第二章细菌感染实验诊断

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二章细菌感染实验诊断

二、标本的处理
1.标本保存在4℃环境中，在2h之内送检。脑脊液则要在25 ℃保存，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。对环境敏感的细菌应保温并立即送检。
2.标本中可能含有致病菌，必须注意安全防护。切勿污染环境。对于烈性传染病标本运送时更要由专人运送，严格按规定包装。
3.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送。
二、不染色细菌标本检查
1.主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况。可对某些病原菌作出初步鉴定，如霍乱菌。
2.螺旋体由于不易着色并有形态特征，故多用不染色标本作暗视野显微镜检查。
三、细菌染色标本的检查
细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类。
(一)常用染料
分为碱性和酸性两大类。此外，还有复合染料。 1．碱性染料电离后显色离子带正电荷，
易与带负电荷的被染物结合。由于细菌均带负电荷，易与染料结合而着色。常用的有碱性复红、结晶紫、美蓝等。
2．酸性染料电离后显色离子带负电荷，易与带正电荷的被染物结合。细菌都带有负电荷故不易着色。通常用来染细胞浆，而很少用于细菌的染色。常用的酸性染料有伊红、刚果红等。
第一节临床感染性疾病实验诊断要求
一、诊断的目的 1.以疾病的病原学诊断为目的,只需鉴
定到细菌的种。 2.为提供治疗方案为目的，要进行临
床标本的直接药物敏感试验。
3.以流行病学研究为目的,要鉴定到型。 4.以了解细菌与感染的关系为目的,应
该做细致的鉴定。
二、诊断试验的选择
1.选择有鉴定价值的试验。 2.选择简易、快速、方便的试验，达
第二章细菌感染实验诊断

细菌感染的实验室检查

谢谢您的观看
通过检测患者血清中的抗体以确定患者是否感染某种细菌。
通过病理学方法对感染部位的组织进行观察和诊断。
实验室检查的流程
样本处理
将采集的样本进行处理，如离心、过滤等，以提取样本中的细菌。
药敏试验
对分离鉴定的细菌进行药敏试验，以确定患者对哪种抗生素敏感。
采集样本
根据患者的症状和医生的诊断，采集患者的血液、尿液、粪便、分泌物等样本。
推进实验室检查的标准化和规范化
制定行业标准
组织制定实验室检查相关的国际和国内标准，规范实验室检查的操作流程和质量标准。
培训和教育
加强实验室检查人员的培训和教育，提高他们的专业素养和技术水平。
质量控制
建立实验室检查的质量控制体系，定期对实验室进行检查评估，确保实验室检查数据的准确性和可靠性。
THANKS
04
分子生物学检查
分子生物学检查方法
聚合酶链反应（PCR）
是一种常用的分子生物学检查方法，通过复制目标DNA片段来增加其数量，从而进行快速、灵敏的检测。
基因测序
生物芯片技术
利用芯片上的微小点阵列进行多重检测，可同时检测多种病原菌。
对细菌的基因组进行测序，以识别和鉴定细菌的种类和亚种。
分子生物学检查结果解读
培养与鉴定
将提取的细菌进行培养、分离和鉴定，以确定感染的细菌种类和数量。
结果报告
将实验室检查结果报告给医生，以便医生根据结果制定合适的治疗方案。
02
细菌培养与鉴定
细菌培养方法
01
02
03
常规培养
将样本接种在培养基上，通过培养观察细菌的生长情况、形态、染色等特征，以确定细菌种类。

(完整版)感染性疾病实验室诊断

1.尽快送检
对环境敏感的细菌应保温立即送检,其他所有采集后最好在2小时内送检,不能及时送检,应注意保存
2. 必须注意安全防护,切勿污染环境 3.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接
用抽取标本的注射器运送
二、检验方法
查病原体：形态与结构检查分离培养和鉴定
检测病原体成分（抗原和核酸）检测患者血清中特异性抗体代谢产物（生化试验）毒素：外毒素、内毒素
SARS冠状病毒新甲型H1N1流感病毒高致病性禽流感病毒
(二）按疾病特征分类 1. 病原体被清除 2. 隐性感染(covert infection)，亦称亚临床感染
一般占人群的90％或以上 3. 显性感染(overt infection)又称为临床感染
发病快慢和病程长短：急性感染和慢性感染感染部位及性质：局部感染和全身感染全身感染： ①菌血症 ②败血症 ③毒血症 ④脓毒血症
革兰阳性
革兰阴性
抗酸染色
培养在McCoy细胞的沙眼衣原体吉姆萨染色的McCoy细胞，含大衣原体包涵体，使部分细胞核不清楚。（吉姆萨染色,放大
1000倍）
狂犬病毒可于细胞浆中可形成嗜酸性包涵体
新生隐球菌墨汁负染
假丝酵母菌（白色念珠菌）
革兰染色
2.不染色标本
1) 检查生活状态下细菌的动力及运动状况 2）螺旋体由于不易着色并有形态特征
对某些病原菌作出初步鉴定，如霍乱弧菌
常用方法压片法(压滴法)或悬滴法暗视野显微镜或相差显微镜检查
体癣皮屑可见关节孢子
3. 直接电镜检测EM 免疫电镜技术IEM
HAV形态电镜图粪便标本负染 X200000
HAV particles found in fecal extracts by immunoelectron microscopy

细菌感染的实验室诊断（一）

细菌感染的实验室诊断（一）实验室诊断主要包括以检测致病菌及其抗原、产物或核酸为目的的细菌学诊断，以及检测患者血清中特异性抗体为目的的血清学诊断。

一、细菌学诊断（一）标本采集细菌感染性疾病的实验室检查结果主要取决于临床标本的质量、采集时间及方法、实验人员的技术熟练程度及经验。

临床医生应该知道何时和怎样采取标本，需作哪些实验室检查，以及如何解释结果。

为提高致病菌检出率，避免诊断错误或漏检，标本采集与送检过程应遵循下列原则：1．严格执行无菌操作，尽量避免患者正常菌群或外界环境中杂菌污染标本。

采取局部病变标本处，不可用消毒剂，必要时宜以无菌生理盐水冲洗，拭干后再取材。

从呼吸道、消化道、泌尿生殖道、伤口或体表分离可疑致病菌时，应与其特定部位的正常菌群及临床表现一并加以考虑，因为目前内源性感染呈不断上升趋势。

2．根据致病菌在患者不同病期的体内分布和排出部位，采集不同的标本（表7-1）。

例如流行性脑膜炎患者取脑脊液、血液或出血瘀斑；伤寒患者在病程第1～2周内取血液，第2～3周时可取粪便。

尽可能采集病变明显部位的材料。

3．应在疾病早期和使用抗菌药物之前采集标本，否则可能需停药数天后采集，或者在分离培养时加入药物拮抗剂。

4．标本必须新鲜，采集后尽快送检，尤其是检测抵抗力弱的细菌。

若不能立即送检，应将标本置于特殊的转运培养基中，低温保存，以减缓致病菌的死亡，阻止杂菌的过度生长。

送检过程中，除不耐寒冷的脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等要保温外，多数菌可冷藏送运。

（二）致病菌的检验程序主要有直接涂片染色镜检、分离培养、生化试验、血清学试验等，有的尚需作动物试验等。

细菌学快速诊断新技术主要有核酸杂交（nucleic acid hybridization）和聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）等。

敏感性、特异性和检测效率是影响临床诊断程序选择的重要因素。

1．直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检法可在显微镜下直接观察致病菌的形态、大小、排列方式和染色特点。

【宠物微生物课件】细菌感染的实验室诊断方法

宠物微生物
细菌感染的实验室诊断方法
细菌感染的实验室诊断方法
一、检测细菌二、检测细菌的抗原或抗体三、检测细菌遗传物质
一、检测细菌
直接涂片显微镜检查
分离培养动物接种试验Fra bibliotek生化试验
01
02
03
04
一、检测细菌
1、直接涂片显微镜检查
在细菌病的实验室诊断中，形态检查的应用有两个时机，一是将病料涂片染色镜检；二是在细菌的分离培养之后，将细菌培养物涂片染色，观察细菌的形态、排列及染色特性，这是鉴定分离菌的基本方法之一，也是进行生化鉴定、血清学鉴定的前提。
一、检测细菌
2、分离培养
细菌的分离培养及移植是细菌学检验中最重要的环节，细菌病的诊断与防治以及对未知菌的研究，常需要进行细菌的分离培养。分离纯化的病原菌，可为生化试验和血清学试验提供纯的细菌，也可用于细菌的计数、扩增和动力观察等。
一、检测细菌
3 、动物接种试验
实验动物接种可用于病原体的分离与鉴定，此外，也可用于确定病原体的致病力，恢复或增强细菌的毒力，测定某些细菌的外毒素，制备疫苗或诊断用抗原，制备免疫血清，检验药物的治疗效果及毒性等。
一、检测细菌
4、生化试验
细菌生化试验的主要用途是鉴别细菌。对革兰氏染色反应、菌体形态及菌落特征相同或相似细菌的鉴别具有重要意义。
细菌感染的实验室诊断方法
一、检测细菌二、检测细菌的抗原或抗体三、检测细菌遗传物质
二、检测细菌的抗原或抗体
1、检测抗原
利用已知的特异性抗体测定有无相应的细菌抗原可以确
感谢各位聆听
细菌感染的实验室诊断方法
定菌种或菌型。
细菌感染的实验室诊断方法

病原生物与免疫学基础》教案

《病原生物与免疫学基础》教案第一章：绪论1.1 课程介绍了解病原生物与免疫学的基本概念理解病原生物与免疫学在医学和公共卫生的重要性1.2 病原生物的定义和特点定义病原生物描述病原生物的基本特点1.3 免疫学的基本概念定义免疫学解释免疫系统的组成和功能1.4 病原生物与免疫学的相互关系阐述病原生物与免疫学之间的相互关系第二章：细菌2.1 细菌的基本结构和特点描述细菌的基本结构解释细菌的特点和分类2.2 细菌的感染机制解释细菌如何进入宿主体内阐述细菌的感染过程和机制2.3 细菌的免疫学检测方法介绍细菌的免疫学检测方法解释细菌抗体的检测和鉴定方法2.4 细菌感染的预防和治疗探讨细菌感染的预防和治疗策略第三章：病毒3.1 病毒的基本结构和特点描述病毒的基本结构解释病毒的特点和分类3.2 病毒的感染机制解释病毒如何进入宿主体内阐述病毒的感染过程和机制3.3 病毒的免疫学检测方法介绍病毒的免疫学检测方法解释病毒抗体的检测和鉴定方法3.4 病毒感染的预防和治疗探讨病毒感染的预防和治疗策略第四章：真菌4.1 真菌的基本结构和特点描述真菌的基本结构解释真菌的特点和分类4.2 真菌的感染机制解释真菌如何进入宿主体内阐述真菌的感染过程和机制4.3 真菌的免疫学检测方法介绍真菌的免疫学检测方法解释真菌抗体的检测和鉴定方法4.4 真菌感染的预防和治疗探讨真菌感染的预防和治疗策略第五章：寄生虫5.1 寄生虫的基本结构和特点描述寄生虫的基本结构解释寄生虫的特点和分类5.2 寄生虫的感染机制解释寄生虫如何进入宿主体内阐述寄生虫的感染过程和机制5.3 寄生虫的免疫学检测方法介绍寄生虫的免疫学检测方法解释寄生虫抗体的检测和鉴定方法5.4 寄生虫感染的预防和治疗探讨寄生虫感染的预防和治疗策略《病原生物与免疫学基础》教案第六章：抗原和抗体6.1 抗原的定义和分类解释抗原的概念描述抗原的分类和特点6.2 抗原的识别和呈递阐述抗原如何被免疫系统识别和呈递6.3 抗体的结构和功能描述抗体的结构解释抗体的功能和分类6.4 抗原-抗体反应阐述抗原-抗体反应的原理和特点第七章：免疫应答7.1 先天免疫应答介绍先天免疫应答的机制和特点7.2 适应性免疫应答解释适应性免疫应答的机制和类型7.3 细胞免疫应答阐述细胞免疫应答的过程和作用7.4 体液免疫应答描述体液免疫应答的过程和作用第八章：免疫失调8.1 自身免疫病解释自身免疫病的概念和典型例子8.2 过敏反应描述过敏反应的机制和特点8.3 免疫缺陷病阐述免疫缺陷病的类型和原因8.4 免疫调节和治疗介绍免疫调节的机制和治疗方法第九章：疫苗和免疫接种9.1 疫苗的基本概念和类型解释疫苗的概念和分类9.2 疫苗的制作和应用描述疫苗的制作过程和免疫接种方法9.3 疫苗的免疫效果和评价阐述疫苗的免疫效果评价和影响因素9.4 疫苗的不良反应和处理介绍疫苗的不良反应及其处理方法第十章：病原生物与免疫学的实际应用10.1 病原生物检测和诊断解释病原生物检测的方法和诊断技术10.2 病原生物控制和预防阐述病原生物控制和预防的策略和措施10.3 免疫学治疗和免疫干预描述免疫学治疗的方法和免疫干预的应用10.4 病原生物与免疫学的研究前景探讨病原生物与免疫学的研究发展方向和前景《病原生物与免疫学基础》教案第十一章：感染性疾病概述11.1 感染性疾病的定义和特点解释感染性疾病的概念描述感染性疾病的基本特点11.2 感染过程和感染类型阐述感染过程的阶段和特点解释不同类型的感染性疾病11.3 感染性疾病的临床表现和诊断介绍感染性疾病的常见临床表现解释感染性疾病的诊断方法11.4 感染性疾病的预防和治疗探讨感染性疾病的预防策略描述感染性疾病的治疗方法第十二章：常见病原生物引起的感染性疾病12.1 细菌引起的感染性疾病介绍常见细菌引起的感染性疾病解释细菌感染的临床特点和治疗12.2 病毒引起的感染性疾病介绍常见病毒引起的感染性疾病解释病毒感染的临床特点和治疗12.3 真菌引起的感染性疾病介绍常见真菌引起的感染性疾病解释真菌感染的临床特点和治疗12.4 寄生虫引起的感染性疾病介绍常见寄生虫引起的感染性疾病解释寄生虫感染的临床特点和治疗第十三章：免疫接种和免疫预防13.1 疫苗的基本概念和类型解释疫苗的概念和分类13.2 疫苗的制作和应用描述疫苗的制作过程和免疫接种方法13.3 疫苗的免疫效果和评价阐述疫苗的免疫效果评价和影响因素13.4 疫苗的不良反应和处理介绍疫苗的不良反应及其处理方法第十四章：免疫学技术在临床应用14.1 病原生物检测和诊断解释病原生物检测的方法和诊断技术14.2 免疫学治疗和免疫干预描述免疫学治疗的方法和免疫干预的应用14.3 免疫学技术的临床应用实例介绍免疫学技术在临床治疗和诊断中的应用实例14.4 免疫学技术的未来发展探讨免疫学技术的未来发展趋势和应用前景第十五章：全球公共卫生与病原生物控制15.1 病原生物对全球公共卫生的影响阐述病原生物对全球公共卫生的重要性15.2 病原生物控制和预防策略解释病原生物控制和预防的策略和措施15.3 全球公共卫生面临的挑战探讨全球公共卫生面临的挑战和应对策略15.4 病原生物与免疫学在公共卫生中的应用描述病原生物与免疫学在公共卫生领域的应用第十六章：实验技能与案例分析16.1 实验室技能介绍病原生物与免疫学实验室的基本技能16.2 实验数据分析解释实验数据分析的基本方法16.3 案例分析提供病原生物与免疫学相关的案例分析重点和难点解析：重点：病原生物的基本结构、特点和分类；免疫学的基本概念、抗原和抗体的定义和分类；免疫应答的机制和类型；疫苗和免疫接种的应用；感染性疾病的临床表现和诊断；免疫学技术在临床应用；全球公共卫生与病原生物控制等。

微生物诊断技术

Hybridization Methods: Concept
• Hybridization can be between DNA and DNA, DNA and RNA, RNA and RNA, or either nucleic acid and synthetic oligonucleotids • Southern blot: the procedure for transferrine gel to a nitrocellulose filter where it can be hybridized with a complementary nucleic acid
1.
第一部分免疫学技术
免疫学鉴定和免疫学诊断免疫学鉴定-用已知的抗体检测标本中或分离培养物中的未知病原生物，确定生物的种或型。免疫学诊断-用已知的病原生物或其特异抗原检测患者血清中相应的特异抗体及效价的变化。
一、凝集反应
1 玻片凝集反应，用已知抗体的诊断血清，在玻片上直接与细菌培养物或细菌悬液混合，若有与抗体相应的细菌，出现肉眼看见的凝集块或颗粒。 2 反向间接凝集试验，将已知的细菌抗体直接吸附或通过化学偶联方法结合于RBC表明，制成抗体致敏细胞，再与被检物混合。
Blank Negative Positive
EBV
Specimen 1 Specimen 1 Specimen 2 Specimen 2 DNA Marker Negative Positive Specimen 1 Specimen 2
3. PCR Amplification
Diagnostic PCR amplification from patient samples
微生物感染的诊断技术

健康体检中心全程检验分析精细化操作技术实用手册.套

健康体检中心全程检验分析精细化操作技术实用手册.作：编委会中国党史2009年416开1册光盘：0定价：398元优惠：210元..详细：.......................................... ...................................................... ............第一篇普通人群健康检查第一章普通人群健康检查的目的及检查项目第二章老年人、中年知识分子健康检查第三章癌症普查第四章结核普查第五章妇科病普查第六章性病监测的体检项目和重点检查内容第二篇体格检查法之一第一章内科检查方法第二章外科检查方法第三章耳鼻喉科检查方法第四章眼科检查方法第三篇体格检查法之二第一章说明第二章外科、皮肤科第三章内科第四章神经精神科第五章眼科第六章耳鼻咽喉科、口腔科第四篇体液、分泌物和排泄物检验与仪器使用第一章尿液一般检查第二章粪便检验第三章脑脊液检验第四章浆膜腔积液检验第五章生殖系统液体检验第六章消化道分泌检验第七章痰液及支气管肺泡灌洗液检查第八章关节腔积液及鞘膜囊积液检查第五篇血液学检验与仪器使用第一章血液标本的采集和抗凝第二章红细胞的一般检验第三章白细胞的一般检验第四章血栓与止血检验第五章血液流变学检查第六篇生物化学检验与仪器使用第一章生物化学检验标本的采集和处理第二章蛋白质测定第三章糖及其代谢物测定第四章脂类测定第五章酶类测定第六章无机无素测定第七章肝功能检验第八章肾功能检验第九章激素检验第十章各类生化分析仪器使用第七篇传染病免疫学与血清学检查第一章病毒性肝炎免疫学检测第二章其他病毒性疾病免疫学检验第三章伤寒与副伤寒血清检测第四章霍乱的免疫学检测第五章流行性脑脊髓膜炎的免疫学检测第六章肾综合征出血热病毒的免疫学诊断第七章虫媒病毒的免疫学论断第八章呼吸道病毒的免疫学诊断第九章肠道病毒的免疫学诊断第十章 TORCH感染的血清学检测第八篇肿瘤免疫检测第一章癌胚抗原检测第二章肿瘤诊断中常见标记物第三章甲胎单白测定第九篇激素测定第一章绒毛膜促理性腺激素测定第二章皮质醇测定第三章性激素测定第四章垂体激素测定第五章胰激素测定第六章甲状腺激素第七章甲状旁腺素测定第十篇微生物学检验第一章概述第二章细菌感染的实验诊断第三章常见临床标本的张国荣学检验第十一篇临床分子生物学检验第一章在病毒感染性诊断中的应用第二章在细菌性感染诊断中的应用第十二篇临床细胞遗传学检查第一章染色体显带实验室操作程序第二章核型分析和照片健康体检中心全程检验分析精细化操作技术实用手册第一篇普通人群健康检查第一章普通人群健康检查的目的及检查项目第二章老年人、中年知识分子健康检查第三章癌症普查第四章结核普查第五章妇科病普查第六章性病监测的体检项目和重点检查内容第二篇体格检查法之一第一章内科检查方法第二章外科检查方法第三章耳鼻喉科检查方法第四章眼科检查方法第三篇体格检查法之二第一章说明第二章外科、皮肤科第三章内科第四章神经精神科第五章眼科第六章耳鼻咽喉科、口腔科第四篇体液、分泌物和排泄物检验与仪器使用第一章尿液一般检查第二章粪便检验第三章脑脊液检验第四章浆膜腔积液检验第五章生殖系统液体检验第六章消化道分泌检验第七章痰液及支气管肺泡灌洗液检查第八章关节腔积液及鞘膜囊积液检查第五篇血液学检验与仪器使用第一章血液标本的采集和抗凝第二章红细胞的一般检验第三章白细胞的一般检验第四章血栓与止血检验第五章血液流变学检查第六篇生物化学检验与仪器使用第一章生物化学检验标本的采集和处理第二章蛋白质测定第三章糖及其代谢物测定第四章脂类测定第五章酶类测定第六章无机无素测定第七章肝功能检验第八章肾功能检验第九章激素检验第十章各类生化分析仪器使用第七篇传染病免疫学与血清学检查第一章病毒性肝炎免疫学检测第二章其他病毒性疾病免疫学检验第三章伤寒与副伤寒血清检测第四章霍乱的免疫学检测第五章流行性脑脊髓膜炎的免疫学检测第六章肾综合征出血热病毒的免疫学诊断第七章虫媒病毒的免疫学论断第八章呼吸道病毒的免疫学诊断第九章肠道病毒的免疫学诊断第十章 TORCH感染的血清学检测第八篇肿瘤免疫检测第一章癌胚抗原检测第二章肿瘤诊断中常见标记物第三章甲胎单白测定第九篇激素测定第一章绒毛膜促理性腺激素测定第二章皮质醇测定第三章性激素测定第四章垂体激素测定第五章胰激素测定第六章甲状腺激素第七章甲状旁腺素测定第十篇微生物学检验第一章概述第二章细菌感染的实验诊断第三章常见临床标本的张国荣学检验第十一篇临床分子生物学检验第一章在病毒感染性诊断中的应用第二章在细菌性感染诊断中的应用第十二篇临床细胞遗传学检查第一章染色体显带实验室操作程序第二章核型分析和照片编委会中国党史出版日期：2009年4 开本：16开册数：1册光盘数：0 定价：398元。

细菌检验基本技术

混合营养物制品。
组成和作用
---营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类
---水 ---凝固剂：琼脂、明胶 ---抑制剂 ---指示剂
4
培养基的种类（按用途分类）
基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板。营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板。鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克
液体培养基接种法半固体穿刺接种法 :用于观察细菌动力斜面接种法倾注培养法:用于细菌计数涂布法
分区划线法
第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环
其他接种方法
5
细菌培养法
一般培养（需氧培养）
---培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ---培养时间：18～24h
二氧化碳培养法：二氧化碳培养箱、烛缸法、化学法厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养
2017-10-11
细菌内毒素的检测
目的：主要用于诊断病人是否发生革兰阴性细菌感染。用于检测注射用液和生物制品有无内毒素污染。
检测方法：家兔发热法鲎试验
细菌外毒素的测定
体内毒力试验：细菌外毒素对机体的毒性作用，可被
相应抗毒素中和，若先给动物注射抗毒素，然后再注射外毒素，则动物不产生中毒症状。
有动力现象
无动力现象
细菌的生物化学鉴定技术
3
6
细菌的代谢产物检测与鉴定
碳水化合物的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验碳源和氮源利用试验酶类试验抑菌试验
碳水化合物的代谢试验
糖类发酵试验氧化－发酵试验 β－半乳糖苷酶试验（ONPG）七叶苷水解试验甲基红试验 VP试验

细菌与病毒的病原学检查法

抗原检测：
凝集试验、对流免疫电泳、酶免疫技术、免疫荧光技术
核酸检测：
1.核酸杂交技术:Southern印迹杂交、Northern印迹杂交、原位杂交
2.PCR技术 3.基因芯片 4.16rRNA基因序列分析：编码rRNA，保守区、可变区
三、抗体的检测（血清学诊断）
凝集试验：直接、间接、协同、冷凝集沉淀试验：环状、絮状、双向、对流电泳补体结合试验：酶联免疫吸附试验（ELISA）：
取双份血清，抗体效价比早期高4倍以上有意
义。
第二节病毒感染的微生物学检查法
一、形态学检查
1.电子显微镜检查
直接镜检法：107颗粒/ml，电镜观察病毒
颗粒的形态和结构
免疫电镜法（IEM）：
标本+特异性抗体病毒颗粒聚集电镜观察
轮状病毒的粪便、HAV、HBV的血清、疱疹病毒的疱疹液，可早期诊断。
三、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标
细胞的变化：CPE 红细胞吸附（HAd）：红细胞凝集：病毒干扰作用：风疹病毒，埃可病毒,Vero细
胞。
中和试验（NT）：是病毒在活体内或细胞培
养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验
空斑形成试验：蚀斑形成单位（PFU），感染
性病毒的滴度用PFU/ml表示。
四、病毒成分的检测
血凝抑制试验
病毒+红细胞血凝现象
病毒+抗体+红细胞血凝现象消失
用于流感病毒、副流感病毒的诊断、流行病学调查及鉴定病毒的型和亚型。
ELISA法：HSV、CMV、EB病毒等
蛋白印迹技术：用已知病毒蛋白检测未
知病毒
病毒抗原的检测：HIV和HBV抗原
病毒核酸的检测

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第二章细菌感染实验诊断
2.标本中可能含有致病菌，必须注意安全防护。切勿污染环境。对于烈性传染病标本运送时更要由专人运送，严格按规定包装。
第二章细菌感染实验诊断
3.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送。
第二章细菌感染实验诊断
第三节细菌形态学检查
一、显微镜
第二章细菌感染实验诊断
二、诊断试验的选择
1.选择有鉴定价值的试验。 2.选择简易、快速、方便的试验，达
到目的即可。
第二章细菌感染实验诊断
3.综合考虑试验的敏感性和特异性。敏感性=阳性结果数/感染病人数，越高假阴性就越少。特异性=阴性结果数/未感染病人数，越高假阳性就越少。
第二章细菌感染实验诊断
第二章细菌感染实验诊断
1．革兰染色
最经典、最常用的染色方法。在分离培养前都要进行革兰染色、镜检。通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G菌两大类，可初步识别细菌，有助于进一步鉴定。
第二章细菌感染实验诊断
结合细菌特殊结构及排列方式，对病原菌可进行鉴定，其结果为临床早期诊断及治疗提供了依据。
革兰染色可为临床选择用药提供参考，帮助临床制订有针对性的治疗方案。因为 G+菌和G-菌对抗生素敏感性不同，且致病物质及其作用机理也不同。
第二章细菌感染实验诊断
2．抗酸染色
将细菌分为抗酸性和非抗酸性细菌两大类。因为大多数病原菌为非抗酸性，所以抗酸染色不作为常规检查项目。
只用于结核病等检查。抗酸染色的鉴定结果。对疾病的诊断和治疗具有重要参考价值。
第二章细菌感染实验诊断
3．荧光染色
敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。
第二章细菌感染实验诊断
疾病的种类不断发生变迁，传染病如鼠疫等已明显减少，相反，由条件致病菌引起的内源性感染却明显增多。同时，新的病原菌不断出现，原有的病原菌因变异、耐药等又重新流行。
第二章细菌感染实验诊断
目前，临床遇到主要是条件致病菌，引起的感染。正常菌群与病原菌的致病性是相对的，因此，既不要轻易认为分离出的非致病菌是污染菌，也不要轻易认为所发现的细菌就是该感染的病原菌，必须结合临床进行进一步的诊断。
三、常用诊断流程
1.双歧索引
用于相互区别比较容易,有特征的细菌，如革兰阴性杆菌初步分群；对于相互区别较难的细菌，鉴定项目较多,用起来不太方便。
第二章细菌感染实验诊断
2.表解法：
将各种细菌及其多种特性列成矩阵表格，使相互的区别点十分明显，便于分析比较。此法对于相互区别比较复杂的细菌，如肠杆菌科的初步分属。
第二章细菌感染实验诊断
3.根据目的菌的特性用不同的方法采集适量标本，采集量不应过少。
4.注意在不同病程采集不同部位标本。 5.采集标本时要防止传播和自身感染。
第二章细菌感染实验诊断
二、标本的处理
1.标本保存在4℃环境中，在2h之内送检。脑脊液则要在25 ℃保存，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。对环境敏感的细菌应保温并立即送检。
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1 第二章细菌感染- 实验诊断 0
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第二节临床标本的采集与处理
一、标本采集的一般原则
1.病程早期、急性期或症状典型时，使用抗生素前。
2.无菌采集应无污染，严格进行无菌操作。
第二章细菌感染实验诊断
二、不染色细菌标本检查
1.主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况。可对某些病原菌作出初步鉴定，如霍乱菌。
2.螺旋体由于不易着色并有形态特征，故多用不染色标本作暗视野显微镜检查。
第二章细菌感染实验诊断
三、细菌染色标本的检查
细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类。
第二章细菌感染实验诊断
(一)常用染料
分为碱性和酸性两大类。此外，还有复合染料。 1．碱性染料电离后显色离子带正电荷，
易与带负电荷的被染物结合。由于细菌均带负电荷，易与染料结合而着色。常用的有碱性复红、结晶紫、美蓝等。
第二章细菌感染实验诊断
2．酸性染料电离后显色离子带负电荷，易与带正电荷的被染物结合。细菌都带有负电荷故不易着色。通常用来染细胞浆，而很少用于细菌的染色。常用的酸性染料有伊红、刚果红等。
第二章细菌感染实验诊断
3.数字编码鉴定法
将所得生化反应模式转化成数学模式，可把细菌生化反应结果转化成数字，经检索手册又可将转化成细菌名称。与电脑分析软件配套，形成了半自动或全自动细菌分析系统。
第二章细菌感染实验诊断
组别 1 2 3 4 5
试验项目
硫化氢苯丙氨酸葡萄酸盐靛基质甲基红枸橼酸盐尿素动力产气赖氨酸鸟氨酸棉子糖山梨醇侧金花醇木胶糖
第二章细菌感染实验诊断
第一节临床感染性疾病实验诊断要求
一、诊断的目的 1.以疾病的病原学诊断为目的,只需鉴
定到细菌的种。 2.为提供治疗方案为目的，要进行临
床标本的直接药物敏感试验。
第二章细菌感染实验诊断
3.以流行病学研究为目的,要鉴定到型。 4.以了解细菌与感染的关系为目的,应
该做细致的鉴定。
第二章细菌感染实验诊断
3．复合染料(中性染料)及荧光染料复合染料是碱性染料和酸性染料的复合物，如瑞氏染料(伊红美蓝)、姬姆萨染料(伊红天青)等；荧光染料如荧光标记的抗体，荧光素常用异硫氢基荧光素。这些染色常用于某些特殊的染色技术中。
第二章细菌感染实验诊断
（二）常用的染色方法
在细菌感染标本的检查中，临床上常用的染色方法有革兰染色、抗酸染色和荧光染色。
1.普通光学显微镜用油镜放大1000倍，一般细菌均能清楚看到。
2.暗视野显微镜用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动观察。
3.相差显微镜主要用于检查不染色活细菌的形态及某些内部结构。
第二章细菌感染实验诊断
4.荧光显微镜可看到发射荧光的细菌。还应用于免疫荧光技术中。
5.电子显微镜有透射电子显微镜和扫描电子显微镜。前者适于观察细菌内部超微结构，后者适于对细菌表面结构及附件观察。