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第八章生物氧化1.生物氧化：物质在生物体内进行氧化称生物氧化，主要指糖、脂肪、蛋白质等在体内彻底分解时逐步释放能量，最终生成CO2 和 H2O的过程。
2.生物氧化中的主要氧化方式：加氧、脱氢、失电子3.CO2的生成方式：体内有机酸脱羧4.呼吸链：代谢物脱下的成对氢原子通过位于线粒体内膜上的多种酶和辅酶所催化的连锁反应逐步传递，最终与氧结合生成水，这一系列酶和辅酶称为呼吸链，又称电子传递链。
NADH →复合物I→ CoQ →复合物III →Cyt c →复合物IV →O 产2.5个ATP (2)琥珀酸氧化呼吸链:3-磷酸甘油穿梭琥珀酸→复合物II→ CoQ →复合物III → Cyt c →复合物IV →O 产1.5个ATP 含血红素的辅基：血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素、过氧化物酶、过氧化氢酶5.细胞质NADH的氧化:胞液中NADH必须经一定转运机制进入线粒体，再经呼吸链进行氧化磷酸化。
转运机制（1）3-磷酸甘油穿梭：主要存在于脑和骨骼肌的快肌，产生1.5个ATP（2）苹果酸-天冬氨酸穿梭：主要存在于肝、心和肾细胞；产生2.5个ATP6.ATP的合成方式：（1）氧化磷酸化：是指在呼吸链电子传递过程中偶联ADP磷酸化，生成ATP，又称为偶联磷酸化。
偶联部位：复合体Ⅰ、III、IV（2）底物磷酸化：是底物分子内部能量重新分布，通过高能基团转移合成ATP。
磷/氧比：氧化磷酸化过程中每消耗1摩尔氧原子（0.5摩尔氧分子）所消耗磷酸的摩尔数或合成ATP的摩尔数。
7.磷酸肌酸作为肌肉中能量的一种贮存形式第九章糖代谢一、糖的生理功能：（1）氧化供能（2）提供合成体内其它物质的原料（3）作为机体组织细胞的组成成分吸收速率最快的为-半乳糖二、血糖1.血糖：指血液中的葡萄糖正常空腹血糖浓度：3.9~6.1mmol/L2.血糖的来源：（1）食物糖消化吸收（2）肝糖原分解(3)糖异生去路：(1）氧化分解供能（2）合成糖原（3）转化成其它糖类或非糖物质3.血糖调节：肝脏调节、肾脏调节（肾糖阈）、神经调节、激素调节体内主要升血糖激素：胰高血糖素、糖皮质激素、肾上腺素、生长激素、甲状腺素三、糖代谢1.无氧酵解(无氧或缺氧；生成乳酸；释放少量能量)关键酶：己糖激酶、6-磷酸果糖激酶1、丙酮酸激酶反应部位：胞液产能方式：底物磷酸化净生成2ATP⑴葡萄糖磷酸化为6-磷酸葡萄糖 -1ATP⑵ 6-磷酸葡萄糖转变为 6-磷酸果糖⑶ 6-磷酸果糖转变为1,6-二磷酸果糖 -1ATP⑷ 1,6-二磷酸果糖裂解⑸磷酸丙糖的同分异构化⑹ 3-磷酸甘油醛氧化为1,3-二磷酸甘油酸【脱氢反应】⑺ 1,3-二磷酸甘油酸转变成3-磷酸甘油酸【底物磷酸化】 +1*2ATP⑻ 3-磷酸甘油酸转变为2-磷酸甘油酸⑼ 2-磷酸甘油酸转变为磷酸烯醇式丙酮酸⑽磷酸烯醇式丙酮酸转变成丙酮酸，并通过底物水平磷酸化 +1*2ATP(11)丙酮酸加氢转变为乳酸生理意义：（1）是机体在缺氧情况下获取能量的有效方式。
免疫组化：链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法1)将石蜡切片置于烤片机烘烤２－３h,{因为做石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，所以应烤片2-3h,除非组织的抗原性较稳定，则时间可长一点}后可把烤好的组织切片，放在60℃烤箱中过夜，最佳时间控制在14-18h{乳腺病理处省略此步骤}。
取组织切片于切片架，用吹风机吹至产生蜡液，不可靠太近，以免使组织切片局部温度过高，破坏组织切片。
2）常规脱蜡 ({二甲苯脱蜡，在夏天，室温较高，脱蜡试剂也新鲜，则脱蜡时间不需很多，3-5分钟就已足够。
如果在冬天，室温较低，脱蜡试剂也较陈旧，则脱蜡时间需要延长，10-20分钟或更长}二甲苯I 20min →二甲苯II 20min→二甲苯Ⅲ20min →无水乙醇10min（清洗二甲苯）→无水乙醇10min→95%乙醇5min→80%乙醇5min) {梯度酒精用无水酒精与蒸馏水配置}目的：把水渗入组织切片中，给细胞创造一个水溶性环境<以下步骤是为细胞染色做准备>3）捞出，放入铁缸内，用凉清水冲洗3次{如果组织容易脱片，就尽量泡一下，这样脱片可以减少很多}；4）将配好的柠檬酸盐抗原修复液（抗原修复液的量为稍高于横向放倒的切片架的高度）{EDTA配制方法：EDTA修复液使用比例：EDTA:蒸馏水=1:49,每次最好配制1000ml。
EDTA修复液重复使用最好不要超过5次，并且3次之后要测PH值，测PH是否为9.0，如偏离太大则弃用。
枸橼酸修复液只能用一次。
修复的原因：因为常规的石蜡切片标本均用甲醛固定，结果使得抗原性物质形成醛键，羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇。
另外，蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。
在染色时，要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态}{用EDTA修复比柠檬酸容易脱片，但是你要用到EDTA的时候也可，因其抗原修复效果比柠檬酸盐的好，可从另外的问题上着手}灌入高压锅中，不旋紧，盖上即可，210℃烧至沸腾后，把切片架放入横向放倒，旋紧锅盖，待喷气时，开始计时2min-2min30s,如果组织不易染色，可延长修复时间，但一般不超过3min，否则容易掉片。
CISH的原理：
将基因探针用地高辛或生物素标记，利用过氧化物酶或碱性磷酸酶的呈色反应使在光学显微镜下检测组织mRNA的表达水平。
FISH技术的基本原理
利用DNA碱基对的互补性，将直接标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补的目标样本的DNA(玻片上的标本)杂交，通过观察荧光信号在染色体上的位置反映相应染色体的情况。
FISH就是利用这一原理将标记探针同组织、细胞核或染色体DNA进行杂交，经荧光检测体系对待测核酸定性、定位或相对定量分析的一种研究方法。
试剂配制：(1)杂交增强液：取适量100倍杂交增强液与蒸馏水按1:99 配制并放置冰箱备用(2) DAB显色液DAB底物和E和稀释液D按1:50比例混匀。
脱蜡及水化：组织经二甲苯2次，5min ，无水乙醇3min ，95%乙醇3min, 80%乙醇脱蜡，以及水洗2min ，蒸馏水洗2min 2次。
杂交预处理：将切片放入盛有1倍杂交增强液的容器里，微波高
火煮2 次，每15min加杂交增强液，并保证组织始终浸没于溶液中,自然冷却，流水冲洗，蒸馏水洗。
杂交及变性：①加探针②加热变性③放置在杂交仪上培养过夜④浸没于PBS中，使盖玻片脱落⑤用PBS洗涤
信号放大与显色：①小心擦去组织周围液体，加第一抗体②小心擦去组织周围液体，加第二抗体③小心擦去组织周围液体，加聚合物，室温培养，PBS清洗④擦去组织周围液体，加显色液体⑤流水冲洗，PBS返蓝，梯度酒精脱水，中性树胶封固。
结论
是免疫组化表达初步筛查的首选方法检测法建议ICH阳性患者可进一步作显色法检测更有利于临床治疗方案的选择。
第八章生物氧化1. 生物氧化：物质在生物体内进行氧化称生物氧化，主要指糖、脂肪、蛋白质等在体内彻底分解时逐步释放能量，最终生成C02和H2O的过程。
2. 生物氧化中的主要氧化方式：加氧、脱氢、失电子3. CO2的生成方式：体内有机酸脱羧4. 呼吸链：代谢物脱下的成对氢原子通过位于线粒体内膜上的多种酶和辅酶所催化的连锁反应逐步传递，最终与氧结合生成水，这一系列酶和辅酶称为呼吸链，又称电子传递链。
组成(1) N ADH 氧化呼吸链：苹果酸-天冬氨酸穿梭NADH —复合物I —CoQ —复合物III —Cyt c —复合物IV f O 产2.5个ATP(2) 琥珀酸氧化呼吸链：3-磷酸甘油穿梭琥珀酸—复合物II —CoQ —复合物III —Cyt c —复合物IV —O 产1.5个ATP含血红素的辅基：血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素、过氧化物酶、过氧化氢酶5. 细胞质NADH 的氧化：胞液中NADH必须经一定转运机制进入线粒体，再经呼吸链进行氧化磷酸化。
转运机制(1 ) 3-磷酸甘油穿梭：主要存在于脑和骨骼肌的快肌，产生 1.5个ATP(2 )苹果酸-天冬氨酸穿梭：主要存在于肝、心和肾细胞；产生2.5个ATP6. ATP的合成方式：(1 )氧化磷酸化：是指在呼吸链电子传递过程中偶联ADP磷酸化，生成ATP，又称为偶联磷酸化。
偶联部位：复合体I、III、IV(2 )底物磷酸化：是底物分子内部能量重新分布，通过高能基团转移合成ATP。
磷/氧比：氧化磷酸化过程中每消耗1摩尔氧原子(0.5摩尔氧分子)所消耗磷酸的摩尔数或合成ATP的摩尔数。
7. 磷酸肌酸作为肌肉中能量的一种贮存形式第九章糖代谢寸一、糖的生理功能：(1 )氧化供能(2 )提供合成体内其它物质的原料(3 )作为机体组织细胞的组成成分吸收速率最快的为-半乳糖二、血糖1. 血糖：指血液中的葡萄糖正常空腹血糖浓度：3.9~6.1mmol/L2. 血糖的来源：（1）食物糖消化吸收（2）肝糖原分解（3）糖异生去路：（1 ）氧化分解供能（2）合成糖原（3）转化成其它糖类或非糖物质3. 血糖调节：肝脏调节、肾脏调节（肾糖阈）、神经调节、激素调节体内主要升血糖激素：胰高血糖素、糖皮质激素、肾上腺素、生长激素、甲状腺素三、糖代谢1. 无氧酵解（无氧或缺氧；生成乳酸；释放少量能量）关键酶：己糖激酶、6- 磷酸果糖激酶1、丙酮酸激酶反应部位：胞液产能方式：底物磷酸化净生成2ATP⑴ 葡萄糖磷酸化为6- 磷酸葡萄糖-1ATP⑵ 6- 磷酸葡萄糖转变为6- 磷酸果糖⑶ 6- 磷酸果糖转变为1,6- 二磷酸果糖-1ATP⑷ 1,6- 二磷酸果糖裂解⑸ 磷酸丙糖的同分异构化⑹ 3- 磷酸甘油醛氧化为1,3- 二磷酸甘油酸【脱氢反应】⑺ 1,3- 二磷酸甘油酸转变成3- 磷酸甘油酸【底物磷酸化】+1*2ATP⑻ 3- 磷酸甘油酸转变为2- 磷酸甘油酸⑼ 2- 磷酸甘油酸转变为磷酸烯醇式丙酮酸⑽ 磷酸烯醇式丙酮酸转变成丙酮酸，并通过底物水平磷酸化+1*2ATP（11）丙酮酸加氢转变为乳酸生理意义：（1）是机体在缺氧情况下获取能量的有效方式。
几种常见的抗体标记方法-酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记抗体标记主要有酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记等，还有一些其他的标记方法例如金标记，本文主要讲述了这些抗体标记的基本原理、操作步骤。
、酶标记1 、辣根过氧化物酶(HRP) 标记辣根过氧化物酶(HRP) 标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。
其原理是HRP 的糖基用过碘酸钠氧化成醛基，加入抗体IgG后该醛基与IgG 氨基结合，形成Schiff 氏碱。
为了防止HRP中糖的醛基与其自身蛋白氨基发生偶合，在用过碘酸钠氧化前先用二硝基氟苯阻断氨基。
氧化反应末了，用硼氢化钠稳定Schiff 氏碱。
这里介绍两种程序。
程序一：(1)将5mg HRP 溶于0.5ml 0.1mol/L NaHCO3 溶液中加0.5ml 10mmol/LNaIO4 溶液，混匀，盖紧瓶塞，室温避光作用2 小时。
(2)加0.75ml 0.1mol/L Na2CO3 混匀。
(3)加入0.75ml 小鼠已处理的腹水，或纯化单抗等(15mg/ml) ，混匀。
(4)称取SephadexG25 干粉0.3g ，加入一支下口垫玻璃棉的5ml 注射器外筒内;随后将上述交联物移入注射器外套;盖紧，室温作用(避光)3小时或4C过夜。
(5)用少许PBS 将交联物全部洗出，收集洗出液，加1/20V 体积新鲜配制的5mg/mlNaBH4 溶液，混匀，室温作用30 分钟;再加入3/20V NaBH4溶液，混匀，室温作用1小时(或4C过夜)。
(6)将交联物过Sephadex g200 或Sepharose6B(2.6 X 50cm)层析纯化，分管收集第一峰。
(7)酶结合物质量鉴定：克分子比值测定酶量(mg/ml)=OD403 X 0.4IgG 量(mg/ml)=(OD280- OD403X 0.3) X 0.62克分子比值(E/P)=酶量X 4/IgG量，一般在1-2之间。
酶结合率=酶量X体积/抗体，标记率一般为0.3-0.6，即1-2个HRP 分子结合在一个抗体分子上，标记率可大于0.6，0.8，0.9;OD403/OD280 等于0.4 时，E/P 约为1 。
生物素的生化功能生物素是一种重要的维生素，也称为维生素H或辅酶R。
它在人体内起着多种生化功能，对于维持身体健康至关重要。
生物素在体内参与了脂肪、碳水化合物和蛋白质的代谢。
它是许多酶的辅助因子，能够促进这些酶的活性，从而加速代谢过程。
例如，生物素参与了葡萄糖的合成与分解过程，帮助维持血糖水平的稳定。
此外，生物素还参与了脂肪酸的合成与氧化，对于脂肪代谢的平衡起着重要的作用。
它还能够参与氨基酸的代谢，帮助身体合成蛋白质，并维持蛋白质的稳定。
生物素对于维持健康的皮肤、头发和指甲具有重要作用。
皮肤是人体最大的器官之一，生物素能够促进皮肤细胞的正常分裂和生长，从而保持皮肤的健康和光滑。
它还能够促进头发和指甲的生长，预防头发和指甲的脆弱、干燥和脱落。
因此，摄入足够的生物素对于保持健康的皮肤、头发和指甲至关重要。
生物素还对神经系统的正常功能起着重要的调节作用。
它参与了神经递质的合成和传递过程，维持了神经系统的平衡和稳定。
生物素还能够促进脑细胞的正常发育和功能，增强记忆力和注意力。
因此，摄入足够的生物素对于保持健康的神经系统至关重要。
生物素还参与了DNA和RNA的合成过程，对于细胞的生长和分裂具有重要作用。
它能够促进细胞的正常分裂和增殖，帮助维持身体组织的正常生长和修复。
生物素还对免疫系统的正常功能起着重要的调节作用。
它能够促进免疫细胞的活性和功能，增强免疫系统的抵抗力。
生物素还参与了炎症反应的调节，帮助控制炎症反应的过程。
因此，摄入足够的生物素对于维持健康的免疫系统至关重要。
生物素在人体内具有多种生化功能，对于维持身体健康至关重要。
它参与了脂肪、碳水化合物和蛋白质的代谢，维持健康的皮肤、头发和指甲，调节神经系统的正常功能，参与DNA和RNA的合成，以及调节免疫系统的正常功能。
因此，我们应该保证摄入足够的生物素，以维持身体的正常功能和健康。
免疫组化试题参考答案免疫组织化学试题参考答案一、名词解释：1.PAS反应：即过碘酸--雪夫反应显示糖原，简称PAS反应。
其原理是通过利用过碘酸的氧化作用，使糖分子中的二醇基氧化为二醛基，释放出醛基，与碱性品红反应，生成紫红色化合物沉淀。
2.Feulgen法：即福尔根反应显示DNA法。
其原理是组织用1NHCl 60℃水解，将DNA分子中脱氧核糖核酸与嘌呤间的连链打开，使之释放出醛基与碱性品红发生反应，生成紫红色化合物沉淀。
3.PAP法：即过氧化物酶一抗过氧化物酶法，该技术原理与其他免疫定位技术相同，即通过抗体使标记分子（抗辣根过氧化物酶）定位于抗原附件。
其不同点为三步法，且有放大作用，反应彻低依靠于免疫学结合，不需要标记任何抗体，反应敏捷度高，背景低。
注重一抗与复合物中的抗体必需来源于同一种动物，且二抗必需过剩。
4.核酸探针：指能与特定核酸序列发生特异性互补的已知标记的核酸片段，可检测待测样品中特定的基因序列。
无标记的探针称裸探针。
5.核酸分子杂交：指具有互补序列的两条核酸单链在一定条件下按碱基配对原则形成双链的过程。
杂交的双方分离为待测的核酸序列和已知核酸序列，后者通常用核素或非核素示踪标记，称为探针（probe），杂交后形成的异源双链分子称为杂交分子。
6.质量控制：指组织化学反应各环节中获得最佳效果的技术掌握，是组织化学的关键环节，是取得惬意效果的须要条件，是提高结果可信度的根本保证。
7.诱发荧光：组织细胞中的某些物质本身不发荧光，但在经过一定的化学反应后可以改变成荧光分子。
此技术目前主要应用在生物胺的显示中。
其中最重要的是甲醛和乙醛酸诱发多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素和5—羟色胺荧光，以及邻苯二醛诱发组织胺荧光的反应。
8.定量分析：定量推断是结果推断中最重要也是具故意义的推断，其推断结果有助于统计学的分析处理。
组织细胞化学结果的定量分析又称定量组织细胞化学，指在组织细胞化学阳性结果的基础上，对阳性结果（终于阳性产物）举行测量，以数值反应被检测物质的含量。
免疫组织化学试题参考答案一、名词解释：1.PAS 反应：即过碘酸--雪夫反应显示糖原，简称证。
PAS 反应。
其原理是通过利用过碘酸的氧化作用，7.诱发荧光：组织细胞中的某些物质本身不发荧使糖分子中的二醇基氧化为二醛基，释放出醛基，光，但在经过一定的化学反应后可以转变成荧光分与碱性品红反应，生成紫红色化合物沉淀。
子。
此技术目前主要应用在生物胺的显示中。
其中2.Feulgen 法：即福尔根反应显示DNA 法。
其原最重要的是甲醛和乙醛酸诱发多巴胺、去甲肾上腺理是组织用1NHCl 60℃水解，将DNA分子中脱氧素、肾上腺素和5—羟色胺荧光，以及邻苯二醛诱核糖核酸与嘌呤间的连链打开，使之释放出醛基与发组织胺荧光的反应。
碱性品红发生反应，生成紫红色化合物沉淀。
8.定量分析：定量判断是结果判断中最重要也是具3.PAP 法：即过氧化物酶一抗过氧化物酶法，该技有意义的判断，其判断结果有助于统计学的分析处术原理与其他免疫定位技术相同，即通过抗体使标理。
组织细胞化学结果的定量分析又称定量组织细记分子（抗辣根过氧化物酶）定位于抗原附件。
其胞化学，指在组织细胞化学阳性结果的基础上，对不同点为三步法，且有放大作用，反应完全依赖于阳性结果（最终阳性产物）进行测量，以数值反应免疫学结合，不需要标记任何抗体，反应灵敏度高，被检测物质的含量。
此法是阳性结果的进一步检测背景低。
注意一抗与复合物中的抗体必须来源于同和分析，更加直观地反应实验结果，更有力地说明一种动物，且二抗必须过剩。
实验结果。
常用有人工定量分析与仪器定量分析两4.核酸探针：指能与特定核酸序列发生特异性互补类。
的已知标记的核酸片段，可检测待测样品中特定的9.固定：为了更好的保持细胞和组织原有的形态结基因序列。
无标记的探针称裸探针。
构，防止组织自溶，有必要对细胞和组织进行固定，5.核酸分子杂交：指具有互补序列的两条核酸单链其作用不仅是使细胞内蛋白质凝固，终止或抵制外在一定条件下按碱基配对原则形成双链的过程。
