培养基母液配制Word版

配制2升MS+琼脂0.6%+蔗糖3%的固体培养基，阐述母液配制，培养基配制的全过程（1）母液配制：1确定制备的培养基为MS+琼脂0.6%+蔗糖3%为大量元素培养基，应注意溶解和添加顺序，防止沉淀。

2确定各母液的浓缩倍数，大量母液一般为浓缩10倍有机母液浓缩100倍，即所需配制的大量母液为200ml 微量元素20ml，铁盐20ml，有机元素20ml。

3根据公式：药品称取量（mg）=配方用量x浓缩倍数x母液体积计算出各药品的用量，即琼脂12g、蔗糖60g4用普通天平（1/100）称量药品，称号后的药品要分别放置。

5将药品分别放入烧杯中，分别溶解，经充分溶解后再混匀。

6将混合后的溶液移入容量瓶中，进行定容。

7混合均匀后，将母液转入试剂瓶。

8在试剂瓶上贴上标签，注明母液名称，浓缩和配制日期。

9放入冰箱中低温（2~4度）保存。

（2）培养基的配制：1根据配方计算所需的各母液，琼脂及蔗糖的量分别为大量：200ml 微量20ml 铁盐20ml 有机20ml 琼脂12g 蔗糖60g。

2在容器内装相当于1/3左右的纯水，加入称好的琼脂粉，并将其加热溶解再次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液，最后加入称量的蔗糖并搅拌均匀。

3加水定容至2L，再搅拌均匀。

4调整培养基的pH5将配制好的培养基尽快分装。

6将分装后的培养基进行封口7用高压灭菌锅进行灭菌。

现在需要你配制2升MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+琼脂0.6%+蔗糖3%的固体培养基，已知大量元素母液10倍，微量元素母液100倍，铁盐50倍，有机物母液50倍，6-BA母液1mg/ml，NAA母液0.1mg/ml，请你阐述培养基的配制及灭菌的全部过程。

1根据配方计算所需的各母液，琼脂及蔗糖的量分别：为大量元素母液200ml，微量元素20ml，有机物40ml，6-BA4ml，NAA2ml，琼脂12g，60g.2在容器内装相当于1/3左右的纯水，在依次加入称好的琼脂粉，并将其加热溶解再次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液，6-BA，NAA，蔗糖。

MS培养基母液配方1、大量元素母液（10倍，1 L）NH4NO316.5 g KH2PO4 1.7 g（单独溶解后混匀）KNO319 g CaCl2·2H2O 4.4 g（单独溶解后混匀）MgSO4·7H2O 3.7 g（单独溶解后混匀）2、微量元素母液（200倍，1 L）KI 0.166 g Na2MoO4·2H2O 0.05 gH3BO3 1.24 g CuSO4·5H2O 0.005 gMnSO4·4H2O 4.46 g CoCl2·6H2O 0.005 gZnSO4·7H2O 1.72 g3、铁盐母液（200倍，500 mL；定容后调pH至5.5，加热至90℃左右螯合15~30 min）EDTA二钠（Na2·EDTA·7H2O） 3.73 gFeSO4·7H2O 2.78 g4、有机母液①（200倍，500 mL）盐酸硫胺素（VB1）0.01 g烟酸0.05 g盐酸吡哆醇（VB6）0.05 g5、有机母液②（200倍，500 mL）肌醇10.0 g6、有机母液③（200倍，500 mL）甘氨酸0.2 g7、植物激素1)0.1mg/mL 的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250mL。

2)0.1mg/mL NAA：取25mg的NAA可溶于热水中或用少量95%乙醇或少量1N的NaOH溶解后，再加水定容至250mL。

3)2,4-D：2,4-二氯苯氧乙酸，相对分子量为221.0，用乙醇做助溶剂，cas号为94-75-7，分子式为，C8H6Cl2O30.2mg/mL 的2,4-D溶液：40mg 2,4-D，用少量95%乙醇溶解后，再用蒸馏水定容至200ml。

培养基母液的配制植物在自然状态下生长时，具有完整的营养体，是属于自养型的，很多营养物质可以自制，对外界营养条件的要求比较简单,而在离体条件下生长的植物器官、组织和整体植物不同，属于异养型,要求的营养条件十分复杂,因此在人工合成养基的组成和制备上必须全面考虑，满足供应。

一、实验目的配制培养基母液是植物组织培养的基本技术。

当需要连续和大量配制培养基时,如果每次都称量药品、溶解并定容，工作将十分繁琐，因此需要将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成适当的浓缩液。

要求拿握植物组织培养培养基母液的配制方法。

二、实验材料仪器冰箱、电子天平(0.0001g)容量瓶: 1000 ml, 500ml、250 ml、100 ml、25 ml广口储液瓶: 500 ml、250ml、50 ml、25 ml烧杯: 1000ml、500ml 、250m、100ml 、50 ml.数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺、标签纸、胶水、记号笔药品50%酒精、95%酒精、1N盐酸(1N盐酸(HC1)的配制:取浓盐酸825ml,加入蒸馏水1000ml,即为IN的HCI)、1 N Na0H(1N氢氧化钠(或氢氧化钾)的配制:称40 gNa0H (或氢氧化钾57.1g)加入蒸馏水100ml ,即为1N的Na0H( IN的K0H)几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品、蒸馏水三、实验步骤按照培养基配方，把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类，每一类中各种药品分别称量。

如Ms培养基各种母液的配制步骤如下:1、大量元素母液:包括用量较大的几种化合物，按表中排列顺序，将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解,然后按照顺序混合在一-起。

如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容。

最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。

在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃棒以减少误差。

定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养基需吸取该母液100 m或502、微量元素母液:因用量少,为了称量精确和方便,常配成100倍或100倍的母液,即每种药品扩大100倍或者1000倍。

word格式-可编辑-感谢下载支持、MS培养基母液的配制注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2・2巧0单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称(或编号)，浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2・2H2O配制同上置于另一小口瓶中。

2．微量元素母液的配制各种生长调节剂）word 格式-可编辑-感谢下载支持按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO 4・7H 2O 和Na 2-EDTA.2H 2O ）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml 容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。

3.铁盐配制将FeSO 4・7H 2O 和Na Q -EDTAZ^O 分别溶于450ml 蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH 至5.5加水定容至1000ml ，置于小口瓶中，贴上标签。

4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml 容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。

5.母液最好在2〜4°C 的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。

1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。

2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。

．生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。

不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA ），吲哚乙酸（IAA ），赤霉素（GA 3），2,4-D 等生长素和玉米素（ZT ）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。

目录实验一培养基母液的制备 (1)实验二培养基的配制与灭菌 (6)实验三无菌操作及种子无菌播种 (9)实验四激素对器官分化及愈伤组织诱导的影响 (13)实验五茎尖培养与脱毒 (16)实验六有丝分裂制片技术和显微观察 (18)实验七植物多倍体细胞的诱发与鉴定 (22)实验八植物组织总DNA的提取与测定 (24)实验九毛状根培养 (27)附录 (32)实验一培养基母液的制备一、实验目的学习和掌握培养基母液的配制方法和注意事项。

二、实验原理培养基的主要成分包括无机营养物质、碳源、有机物质、植物生长物质等，由于每种培养基往往含有一二十种化合物，配制起来不仅繁琐，而且还很难达到准确和精确，尤其是生长调节物质和微量元素用量较少，难于准确称量，稍有偏差，就会影响试验结果及试验的重复性。

为解决这一问题，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。

当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。

三、实验药品和试剂NH4NO3、KNO3、MgSO4·7H2O、（NH4）2SO4、NaH2PO4·H2O、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、Na2-EDTA·2H2O、FeSO4·7H2O、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(VB6)、盐酸硫胺素(VB1)、甘氨酸、蔗糖、琼脂四、实验仪器及用具电子天平（感量为0.0001g）、扭力天平（感量为0.01g）、烧杯（1000ml、500ml、100ml、50ml）、量筒（500ml、25ml）、容量瓶（1000ml、500ml、100ml）、试剂瓶（1000ml、500ml、100ml）、药勺、玻棒、电炉、石棉网。

培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质，配制成较浓的母液（母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍），贮存在冰箱中备用，以后配制培养基时根据用量量取。

由于培养基成分较多，如果每配制一次即进行多次称量（不少成分用量较微），不仅会造成较大的误差，而且会增加工作量，因而配制母液可使培养基配制方便准确。

配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍，倍数不宜过高。

MS培养基母液及培养基配方法参考表2。

大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存，以免长期贮存发生沉淀。

若将全部大量成分配在一起时，为防止在混合时发生沉淀，须在各药品充分溶解后，按表1.2中化合物出现顺序混合，氯化钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后，在1000 ml容量瓶中定容，然后移入磨口瓶中，贴上标签，置于普通冰箱（4℃）贮存。

微量元素母液配制时，由于培养基中微量元素用量甚微，浓度为0.l~0.0001mg/l，所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。

一般将微量元素分别称量溶解，定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中，但也有将KI分别配制，单独贮存在棕色瓶中。

配好后，贴上标签，贮存于4℃冰箱。

培养基中的铁盐母液一般单独配制。

目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。

称取Na2-EDTA 3.73 g，FeSO4 ·2H2O 2.78 g，分别溶解（可加热），然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。

转入细口瓶，贴上标签，4℃冰箱中保存。

氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时，母液浓度通常为原培养基配方的50倍（或100）。

常用氨基酸和维生素为水溶性物质，可用蒸馏水溶解，但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解，然后用重蒸馏水定容。

配制好后，转入细口瓶，贴上标签，-20℃（或4℃）冰箱中保存。

植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要，灵活设计其浓度，一般为 0.01、0.1、0.2、0.5或1 mg/l。

培养基母液与培养基的配置摘要：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。

关键词：培养基母液常用培养基植物激素1.常用培养基种类，培养基母液的各种成分的量以及配置过程1.1常用培养基：MS培养基MS培养基是目前使用最普遍的培养基。

其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。

由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。

MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。

MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。

因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。

和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。

B5培养基与其他培养基相比，它的主要特点是含有较低的铵，而铵这一营养成分可能对有些培养基有抑制生长的作用。

当愈伤组织和悬浮培养中对B5培养基与MS培养基进行对比培养试验时，发现有些植物的愈伤组织和细胞培养物在MS培养基上平内的脏物清理干净。

3.3在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成FeS04和Na2-EDTA鳌合不彻底，此时若将其冷藏，FeSO4会结晶析出。

为避免此现象发生，配制铁盐母液时，FeSO4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20 - 30 min)，调pH值至5 .5，室温放置冷却后，再冷藏。

3.4由于维生素母液营养丰富，因此贮藏时极易染菌。

被菌类污染的维生素母液，有效浓度降低，并且易给后期培养造成伤害，不宜再用。

避免此现象发生的方法是:配制母液时用无菌重蒸馏水溶解维生素，并贮存在棕色无菌瓶中，或缩短贮藏时间。

培养基母液的配制（一）激素母液由于多数生长调节物质难溶于水，因此配法各不相同，激素母液可以在2~4℃冰箱中保存。

在配制药品前，应准备好一定容积的小烧杯、玻璃棒，用纯净水冲洗干净方可使用：1、IAA、IBA、GA3、ZT可先用少量95%酒精溶解，再加水定容，摇匀后贮于试剂瓶中，贴上标签。

2、2,4-D、KT、可用少量10%的Noah溶解，再加水定容。

3、6-BA可用少量1mol/LHCl溶解后，再加水定容。

4、NAA可溶于热水或少量95%酒精中，再加水定容至一定体积。

5、1mg/ml的2.4-D的配制：称取0.1g2,4-D，用少量1mol/LNaOH 溶解，然后定容到100ml容量瓶中。

6、1mg/ml的6BA的配制：称取0.1g6-BA，用少量1mol/LNaOH 溶解，然后定容到100ml容量瓶中。

7、1mg/ml的NAA的配制：称取0.1gNAA，用少量95%酒精助溶，然后定容到100ml容量瓶中。

8、1mol/L的HCl的配制：量取83.3ml盐酸加水稀释定容至1L。

（一般、组培室用量少，配制500ml即可，即：称取盐酸41.65ml 稀释定容至500ml。

配制盐酸时。

需要带口罩、戴手套。

）9、10%的NaOH的配制：称取10gNaOH，加少量纯净水溶解，然后定容到100ml容量瓶中。

10、HgCl2 的配制：称量1g的HgCl2，加热水后进行溶解定容至1L。

二、培养基配制配错培养基造成的危害比组培技术中其他任何失误都大。

因此，配制培养基和称取其他成分必须绝对小心。

为了降低配错培养基的风险，最好准备一张纸，详细地写出配制培养基过程中所需的成分和配置步骤。

每配完一种成分或配完一种母液，划掉相应的记录。

1、一般而言，分化配方的配制：除萱草琼脂为5.5g/L外，其它植物为琼脂5g/L。

白糖为30g/L。

母液粉为4.74g/L。

用自己配制的母液配培养基时，大量母液（1号）50ml/L，微量（2~5号为5 ml/L）。

培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质, 配制成较浓的母液（母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍）, 贮存在冰箱中备用, 以后配制培养基时根据用量量取。

由于培养基成分较多, 如果每配制一次即进行多次称量（不少成分用量较微）, 不仅会造成较大的误差, 而且会增加工作量, 因而配制母液可使培养基配制方便准确。

配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍, 倍数不宜过高。

MS培养基母液及培养基配方法参考表2。

大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存, 以免长期贮存发生沉淀。

若将全部大量成分配在一起时, 为防止在混合时发生沉淀, 须在各药品充分溶解后, 按表中化合物出现顺序混合, 氯化钙最后加入, 以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后, 在1000 ml容量瓶中定容, 然后移入磨口瓶中, 贴上标签, 置于普通冰箱（4℃）贮存。

微量元素母液配制时, 由于培养基中微量元素用量甚微, 浓度为~l, 所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。

一般将微量元素分别称量溶解, 定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中, 但也有将KI分别配制, 单独贮存在棕色瓶中。

配好后, 贴上标签, 贮存于4℃冰箱。

培养基中的铁盐母液一般单独配制。

目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。

称取Na2-EDTA g, FeSO4 ·2H2O g, 分别溶解（可加热）, 然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。

转入细口瓶, 贴上标签, 4℃冰箱中保存。

氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时, 母液浓度通常为原培养基配方的50倍（或100）。

常用氨基酸和维生素为水溶性物质, 可用蒸馏水溶解, 但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解, 然后用重蒸馏水定容。

配制好后, 转入细口瓶, 贴上标签, -20℃（或4℃）冰箱中保存。

植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要, 灵活设计其浓度, 一般为、、、或1 mg/l。

培养基母液的配制方法培养基是用于细胞培养的基础营养物质，它为细胞提供适当的营养和环境条件，以促进细胞的生长和繁殖。

培养基母液是制备培养基的初始液体，下面是一种常见的培养基母液的配制方法。

配制培养基母液的材料和设备：1.高质量的培养基成分：如氨基酸、维生素、无机盐、糖、有机酸等。

2.纯净的水：可以使用去离子水或高纯水。

3.称量器具：称量天平、量筒等。

4.搅拌装置：磁力搅拌器或振荡器等。

5.固液分离装置：滤纸、滤膜或离心管等。

6.灭菌工具：如高压灭菌锅、紫外线灭菌仪等。

具体步骤如下：步骤1：准备工作-清洗和消毒工作台和必要的玻璃器皿，如量筒、烧杯、磁力搅拌器等。

-检查所需材料和设备是否完整，以防止操作过程中的中断。

步骤2：配制培养基1.按照所需培养基配方中各成分的质量比例，用称量天平准确称量各成分。

2.使用量筒或烧杯，加入适量的纯净水。

3.将已称量的培养基成分加入水中。

根据配方要求的顺序，加入各成分并充分搅拌混合。

4.搅拌速度和时间根据配方要求进行调整，使各成分充分溶解并均匀分布。

步骤3：过滤和灭菌1.准备好合适的滤纸或滤膜，并放置在过滤装置中。

可以根据需要使用多次过滤或组合过滤器设备以获得更好的过滤效果。

2.调整过滤装置的设置，使培养基缓慢通过过滤器，以避免气泡的产生。

可以使用真空过滤或重力过滤方法，根据实际情况进行选择。

3.检查过滤结果，确保培养基没有异物或沉淀物。

4.准备好灭菌容器，如离心管或高压灭菌锅。

将过滤后的培养基倒入容器中，并盖好盖子。

5.使用适当的灭菌设备对培养基进行灭菌处理。

可以使用高压灭菌锅、摇床灭菌、紫外线灭菌等方法。

步骤4：保存和使用1.灭菌后的培养基母液应存放在适当的条件下，如低温、阴凉和无光照的环境中，以保持其质量。

2.在使用前，应对培养基进行适当的质量控制，如pH值检测、无菌条件下培养等。

总结：以上是一个常见的培养基母液的配制方法。

在实际操作中还要根据所需培养基的种类和配方进行合理选择和调整。

一.大量元素(10倍液)：称取下列药品分别溶解定容到1升后，加到5升存储瓶中。

KNO3 95gNH4NO3 82.5gKH2PO4 8.5gMgSO4•7H2O 18.5gCaCl2•2H2O 22.0g注意事项：1配置母液前要仔细清洗存储容器2.应按照顺序分别彻底溶解后混合，每加完一种药品，摇动存储瓶使其混合均匀；3.溶解时最好加热，以便充分溶解，避免沉淀的产生；4.夏季要用新制的蒸馏水，并加热，这样可以避免因为水中带菌量过大而产生沉淀，同时可以减缓绿藻的生成；5.沉淀的产生一是由于溶解不充分就混合造成的（浑浊型沉淀），所以配置时一定不要急；二是由于长菌而产生絮状沉淀，所以要用新制的蒸馏水并加热。

二.微量元素母液的配制(100倍)：取少量(200-300ml)温水依次加入下列药品，每加一种药品后搅拌溶解，最后定容到1L：KI 0.083gH3BO3 0.62gZnSO4*7H2O 0.86gNaMoO4*2H2O 0.025gCuSO4*5H2O 0.0025gCoCl2*6H2O 0.0025gMnSO4*4H2O 2.23g (MnSO4*H2O 1.69g)注意：配好后在室温下放置10 h以上再放入冰箱保存，即刻放入冰箱易产生结晶沉淀。

配制过程中产生沉淀的原因有：1. 前一个没彻底溶解就加入了后一个药品；2. 蒸馏水pH 值过高，可加几滴盐酸校正。

三.甘氨酸和肌醇的配制(100倍):甘氨酸: 0.2g溶解定容到一升; 肌醇: 10g溶解定容到一升。

四.铁盐的配制（100倍）:称取EDTA 3.73 g , FeSO4·7H2O 2.78 g , 分别溶解后混合定容到1L,放入棕色细口瓶中,室温放置10 h以上（防止结晶沉淀），然后放入4℃冰箱。

五.维生素B的配制（100倍）：改良MT：VB1（盐酸硫氨素）1g, MS： 10mgVB6 (盐酸吡哆素) 1g , 50mgVB5 (烟酸) 0.5g, 50mg分别称取顺序溶解在温热的蒸馏水中，定容到1升。

MS母液的配制与保存一、目的要求：通过MS培养基母液的配制，掌握配制与保存培养基母液的基本技能。

二、设备用品：1、设备：百分之一天平，万分之一天平,电磁炉，家用冰箱2、用品：称量纸（大小都要），玻璃烧杯250ml,容量瓶500ml和250ml，广口瓶500ml250ml，标签纸，洗瓶，药匙，玻璃棒，搪瓷杯，纯水，95%酒精，纸巾，笔。

三、方法步骤计算方式：称取量＝规定量×浓缩倍数×母液体积1、MS1大量元素母液配制(0.5L）化合物原配方量扩大倍数称取量母液体积NH4NO3 1650mg/L 20倍16.5g0。

5LKNO3 1900mg/L 20倍19g0。

5LMgSO4。

7H2O 370mg/L 20倍3。

7g0。

5LKH2PO4 170mg/L 20倍 1.7g0.5LCaCl2。

2H2O 440mg/L 20倍 4.4g0，5L配制方法:用百分之一天平称取NH4NO316。

5g，KNO319g,MgSO4.7H2O3。

7g，KH2PO41。

7g；将纯水装入搪瓷杯中放到电磁炉上加热，把药品分别放入玻璃烧杯中加热水玻璃棒搅拌至药品完全溶解,用玻璃棒引流的方式将溶解完的药品倒入容量瓶中，用洗瓶清洗3次玻璃烧杯，以免药品残留。

用此方式分别将药品溶解然后引流至容量瓶中，最后将容量瓶定溶至500ml刻度线，待冷却后倒入广口瓶中放置冰箱内保存。

注意：CaCl2.2H2O是放热性药品所以单独配制，称取药品4。

4g放入玻璃烧杯中用冷水将药品溶解，用同样的方法将CaCl2。

2H2O定溶，待冷却后倒入广口瓶中放置冰箱内保存.在MS母液瓶上贴标签，注明母液名称，浓缩倍数，配制日期，配制人以及吸取量。

2、MS2微量元素母液的配制(0.25L）化合物原配方量扩大倍数称取量母液体积H3BO36。

2mg/L200倍0.31g0.25LMnSO4. 4H2O22.3mg/L200倍1。

115g0。

25LZnSO4. 7H2O 8。

实验1、培养基母液的配制一、实验目的1、了解植物组织与细胞培养基的基本类型和组成。

2、掌握植物组织与细胞培养基各种母液的配制方法。

二、实验原理离体植物组织和细胞的生长、分化所需要的营养物质都是由培养基供给。

基本培养基通常包括大量元素、微量元素、有机物以及糖和水，完全培养基是在基本培养基的基础上，附加植物生长调节剂、椰乳、香蕉汁、番茄汁等天然提取物。

迄今为止，基本培养基的配方已有几百种，但较常用的有一二十种，如MS、White、N6、B5等。

实验用的培养基一般是先配成10-100倍的母液，用时再按配方配制培养基。

二、实验用品1、实验器材：冰箱、电炉、电子天平、移液管、量筒、烧杯（1000mL、500mL、50mL）、容量瓶、玻璃棒、试剂瓶（1000mL）、标签纸等。

2、实验试剂：MS培养基配方中的19种试剂，2,4-D，KT，NaOH，HCl，95%乙醇，HgCl2，次氯酸钠，蒸馏水等。

三、实验方法1、大量元素母液的配制按表1-1计算并称取各试剂，用蒸馏水依次溶解，最后定容到1000mL，即为10倍的大量元素母液，倒入试剂瓶，贴好标签，保存于4℃冰箱里。

表1-1 MS培养基大量元素母液试的配制注意1: ①称取量的值（mg）=规定量(mg/L)×扩大倍数×母液体积(L)②每称量一种试剂，都要在备注栏中相应的部分做好标记，比如写上日期和划出“√”。

注意2：①为避免沉淀现象发生，应将Ca 2+、SO42-、Mg 2+和H 2PO 4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合；②CaCl 2·2H 2O 要在最后单独加入，在溶解CaCl 2·2H 2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO 2，以防沉淀。

另外，CaCl 2·2H 2O 放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。

③如遇沉淀，缓慢加入（注意搅拌）1mol/L 的Hcl 将其溶解。

2、微量元素母液的配制按表1-2计算并用分析天平称取各试剂，用蒸馏水依次溶解，最后定容到1000mL ，即为100倍的微量元素母液，倒入试剂瓶，贴好标签，保存于4℃冰箱里。

MS母液配制1 / 1基础母液：1.大量元素2.微量元素3.氯化钙（大量元素）4.铁盐5.肌醇有机质 6.烟酸7.维生素（B6B1）8.甘氨酸配方：分化培养基MS+BA1.0+NAA0.1+蔗糖+琼脂调试PH值（NaoH）5.7-5.8激素类 (配制) 助溶BA 0.2mg/ml 20mg+100ml蒸馏水 Hcl 3、4滴棕色瓶 NAA 0.1mg/ml 10mg+100ml 95%酒精IBA 0.1mg/ml 10mg+100ml 95%酒精IAA 0.1mg/ml 10mg+100ml 95%酒精KT 0.2mg/ml 20mg+100ml Hcl 微热2.4-D 0.1mg/ml 10mg+100ml 95%酒精配制1N NaOH :10克NaOH+250ml蒸馏水配制1N Hcl : 9mlHcl+100ml蒸馏水配制0.1N Hcl : 9mlHcl+1000ml蒸馏水（调节PH值）具体步骤：1、材料采集2、清洗消毒（1）洗涤剂清洗，然后用清水冲洗数次。

（2）次氯酸钙消毒（20或30分钟），清水冲洗，洗衣粉或洗涤剂清洗，无菌纯净水冲洗两遍，滤纸吸干，选取所需材料剪切（要求上短下长），下切口为斜切，便于充分接触培养基。

（3）升汞消毒清水冲洗、洗衣粉或洗涤剂清洗，升汞浓度为0.1%，浸泡7分钟，（木质化程度高的8-10分钟）。

无菌水浸泡冲洗（至少3次），无菌水浸泡时间为30分钟左右。

（4）75%酒精消毒95%酒精取75毫升，加入20毫升蒸馏水，即为75%酒精，75%酒精消毒10秒。

（5）消毒顺序：洗涤剂清洗、75%酒精消毒、升汞消毒（无菌条件下进行）洗涤剂清洗，升汞消毒（无菌条件下进行）洗涤剂清洗，次氯酸钙消毒非洲紫罗兰组培配方分化培养基：MS+BA1.0+NAA0.1生根培养基：1/2MS+IBA0.5（注：本资料素材和资料部分来自网络，仅供参考。

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20X AA major salts Dissolve 59 g KCl, 3 g CaCl2 2H2O, 10 g MgSO4 7H2O and 3 g NaH2PO4 H2O in 900 ml distilled water and make up the volume to1,000 ml (see ref. 32). Store at 4 1C10X AA amino acids (pH-free) Dissolve 8.76 g GIn, 2.66 g Asp, 1.74 g Arg and 75 mg Gly in 900 ml distilled water and make up the volume to 1,000 ml(see ref. 32). Sterilize with a 0.22-mm cellulose acetate filter. Store at 4 1C.100X FeEDTA Dissolve 2.78 g FeSO4 7H2O in 900 ml of hot distilled water and add 3.73 g EDTA, disodium salt. Cool to 25 1C and make up the volume to 1,000 ml. Store at 4 1C.AAM medium (for infection of callus) Add 50 ml of 20 AA major salts,10 ml of 100 x FeEDTA, 10 ml of 100x B5 minor salts, 10 ml of 100 x B5 vitamins, 100 ml of 10 x AA amino acids and 1 ml of 100 mM acetosyringoneto 700 ml distilled water. Dissolve 68.5 g sucrose, 36 g glucose and 0.5 gvitamin assay casamino acids in the mixture and make up the volume to1,000 ml. Adjust pH to 5.2 and sterilize with a 0.22-mm cellulose acetate filter..常用植物培养基母液20х N6 major saltsKNO3 56.6g/L(NH4)2SO4 9.26 g/LKH2PO4 8.00 g/LMgSO4.7H2O 3.7 g/LCaCl2.2H2O 3.32 g/L20хMS major saltsKNO3 38g/LNH4NO3 33 g/LKH2PO4 3.4 g/LMgSO4.7H2O 7.4 g/LCaCl2.2H2O 8.8 g/L20хCC major saltsKNO3 24.24g/LNH4NO3 12.8 g/LKH2PO4 2.72 g/LMgSO4.7H2O 4.94 g/LCaCl2.2H2O 11.76 g/L20хAA major saltsKCl 59 g/LMgSO4.7H2O 10 g/LCaCl2.2H2O 3 g/LNa2H2PO4 3 g/L100хN6 minor saltsMnSO4.4H2O 440 mg/LH3BO3 160 mg/LZnSO4.7H2O 150 mg/LKI 80 mg/L100хB5 minor sal tsMnSO4.4H2O 1320 mg/LH3BO3 300 mg/LZnSO4.7H2O 200 mg/LNa2MoO4.2H2O 25 mg/LCuSO4.5H2O 2.5 mg/LCoCl2.6H2O 2.5 mg/LKI 75 mg/L100хMS minor saltsMnSO4.4H2O 2230 mg/LH3BO3 620 mg/LZnSO4.7H2O 860mg/LNa2MoO4.2H2O 25 mg/LCuSO4.5H2O 2.5 mg/LCoCl2.6H2O 2.5 mg/LKI 83 mg/L100хCC minor saltsMnSO4.4H2O 1115 mg/LH3BO3 310 mg/LZnSO4.7H2O 576 mg/LNa2MoO4.2H2O 24 mg/LCuSO4.5H2O 2.5 mg/LCoSO4.7H2O 2.8 mg/LKI 83 mg/L100хN6 vitaminsthiamine hydrochloride VB1 100mg /L pyridoxine hydrochloride VB6 50mg/L nicotinic acid 50 mg/LGly 200g/L100хB5 vitaminsthiamine hydrochloride VB1 1g/L pyridoxine hydrochloride VB6 100 mg/L nicotinic acid 100 mg/Lmyo-inositol 10 g/L100х modified MS vitaminsthiamine hydrochloride VB1 100mg /LPlant Cell Rep (2005) 23:540–547籼稻转化诱导愈伤培养基L3+2.5 2,4-D+500毫克脯氨酸+500谷氨酰胺+3%的麦芽糖+0.25%胶分化D+500毫克脯氨酸+500谷氨酰胺+800毫克CH+2毫克BA+2毫克KT+0.2毫克NAA+0.2毫克IAA+3%的麦芽糖+0.3%胶Sigma E6760 The theoretical iron content is 15.2%,亚铁离子的工作浓度为0.1mM, E6760的分子量为367.1,含水量为9%,配置100倍的铁盐1000毫升需要E6760 4.03克.。