超薄切片制备步骤

培养细胞透射电镜超薄切片制备方法
细胞透射电镜超薄切片是一种常用的电镜技术，用于观察细胞的超微结构。

下面是一种常用的细胞透射电镜超薄切片制备方法：
1. 细胞固定：首先，将要观察的细胞固定在适当的细胞培养基或缓冲液中。

常用的细胞固定剂有戊二醛、乙醛等，用于维持细胞内各种结构和细胞间连接的完整性。

2. 细胞架构处理：固定后的细胞经过漂洗，然后进行细胞架构处理。

根据需要，可以使用内部或外部染色剂对细胞结构进行染色，以提高细胞的对比度。

3. 细胞包埋：在细胞固定和染色后，将细胞包埋在适当的树脂中。

常用的树脂包括Epon、Araldite等。

包埋过程中需要将细胞置于特殊的盒子或管中，并将树脂逐渐浸入细胞中，使细胞与树脂充分接触。

4. 刮丝切片：包埋完成后，将树脂固化并取出样品。

使用特殊的刮丝刀在树脂块上刮下薄片。

切片的厚度通常在70-90纳米之间。

5. 超薄切片收集：收集切下的超薄切片并将其放到透射电镜网格上。

通常使用特殊的刀片或刮片将切片直接转移到网格上，然后用特殊的工具将切片平整在网格上。

6. 染色：切片通常需要染色以增加对比度。

常用的电子显微镜
染色包括乌洛托品，还可以使用其他染色剂进行后续的特殊染色。

7. 观察：将染色后的超薄切片放入透射电镜中，进行观察和拍摄。

需要注意的是，在整个制备过程中，尽量减少样品的处理时间和曝光在空气中的时间，以保证细胞结构和细胞间连接的完整性。

此外，制备超薄切片需要一定的经验和技巧，因此在进行细胞透射电镜超薄切片制备之前最好接受相关的培训和指导。

超薄切片法（一）以Epon 812为包埋介质的植物组织制样流程1 取材：常温取样，低温保存（0~4℃）。

2 固定和浸洗：1%~3%戊二醛固定液固定2h，最多不超过1周。

PBS缓冲液20~30min(更换1~3次)，然后1%~2%OsO4固定液固定1~2h，PBS缓冲液20~30min(更换1~3次)。

3 脱水：30%丙酮水溶液，50%丙酮水溶液，70%丙酮水溶液（或冰箱过夜）10~20min，在常温条件下，90%丙酮水溶液，100%丙酮水溶液，“纯丙酮”（更换2次）每次10~20min。

4 渗透：Epon 812混合液：纯丙酮（1:3）12h，Epon 812混合液：纯丙酮（1:1）12h，Epon 812混合液：纯丙酮（3:1）12h，Epon 812混合液（35~40℃）12h。

5 包埋和聚合：将组织放入胶囊（或包埋板）中，加入新鲜的Epon 812混合液，放烘箱中加热35℃12h ，45℃12h ，60℃24h ，树脂聚合后，待冷却到室温，进行切片。

6 制刀：用制刀机制出刀刃锋利的玻璃刀。

若用钻石刀则省略此步。

7 修块：经粗修，将包埋块修整合适。

8 切片：在切片机上固定好包埋块和切片刀，调整刀位后对刀、进刀，完成细修后切片，厚度60~80μm，铜网捞片，风干或灯下烤干。

9 染色：常规铅-铀染色。

（把一张滤纸平铺在有盖平皿底部。

用配制染剂的溶液将其润湿，上放一小片干净牙科蜡。

将染液滴于蜡块上，迅速盖上平皿盖。

将欲染载网浮在液滴上，注意切片朝下。

一般采用铀-铅双染法：先用1～3％醋酸双氧铀水溶液或70％酒精溶液将载网按上述方法染20～30min。

染后必须清洗，一般用钟表镊子夹载网浸入清洗液中，反复清洗，清洗液可放在试管中或小瓶中。

经三瓶清洗液即可。

注意将镊子中间夹缝液体用一小片滤纸将其吸干。

用硝酸铅与柠檬酸钠配制成柠檬酸铅，将其溶于氢氧化钠，可得到稳定的强碱溶液（pH12）。

染、洗方法同前。

用铅染时，可用0.1MNaOH浸湿滤纸，以吸收空气中CO2，防止生成碳酸铅沉淀污染切片。

超薄切片样品制备的基本步骤
一、样品固定
超薄切片样品制备的第一步是对样品进行固定。

固定是为了使组织或细胞保持在自然状态，防止其在处理过程中发生自溶和腐败。

常用的固定方法有戊二醛固定法和锇酸固定法。

在固定过程中，要确保样品充分固定，以避免后续步骤出现问题。

二、样品包埋
固定后的样品需要用适当的介质进行包埋，以便于切片的制作。

包埋剂的选择应根据样品的性质和实验要求来决定。

在包埋过程中，要保证样品平整，无气泡，以免影响切片的制作。

三、切片制作
切片制作是超薄切片样品制备的关键步骤。

一般采用超薄切片机进行切片，得到厚度在50-100nm之间的超薄切片。

切片时要保证切片平整，无裂痕，无毛刺。

切好的切片需用蒸馏水冲洗，去除多余的介质。

四、染色处理
染色处理是为了使切片中的结构能够更好地显现出来。

常用的染色方法有免疫标记染色和重金属染色。

染色时要注意控制染色时间和浓度，以免造成过度染色或染色不足。

五、观察与成像
染色后的切片需在电子显微镜下进行观察和成像。

观察时要选择合适的放大倍数和观察条件，以便更好地观察到样品的结构特征。

成像时需注意控制曝光时间和亮度，以获得高质量的图像。

以上是超薄切片样品制备的基本步骤，每个步骤都需要严格按照操作规程进行，以保证制备出的样品质量可靠，满足实验要求。

冷冻超薄切片原理和使用冷冻超薄切片原理和使用冷冻超薄切片技术是一种为了研究更接近于生物生活状态结构和功能而发展起来的电镜样品制备技术。

它是把样品进行冷冻固定后，进行超薄切片，省去了经典超薄切片法的长时间的固定、脱水和也埋等处理。

样励在切片前后，不经过强烈的化学处理，约胞结构能得到很好的保存；尤其是可溶性成分小会被抽提，使得电镜图像更接近于生物的生活状态。

可用于细胞免疫化学、可溶性成分自显影、尤其在X射线微区成分分析等研究中。

冷冻超薄切片机操作：在超薄切片机上加上高压冷冻仪冷冻附件就可进行。

冷冻超薄切片的制备程序可为两类：1.无溶液制备法：包括取材、快速冷踪、冷冻替代、切片、干燥、染色或不染色、镜检等几个步骤。

主要用于可溶性物质的放射白显影和X射线微区分析。

2.固定样品制备法：包括取材、醛类阑定、样品包埋或不包埋、冷冻保护处IR、快速冷冻切片、染包及镜检等步骤。

适用于进行形态学、细胞化学和免疫细胞化学研究。

用户经培训后取得资格可自行使用超薄切片机，使用步骤如下：1）开机2）检查是否处于切片模式，检查顶光底光是否亮度正常；3）将包埋块放入适当夹头并用六角扳手旋紧，以固定包埋块；（然后将夹头安装在修快台进行修快）；4）将夹头放入机械臂，并用手旋好螺丝上紧夹头（不可用六角扳手）；5）将玻璃刀/钻石刀安装在刀台上，用手旋好螺丝以固定刀，并注意检查刀台是否固定于底座上；6）检查刀间隙角，调整刀台角，选择适当的夹头角度等；7）设定切片窗口（上下范围）；8）对刀；9）选择所用切片速度和厚度；10）在刀槽内注水，注意水面平整；11）切片、捞片；12）关机、清理切片机，拿走个人物品，保持切片台面整洁；13）登记使用记录。

超薄切片法详细流程超薄切片法可是个超有趣的东西呢，今天就来好好唠唠它的详细流程。

一、准备工作。

咱得先把要用的家伙事儿都准备齐喽。

这就好比做饭得先把食材和厨具备好一样。

需要一台超棒的切片机，这可是主角哦。

然后呢，还得有合适的包埋材料，就像给我们要切的东西找个舒服的小窝。

玻璃刀或者钻石刀也不能少，这可是用来切片的利器呢。

还有载网，它就像个小盘子，用来盛切片的。

另外，染色剂之类的辅助材料也得准备好，就像给切片化个妆，让我们能更好地观察它。

二、样品处理。

样品可不能就那么直接拿去切呀。

得先把它固定好，这就像给调皮的小娃娃定住，不让它乱跑。

常用的固定剂有戊二醛之类的。

固定之后呢，还要脱水，把样品里多余的水分去掉，就像给它把身上的小水珠都擦干。

然后就是浸透包埋，让样品在包埋材料里舒舒服服地待着，这样切的时候才能切得好。

这一步可不能马虎，要是包埋没做好，后面切片就容易出问题啦。

三、切片操作。

好啦，前面准备工作都做好了，就开始切片喽。

把包埋好的样品放到切片机上，就像把小蛋糕放到案板上准备切一样。

调整好切片机的参数，这个可重要啦，厚度要调到超薄的程度，一般是几十纳米到几百纳米呢。

然后小心翼翼地切，就像对待最心爱的小宝贝一样。

切出来的切片要轻轻地放到载网上，可不能把它弄破或者弄皱了，不然前面的努力就白费啦。

四、染色。

切片切好啦，但是还不够漂亮呢，这时候就轮到染色剂出场啦。

染色就像给切片穿上漂亮的衣服，让我们能更清楚地看到它的结构。

不同的染色剂会染出不同的效果，可以根据我们想要观察的东西来选择合适的染色剂。

染色的时候也要小心哦，按照正确的步骤来操作，不然可能会把切片弄得一团糟。

五、观察。

经过前面一系列的折腾，终于可以观察我们的超薄切片啦。

把载网放到电子显微镜下，然后就像探索神秘宝藏一样，仔细地去看切片里面的微观世界。

可以看到细胞的结构啦，细胞器的形态啦等等好多超有趣的东西。

每次看到那些微观结构的时候，都感觉像进入了一个神奇的小世界，特别激动呢。

简述超薄切片样品制备过程超薄切片样品制备是一种常见的实验技术，用于观察和分析生物组织的结构和组成。

下面将全面介绍超薄切片样品制备的过程。

首先，准备样品。

样品可以是动物组织、植物组织或细胞培养物等。

样品应选择新鲜、健康和具有代表性的组织。

如果是动物或植物组织，可以通过离心、选择性切割或者冰冻保存来获取。

如果是细胞培养物，应选择密集和健康的细胞。

接下来，进行固定处理。

固定处理是为了保持样品的形态结构，防止组织脱落和破坏。

通常，选择合适的固定剂，如福尔马林或戊醛，将样品浸泡在固定液中，时间一般为数小时到数天。

固定液中的一般浓度为4%到10%。

然后，进行脱水处理。

脱水处理是为了将固定后的样品从水中转移到透明质量可嵌入剂（如蜡）中。

首先，用浓度递增的酒精溶液（例如30%、50%、70%、90%、100%酒精）依次处理样品。

每一步的时间可以根据样品大小和性质来确定，一般为10到30分钟。

最后，用纯醇或乙醚等溶液进行最后一步脱水处理。

进行渗透处理。

渗透处理是将样品从脱水剂中转移到蜡中。

首先，使用浓度递增的蜡溶液（如蜡-醇混合液）进行处理。

每个浓度的时间也可以根据样品大小和性质来调整，一般为30分钟到数小时。

最后，将样品转移到纯蜡中，进行长时间浸泡以保证充分的渗透。

接下来，进行包埋处理。

将样品放入包埋盒中，加入熔化的蜡，使样品完全包裹其中。

然后，用冷却水或冷却平台使蜡固化，通常需要数小时到数天时间。

最后，将固化的蜡块从包埋盒中取出。

最后，进行切片处理。

先用蜡切片机将蜡块切割成适当大小的切片。

然后，将切片浸泡在加热的水中，蜡会溶解，使切片从蜡中解脱出来。

最后，将解脱后的切片转移到玻璃载玻片上，并用热盖玻片使其固定。

通过以上步骤，就可以得到超薄切片样品。

这些样品可以用于光学显微镜、电子显微镜等技术的观察和分析。

制备超薄切片样品的过程繁琐，需要耐心和细心操作，但是它对于研究生物组织结构和功能具有重要的指导意义。

超薄切片法详细流程超薄切片法呀，那可真是个挺有趣的技术呢。

一、样品准备。

咱们得先有个合适的样品哦。

这样品可不能随随便便的。

要是研究生物组织呢，就得把组织取出来，还得小心别破坏了它原本的结构。

比如说研究植物的叶片细胞，那得轻轻地把叶片切下一小片，就像对待小宝贝一样。

要是研究动物组织，像肝脏之类的，也要很细致地取出来一块。

然后呢，这个样品得固定好。

固定剂就像保护神一样，把样品的状态定格住。

常用的固定剂有戊二醛呀，它能让细胞里的各种成分都老老实实待在原地，不会到处乱跑。

把样品放在固定剂里泡一泡，就像给它洗个舒服的澡，但这个澡可是有大作用的呢。

二、脱水处理。

固定好之后，就该脱水啦。

水对于超薄切片来说可不是个好东西，得把它去掉。

这就像给样品脱掉湿漉漉的外衣一样。

我们可以用乙醇或者丙酮来脱水。

从低浓度开始，一点点增加浓度。

就像爬楼梯一样，一步一步来。

先从30%的乙醇开始，让样品适应一下，然后50%、70%、90%，最后到100%。

这个过程得慢慢来，要是太着急，样品可能就不高兴啦，会出现变形之类的问题。

在每一个浓度的溶液里都要泡上一定的时间，可不能偷工减料哦。

三、浸透与包埋。

脱水之后呢，就是浸透啦。

要把样品浸到一种特殊的包埋剂里。

包埋剂就像给样品做一个温暖的小窝。

常用的包埋剂有环氧树脂之类的。

把样品放在包埋剂里，让包埋剂慢慢地渗透到样品的每一个角落。

这就像是包埋剂在跟样品说：“我来保护你啦。

”然后把样品和包埋剂一起放到模具里，等包埋剂凝固。

这个时候就像看着蛋糕在模具里慢慢成型一样，可期待啦。

四、切片。

等包埋好了，就可以切片啦。

这可是个技术活。

用超薄切片机来切，切片机的刀片要非常锋利，就像剑客的宝剑一样。

切的时候要调整好厚度，超薄切片嘛，那厚度可是很薄很薄的，一般是几十纳米到几百纳米。

就像把一个大大的蛋糕切成超级薄的片一样，这个过程得小心翼翼的。

要是切得不好，那前面的努力可就白费啦。

五、染色。

切好片之后，还得染色呢。