3M 判读手册 PCC大肠菌群快速检测测试片
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微生物快速检测方法ppt课件页数:32
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3M PetrifilmTM 肠杆菌科测试片法
Microbiology
3M PetrfilmTM 肠杆菌科测试片法
检样 25g(ml)样品＋225ml 稀释液
10倍系列稀释
选择2-3个适宜稀释度的样品匀液，接种Petrifilm测试片
371°C, 24 2h
菌落计数
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结果报告
Microbiology
好氧或兼性厌氧发酵型G-杆菌
氧化酶阴性
氧化酶阳性
肠杆菌科
乳糖发酵
非乳糖发酵
埃希氏菌 克雷伯氏菌 柠檬酸杆菌 等
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沙门氏菌 志贺氏杆菌 耶尔森氏菌 普罗威登斯菌等
Microbiology
什么是肠杆菌科？
革兰氏阴性 无芽孢杆菌 氧化酶阴性 发酵葡萄糖产酸或产酸产气 习惯生长于肠道、土壤、水和蔬菜 在干燥环境中存活性差 对热敏感 部分对人体有致病性
Microbiology
操作时的注意点
Copyright 3M China Ltd.
Microbiology
操作时的注意点
Copyright 3M China Ltd.
Microbiology
食品与环境中 肠杆菌科和大肠菌群检测的对比试验
Copyright 3M China Ltd.
Microbiology
Microbiology
3MTM PetrifilmTM 霉菌酵母测试片
标准培养基 抗生素抑制细菌生长 叠放片数小于20片 磷酸酶指示剂 3-5天，21-25°C AOAC官方方法
997.02
Copyright 3M China Ltd.
Microbiology
大肠菌群快检纸片
大肠菌群快检纸片法的结果判定
其结果可有如下5种情况： ①纸片保持青紫色，无论有无红色斑点或红晕均为阴性。 ②纸片上出现红点或红晕且其周围变黄，为典型阳性。 ③整个纸片全变黄色，却无红色斑点或红晕出现，为不典 型阳性，造成此结果的因素很多，见“影响因素” 。 ④纸片中某部分变黄色，或有或无红斑（红晕），为不典 型阳性。 ⑤纸片加样后立即或较短时间内出现黄色或褪色，此情况 应对样品进行中和处理。
组成和性状：每份2张5×5cm纸片，干燥纸片 为灰白色或淡绿色，加中性水湿润后为青紫色。 ±1 使用方法： 将纸片用适量无菌蒸馏水浸湿（无 多余水分），贴于食饮具内侧表面或其他待测 物体表面规定位置，压实，使纸片与物体面充 分接触，30秒后取下，放于无菌袋内，37℃培 养16-18h观察结果。
大肠菌群快检纸片的种类及其使用方法
大肠菌群快检纸片法的检测原理
众所周知，酶是一种蛋白质，其活性随 温度和pH等变化而改变，在高温和极端 酸性或碱性情况下，可完全丧失活性而 失去脱氢的能力。受氢体的作用也可能 受pH的影响，因此影响酶活性和导致pH 异常的任何因素均可影响检测结果。
大肠菌群快检纸片的种类及其使用方法
1 餐饮具和待测物体表面用纸片：
大肠菌群和粪大肠菌群的定义
总大肠菌群中的细菌除生活在肠道中外，在自 然环境中的水与土壤中也经常存在，但此等在 自然环境中生活的大肠菌群培养的最合适温度 为25℃左右，如在37℃培养则仍可生长，但如 将培养温度再升高至44．5℃，则不再生长， 而直接来自粪便的大肠菌群细菌，习惯于37℃ 左右生长，如将培养温度升高至44．5℃仍可 继续生长。
1.0 毫 升 水 样 0.1 毫 升 水 样
3M大肠菌群的测定
食品卫生微生物学检验 大肠菌群的测定 国标（GB/T 4789.3—2008） 国标（GB/T 4789.3—2008）
实验目的
学习并掌握国标GB/T 4789.38—2008标准中 规定食品中大肠菌群的测定方法。
大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气。需氧 和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源 于人畜粪便，故此作为粪便污染指标来评价食品的卫 生质量，具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否 被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌 污染的可能性。
计数菌落数大于150个的测试片时，可计数一 个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成 单个方格内的菌落数后乘以20即为测试片上估算的 菌落数（圆形生长面积为20 cm2）。食品中最终菌 落浓度的单位以“cfu/g (mL)”表示，表面上菌落数以 “cfu/cm2”表示。
3M PetrifilmTM 大肠菌群测试片
• 含有改良的VRB培养基 • 目标菌落为红色带气泡 • 35±1°C, 24 ±2 h培 养 • AOAC Offical Method 991.14
3M PetrifilmTM 大肠杆菌/大肠菌群测试片
样品制备
样品制备
接种
接种
接种
培养
解释
3. 接种 将PetrifilmTM大肠菌群测试片或PetrifilmTM 大肠杆菌/大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开 上层膜，用吸管吸取1 mL样液垂直滴加在测试片的 中央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡产生和上层膜 直接落下，把压板（平面底朝下）放置在上层膜中 央，轻轻地压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面 积上。拿起压板，静置至少1 min以使培养基凝固。
在PetrifilmTM大肠杆菌/大肠菌群测试片上， 蓝色有气泡的菌落确认为大肠杆菌。蓝色有气泡 和红色有气泡的菌落数之和为大肠菌群数。培养 圆形面积边缘上及边缘以外的菌落不做计数。出 现大量气泡形成、不明显的小菌落，培养区呈蓝 色或暗红时，进一步稀释样品可获得准确的读数。
实验目的
学习并掌握国标GB/T 4789.38—2008标准中 规定食品中大肠菌群的测定方法。
大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气。需氧 和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源 于人畜粪便，故此作为粪便污染指标来评价食品的卫 生质量，具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否 被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌 污染的可能性。
计数菌落数大于150个的测试片时，可计数一 个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成 单个方格内的菌落数后乘以20即为测试片上估算的 菌落数（圆形生长面积为20 cm2）。食品中最终菌 落浓度的单位以“cfu/g (mL)”表示，表面上菌落数以 “cfu/cm2”表示。
3M PetrifilmTM 大肠菌群测试片
• 含有改良的VRB培养基 • 目标菌落为红色带气泡 • 35±1°C, 24 ±2 h培 养 • AOAC Offical Method 991.14
3M PetrifilmTM 大肠杆菌/大肠菌群测试片
样品制备
样品制备
接种
接种
接种
培养
解释
3. 接种 将PetrifilmTM大肠菌群测试片或PetrifilmTM 大肠杆菌/大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开 上层膜，用吸管吸取1 mL样液垂直滴加在测试片的 中央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡产生和上层膜 直接落下，把压板（平面底朝下）放置在上层膜中 央，轻轻地压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面 积上。拿起压板，静置至少1 min以使培养基凝固。
在PetrifilmTM大肠杆菌/大肠菌群测试片上， 蓝色有气泡的菌落确认为大肠杆菌。蓝色有气泡 和红色有气泡的菌落数之和为大肠菌群数。培养 圆形面积边缘上及边缘以外的菌落不做计数。出 现大量气泡形成、不明显的小菌落，培养区呈蓝 色或暗红时，进一步稀释样品可获得准确的读数。
大肠菌群测试片
大肠菌群测试片产品编号： BE211产品规格： 24片/包产品用途：食品、饮用水、原料和食品加工设备表面大肠菌群的检测产品说明1、原理及适用范围大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被广泛应用于食品卫生检验工作中。
大肠菌群多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，大肠菌群数的高低，表明了食品及食品生产过程中受污染的程度。
大肠菌群测试片（Filmplate TM Enumeration of Coliform BE211）含有选择性培养基、大肠菌群特异性半乳糖苷酶的显色指示剂和高分子吸水凝胶，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品。
本产品适合于食品、饮用水及原料中大肠菌群的计数，也可用于食品加工设备表面的卫生检测。
执行标准：食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数（GB/T 4789.3—2010）。
2、操作方法2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液。
2.2、接种：一般食品选2～3个适宜的稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。
将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固。
每个稀释度接种两片。
同时做一片空白阴性对照。
2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。
培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。
3、计数原则及报告方式3.1、培养后纸片上的蓝色菌落为大肠菌群菌落，选择菌落数在15CFU～150CFU之间的纸片进行计数。
3.2、若两个稀释度的菌落数均在15CFU～150CFU之间，则取其平均菌落数乘以稀释倍数报告之，即为每毫升（或每克）样品中的大肠菌群菌落数。
快速测试片法和GB法检测生鲜猪肉中大肠菌群的结果比较
１材 料与 方 法
表 １ 生 鲜 猪 肉 ＧＢ法 大 肠 菌 群 ＭＰ Ｎ ／ Ｉ Ｏ Ｏ ｇ计 数 结 果
样 品 稀 释 瘦 汁 数 结 果
百 而 —— ———— １ 设备 。按照 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ． ３ — ２ ０ １ ０ 要求 ， 实验室的检验设备主要有均 表 ２ 生鲜猪肉测试片法大肠菌群计数结果 质器 ， 振荡器 ， 高压灭菌器 ， 超净工作台 ， 恒温培养箱 ， 天平 ， 酸度计 ， 冰 箱， 恒温水浴箱 ， 微波炉 ， 移液器 。 １ ． ２ 试剂和检测样品。大肠菌群测试片（ 广州绿洲生化 Ｂ Ｅ ２ １ １ ） ， 月 桂基硫酸盐胰蛋 白胨 （ Ｌ Ｓ Ｔ ） 肉汤、 煌绿乳糖胆盐 （ Ｂ Ｇ Ｌ Ｂ ） 肉汤（ 广东环凯 微生物科技有限公司） ， 生理盐水 自制。 玻璃器皿洗刷烘干备用。 测试用 生猪肉（ １ ５ 份） 购买于本地大型超市分割冷鲜 肉、 菜市场案板柜 台、 早市 案板柜台等不同胴体。 １ ． ３ 样 品制备 、 稀释 、 接种 。两种检测方法的样 品制备和稀释 ， 均是 按照 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ． ３ ． ＿ ． ２ ０ ｌ ０ 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群 计数 中的第一法大肠菌群 ＭＰ Ｎ计数法进行样品制备和稀释。 国标法选择了 １ ： １ ０ ０ 、 １ ： １ ０ ０ ０ 、 １ ： １ ０ ０ ０ ０ 稀释度 ， 测试片法选择 了 １ ： 大型超市分割冷鲜肉、 壮 ＃ 菜市场案板柜台、 ＃ 社 ＃ 早市案板柜台 １ ０ ０ 、 １ ： １ ０ ０ ０稀释度进行检测 。测试片方法按照产品说明书进行 ， 测试 ＃ 片叠在一起放回原 自封袋中并封 口，透明面朝上水平置于恒温培养箱 食用 。 大肠菌群计数数值的多少是衡量食品安全的一个重要指标 ，可判 内， 堆叠片数不超过 １ ２ 片。 ３ ６ ± ｌ ℃ 培养 １ ５ — ２ ４ ｈ 。 国 标检测方法进行如 下实 验 。 定食品被大肠菌群污染的程度。 Ｇ Ｂ ２ ７ ０ ７ — ２ ０ ０ ５鲜黼 肉卫生标准中 Ｇ Ｂ ２ ７ ２ ６ — ２ ０ ０ ５熟 肉制品卫生标 １ ４初发酵试验 。将 每个样品的 ３个连续稀释度分别接种于 ３管 没有对生鲜肉微生物指标进行限定 ； ２ Ｉ ｕ ２ ４ ４ ２ ４ ４ ¨ ¨ ２ Ｌ ｓ Ｔ肉汤，每管接种 Ｉ ｍＬ ， ３ ６ ℃２ ４ ｈ ± ２ ｈ ，观察倒管 内是否有气泡产 准中对微生物指标进行 了限定， 肉干肉铺类 、 烧烤类 、 酱卤类大肠菌群 Ｐ Ｎ ／ Ｉ Ｏ Ｏ ｇ ＜３ ￣ ０ — １ ５ ０ ； Ｇ Ｂ １ ８ ４ ０ ６ ． ３ — ２ ０ ０ １农产品安全质量无公害畜禽 肉 生， ２ ４ ｈ ±２ ｈ产气者进行复发酵试验， 如未产气则继续培养至 ４ ８ ｈ ±２ Ｍ Ⅲ ㈣ 黜 ㈣ 安全要求 ，大肠菌群 ＭＰ Ｎ ／ １ ０ ０ ｇ ＜１ ￣ ０ Ｏ ０ ０ ； Ｇ Ｂ Ｔ １ ７ ２ ３ ８ — ２ ０ ０ ８鲜冻分割 ｈ ， 产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。 大肠菌群 ＭＰ Ｎ ／ １ ０ ０ ｇ ￣１ ０ ０ ０ ０ ； Ｇ Ｂ ／ Ｔ ９ ９ ５ ９ ． ２ — ２ ０ ０ ８分割鲜冻猪瘦 １ ． ５ 复发酵试验。用接种环从产气的 Ｌ Ｓ Ｔ肉汤管中分别取培养物 １ 牛肉， 大肠菌群 Ｍ Ｐ Ｎ ／ １ ０ ０ ｇ ＜１ ￣ ０ ０ ０ ０ ； Ｇ Ｂ １ ６ ８ ６ ９ — ２ ０ ０ ５鲜 、 冻禽产品， 鲜禽 环， 移种于 Ｂ Ｇ Ｌ Ｂ管中， ３ ６℃４ ８ ｈ ， 观察产 腾况。产气者 ， 计为大肠菌 肉 ， 群 阳性管 。 大肠菌群 Ｍ Ｐ Ｎ ／ １ ０ ０ ｇ ＜１ ￣ ０ ０ ０ ０ ， 冻禽≤５ ０ ０ ０ 。 我们对检测结果进行了统计学分析 ，表明两种检测方法没有显著 １ ． ６ 大肠菌群最可能数（ ＭＰ Ｎ） 的报告 。 国标检测方法观察倒管内是 ｐ ＞０ ． ０ ５ ） ， 说 明快速测试片可以应用于实际检测 ， 能大大缩短时 否有气泡产生 ， 按１ ． ５确证的大肠菌群 Ｉ ＿ Ｓ Ｔ阳性管数 ， 检索 ＭＰ Ｎ表 ， 报 差异 （ 告每 ｇ （ ｍＬ ） 样品中大肠菌群 的 ＭＰ Ｎ值。测试片检测方法细菌在测试片 间 ， 操作简便 ， 减少实验过程污染环节 ， 提高工作效率 。美 国 ３ Ｍ公司 ｅ ｔ ｒ ｉ ｉ ｆ ｌ ｍ Ｔ Ｍ快速测试片、 国内公司如北京陆桥技术股份有限公司、 广州 上生长后会显示蓝色菌落 ，选择菌落数在 １ ５ — １ ５ ０ Ｃ Ｆ Ｕ之 间进行计数 。 Ｐ 分别计数和记录稀释倍数。 天河绿洲生物化学研究中心等快速检验纸片均适合于食品企业进行 陕 速检测。且国产产品有着很好的价格优势。 ２ 结 果 国标检测方法和测试片检测方法大肠菌群计数结果 ，见表 １ 和表 食品卫生微生物学检验大肠菌群计数 国标经历了多次修订 ，历次 ２。 版本分 别为 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ￣ ３ — １ ９ ８ ４ 、 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ． ３ — １ ９ ９ ４ 、 Ｇ Ｂ／ Ｔ ４ ７ ８ ￣ ３ — ２ ０ ０ ３ 、 Ｇ Ｂ ｆ ｒ ４ ７ ８ ９ ． ３ — ２ ０ ０ ８ 、 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ． ３ — ２ ０ １ ０ 。由国家强制食品安全 国家标准 ３ 分 析与讨 论 为 了保障公众健康， 以食品安全风险评估 通过表 １ 和表 ２的实验结果可以看出 ， 针对同样的生鲜猪 肉， 通过 替代了原来的国家推荐标准。 做到科学合理、 公开透明、 安全可靠 ， ２ ０ １ ６ 年１ ２月 ２ ３日国 采用 Ｇ Ｂ法大肠菌群 ＭＰ Ｎ ／ Ｉ Ｏ ０ ｇ 计数和快速测试片法大肠菌群计数结 结果为依据 ， 果的符合率是—致。肉品采样来源于本地大型超市店分割冷鲜肉、 菜市 家卫计委和国家食药监总局联合发布 了 包括 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ． １ 食品安全国 家 场案板柜台、 早市案板柜 台， 从检验结果可以说明 ， 分割肉在卫生方面 标准 食品微生物学检验 总则等 ｌ ５ 个Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ 系列食品安全国家标 还是有很大 的优势的。 建议食用者购买生鲜肉品后 ， 充分加热熟透后再 准 。
表 １ 生 鲜 猪 肉 ＧＢ法 大 肠 菌 群 ＭＰ Ｎ ／ Ｉ Ｏ Ｏ ｇ计 数 结 果
样 品 稀 释 瘦 汁 数 结 果
百 而 —— ———— １ 设备 。按照 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ． ３ — ２ ０ １ ０ 要求 ， 实验室的检验设备主要有均 表 ２ 生鲜猪肉测试片法大肠菌群计数结果 质器 ， 振荡器 ， 高压灭菌器 ， 超净工作台 ， 恒温培养箱 ， 天平 ， 酸度计 ， 冰 箱， 恒温水浴箱 ， 微波炉 ， 移液器 。 １ ． ２ 试剂和检测样品。大肠菌群测试片（ 广州绿洲生化 Ｂ Ｅ ２ １ １ ） ， 月 桂基硫酸盐胰蛋 白胨 （ Ｌ Ｓ Ｔ ） 肉汤、 煌绿乳糖胆盐 （ Ｂ Ｇ Ｌ Ｂ ） 肉汤（ 广东环凯 微生物科技有限公司） ， 生理盐水 自制。 玻璃器皿洗刷烘干备用。 测试用 生猪肉（ １ ５ 份） 购买于本地大型超市分割冷鲜 肉、 菜市场案板柜 台、 早市 案板柜台等不同胴体。 １ ． ３ 样 品制备 、 稀释 、 接种 。两种检测方法的样 品制备和稀释 ， 均是 按照 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ． ３ ． ＿ ． ２ ０ ｌ ０ 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群 计数 中的第一法大肠菌群 ＭＰ Ｎ计数法进行样品制备和稀释。 国标法选择了 １ ： １ ０ ０ 、 １ ： １ ０ ０ ０ 、 １ ： １ ０ ０ ０ ０ 稀释度 ， 测试片法选择 了 １ ： 大型超市分割冷鲜肉、 壮 ＃ 菜市场案板柜台、 ＃ 社 ＃ 早市案板柜台 １ ０ ０ 、 １ ： １ ０ ０ ０稀释度进行检测 。测试片方法按照产品说明书进行 ， 测试 ＃ 片叠在一起放回原 自封袋中并封 口，透明面朝上水平置于恒温培养箱 食用 。 大肠菌群计数数值的多少是衡量食品安全的一个重要指标 ，可判 内， 堆叠片数不超过 １ ２ 片。 ３ ６ ± ｌ ℃ 培养 １ ５ — ２ ４ ｈ 。 国 标检测方法进行如 下实 验 。 定食品被大肠菌群污染的程度。 Ｇ Ｂ ２ ７ ０ ７ — ２ ０ ０ ５鲜黼 肉卫生标准中 Ｇ Ｂ ２ ７ ２ ６ — ２ ０ ０ ５熟 肉制品卫生标 １ ４初发酵试验 。将 每个样品的 ３个连续稀释度分别接种于 ３管 没有对生鲜肉微生物指标进行限定 ； ２ Ｉ ｕ ２ ４ ４ ２ ４ ４ ¨ ¨ ２ Ｌ ｓ Ｔ肉汤，每管接种 Ｉ ｍＬ ， ３ ６ ℃２ ４ ｈ ± ２ ｈ ，观察倒管 内是否有气泡产 准中对微生物指标进行 了限定， 肉干肉铺类 、 烧烤类 、 酱卤类大肠菌群 Ｐ Ｎ ／ Ｉ Ｏ Ｏ ｇ ＜３ ￣ ０ — １ ５ ０ ； Ｇ Ｂ １ ８ ４ ０ ６ ． ３ — ２ ０ ０ １农产品安全质量无公害畜禽 肉 生， ２ ４ ｈ ±２ ｈ产气者进行复发酵试验， 如未产气则继续培养至 ４ ８ ｈ ±２ Ｍ Ⅲ ㈣ 黜 ㈣ 安全要求 ，大肠菌群 ＭＰ Ｎ ／ １ ０ ０ ｇ ＜１ ￣ ０ Ｏ ０ ０ ； Ｇ Ｂ Ｔ １ ７ ２ ３ ８ — ２ ０ ０ ８鲜冻分割 ｈ ， 产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。 大肠菌群 ＭＰ Ｎ ／ １ ０ ０ ｇ ￣１ ０ ０ ０ ０ ； Ｇ Ｂ ／ Ｔ ９ ９ ５ ９ ． ２ — ２ ０ ０ ８分割鲜冻猪瘦 １ ． ５ 复发酵试验。用接种环从产气的 Ｌ Ｓ Ｔ肉汤管中分别取培养物 １ 牛肉， 大肠菌群 Ｍ Ｐ Ｎ ／ １ ０ ０ ｇ ＜１ ￣ ０ ０ ０ ０ ； Ｇ Ｂ １ ６ ８ ６ ９ — ２ ０ ０ ５鲜 、 冻禽产品， 鲜禽 环， 移种于 Ｂ Ｇ Ｌ Ｂ管中， ３ ６℃４ ８ ｈ ， 观察产 腾况。产气者 ， 计为大肠菌 肉 ， 群 阳性管 。 大肠菌群 Ｍ Ｐ Ｎ ／ １ ０ ０ ｇ ＜１ ￣ ０ ０ ０ ０ ， 冻禽≤５ ０ ０ ０ 。 我们对检测结果进行了统计学分析 ，表明两种检测方法没有显著 １ ． ６ 大肠菌群最可能数（ ＭＰ Ｎ） 的报告 。 国标检测方法观察倒管内是 ｐ ＞０ ． ０ ５ ） ， 说 明快速测试片可以应用于实际检测 ， 能大大缩短时 否有气泡产生 ， 按１ ． ５确证的大肠菌群 Ｉ ＿ Ｓ Ｔ阳性管数 ， 检索 ＭＰ Ｎ表 ， 报 差异 （ 告每 ｇ （ ｍＬ ） 样品中大肠菌群 的 ＭＰ Ｎ值。测试片检测方法细菌在测试片 间 ， 操作简便 ， 减少实验过程污染环节 ， 提高工作效率 。美 国 ３ Ｍ公司 ｅ ｔ ｒ ｉ ｉ ｆ ｌ ｍ Ｔ Ｍ快速测试片、 国内公司如北京陆桥技术股份有限公司、 广州 上生长后会显示蓝色菌落 ，选择菌落数在 １ ５ — １ ５ ０ Ｃ Ｆ Ｕ之 间进行计数 。 Ｐ 分别计数和记录稀释倍数。 天河绿洲生物化学研究中心等快速检验纸片均适合于食品企业进行 陕 速检测。且国产产品有着很好的价格优势。 ２ 结 果 国标检测方法和测试片检测方法大肠菌群计数结果 ，见表 １ 和表 食品卫生微生物学检验大肠菌群计数 国标经历了多次修订 ，历次 ２。 版本分 别为 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ￣ ３ — １ ９ ８ ４ 、 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ． ３ — １ ９ ９ ４ 、 Ｇ Ｂ／ Ｔ ４ ７ ８ ￣ ３ — ２ ０ ０ ３ 、 Ｇ Ｂ ｆ ｒ ４ ７ ８ ９ ． ３ — ２ ０ ０ ８ 、 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ． ３ — ２ ０ １ ０ 。由国家强制食品安全 国家标准 ３ 分 析与讨 论 为 了保障公众健康， 以食品安全风险评估 通过表 １ 和表 ２的实验结果可以看出 ， 针对同样的生鲜猪 肉， 通过 替代了原来的国家推荐标准。 做到科学合理、 公开透明、 安全可靠 ， ２ ０ １ ６ 年１ ２月 ２ ３日国 采用 Ｇ Ｂ法大肠菌群 ＭＰ Ｎ ／ Ｉ Ｏ ０ ｇ 计数和快速测试片法大肠菌群计数结 结果为依据 ， 果的符合率是—致。肉品采样来源于本地大型超市店分割冷鲜肉、 菜市 家卫计委和国家食药监总局联合发布 了 包括 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ． １ 食品安全国 家 场案板柜台、 早市案板柜 台， 从检验结果可以说明 ， 分割肉在卫生方面 标准 食品微生物学检验 总则等 ｌ ５ 个Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ 系列食品安全国家标 还是有很大 的优势的。 建议食用者购买生鲜肉品后 ， 充分加热熟透后再 准 。
大肠杆菌大肠菌群测试片
大肠杆菌大肠菌群测试片什么是大肠杆菌大肠菌群？大肠杆菌（Escherichia coli）和大肠菌群（Coliform）都是存在于温血动物肠道和粪便的细菌，是条件性致病菌，主要造成水体污染，也可能引起食物中毒的发生。
大肠杆菌大肠菌群测试片（FilmplateTM E.coli&coliform count plate BE203）是一种预先制备好的一次性培养基产品，可以同时检测大肠杆菌和大肠菌群，含有大肠菌选择性培养基、冷水可溶性的吸水凝胶和半乳糖苷酶（GAL）和葡萄糖醛酸酶（GUD）指示剂。
大肠杆菌显蓝色，其他大肠菌群显红色，蓝点加上红点为总的大肠菌群数。
本产品适合于食品及原料中大肠菌群的计数，如消毒牛乳、冷饮和调味品等样品的检测，也可用于表面的卫生检测。
执行标准：食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数——Petrifilm TM 测试片法（GB/T 4789.38）。
使用方法1、样品处理取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，依次往下稀释。
2、样品接种：一般食品选1～2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。
将大肠杆菌大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片。
同时做一片空白阴性对照。
3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。
培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。
4、结果判读培养后大肠杆菌显蓝色，其他大肠菌群显红色，蓝点加上红点为总大肠菌群数。
计数原则及报告方式1、选择菌落数在15～150个之间的纸片进行计数。
Handyplate大肠杆菌 大肠菌群测试片说明书
1大肠杆菌/大肠菌群测试片使用说明书【产品名称】通用名称：大肠杆菌/大肠菌群测试片英文名称：Handy plate TM E.coli &Coliform(ECC)Detetction Plate 【产品编号】HP 004【包装规格】20片/包【产品简介】Handy plate TM 大肠杆菌/大肠菌群测试片为预制备的即用型培养基产品，含有标准的培养基、冷水凝胶和显色指示剂。
本产品可用于食品和饮料中大肠杆菌/大肠菌群的测定。
【使用说明】1.样品制备取样品25g(mL)放入含有225mL 磷酸缓冲液（或生理盐水）的无菌均质杯或均质袋内，均质器混匀1min ～2min 制成1:10的样品匀液，必要时用无菌1mol/L NaOH 或1mol/L HCl 溶液调节样品匀液pH 至6.8～7.2。
用1mL 无菌吸管或移液器吸取1:10均液1mL ，注入含有9mL 稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推制备10倍系列稀释的样品匀液，每次换一支吸管。
2.接种根据对样品污染状况的估计，选择2～3个稀释度进行检测。
将大肠杆菌/大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL 样品匀液滴加到测试片中央，缓缓盖上上层膜，避免产生气泡，静置3～5min 使样液扩散并重新形成凝胶。
3.培养将测试片正面向上水平放置36℃±1℃，培养18h ～24h 。
24.判读大肠杆菌为蓝绿色菌落，其它大肠菌群为品红色菌落。
合适的计数范围在20CFU ～200CFU 。
若整个培养区域呈蓝绿、蓝紫或品红色，可能是菌浓度过高，需对样品进一步稀释以获得确切的计数。
如需分离菌落进行进一步分析，揭开上层膜用接种针将菌落挑出使用即可。
【操作图解】1.用剪刀沿虚线剪开，2.将测试片放在水平台面上，3.缓慢盖上覆膜，取出测试片盒揭开覆膜，将1mL 样品液静置3-5分钟。
滴加在纸片中心。
4.将测试片正面朝上，放置于5.根据判读手册判读测试片恒温培养箱中，36±1℃培上是否有目标菌生长，或养24±2h。
大肠菌群快速纸片检测试剂盒 使用说明
【检验方法】将接种好的纸片，袋口朝上，竖直放置于37℃培养箱中培养12～18小时。
【结果判断】
1、 纸片上出现紫红色菌落，其周围有黄圈者为阳性。
2、 纸片为一种颜色，无菌落生长者为阴性。
3、 纸片呈紫色，有紫红色菌落，其周围无黄圈者为阴性。
4、 酸性食品接种后，纸片变黄，经培养后无紫红色菌落为阴性。
4、 确认试验的方法：进行确认试验，用灭菌摄子无菌操作将可疑纸片移种到乳糖发酵管里，置37℃24小时培养后，对其产酸产气者判为大肠菌群阳性，否则判为阴性。
大肠菌群量的多少与结果的显示密切相关，可出现3种不同现象：⑴菌量较晕)；⑵菌量适中(102～103 cfu/ml)，整个纸片也变黄，但有小而密集的红色斑点；⑶菌量较少(≤102cfu/ml)，纸片可呈紫蓝色，并有散在或较密集的红色斑点，其周围变黄。因此菌量较大时，可能出现可疑现象。此时应通过加大样品稀释度或进一步做复发酵进行证实。其它可疑现象也可通过发酵实验进行确认。
【标本处理】
1、样品处理：液体样品按国标方法进行；固体样品，取25g样品，研碎加入25ml灭菌盐水混匀。
2、接种：液体样品吸取三个1mL分别涂布于三疑于三张纸片，再吸取1︰10、1︰100稀释液各三个1ml，分别涂布于三张纸片。固体样品，吸取1︰1混悬液三个1mL(1g)分别涂布于三张纸片，再吸取1︰10、1︰100稀释液各三个1ml，分别涂布于三张纸片，而后用手轻轻压平，置36±1℃温箱，培养15小时观察结果。
【检验原理】应用灭菌的滤纸吸收选择性培养基，细菌通过滤纸纤维膨胀而被固定并生长繁殖，大肠菌群在发育时伴随产生琥珀酸脱氢酶将纸片上的TTC(红四碳唑)还原成不可逆的Formazane产生红色色素，即大肠菌在纸片培养上呈红菌落，菌落周围产生黄圈是大肠菌分解乳糖产酸使指示剂变色的结果。
【结果判断】
1、 纸片上出现紫红色菌落，其周围有黄圈者为阳性。
2、 纸片为一种颜色，无菌落生长者为阴性。
3、 纸片呈紫色，有紫红色菌落，其周围无黄圈者为阴性。
4、 酸性食品接种后，纸片变黄，经培养后无紫红色菌落为阴性。
4、 确认试验的方法：进行确认试验，用灭菌摄子无菌操作将可疑纸片移种到乳糖发酵管里，置37℃24小时培养后，对其产酸产气者判为大肠菌群阳性，否则判为阴性。
大肠菌群量的多少与结果的显示密切相关，可出现3种不同现象：⑴菌量较晕)；⑵菌量适中(102～103 cfu/ml)，整个纸片也变黄，但有小而密集的红色斑点；⑶菌量较少(≤102cfu/ml)，纸片可呈紫蓝色，并有散在或较密集的红色斑点，其周围变黄。因此菌量较大时，可能出现可疑现象。此时应通过加大样品稀释度或进一步做复发酵进行证实。其它可疑现象也可通过发酵实验进行确认。
【标本处理】
1、样品处理：液体样品按国标方法进行；固体样品，取25g样品，研碎加入25ml灭菌盐水混匀。
2、接种：液体样品吸取三个1mL分别涂布于三疑于三张纸片，再吸取1︰10、1︰100稀释液各三个1ml，分别涂布于三张纸片。固体样品，吸取1︰1混悬液三个1mL(1g)分别涂布于三张纸片，再吸取1︰10、1︰100稀释液各三个1ml，分别涂布于三张纸片，而后用手轻轻压平，置36±1℃温箱，培养15小时观察结果。
【检验原理】应用灭菌的滤纸吸收选择性培养基，细菌通过滤纸纤维膨胀而被固定并生长繁殖，大肠菌群在发育时伴随产生琥珀酸脱氢酶将纸片上的TTC(红四碳唑)还原成不可逆的Formazane产生红色色素，即大肠菌在纸片培养上呈红菌落，菌落周围产生黄圈是大肠菌分解乳糖产酸使指示剂变色的结果。
大肠菌群测试片操作流程
大肠菌群测试片检测操作流程1.样品的前处理:(建议使用蔬菜瓜果、河水及大肠菌群标准菌作为样品)（1）蔬菜瓜果：称取25g样品切成1cm左右的碎片，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min制成1:10的样品匀液。
（2）河水：以无菌吸管吸取25mL河水置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
（3）大肠杆菌标准菌：挑取平板上大肠杆菌标准菌的单菌落，于盛有5mL LB 液体培养基的试管中，37℃培养过夜，以此作为菌原液。
用1mL无菌吸管或微量移液器吸1mL菌原液于盛有9mL的稀释液的无菌试管中，制成1:10的样品匀液。
2.样本稀释倍数：用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL的稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸管尖端不要触及稀释液面），振荡试管或换用一只无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
按此操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释液需用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L盐酸（HCl）调节pH至7.0~7.2。
（1）蔬菜样品的稀释倍数：取100、10-1两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况而定)。
（2）河水样品的稀释倍数：取10-1、10-2两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况而定)。
（3）大肠菌群标准菌的稀释倍数：取10-7、10-8两个进行接种验证(可根据实际情况而定)。
（4）自来水的稀释倍数：直接取自来水接种进行验证。
3.接种一般食品选1～2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。
将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液垂直加入到测试片中央，用手轻轻将上层盖下，使检测样品液覆盖整个检测圈（应尽量避免产生气泡），静置1 min使培养基凝固，最后用手轻轻将上层盖下。
肠菌群测试片准确度验证操作流程____3M大肠菌群测试片
大肠菌群测试片准确度验证操作流程____3M大肠菌群测试片1.样品的前处理：（建议用蔬菜瓜果、河水及大肠菌群标准菌作为检测样品）（1）蔬菜瓜果：称取25g样品切成1cm左右的碎片，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min制成1:10的样品匀液。
（2）河水：以无菌吸管吸取25mL河水置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
（3）大肠菌群标准菌：挑取平板上大肠菌群标准菌的单菌落，于盛有5mLLB 液体培养基的试管中，37℃培养过夜，以此作为菌原液。
用1mL无菌吸管或微量移液器吸1mL菌原液于盛有9mL的稀释液的无菌试管中，制成1:10的样品匀液。
2.样本稀释倍数：用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL的稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸管尖端不要触及稀释液面），振荡试管或换用一只无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
按此操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释液必要时用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L盐酸（HCl）调节pH至7.0~7.2。
（1）蔬菜样品的稀释倍数：取100、10-1两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。
（2）河水样品的稀释倍数：取10-1、10-2两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。
（3）大肠菌群标准菌原液的稀释倍数：取10-7、10-8两个进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。
（4）自来水的稀释倍数：直接取自来水接种进行验证。
3.接种一般食品选1～2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。
将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品垂直滴加到纸片中央，轻轻晃荡纸片，使检测样品液覆盖整个检测圈，然后再将上层膜缓慢盖下（应尽量避免产生气泡），静置1 min使培养基凝固，最后用手轻轻将上层盖下。
最新3m测试片操作手册资料
细菌总数测试片该手册能指导你熟练掌握3M TM Petrifilm Aerobie Count Plants的使用，你可与3M微生物产品代理接洽会得到更多的信息。
[贮藏]1、未开封时，冷藏于≤8℃（≤46℉），并在保存期内用完，高温度时，凝固水可以排除，包装物最好于室温启开。
2、已开封的，将封口以胶带封紧。
3、保存再封的袋于≤25℃（≤77℉）和温度<50％，不要冷藏已开启的包装袋，并于一个月内使用完。
[样品制备]4、制备1：10和更大稀释的食物样品稀释液，0称取或吸取食物样品，置入适宜的无菌容器内，如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag 或者其他灭菌容器内.5、加入适量的无菌稀释液,包括Buffered peptonephopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4调PH7.2) 、0.1%的蛋白胶水(ISO方法6887) 、缓冲蛋白胶水(ISO方法6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheenbroth或蒸馏水.6、搅拌或均质样品。
[接种]7、将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。
8、使用吸管将1mL样液垂直滴加在测试片的中央处。
9、允许使用上层膜直接落下，切勿向下滚动上层膜。
10、使用压板隆起面底朝下，放置在上层膜中央处。
11、轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。
12、拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。
[培养][解释]13、测试片的透明面朝上，可堆叠至20片，对有一定湿度养箱能保持最少份损失是需要的。
14、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数，并可参考判读卡计算菌落数。
15、可以分离菌落作进一步鉴定，即掀起上层膜，由培养胶上判读卡Aerobic bacteria count=152测试片中含有一种红色指示染剂可使菌落着色,计算所有红色菌落(不论其大小和颜色深浅均计算之).Count=0在petrifilm AC测试片上,很容易解释,图2测试片上没有任何菌落生长.Count=16图3示有不多的菌落.Count=143Petrifilm AC测试片菌落数适宜计数范围是25-250,见图4Count=560测试片面积约为20cm2,当菌落数超过250个,如图5所示,为了估计菌落数,可选择其中一个或数个有代表性菌落的小方格(1cm2),计算平均菌落数,再乘以20可得到整个测试片上的菌落数.Count=tntc(estimated count=103)图6所示petrifilm AC测试片上菌落太多而无法计数(tntc)count=tntc(Estimated count=105)有很多高数量菌落,使整个生长区变粉色,如图7所示,你仅可在生长区边缘现观察到单个菌落,应计录为菌落太多无法计数(TNTC)count=tntc(Estimated count=103)有时菌落分布出现不均衡,如图8所示,这也记录为TNTC.Count=tntc(Estimated count=107)在图9中petrifilm AC测试片上的菌落,最先粗略一看是可计数的,然而,你密切注意到生长区边缘,能看到高密度的菌落,应记录为TNTC Estimated count=160很少数菌种会液化petrifilm AC测试片上的培养基,如图10所示.若有这种现象发生,可选择没有液化区的几个有代表性菌落的小方格(1cm2),计算平均菌落数.不要计数液化区内的红点.Count=83因为在petrifilm AC测试片上菌落是红色的,你会和不透明的不规则形状的事物颗粒区分开,见圆圈1和2.。
大肠菌群测试片检测效果验证
大肠菌群测试片检测效果验证一、试验目的1. 测定大肠菌群测试片的准确度；2. 测定大肠菌群测试片的批间差异；3. 测定大肠菌群测试片的假阳性率。
二、试验材料1. 材料蔬菜、鸡肉、大肠埃希氏菌ATCC 259222. 培养基及试剂VRBA 培养基、BHI 肉汤、8.5%生理盐水、1M HCL 和NaOH 等。
3. 耗材3M 大肠菌群测试片、大肠菌群测试片、平板、移液管等。
三、试验流程1、将各样本按照如下稀释度进行梯度稀释：①蔬菜测定：以8.5%生理盐水将蔬菜样本稀释至10-1和10-2。
三种测定方法计数（国标、3M、）。
②大肠埃希氏杆菌（提前培养24h）：以8.5%生理盐水将菌体稀释至10-7和10-8。
三种测定方法计数（国标、3M、）。
③鸡肉样本的测定：以8.5%生理盐水将蔬菜样本稀释至10-2和10-3。
三种测定方法计数（国标、3M、）。
2、样本不同浓度添加的自验证④以②中稀释浓度10-5做阳性菌液标准品，添加0.5ml菌液标准品于4.5ml的10-1的蔬菜样本稀释液中。
再将所得样本添加稀释至10-1、10-2和10-3（相当于菌液稀释浓度为10-7、10-8和10-9），三种测定方法计数（国标、3M、）。
⑤大肠埃希氏杆菌（提前培养24h）：以8.5%生理盐水将菌体稀释至10-7和10-8。
三种测定方法计数（国标、3M、）。
以稀释浓度10-5做阳性菌液标准品，添加0.25ml于4.75ml生理盐水中，在继续稀释至浓度为0.5×10-7和0.5×10-8。
三种测定方法计数（国标、3M、）。
3、调节样液pH 至7.0~7.2，取1ml 样液接种到VRBA 培养基和测试片，按照如下温度和培养时间培养：①国标法：36℃，18~24h；②3M 测试片：36℃，18~24h；③测试片：36℃，18~24h。
4、结果判读按照测试片说明书和国标方法进行计数，记录计数结果。
四、试验结果1、大肠菌群测试片准确度的测定五、验证效果评价1、大肠菌群测试片检测标准菌，准确度均>80%，产品计数验证合格。
Petrilfilm
50
判读
3M PetrifilmTM 测试片
培养24h 2h后应立即计数，可目测、用标准菌落计数器、 显微镜、或 PetrifilmTM自动判读仪来计数。红色有气泡的菌落 确认为大肠菌群数。培养圆形面积边缘上及边缘以外的菌落不 作计数。当培养区域出现大量气泡，大量不明显小菌落或培养 区呈暗红色三种情况，表明大肠菌群的浓度较高，需要进一步 稀释样品来获得准确的读数。
• 计数规则按平板菌落计数法进行
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3M Petrifilm™自动判读仪
3M PetrifilmTM 测试片
4 秒判读一张测试片 结果以EXCEL表格保存 数据安全性高 能保存测试片照片
32
3M PetrifilmTM 测试片
33
3M PetrifilmTM 测试片
34
乳酸菌
3M PetrifilmTM 测filmTM 测试片
计数所有红点
18
菌落判读
3M PetrifilmTM 测试片
19
浅粉红色菌落
判读
菌落密度很高时，整个测试片 会变成红色或粉红色，将结果 记为“多不可计”
3M PetrifilmTM 测试片
对所有的红色菌落进行计数
圆形培养基的边缘有许多小的 菌落，也记为“多不可计”
接种
培养
计数
8
Petrifilm测试片的储存
3M PetrifilmTM 测试片
– 开封以前 • 冷藏 • 冷冻 • 室温？ （只允许运输中） – 开封以后 • 防潮 • 避光 • 室温（1个月内）
9
Petrifilm测试片的其它特点
确认、定量的平板计数法
3M PetrifilmTM 测试片