血凝抑制试验测抗原的原理

2、HI试验可用于发病禽群的诊断
鸡、鸭、鹅规模化养殖中虽进行相关疫病疫苗的免疫，但往往有部分家 禽由于各种原因免疫力水平达不到要求，因而造成某些传染病的流行。 由于免疫禽群发病时临床症状和病变不典型，给确诊带来困难。采用HI 试验对鸡群中禽流感、新城疫等抗体进行测定，依据抗体滴度的高低和 离散性有助于诊断。 例如：经新城疫活苗加灭活苗免疫过的鸡群，新城疫抗体水平平均为 7Log2～8Log2，最高为10Log2。而新城疫感染鸡群中HI抗体部分高 达11Log2～13Log2；就抗体分布而言，鸡新城疫免疫鸡群抗体水平呈 正态分布，HI抗体在10Log2以上者仅占10％以下，4Log2以下者在1 ％以下。而感染了新城疫强毒并出现发病的鸡群，HI抗体中10Log2以 上者占25％以上，而4oLg2以下者在10％～30％之间。因此，依据禽 群的抗体水平高低和分布，结合临床症状和病、死鸡的剖检变化，可诊 断禽群是否患有新城疫或禽流感等。
1.3 原理
血凝的原理因不同的病毒而有所不同,如:
痘病毒对鸡的红细胞发生凝集并非是病毒本身，而 是痘病毒的产物--类脂蛋白的作用。
流感病毒的血凝作用是病毒囊膜上的血凝素与红细 胞表面的受体糖蛋白相互吸附而发生的。
2、血凝抑制试验(HI)
2.1定义
当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的 量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的 受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。这时 红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制 (hemagglutination inhibiion，HI)反应，也称血 凝抑制反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验 (HI) 。
三、实验步骤
（以禽流感为例，参照禽流感防治技术规范）
1 阿氏（Alsevers）液配制 量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸

病毒的血凝试验（HA）及血凝抑制试验(HI)
一、目的要求 掌握HA和HI试验的基本操作技术，了解其实用价值。 二、实验材料 1、禽流感毒 2、1%鸡红细胞 3、生理盐水 4、禽流感阳性血清 5、96孔“V”型微量反应板 三、实验内容 1、HA试验术式表： 2、HI试验术式表： 四、作业 1、病毒凝集红细胞是不是一种特异的抗原抗体反应？为什么？ 2、HI试验是不是特异的抗原抗体反应？为什么
25
25
1： 2 1： 4 1： 8 ﹟ 以100%凝集病毒最大稀释孔为该病毒的凝集价
血凝抑制试验(HI)
一、概念： 1 、 HI 试验：病毒的红细胞凝集现象，可以被特异性免疫血清所抑制， 称HI试验。 2、抗体效价：出现红细胞凝集抑制现象的血清的最大稀释倍数叫抗体 效价。
病毒的红细胞凝集试验（HA）
一、 概念 病毒的红细胞凝集现象：许多病毒表面有血凝素，能与各种动物的红细胞 表面受体结合，而出现红细胞凝集现象，简称为病毒的血凝现象。 二、应用 1 、当以被检动物的某一器官为病料，进行HA试验，结果为阳性者，证明 该被检材料中有能凝集红细胞的某种病毒。 2 、凝集价的测定：将被检病毒材料，稀释成不同的稀释倍数，进行 HA试 验，出现血凝现象的各稀释孔中，以100%能出现病毒的红细胞凝集现象的 病毒的最大稀释倍数者即定为凝集价(血凝价)
二、动物体内抗体存在情况 1、当动物感染某病毒而发病时，可在机体的相应器官查出病毒。
2、病毒相当于免疫效应物质中的抗原，病毒进入动物机体，将发生特异
性免疫反应，即产生免疫物质——抗体（ 90%抗体都存在于动物的血清 中），抗原和抗体发生特异性结合反应 3、病畜体内，因受病毒抗原刺激，产生大量相应抗体，故体内抗体效价 较高 4、健康动物，免疫接种后，因受疫苗（抗原）刺激，而发生免疫应答反 应，体内抗体效价较高

血凝试验(HA)定义：某此病毒或病毒的血凝素，能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝(hemagglutination，HA)，也称直接血凝反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验(HA)血凝抑制试验(HI)定义：当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。

这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制(hemagglutination inhibiion，HI)反应，也称血凝抑制反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验(HI) 。

原理：特异性抗体与相应病毒结合，使病毒失去凝集红细胞的能力，从而抑制血凝现象。

用于禽流感、新城疫等具有血凝性病毒的鉴定根据抗原与相应抗体的特异性中和反应原理，给未知病毒悬液中加入已知的抗禽流感病毒阳性血清或已知的抗新城疫病毒阳性血清，相应病毒便丧失了其凝集红细胞的能力。

因此，可利用从发病的鸡、鸭、鹅体内分离的病毒作HA和HI试验。

病毒悬液能凝集红细胞，并且能被已知的抗血清（阳性血清）所抑制，那么该病毒即是已知阳性血清相对应的病毒。

如用新城疫阳性血清完全抑制了未知病毒培养物的血凝性，那么，这个未知病毒培养物就是新城疫病毒；如果病毒悬液虽然能凝集鸡红细胞，但不能被鸡新城疫血清所抑制，说明不是鸡新城疫病毒，可能是其他有血凝性的病毒。

阿氏（Alsevers）液配制称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH值至6.1，69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用1%鸡红细胞液的制备2.1采血用注射器吸取阿氏液约1mL，取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与阿氏液混合，放入装10mL 阿氏液的离心管中混匀。

2.2 洗涤鸡红细胞将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液，轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 mL，轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。

HA值可用于评估血液凝固功能和血栓形成风险
试验方法
添加标题
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试验材料：抗凝剂、试管、离心机、凝血因子活性检测试剂等。
试验原理：通过观察血液凝固过程，检测血浆中凝血因子的活性。
试验步骤：采集血液样本，加入抗凝剂，离心分离血浆，加入凝血因子活性检测试剂，观察血液凝固时间并记录结果。
不同点：血凝HA试验只能判断是否存在凝血功能障碍或血栓前状态，而血凝抑制试验HI不仅可以判断是否存在凝血功能障碍或血栓前状态，还可以检测抗凝物质的具体类型和浓度。
试验方法的比较
血凝HA试验：通过观察血凝块的形成和溶解过程，检测抗凝物质的存在和含量
操作简便性：血凝HA试验操作相对简单，而血凝抑制试验HI需要更多的样本和操作步骤
参考值：血凝HA试验结果的参考值一般为阴性或阳性，具体参考值因不同病毒而异。
临床意义
用于诊断血栓栓塞性疾病
评估血液高凝状态的风险
辅助诊断易栓症等血栓前状态
监测抗凝治疗的效果
02
血凝抑制试验HI
试验原理
血凝抑制试验HI是一种检测病毒抗体的方法，通过与特异性抗体结合，抑制病毒的凝集活性，从而检测出病毒抗体。
临床意义
用于诊断疾病：血凝抑制试验HI可以用于诊断多种疾病，如流感、麻疹等病毒感染性疾病，以及疟疾、血友病等出血性疾病。
监测治疗效果：通过血凝抑制试验HI，可以监测治疗效果，评估病情进展和预后。
指导治疗：血凝抑制试验HI的结果可以指导治疗，例如在输血时，通过血凝抑制试验HI可以确定最佳的输血量。
流行病学调查：血凝抑制试验HI还可以用于流行病学调查，了解疾病的流行趋势和分布情况。
试验意义：用于检测凝血因子活性，评估血液凝固功能，协助诊断凝血障碍相关疾病。

４ 加样
如果短时间内不能检测 ，应放在一 ２ Ｏ ℃ —． ８ Ｏ ｃ 冰箱内保存 ，运送 病毒悬液和红细胞悬液在使用前一定要摇匀 ，以保证每一 血清 时 应将 血 清放 在 盛有 冰 块 的保 温设 备 中运 送 。被 检血 清 应避 孔 中加 入 的浓 度 准确 一致 ，避免 加 入 的浓 度高 低不 一 ，人 为造 成 免反 复 冻融 ，反 复冻 融 的血 清抗 体效 价 会 降低 。 血清 保存 不 当 ， 误 差 。摇晃 红 细胞 悬 液 时力 度不 宜 过大 ，防止 红 细胞 的结 构被 破 腐 败 变质会 严 重影 响试 验结 果 。 坏 ，造 成溶血 。 加液体时 ，避免吸头与反应板孔接触造成污染。尤其是在最 （ １ ）反 应 板 应 选 择 一 次 性 使 用 ９ ６ ￣ Ｌ ｖ 型 板 ，要保 持 板 面及 后加入红细胞悬液 时，孔 内已有稀释液 、血清 、单位抗原等 ，如 凹孔 的 干净 ，板 面应 水平 ，不能 弯 曲 、倾 斜 ，使用 不 合格 的反应 果 吸头 接触 到 孔 内混 合液 ，会造 成 各个 孔 内液 体相 互 污染 ，导致 板 会 严 重影 响结 果 。板 孔 倾斜 的角度 会 影 响红 细胞 的 沉降 速度 ， 试 验 结果 出现 误差 。所 以 ，在 使 用 移液 器 时 ，一定 要保 持 加样 器 角度 过 小 ，红 细胞 沉 降加 快 ，血 凝价 偏 低 ，血 凝抑 制 价偏 高 。角 吸 头与 凝集 板 孔 间 的距 离 ，以保 证 每个 凝集 孑 Ｌ 内液 体 数量 和浓 度
１ 被检样品
种 ，应— ２ ０ ｏ Ｃ 保存 。在进 行抗 原效 价 的测定 时 ，同一种 抗原 最好
１ ． １ 采样 两 瓶 以上 混合 后使 用 ，并做 重复 试 验 ，取 其平 均值 ，减 少误 差 。 （ １ ）随 机 采集 的被 检 样 本要 能够 代 表 整个 鸡 群 。一 般条 件 抗 原 的凝集 价 在外 界 不稳 定 ，冷 藏 保存 或反 复 冻融 时 其 血凝 价降

阐述ha,hi原理和实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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血凝抑制实验报告（通用3篇）血凝抑制试验报告篇1一、原理流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，HA试验由此得名。

HA蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA蛋白与红细胞受体的结合从而消失抑制现象。

二、应用该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采纳的试验方法。

可用于流感病毒分别株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型全都的感染或免疫抗体。

三、缺点只有当抗原和抗体HA亚型相全都时才能消失HI现象，各亚型间无明显交叉反应；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。

四、试验步骤1 阿氏（Alsevers）液配制称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH值至6.1，69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用。

（3.8%枸橼酸钠（3.8g枸橼酸钠，100ml超纯水），101 kPa,20min高压灭菌，4℃保存备用,保存期1个月）。

2 10%和1%鸡红细胞液的制备2.1采血用注射器吸取阿氏液约1mL（3.8%枸橼酸钠），取至少2只SPF 鸡（假如没有SPF鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与阿氏液混合（3.8%枸橼酸钠），放入装10mL 阿氏液（生理盐水）的离心管中混匀。

2.2 洗涤鸡红细胞将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液（生理盐水），轻轻混合，再经1500～1800 r/min 离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 mL（生理盐水），轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。

2.3 10%鸡红细胞悬液取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，精确观看刻度离心管中红细胞体积(mL)，加入9倍体积(mL)的生理盐水，用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合匀称。

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抗原效价测定
12345
67
8
9
10
11 12
2 4 8 16 32 64 128 ×××× × × ×
生 25 25 25 25 25
理 盐 水
抗 25 25 25 25 25
原
生
理 25 25 25 25 25
盐 水
红 25 25 25 25 25
细 胞
结 ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ 果 ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋
2021/3/10
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2021/3/10
4
实验原理
1、HA原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地 使某种动物地红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的 现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应（红细胞 不流淌）。
病
毒
红
颗
细
粒
胞
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5
2、HI原理：当病毒的悬液中加入特异性抗体，且这 种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细 胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。 这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑 制（HI）反应，也称血凝抑制反应。
3、每孔再次加入生理盐水25ul
4、每孔加入1％鸡红细胞悬液25ul
5、在振荡器上振荡均匀后，放于室温（20-25°C） 下静置30分钟，或2-8℃45-60分钟，红细胞对照孔 呈纽扣状时判定结果。
6、结果判定。将反应板倾斜60°，观察红细胞有无
泪滴状流淌，完全凝集无泪珠状流淌（100%）的最
2高021/稀3/10 释倍数为抗原血凝价。
6、 振荡，放于室温静置30分钟，或2-8℃45-60分钟； 7、 结果判定。以完全抑制的4个单位抗原的最高稀释倍数为该

影响血凝抑制实验的因素目前，县级实验室做的最多的要数血凝试验和血凝抑制试验。

经过反复操作，不断摸索，逐渐找出一些影响血凝抑制试验的因素。

现列举出来，以便日后引以为戒。

1 红细胞悬液浓度：来源于不同个体鸡的红细胞，对抗原的敏感性不尽相同。

因此实验时最好用3-4只未免疫鸡。

配制红细胞时，红细胞浓度低，HI滴度就会下降；红细胞浓度高，HI滴度就会上升。

有实验表明，红细胞浓度增加一倍，HI滴度就会上升20.7-0.9，因此，红细胞浓度以1％为宜。

2 抗原的稀释倍数：配制抗原时，浓度必须准确。

当抗原浓度高时，HI抗体效价就下降；当抗原浓度抵时，HI抗体效价就上升。

3 实验用的稀释液（PBS）：稀释液的pH值对实验有影响。

稀释液的pH值5.8以下，红细胞容易产生自凝现象；pH值在7.8以上凝集图形易消失，也会造成实验误差。

而pH值为7.0时，红细胞沉降最充分，图形最清晰，HI效价也最高，因此实验时用ph7.0-7.2的稀释液。

4 实验时的温度：实验时的温度，从4-37℃，随着温度上升，HA与HI滴度提高，但在37℃时，凝集的红细胞易洗脱；4℃以下红细胞易产生自凝，故操作常用18-22℃。

（以上所阐述的是实验室操作过程中存在的几点因素，在实际工作中，也存在着其他诸多原因，如采样的时间、采样的数量、以及由疫苗产生的影响等第。

）血凝抑制试验：一些动物红细胞(如鸡、豚鼠等)以及人“O”型血红细胞上有流感病毒受体，遇流感病毒可产生红细胞凝集现象，简称血凝。

若将特异性抗体与流感病毒(血凝素)预先作用后再加入红细胞则不产生凝集，称为血凝抑制现象。

用定量血凝素与不同稀释度血清抗体作用后，能完全抑制血凝的最高稀释度，即为血凝抑制抗体效价。

血凝抑制试验主要材料：1 大孔塑料板，1mL吸管或1mL移液器。

2 双份血清收集及处理：急性期血清于发病3d内采取，恢复期血清于发病后2～4周采取。

取0.1mL已分离的血清加入0.9(或0.4)mL霍乱滤液(RDE)(即1∶10或1∶5稀释)摇匀，于37℃水浴中过夜，以去除血清中的非特异性抑制素，次日置56℃水浴50min以灭活多余的RDE。

血凝抑制实验报告（经典版）编制人：__________________审核人：__________________审批人：__________________编制单位：__________________编制时间：____年____月____日序言下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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2、HI试验可用于发病禽群的诊断
鸡、鸭、鹅规模化养殖中虽进行相关疫病疫苗的免疫，但往往有部分家 禽由于各种原因免疫力水平达不到要求，因而造成某些传染病的流行。 由于免疫禽群发病时临床症状和病变不典型，给确诊带来困难。采用HI 试验对鸡群中禽流感、新城疫等抗体进行测定，依据抗体滴度的高低和 离散性有助于诊断。 例如：经新城疫活苗加灭活苗免疫过的鸡群，新城疫抗体水平平均为 7Log2～8Log2，最高为10Log2。而新城疫感染鸡群中HI抗体部分高 达11Log2～13Log2；就抗体分布而言，鸡新城疫免疫鸡群抗体水平呈 正态分布，HI抗体在10Log2以上者仅占10％以下，4Log2以下者在1 ％以下。而感染了新城疫强毒并出现发病的鸡群，HI抗体中10Log2以 上者占25％以上，而4oLg2以下者在10％～30％之间。因此，依据禽 群的抗体水平高低和分布，结合临床症状和病、死鸡的剖检变化，可诊 断禽群是否患有新城疫或禽流感等。
2.1采血 用注射器吸取阿氏液约1mL，取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡， 可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与 阿氏液混合，放入装10mL阿氏液的离心管中混匀。 2.2 洗涤鸡红细胞 将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃 上清液，沉淀物加入阿氏液，轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分 钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过 程后，加入阿氏液20 mL，轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过 5天。 2.3 10%鸡红细胞悬液 取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离 心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管 中红细胞体积(mL)，加入9倍体积(mL)的PBS，用吸管反复吹吸使PBS与红 细胞混合均匀。 2.4 1%鸡红细胞液 取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 mL，加入9 mLPBS， 混合均匀即可。

禽流感HN血凝和血凝抑制试验培训课件(一)
禽流感是一种由禽类传播的病毒性疾病，它严重影响禽类养殖业的稳定和人们的健康。

为了加强对禽流感的诊断和监测，现已开展了许多相关培训课件，其中包括HN血凝和血凝抑制试验培训课件。

一、 HN血凝试验
HN血凝试验是一种有效检测禽流感的方法。

该试验涉及到鸭或鸡的腹腔内的红白血球，以及指定的病毒抗原和抗体。

该试验的转化需要将抗原和抗体分别注入鸡和鸭体内，然后观察细胞凝集的形成情况，最终确定结果。

二、血凝抑制试验
血凝抑制试验是检测禽流感的另一种方法。

这种试验依赖于血红蛋白联合病毒和抗体。

在正常情况下，抗体能够识别并抑制病毒，防止病毒感染红血球。

但是，当感染病毒时，一些抗体会被该病毒绑定，使掉血集合的凝固作用被阻止，从而导致血小板和红细胞受到影响。

三、培训课件的优点
1. 它可以提高禽类人员的技能和能力，他们可以通过学习这些课件加强对禽流感的认知。

2. 通过学习HN血凝和血凝抑制试验的原理和流程，人们能够更好地理解各种试验的工作原理，包括试验的优缺点和最佳实践。

3. 通过掌握这些试验技巧，专业人员将可以更高效地诊断出禽流感。

四、总结
HN血凝和血凝抑制试验是两种有效的禽流感检测方法。

培训课件可使
禽类专业人员更好地掌握这些技巧，并提高他们处理这类病毒的能力。

最终，这些技能和知识将有助于确保禽类养殖业的稳定和人类的健康。

工作有着十分重要的临床意义和经济意义。
一、重要性
01 有效预防动物疫情的发生 02 有效判断动物疫情发生的原因 03 有效推动动物免疫程序的制定
二、检测内容和方法
检测内容
猪
猪瘟 O型口蹄疫 A型口蹄疫 地方病：蓝耳、细 小、圆环、伪狂犬、 乙脑
羊
O型口蹄疫 小反刍兽疫
牛
O型口蹄疫 A型口蹄疫
鸡
禽流感 新城疫
用已知抗原来检测被检血清中有无相应的特异性抗体和滴 定该特异性抗体的水平。
血凝试验：某种病毒的血凝素， 能使鸡、鹅或人的红细胞发生凝 集，叫做血凝试验，也称直接血 凝反应，利用这种特性设计的试 验称血凝试验 (HA) 。
常见于正粘病毒、副粘病毒和某 些黄病毒、痘病毒等。
目的：测定病毒的血凝效价，采用 一定的病毒量，通常采用4个血凝 单位
2.采血完毕后将血加入至10ml离心管中，加3-4倍体积生理盐水以 2000~3000r/min，5~10min离心3-5次。
3.弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜，再加入十倍以上血量的PBS液， 上下缓慢颠倒（切忌用力过大使红细胞破裂），使其充分混匀，再离心 弃去上清液，反复几次直至上清液清亮透明为止。
阿氏（Alsevers）液配制
称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸 0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散 热溶解后调pH值至6.1，69kPa 15min高压灭菌， 4℃保存备用。
1%红细胞的配制：
1.为避免有些鸡只的红细胞有自凝现象，因此配制1%红细胞悬液时应最好 选择采取3只SPF鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液。（抗凝剂与 血液比例为1:4）
血凝试验（HA)原理：
血凝抑制试验（HI）原理

血凝-血凝抑制试验中配制四单位抗原试验佚名【摘要】血凝-血凝抑制(HA-HI)试验是鉴定病毒及检测相应抗体常用的检测方法之一,是兽医实验室人员必须掌握的试验技能,主要应用于家禽H5N1/H7N9型禽流感、鸡新城疫的免疫效果评估.试验中根据血凝(HA)试验的终点判定,正确计算和配制四单位(4HAU)抗原是直接影响试验成败的关键,配制4HAU抗原后需进行抗原回滴验证,确保血凝抑制(HI)试验结果无误.【期刊名称】《湖南畜牧兽医》【年(卷),期】2018(000)006【总页数】3页(P47-49)【关键词】四单位抗原;抗原回滴;血凝-血凝抑制试验;鸡禽流感抗体检测【正文语种】中文【中图分类】S851.4在HA-HI试验操作过程中，应准备好试验试剂、器材，按照试验步骤，提前配制好阿氏液、PBS液、1%鸡红细胞、病毒抗原、阳性血清，在完成HA试验后仔细观察抗原的最高稀释倍数，根据观察结果计算配制出4HAU抗原，HI试验与抗原回滴验证依次进行，抗原回滴验证结果出现抗原少、太少或太多的问题，则配制4HAU抗原环节出现误差，抗原回滴情况好则HI试验成功。

1 试验准备1.1 试剂禽流感病毒H5亚型（Re-8株）血凝抑制试验抗原、禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验阳性血清、PBS干粉、柠檬酸钠。

1.2 器材分析天平、超纯水仪、离心机、微量振荡器、注射器、离心管、三角烧杯、移液器及吸头、96孔V型微量反应板。

1.3 阿氏液配制称3.8g柠檬酸钠于三角烧杯中，加蒸馏水100mL。

1.4 PBS液配制按PBS干粉说明配制出1 000 mL PBS缓冲液。

1.5 1%鸡红细胞悬液制备取十分之一阿氏液于注射器中，采SPF公鸡血混匀。

用10倍血量的PBS液洗涤3次（高速离心），抽干清液，如SPF公鸡血量为1mL，则加30 mL PBS液，如SPF公鸡血量为2 mL，则加60 mL PBS液，以此类推。

1.6 病毒抗原、阳性血清按试剂要求加入蒸馏水2 mL。