10生物碱类药物分析

※理论量1～3倍
盐酸麻黄碱含量测定 ChP(2010)
取本品约 0.15g，精密称定为0.1511g，加冰醋 酸 10ml，加热溶解后，加醋酸汞试液 4ml 与结晶 紫指示液 1滴，用高氯酸滴定液（0.1002mo1/L）滴 定至溶液显翠绿色，消耗高氯酸滴定液 （0.1002mo1/L）8.25ml，并将滴定的结果用空白试 验校正，空白消耗高氯酸滴定液 （0.1002mo1/L） 0.81ml 。每 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当 于 20.17mg 的C10H15NO· HCl。求含量
过滤 sol
OH有机溶剂
用内容量移液管，精密量取本品10ml，以水洗出移液管内的 附着液，置分液漏斗中，加氨试液使成碱性，用氯仿振摇 提取至少4次，第一次25ml，以后每次各15ml，至可待因 提尽为止，每次得到的氯仿液均用同一份水10ml 洗涤， 洗液用氯仿5ml 振摇提取，合并氯仿液，置水浴上蒸干， 精密加硫酸滴定液(0.01mol/L) 25ml，加热溶解，放冷，加 甲基红指示液2 滴，用氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)滴定。 每1ml 的硫酸滴定液(0.01mol/L)相当于84.88mg的 C18H21NO3·H3PO4·3/2H2O。
剂反应，生成难溶于水的物质 常用的生物碱沉淀试剂为： K2HgI4、KBiI4、I2—KI、二氯化汞、磷钼酸、硅钨 酸等。
生物碱+生物碱显色试剂=呈现不同颜色 显色试剂：浓硫酸、浓硝酸、钼硫酸、甲醛硫酸等 磷酸可待因的鉴别： 取本品1mg，置白瓷板上，加含亚硒酸2.5mg的硫酸 0.5ml，立即显绿色，渐变蓝色。
二、利用药物和杂质在化学性质上的差异
1、盐酸吗啡中阿扑吗啡的检查
本品 加水溶解
加NaHCO3+碘试液
加乙醚振摇
乙醚层不得显红色 水层不得显绿色
2、磷酸可待因中吗啡的检查
原理：吗啡与亚硝酸钠反应产物在氨碱性条件下显 黄棕色
方法：取本品0.1g，加盐酸溶液使溶解成5ml，加亚硝酸钠 试液2ml，放置15分钟，加氨试液3ml如显色，与吗啡标准 液5.0ml，用同一方法制成的对照液比较，不得更深。
测试方法：
精密量取供试品溶液与对照品溶液各2ml，分别置 预先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲 酚绿溶液2.0ml，振摇提取2 分钟后，静置使分层， 分取澄清的三氯甲烷液，照紫外-可见分光光度法 （附录ⅣA），在420nm的波长处分别测定吸光度， 计算，并将结果与1.027 相乘，即得供试量中含有 (C17H23NO3)2·H2SO4·H2O的重量。
（三）熔点测定法
例：磷酸可待因（10版药典） 加入20％NaOH溶液至白色沉淀出现，用玻璃
棒摩擦器壁使沉淀完全，滤过；沉淀用水洗净， 在105℃干燥1小时 ，依法测定，熔点为154℃158℃。
（四）紫外吸收光谱法 （五）红外吸收光谱法 （六）薄层色谱法
二、特征鉴别试验**
OH NHCH3 CH3
第十章 生物碱类药物的分析
生物碱
一类存在于生物体内的含氮有机化合 物，绝大部分存在于植物体内，少数 存在于动物体内。
第一节 结构与性质
一、苯烃胺类
本类药物的结构特征为N在侧链上，为脂肪胺。性质：1.碱性较强，与酸易成盐：盐酸麻黄碱、盐 酸伪麻黄碱 2.旋光性：盐酸麻黄碱，左旋；盐酸伪麻黄碱，右旋 3.紫外吸收：芳环 4.氨基醇结构：双缩脲反应
BH+·ClO4- + HA
(二)测定方法 • 取供试品，加冰醋酸10-30ml溶解。 • 供试品若为氢卤酸盐，应再加5%醋酸汞的冰醋酸
溶液3-5ml • 加指示剂，用高氯酸滴定液滴定
(三)注意事项 • 除水：加入酸酐，吸收冰醋酸及高氯酸中的水分 • 温度：滴定液浓度受温度影响 • 滴定终点：电位法或指示剂法
取供试品溶于水或稀矿酸中，加入适当的碱性试剂使生物 碱游离，再用合适的有机溶剂分次振摇提取，合并提取液 ，用水洗涤除去混存的碱性试剂和水溶性杂质，再用无水 硫酸钠或植物胶脱水，滤过，即得游离生物碱的有机溶剂 提取液
游离生物碱或 生物碱盐类
H2O 或 稀酸
sol(BH+) 水层
中和法测定
有机层（B）
3.有机溶剂的选择
要求：对离子对的提取率高；不能或极少与水互 溶。 常用三氯甲烷、二氯甲烷等。
4.水分的存在
完全无水
5.有色杂质的干扰和排除
为了防止有色杂质的干扰。可对酸性染料进行处 理：用有机溶剂提取，除去有色杂质。
四、置换酸碱滴定法 五、紫外分光光度法
N
在此生物碱的微酸水溶液中，加微过量溴水或者
氯水，再加氨溶液，应呈翠绿色。
硫酸奎宁 溴水或者氯水 氨试液 翠绿色
（4）紫脲酸铵反应
黄嘌呤类生物碱
咖啡因 茶碱
+
HCl
+
KClO3
蒸干 氨气
紫色KOH 紫色消失
吲哚类生物碱的特征反应 与香草醛缩合：利血平+香草醛=玫瑰红色 与对二甲氨基苯甲醛缩合： 取利血平约0.5mg，加对二甲氨基苯甲醛5mg，冰醋 酸0.2ml与硫酸0.2ml，混匀，即显绿色，再加冰 醋酸1ml，转变为红色。
H OH CH3 CH3
H NH
.HCL
H OH
NH
ห้องสมุดไป่ตู้
H3C H
CH3
.HCL
盐酸麻黄碱
盐酸伪麻黄碱
二、托烷类
性质：1.水解性：水解产生莨菪酸和莨菪碱 2.碱性较强，与酸易成盐：硫酸阿托品、氢溴酸山莨菪碱 3.旋光性，氢溴酸山莨菪碱为左旋体，阿托品为外消旋体
氢溴酸山莨菪碱
硫酸阿托品
三 、 喹啉类
性质： 1.碱性 组成：喹啉环+喹核碱 喹核碱碱性较强，与硫酸成盐 2.旋光性 奎宁左旋体，奎尼丁右旋体
2. 硫酸盐的测定
生物碱的硫酸盐，在冰醋酸介质中只能被滴定至 生物碱的硫酸氢盐。
(BH+)2·SO42-+HClO4
BH+·ClO-4 + BH+·HSO4-
（1）硫酸阿托品 取硫酸阿托品约0.5g，精密称定，加冰醋酸
与酸酐各10ml溶解后，加结晶紫指示液1-2滴， 用高氯酸滴定液滴定，至溶液显纯蓝色。 HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶1
（2）硫酸奎宁
取硫酸奎宁约0.2g，精密称定，加冰醋酸10ml溶 解后，加醋酐5ml与结晶紫指示液1-2滴，用高氯酸滴定 液滴定至溶液显蓝绿色。
HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶3
（3）硫酸奎宁片
取硫酸奎宁片10片，除去糖衣后，精密称定，研 细，精密称取适量，置分液漏斗中，加氯化钠0.5g与 0.1mol/L氢氧化钠溶液10ml，混匀，加氯仿50ml，振摇 10分钟，静止，分取三氯甲烷液，用干燥滤纸过滤，弃 去初滤液，精密量取续滤液25ml，加酸酐5ml与二甲基 黄指示液2滴，用高氯酸滴定液滴定至终点。
=1.027
（三）影响测定结果的因素
※关键：酸性染料与有机碱能否定量的形成离子对， 并完全被有机溶剂提取。** 1.水相最佳PH值的选择： 使生物碱均形成阳离子，且酸性染料电离足够阴 离子。
2.酸性染料
种类的要求：与生物碱定量结合；生成的离子对 在有机相中溶解度较大，而染料自身在有机相中 不溶或很少溶解；生成的离子对有较高吸光度。 常用：溴麝香草酚蓝、甲基橙、溴甲酚绿等
(四)适用范围
Kb ＜10 -8 pKb8-10时，宜选冰醋酸作为溶剂； pKb为10-12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合液作 为溶剂； pKb 为12以上时，选用醋酐作为溶剂。
1. 氢卤酸盐的测定
汞污染
一般均预先在溶液中加入Hg(Ac)2 的冰醋酸溶液， 以消除氢卤酸对滴定的干扰。
2BH X Hg(Ac)2 2BH Ac HgX2
(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O标示量%=
Ax/AR × CR × 50 × 1.027 ×平均片重
W×标示量
×100%
1.027：质量换算因数，指1g无水硫酸阿托品相当于 硫酸阿托品的量。由下式求得：
(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O的分子量 (C17H23NO3)2·H2SO4的分子量
HH
（1）双缩脲反应 芳环侧链氨基醇结构的特征反应 盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱 蓝紫色
（2）Vitali反应
托烷类生物碱的特征反应 莨菪酸结构 硫酸阿托品，氢溴酸东莨菪碱
硫酸阿托品
加发烟硝酸5滴 放冷 水浴蒸干
加乙醇2－3滴润湿 加固体KOH一粒
显深紫色
（3）绿奎宁反应
MeO
C6位含氧喹啉类生物碱
三、色谱法
硫酸奎宁中其它金鸡纳碱的检查（p147自学） 检查方法：供试品溶液自身稀释对照法 有关物质的检查 方法：HPLC
非水溶液滴定法 提取酸碱滴定法 酸性染料比色法 置换酸碱滴定法 紫外分光光度法
(一)原理 • 指示剂或电位法确定终点 • 置换反应：强酸置换弱酸
BH+·A- + HClO4
1、甲醛-硫酸反应 Marquis反应
含酚羟基的异喹啉生物碱的特征反应：盐酸吗啡
盐酸吗啡 + 甲醛硫酸
紫堇色
2、还原反应 盐酸吗啡+稀铁氰化钾=伪吗啡+亚铁氰化钾 亚铁氰化钾+三氯化铁=亚铁氰化铁，显蓝色
第三节 特殊杂质检查
一、利用药物和杂质在物理性质上的差异
硫酸奎宁中“氯仿乙醇中不溶物”的检查
（一）基本原理
在适当的介质中，
B+H+
HIn
BH+
+
H++In-
BH+ .In-
（水相）
BH+ .In-
（有机相）
例：硫酸阿托品片（05版药典）
➢ 供试品溶液的制备：取本品20片，精密称定，研 细，精密称取适量（约相当于硫酸阿托品2.5mg ）， 置50ml量瓶中，加水振摇使硫酸阿托品溶解并稀释 至刻度，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。 ➢ 对照品溶液的制备：另取硫酸阿托品对照品约 25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加水溶解并稀 释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中， 加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
较弱，不能成盐。
2水解性：利血平含有酯键，弱碱或受热条件下易
水解
3还原性和荧光性：利血平在光照和氧气存在下极
易被氧化，氧化产物为黄色，并带有黄绿色荧光，
进一步氧化，显蓝色荧光
1 2
利血平
六、黄嘌呤类
咖啡因
性质：
几乎不显碱性
茶碱显酸性，可溶于碱性
水溶液
茶碱
第二节 鉴别试验
一、一般鉴别试验 （一）沉淀反应： ➢ 生物碱类药物在酸性水溶液中，可与生物碱沉淀
（三）注意事项
1. 碱化试剂 最常用氨试液**
优点：使大部分生物碱游离，不会和生物碱发生 反应，不易乳化，易挥发，易除去，无干扰。
2. 提取溶剂
（1）提取溶剂选择的原则 对生物碱溶解度大，而对其他共存物溶解度
尽可能小；与生物碱及碱化试剂不起任何反应。 （2）常用的提取溶剂 最常用氯仿**
3.滴定指示剂
HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶4
3. 硝酸盐的测定
因HNO3具有氧化性，可使指示剂变色，一般电位 法指示终点。
4. 磷酸盐及其有机酸盐的测定
无影响，直接测定。如磷酸可待因。
二、提取酸碱滴定法
（一）原理
游离生物碱不溶于水，易溶于有机溶剂 依据性质
生物碱盐类可溶解于水，不溶于有机溶剂 适用于碱性比较强的的药物分析。(pKb=6-9)
利用溶解行为的差异
硫酸阿托品中“莨菪 碱”的检查*
利用旋光度的差异
利血平中“氧化产物” 的检查
利用对光选择性吸收的差异
二、利用药物和杂质在化学性质上的差异
（一）酸碱性的差异 硫酸阿托品中其他生物碱的检查
原理：其他生物碱的碱性比阿托品弱 方法：取本品0.25g，加盐酸溶液1ml溶解，用水稀
释成15ml，分取5ml，加氨试液2ml，不得立即发 生浑浊。
要求：变色范围在酸性区域的指示剂；被滴定生
物碱的化学计量点，应在选用的指示剂变色范围内。
药品
阿托品 罂粟碱
化学计量点 的PH值（PT 值）
5.4
3.60
滴定突越的 PH值
3.8-7.2 3.8-4.6
指示剂
甲基红 溴酚蓝
注：甲基红：4.2-6.3，溴酚蓝：3.0-4.6
三、酸性染料比色法
生物碱与某些酸性染料，在一定PH条件下可定量 结合显色，然后用比色法测定含量。 特点：灵敏度高、方便，并且具有一定专属性和 准确性。适用于含量较低的样品测定。*
硫酸奎宁
盐酸吗啡
四 异喹啉类
性质1.吗啡结构：酚羟基显酸性，叔胺基团 显碱性 2.吗啡溶解性：既可溶于氢氧化钠溶液又可 溶于盐酸溶液 3.可待因：无酚羟基，不能溶于氢氧化钠溶 液
磷酸可待因
2
硝酸士的宁
五、吲哚类
性质：1碱性：均含有两个碱性氮原子，士的宁N1
1
碱性较强，与硝酸成盐；利血平N1空间位阻，碱性