想象一下，咱们在自家菜园里辛勤耕作，种下的可是满满的希望啊。
可如果肥料里含有过多的粪大肠菌群，那就会变得棘手了。
想想看，这些细菌如果进入了蔬菜，最后跑到咱们的餐桌上，那可就让人直冒冷汗了。
人家说了，细菌虽小，危害不小呀！所以，咱们要好好测定一下，确保这些小家伙们不把我们的饭菜搞得乌烟瘴气。
说到测定，咱们先得准备一些工具。
别担心，听起来复杂，但其实就是几样家伙：试管、培养基、还有一个可以让细菌繁殖的环境。
嘿，像是给细菌开了一家“五星级酒店”，只要给它们足够的养分和合适的温度，它们就会像春天的小花一样，争先恐后地冒出来。
你看，细菌们也是有自己的生活哲学的。
在培养过程中，要是不小心让外来的细菌混入，那可就糟糕了。
就像是派对上混进了不受欢迎的客人，气氛瞬间就冷了下来。
因此，保持环境的洁净很重要。
要确保每个步骤都做到位，这样才能准确测定出粪大肠菌群的数量。
等到结果出来，那真是如释重负，心里的大石头总算落下来了。
测定完后，数据也得好好分析。
数一数，这个肥料里的粪大肠菌群到底是个什么情况，是过高还是正常？如果超标了，那就得好好琢磨琢磨，哪里出了问题，是施肥的量不对，还是选择的肥料本身就有问题。
说白了，咱们就像是一名侦探，跟细菌们斗智斗勇，寻找真相。
再说了，细菌也不是全都坏，适量的粪大肠菌群在土壤中其实可以促进微生物的活动，提升土壤的肥力。
就像家里养的小狗狗，虽然有时候调皮捣蛋，但它的存在却能给生活增添很多乐趣。
所以，咱们要做的，不是一味地排斥这些细菌，而是要搞清楚它们的数量和比例，做到心中有数，才能更好地利用肥料。
粪大肠菌群检测方法粪大肠菌群检测是一项非常重要的检测方法，它可以帮助我们了解肠道内的微生物组成情况，对于肠道健康的评估和疾病的诊断具有重要意义。
在进行粪大肠菌群检测时，我们可以采用多种方法来获取准确的检测结果。
下面将介绍几种常见的粪大肠菌群检测方法。
首先，传统的培养法是一种常用的粪大肠菌群检测方法。
通过将粪便样品接种到含有特定培养基的培养皿中，然后进行培养和计数，可以得到不同菌群的数量和种类。
这种方法操作简单，成本较低，但需要一定的培养时间，并且只能检测到能够在特定培养条件下生长的菌群，对于一些无法在常规培养条件下生长的菌群无法检测到。
其次，分子生物学方法也是常用的粪大肠菌群检测方法之一。
包括PCR、实时荧光定量PCR、16S rRNA基因测序等技术，可以对粪便中的微生物DNA进行扩增和测序，进而对菌群进行鉴定和数量分析。
这种方法可以检测到更多种类的微生物，具有更高的灵敏度和特异性，但相对来说操作复杂，成本较高。
另外，近年来，基于高通量测序技术的宏基因组学方法也逐渐应用于粪大肠菌群检测。
通过对粪便样品进行高通量测序，可以获得更全面、更深入的微生物组成信息，包括细菌、真菌、病毒等。
这种方法可以帮助我们更好地了解肠道微生物的多样性和功能，但需要较高的测序深度和数据分析能力。
除了上述方法外，还有一些新兴的粪大肠菌群检测方法，如代谢组学、蛋白质组学等，可以通过检测粪便中的代谢产物和蛋白质组成来评估肠道微生物的活动和功能。
这些方法在研究肠道微生物与宿主健康的关系方面具有重要意义。
综上所述，粪大肠菌群检测方法有多种选择，每种方法都有其特点和适用范围。
在进行粪大肠菌群检测时，应根据具体的研究目的和实际情况选择合适的方法，以获得准确、全面的检测结果。
希望通过不断的技术进步和方法改进，粪大肠菌群检测能够更好地为肠道健康的评估和疾病的诊断提供帮助。
肥料中粪大肠菌群的测定
一：前期准备
一次性帽子、口罩、脚套
1， 移液管10ml 量筒100ml ｝
玻璃珠 三角瓶 培养皿
2， 乳糖胆盐发酵培养基（用于乳糖发酵） 乳糖发酵培养基（用于复发酵）
伊红美蓝培养基（用于分离培养） } 121℃，15min
无菌水 } 121℃，15min
二：实验过程
无菌条件下进行：
10.0g 固体样品/10ml 液体样品
↓
三角瓶（带玻璃珠，90ml 无菌水）1:10=10-1
↓
200r/min 振荡30min
↓
吸取10-1—5ml ，加入45ml 无菌水（提前准备）1:100=10-2
↓
吸取吸取10-2—5ml ，加入45ml 无菌水（提前准备）1:1000=10-3
↓
……依次稀释得到10-4，10-5等浓度稀释液（每个稀释度必须更换无菌移液管）
↓
选取三个连续适宜稀释液，分别吸取1.0ml 加入到乳糖胆盐发酵管内（装有乳糖胆盐发酵培
养基）（每一稀释度接种3支发酵管）
↓
培养箱45℃，24h
↓
结果：产酸，颜色变；产气，导管有气泡
不产酸，不产气，为粪大肠菌群阴性
↓
分离培养：从产酸产气或只产酸的发酵管中挑取发酵液在伊红美蓝培养基平板上划线
↓
培养箱36℃，18-24h
↓
证实实验：从平板上挑取可以菌落，进行革兰氏染色。
结果：染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性
↓
革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中（装有乳糖发酵培养基）
↓
培养箱44.5℃，24h
↓
结果，不产气为粪大肠菌群阴性，产气为粪大肠菌群阳性
↓
证实为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN 检索表，得出每克（毫
升）肥料样品中的粪大肠菌群数 ｝160℃，4h ｝115℃，15min。
