组织及血液酸性磷酸酶(ACP)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法

迪信泰检测平台
酸性磷酸酶（ACP）检测
酸性磷酸酶（Acid phosphatase, ACP）是一种是非特异性磷酸单酯酶，可以催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应，生成无机磷酸和相应的醇、酚、糖等，还可以催化磷酸基团的转移反应，并直接参加磷代谢，在钙、磷的消化、吸收和分泌过程中发挥了重要的作用。

诱导并分泌酸性磷酸酶是植物应对低磷环境的重要适应性反应之一，血清酸性磷酸酶活力已成为诊断和监测多种疾病重要手段。

迪信泰检测平台采用生化法，结合相应的酶类的试剂盒可以高效、精准的检测酸性磷酸酶的活性变化。

此外，我们还提供其他酯酶类的检测服务，以满足您的不同需求。

生化法测定酸性磷酸酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周。

项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。

2. 相关参数（中英文）。

3. 图片。

4. 原始数据。

5. 酸性磷酸酶活性信息。

迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。

过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC0090规格：50T/48S 产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体0.33mL×2瓶，4℃保存；用时每瓶加入5mL 试剂一；用不完的试剂4℃保存一周；试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。

产品说明：POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

POD 催化H 2O 2氧化特定底物，在470nm 有特征光吸收。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水操作步骤：一、粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至470nm，蒸馏水调零。

2、测定前将试剂一、二和三37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min。

3、样本测定表试剂名称（µL）测定管样本15蒸馏水270试剂一520试剂二130试剂三135在1mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录470nm下30s时的吸光值A1和1min30s 后的吸光值A2。

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液使用说明货号：G4561有效期：6个月有效。

产品内容：名称规格（4×10ml）保存试剂(A):TRAP固定液50ml4℃避光试剂(B):TRAP孵育液B1:AS-BI Buffer1ml-20℃避光B2:GBC染色液0.1ml4℃避光B3:TRAP Buffer9ml RT避光临用前，按B1:B2:B3=10:1:90混合，即为TRAP孵育液，即配即用。

试剂(C):苏木素染色液10ml4℃避光试剂(D):甲基绿染色液10ml RT避光产品说明：酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。

溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。

各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。

存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase，TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液。

血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚AS-BI为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚不重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中，若细胞内的ACP有抗酒石酸的活性，则呈阳性反应。

该染色液可用于新鲜血涂片、细胞涂片，亦可用于冰冻切片、石蜡切片。

自备材料：1、蒸馏水、恒温箱2、载玻片、推玻片3、光学显微镜操作步骤(仅供参考)：(一)血液、细胞涂片：1、推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上，推玻片于载玻片保持30度，置于血液或细胞滴液的正前方，稍往后移不血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至铺满血膜为止。

2、自然晾干，TRAP固定液4℃固定30s～3min，多数情况下30～60s即可。

柠檬酸合酶（CS）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC1060规格：10T/5S产品简介：CS（EC 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环第一个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB，在412nm处有特征吸光值。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

产品内容：提取液：液体5mL×1瓶，-20℃保存；试剂一：液体2.5mL×1瓶，-20℃保存；试剂二：液体0.1mL×1支，-20℃保存；试剂三：液体25mL×1瓶，4℃保存；试剂四：粉剂×1支，4℃保存，临用前加入1mL双蒸水，用不完的试剂仍4℃保存；试剂五：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入500μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；试剂六：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入1.5mL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；操作步骤：一、样本前处理组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL提取液和10μL试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2将匀浆液600g，4℃离心5min。

3将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。

4上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的CS。

5在沉淀中加入200μL试剂一和2μL试剂二，反复吹打充分混匀，用于CS测定。

6柠檬酸合酶酶活即沉淀和上清液中的酶活之和。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。

2、试剂三置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中预热10min左右（保证无沉淀）。

土壤酸性磷酸酶（soil acid phosphatase）活性测定试剂盒（分光光度法）使用说明货号:BC0140规格:50T/48S产品简介：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响，根据最适pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。

酸性环境中，S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。

产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

用前加50mL蒸馏水充分溶解。

试剂三：液体×1瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1支，4℃避光保存。

临用前加1152μL无水乙醇（自备），48μL蒸馏水充分溶解。

（变褐色后不能再使用）标准品：液体×1支，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。

操作步骤：一、粗酶液提取：称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。

8000rpm，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。

二、测定步骤：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。

2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL蒸馏水，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A空白管。

3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL标准液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A标准管。

4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL上清液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A测定管。

土壤酸性磷酸酶（S-ACP）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4048规格：50T/48S可见分光光度法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体21mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1瓶2-8℃保存试剂三液体11mL×1瓶2-8℃保存试剂四粉剂×2支2-8℃保存标准品液体1mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：用前加50mL蒸馏水充分溶解，2-8℃保存8周；2、试剂四：临用前取1瓶加576μL无水乙醇（自备），24μL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂可以2-8℃保存2周（变褐色后不能再使用）；3、标准品：0.5μmol/mL苯酚标准液。

产品说明：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响，根据最适pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。

酸性环境中，S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。

Phenyl Disodium Phosphate S-A CP,H+Phenol+Na2HPO4Phenol+2,6-Dibromobenzoquinone Chlorimide Alkaline Conditions Indoxyl(660nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、分析天平、研钵、可调式移液器、冰、蒸馏水、30-50目筛、乙醇和甲苯（不允许快递）。

碧云天生产的碱性磷酸酶检测试剂盒(Alkaline Phosphatase Assay Kit)是一种用于快速、便捷地检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血清、血浆、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性的试剂盒。

碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase)，也称碱性磷酸酯酶，可以在碱性条件下催化磷酸酯键的水解。

哺乳动物中，肝脏、胆管、肾脏、骨头和胎盘中的碱性磷酸酶活性比较高。

常见的碱性磷酸酶包括肠道碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, intestinal, ALPI)、非组织特异性碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, tissue-nonspecific isozyme, ALPL)和胎盘碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, placental type, 也称placental alkaline phosphatase, PLAP)。

干细胞，如iPS中，碱性磷酸酶的活性很高，常被用作iPS成功诱导的标志。

另外，分化的结肠癌细胞中碱性磷酸酶的活性也会显著升高，被当作结肠癌细胞分化程度定性和定量的指标。

此外，血清中碱性磷酸酯酶的升高，被称作高碱性磷酸酶血症(hyperalkalinephosphatasemia)，被认为和恶性胆管阻塞(malignant biliary obstruction)、原发性胆管硬化(primary biliary cirrhosis)、原发性硬化胆管炎(primary sclerosing cholangitis)、肝淋巴瘤(hepatic lymphoma)和肝肉瘤(hepatic sarcoidosis)等肝胆疾病密切相关。

血清中碱性磷酸酶活性升高还和骨头生成密切相关，因为碱性磷酸酶是成骨细胞的副产物。

血清中碱性磷酸酶活性过低也和一些疾病相关。

儿童和孕妇血清中的碱性磷酸酶活性较普通人高一些。

血清中碱性磷酸酶活性范围在20-140U/L。

SOP文件酸性磷酸酶（ACP）染色1. 引言酸性磷酸酶（ACP）是一种重要的酶，广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。

ACP染色是一种常用的染色方法，可以用于检测细胞中ACP的表达和定位。

本文档旨在提供一份标准操作程序（SOP）文件，详细描述了ACP染色的实验步骤和注意事项。

2. 材料和试剂准备•ACP抗体：购买自可靠的供应商，存储在-20℃的冰箱中。

•PBS缓冲液：含有0.1%的Tween 20，pH 7.4。

•4%的多聚甲醛（PFA）：用于细胞固定。

•0.1%的Triton X-100：用于细胞渗透。

•3%的过氧化氢（H2O2）：用于抑制内源性酶活性。

•5%的牛血清白蛋白（BSA）：用于阻断非特异性结合位点。

•3,3’-二氨基苯基亚甲基环丙烷（DAB）底物液：用于显色反应。

3. 实验步骤3.1 细胞处理和固定1.将待检细胞培养在适当的培养基中，使其达到适当的生长状态。

2.使用适当的方法将细胞固定在载玻片上，例如用4%的PFA进行细胞固定，固定时间为15分钟。

3.用PBS缓冲液洗涤载玻片3次，每次洗涤5分钟。

3.2 抗原检出4.使用0.1%的Triton X-100进行细胞渗透，渗透时间为10分钟。

5.用PBS缓冲液洗涤载玻片3次，每次洗涤5分钟。

6.使用5%的BSA阻断非特异性结合位点，阻断时间为30分钟。

7.加入ACP抗体，适当稀释后，与载玻片反应，反应时间为1小时。

8.用PBS缓冲液洗涤载玻片3次，每次洗涤5分钟。

3.3 显色反应9.加入3%的H2O2抑制内源性酶活性，反应时间为10分钟。

10.加入DAB底物液进行显色反应，反应时间根据样品的不同，通常为5-30分钟。

11.用PBS缓冲液洗涤载玻片3次，每次洗涤5分钟。

4. 实验结果和分析使用光学显微镜观察载玻片下的细胞，如果目标细胞中有ACP的表达，则可见棕色的沉积物或颗粒。

通过比较不同实验组的染色结果，可以评估ACP的表达和定位情况。

5. 注意事项•所有步骤中的时间和温度应严格控制，以保证实验结果的准确性和可重复性。