细胞工程总结
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细胞工程的应用知识点总结一、医学领域1. 细胞治疗细胞工程在医学领域最为重要的应用之一是细胞治疗(Cell Therapy)。
通过细胞工程技术,科学家可以利用干细胞或其他类型的细胞来修复受损的组织或器官。
这种治疗方法在一些疾病的治疗中已经取得了一定的成功,比如心脏病、糖尿病、关节炎等。
而且,在未来,细胞治疗还有望成为一种治疗癌症等严重疾病的有效手段。
2. 人工器官细胞工程技术还可以用于生产人工器官,比如人工心脏、人工肾脏等。
这些人工器官的特点是可以与人体的细胞和组织兼容,因此可以在一定程度上代替受损的器官。
目前,人工器官技术还处于研发阶段,但有望在未来成为一种解决器官移植短缺问题的有效手段。
3. 疾病诊断细胞工程技术还可以用于疾病的诊断。
通过对细胞的分析和改造,科学家可以开发出一些新的生物标志物或生物传感器,以便用于疾病的早期诊断。
此外,利用细胞工程技术还可以研发出一些新的治疗方法,比如靶向治疗、基因治疗等。
二、生物技术领域1. 新药研发细胞工程技术在新药研发中有着不可替代的作用。
利用细胞工程技术,科学家可以在实验室中构建出一些疾病模型细胞,从而可以更好地研究疾病的发病机制和药物的作用机制。
此外,细胞工程技术还可以用于生产重组蛋白和抗体等生物药物。
2. 生物材料生产细胞工程技术还可以用于生产一些生物材料,比如纤维素、色素、维生素等。
这些生物材料的特点是能够在一定程度上取代化学合成的材料,因此有望成为未来替代石油化工产品的重要来源。
3. 基因编辑近年来,基因编辑技术的突破使得细胞工程领域发生了天翻地覆的变化。
利用基因编辑技术,科学家可以通过改变细胞的基因组,实现对细胞性状的精确调控。
这种技术在植物基因改良、动物基因改造以及人类基因疾病的治疗等方面都有着广泛的应用前景。
三、食品生产领域1. 细胞培养肉细胞工程技术可以用于生产细胞培养肉(Cultured Meat)。
利用细胞工程技术,科学家可以从动物干细胞中培养出肉类细胞,从而实现无需屠宰动物就可以生产出肉制品的目的。
细胞工程知识点总结细胞工程,是一门涉及生命科学和工程学的交叉学科,它关注的是利用细胞和分子技术来实现生物医学和生物工程的应用。
细胞工程的发展不仅对医学诊疗和疾病治疗领域有着重要的意义,也对生物工程的发展起到了推动作用。
在这篇文章中,我们将对细胞工程的一些重要知识点进行总结。
1. 细胞培养技术细胞培养技术是细胞工程的基础,它是指将细胞从体内或体外分离出来,在适当的环境条件下进行培养、增殖或分化。
细胞培养技术涉及到细胞培养基的配制、细胞传代方法、培养条件的调控等。
对于细胞工程的实验研究以及细胞药物的生产和培养,细胞培养技术都起到了至关重要的作用。
2. 细胞凋亡与细胞增殖细胞凋亡和细胞增殖是细胞工程中两个重要的生物学过程。
细胞凋亡是指受到内部或外部刺激后,细胞通过一系列的生化反应主动死亡。
细胞凋亡在细胞工程中有着广泛的应用,例如用于肿瘤治疗和组织工程的构建。
而细胞增殖则是指细胞的数量增加,通过细胞的分裂和增生来实现。
细胞增殖在组织修复和再生医学方面具有重要的意义。
3. 基因工程技术基因工程技术是一种将外源基因导入目标细胞中的方法,以实现特定功能或表达特定蛋白质的技术。
基因工程技术在细胞工程中被广泛应用,例如用于基因治疗和基因表达的研究。
基因工程技术的主要方法有转染法、电穿孔法、病毒介导转导等。
4. 细胞信号传导与细胞外基质细胞信号传导是细胞与细胞之间或细胞与环境之间进行信息传递的过程。
细胞信号传导是细胞工程领域研究的重点之一,它对细胞内信号传递路径的研究以及细胞外基质的调控具有重要意义。
细胞外基质是细胞外环境中的一种复杂的生物大分子结构,它不仅对身体组织的结构和功能有着重要的影响,同时也对细胞外基质中的信号传导起到了调控作用。
5. 组织工程与再生医学组织工程是一门将细胞、材料科学和工程学相结合的学科,它旨在通过构建人工组织和器官来替代或修复受损的组织和器官。
组织工程在细胞工程领域具有重要的地位,它涉及到细胞培养、支架材料的设计与构建、组织的生物学特性等。
细胞学说:一切细胞从单细胞到高等动植物都是由细胞组成的,细胞是生物体结构和功能组成单位。
细胞周期:从一次分裂结束到下一次分裂结束所经历的过程Go期细胞:暂时脱离细胞周期,不进行增殖,在适当刺激下可以重新进入细胞周期终端分化细胞:不可逆的脱离细胞周期,丧失分裂能力,但保持生理机械活动的细胞连续分裂细胞:在细胞周期中连续运转的细胞细胞分化:细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程。
持家基因:微生物生存所必须的基因组织特异性基因:组织中专一性表达的基因脱分化:细胞脱离原状态,恢复到分生状态再分化:脱分化细胞在特定条件下再次开始新的分化发育过程,最终形成组织器官个体胚状体:体细胞胚离体条件下,没有经过受精过程,但经过胚胎发育过程所形成的胚的离似物植物体细胞杂交:又称植物原生质体杂交,是指将不同来源的原生质体相融合并使之分化再生形成新的物种的技术贴壁细胞:是机体细胞在体内生存和生长发育的基本方式,有机体的多数细胞在体外培养时必须贴附在培养瓶等支持物上才能生长悬浮性细胞:血液中的淋巴细胞、白细胞及某些肿瘤细胞等在体外培养时不需要贴附在支持物上,而需要悬浮状态原代培养:从供体获得细胞后的首次培养传代培养:由原培养瓶中分离稀释后传到新的培养瓶的过程接触抑制:在体外培养的贴壁细胞中,当两个细胞由于移动而相互靠近发生接触时由细胞接触而抑制细胞运动的现象密度抑制:细胞接触汇合后,虽发生接触抑制,但只要营养充足,仍然能够进行增殖分裂,但当细胞密度进一步增大,培养液中营养成分减少代谢产物增多时,则发生密度抑制导致细胞分裂停止细胞株:经单细胞增殖而成的,具有特殊性质和标志物的细胞群细胞系:原代培养物开始第一次传代培养后的细胞群体干细胞:一类能自我更新和有分化潜能的细胞多克隆抗体:由同一抗原的多种抗原决定簇刺激机体产生多种混杂在一起的单克隆抗体单克隆抗体:由一种抗原决定簇刺激机体,由一个B淋巴细胞接受该刺激产生的抗体胞质体:去除了细胞核后的由膜包裹的无核细胞微细胞:由一条或几条染色体,外裹一薄层细胞质,由完整细胞包被的微小细胞1、粗面内质网:结合核糖体光面内质网:合成脂类3、细胞分化的基本特征:①分化过程不可逆②分化水平决定其生理状态③分化水平越高,其分化潜力越窄4、细胞分化的原因:①基因的选择性表达②细胞质的决定作用③细胞间的相互作用④环境对细胞分化的影响5、细胞全能性:①每个植物细胞都有其母体的全部遗传特性②每个细胞都可在特定条件下发育成与母体一样的植株6、多倍体育种:优点:根茎叶花果实较大,抗逆性强,产量高,代谢旺盛缺点:高度不育→减数分裂紊乱7、克隆方式:①胚胎细胞核移植②胚胎干细胞移植③胎儿成纤维细胞核移植④体细胞核移植8植物组织快速无性繁殖:①优势:快、无性②定义:利用离体培养技术,将来自优良植株的茎尖,叶芽、叶片、鳞片等器官组织和细胞进行离体培养在短期内获得大量遗传性状一致的植株③植物组织快速无性繁殖的途径:a、芽途径:顶芽或腋芽→完整植株b、器官发生途径:直接:外植体→不定芽或根→完整植株间接:外植体→愈伤组织→不定芽或根→完整植株c、胚状体途径:经过分化阶段区别:①区别于自然情况下所形成的无融合生殖胚,利于胚囊中的反足细胞,助细胞,珠心细胞形成的不定胚②区别于没有经过离体培养的合子胚,没有经过受精过程③一定经过胚胎发育过程,区别于器官发生途径直接途径:外植体→胚状体→完整植株间接途径:外植体→愈伤组织→胚状体→完整植株d、原球茎途径:外植体→兰球径→完整植株④快速无性繁殖的优势:a、保持杂合植株的优良特性b、可挽救濒临植物c、加速濒危植物的繁衍d、便于优秀种质材料的交换和贮运e、和植物脱病毒技术结合起来,可为生产上提供健康无毒植株9、植物脱病毒技术:脱毒方式原则:既能杀毒,又不损伤植物材料生物法:a、茎尖分生组织培养法①茎尖无维管素,胞间连丝不发达②茎尖组织进行细胞分裂,抑制病毒复制③植物激素的存在,抑制病毒复制b、珠心胚法:珠心胚不属于体细胞胚,不在离体条件下10、植物细胞的大规模培养:①培养方式:1悬浮细胞:成批培养、连续培养、半连续培养2固体培养:易将细胞核培养基分离(包埋法、吸附法)②意义:a、次生代谢产物的生产:药物、香料、色素中的酚类、生物碱、甾类、例如人参皂苷、长春花碱、紫草宁b、转基因植物细胞大规模培养以得药用蛋白质表皮生长因子、生长激素、干扰素11、原生质体的融合:①化学法:a、盐融合法b高钙高PH值法c、PEG法②物理法:电融合法12、多倍体育种方法:①生物法:a、远缘杂交b、体细胞杂交②物理法:a、温度休克法:略高于冷致死温度或略低于热致死温度处理材料,诱导产生多倍体的方法b、水静压法:较高水静压处理材料,抑制第一次或第二次卵裂中第二极体的放出c、化学法:秋水仙素抑制纺锤体的形成13、同源多倍体:无籽西瓜二倍体西瓜→(秋水仙素)四倍体*二倍体→三倍体14、为什么单倍体育种(单倍体优势):单倍体育种优点:①单倍体植物只有一套染色体,染色体上的每个基因都能显示相应的形状,是进行遗传分析的理想材料②单倍体植物细胞只有一套染色体,如将其染色体加倍即可获得纯合二倍体,可代替杂交育种过程中多次自交产生纯合品系过程,缩短育种年限缺点:①较二倍体植株各方面小②高度不育15、孤雄生殖:由精核在卵细胞内单独发育成单倍体①方式:a、花粉培养b、花药培养②过程:外植体的选择和消毒→组织培养单倍体植株→植株的鉴定→人工染色体加倍→组织培养→鉴定③花粉培养:优点:所得植株为单倍体植株缺点:组织培养难度大④花药培养:优点组织培养难度小缺点:花药壁、花丝干扰单倍体植株形成16、孤雌生殖:雌雄配子未经融合,由雌配子单独发育成种子的无性融合生殖①方式:a、物理法:高温、低温、射线b、化学法:马来酰肼苯乙酸二甲基亚砜c、生物法:延迟受粉异源花粉授粉②过程:外植体的选择消毒→组织培养单倍体植株→植物的鉴定→人工染色体加倍→组织培养→鉴定③单倍体鉴定:标记性状鉴定法标记在雄配子上没有标记17、外源基因导入受体方式:载体①农杆菌转化法:根瘤农杆菌的细胞中含有Ti质粒,Ti质粒上有一段DNA。
细胞工程精华总结(共22页)--本页仅作为文档封面,使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--细胞全能性:在多细胞生物中每个体细胞的细胞核具有个体发育的全部基因,只要条件许可,都可发育成完整的个体。
胚胎干细胞 (Embryonic stem cell)是指受精卵分裂发育成囊胚时,内层细胞团的细胞经分裂培养,即得到胚胎干细胞。
胚胎干细胞具有全能性,可以自我复制(或更新)并具有分化为体内所有组织的能力。
它是一种高度未分化细胞,具有发育的全能性,能分化出成体动物的所有组织和器官,括生殖细胞。
细胞工程 (cell engineering):是以细胞生物学和分子生物学为基础理论,采用原生质体、细胞或组织培养等试验方法或技术,在细胞水平上研究改造生物遗传特性,以获得具有新的性状的细胞系或生物体以及生物的次生代谢产物,并发展有关理论和技术方法的学科。
外植体(explant):把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官。
细胞系 (cell line): 原代培养物经首次传代成功后即成细胞系。
如果细胞系不能继续传代或传代次数有限,称为有限细胞系,它由原代培养中的许多细胞系列组成;如细胞系可连续传代,则称为连续细胞系,即已建成的细胞系。
细胞株 (cell strain):通过筛选或克隆化,且有特异标记的细胞,这些特性在以后的培养中必须持续存在。
这些特性包括具有一定的标记染色体,对某种病毒的敏感性或抗性及具有特殊的抗原性等。
细胞融合(cell fusion):又称体细胞杂交(somatic hybridiazation),是指两个或更多个相同或不同细胞通过膜融合形成单个细胞的过程。
转基因动物(transgenetic animal):指借助基因工程技术将外源基因导入受体动物染色体内,外源基因与动物基因整合后随细胞的分裂而扩增,在体内表达并能稳定地遗传给后代的动物。
单克隆抗体:只针对某一抗原决定簇的抗体分子称为单克隆抗体。
细胞工程的生物知识点总结1. 细胞结构与功能细胞是生命的基本单位,由细胞膜、质壁、细胞核、细胞质和细胞器等部分组成。
不同类型的细胞具有不同的结构和功能,请研究人员通过细胞工程技术对细胞的结构和功能进行深入研究,包括细胞的形态特征、生物化学特性、信号传导机制等。
2. 细胞培养技术细胞培养技术是细胞工程中的重要内容,主要包括细胞的分离、培养、传代、冻存和复苏等技术。
通过细胞培养技术,研究人员可以获取大量的同种或异种细胞用于实验研究和临床应用。
3. 细胞信号传导细胞信号传导是细胞与环境之间相互作用的过程,包括细胞对外界刺激的感知、传导和反应等。
研究人员通过细胞工程技术可以揭示细胞信号传导的机制,以及调控信号传导过程的方法和技术。
4. 细胞分化和再生细胞分化是指未分化的细胞在外部刺激下发生形态和功能上的改变,进而组成不同类型的成熟细胞。
细胞再生是指受损细胞的修复和更新过程,是细胞工程领域的研究热点之一。
5. 干细胞研究干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞,对于细胞工程和再生医学有着重要的意义。
研究人员可以通过细胞工程技术对干细胞的生物学特性和应用潜力进行深入研究。
6. 细胞治疗和再生医学细胞治疗是指利用细胞工程技术治疗疾病的方法,包括干细胞移植、细胞基因治疗、组织工程等。
再生医学是利用细胞工程技术再生、修复和替代受损或疾病组织器官的医学领域。
7. 细胞生物传感器细胞生物传感器是一类利用细胞作为传感元件来检测生物学和化学变化的传感器,具有灵敏度高、选择性好、动态范围广等特点,对于环境监测和疾病诊断有着重要的意义。
8. 细胞克隆技术细胞克隆是人工复制和培育大量相同细胞的技术,包括植物细胞克隆、动物细胞克隆和人类细胞克隆等。
研究人员可以通过细胞工程技术研究细胞克隆的机制和方法,以及开发新的克隆技术。
总之,细胞工程是一门富有挑战和前景的学科,涉及多个学科和领域,将为人类健康、环境保护和生物制造等领域带来新的科技突破和应用。
细胞工程知识点总结细胞工程的知识点主要涵盖细胞生物学、生物医学工程、材料科学、化学等多个领域的内容,下面将对一些重要的知识点进行总结和介绍。
一、细胞生物学1. 细胞结构和功能:细胞是生物体的基本单位,包括细胞质、细胞核、细胞膜等结构组成,具有营养吸收、代谢、生长繁殖、分化等功能。
2. 细胞信号传导:细胞通过受体、信号分子等进行信号传导,调控生物功能和代谢活动。
3. 细胞分化:在不同环境条件下,细胞可以分化成不同类型的细胞,如干细胞可以分化成心肌细胞、神经细胞等。
4. 细胞凋亡和增殖:细胞在受到损伤或者环境刺激时,会发生凋亡或者增殖,维持细胞组织的稳态。
二、生物医学工程1. 细胞培养技术:包括细胞分离、培养基配制、细胞传代、细胞冻存等技术,用于大规模的生物制品的生产。
2. 细胞毒性和安全性评价:评估材料或者药物对细胞的毒性和安全性,保证产品的安全性和有效性。
3. 细胞治疗和干细胞技术:通过干细胞移植、基因修复等技术,用于治疗各种疾病和损伤。
4. 人工器官和组织工程:将细胞和生物材料结合,构建人工器官和组织,用于替代受损的组织和器官。
三、材料科学1. 生物材料的设计和制备:设计和制备适合细胞生长的生物材料,如生物降解材料、生物亲和材料等。
2. 生物材料的表征和评价:通过表面形貌、力学性能、生物相容性等评价生物材料的性能。
3. 细胞-材料相互作用:研究细胞和材料之间的相互作用机制,改善生物材料的生物相容性和使用性能。
四、化学1. 细胞药物递送系统:设计纳米级的载体或者纳米颗粒,用于细胞内的靶向递送和释放药物。
2. 细胞标记和成像技术:利用高灵敏度的成像设备和生物标记物,在活细胞和组织中进行细胞成像和追踪。
3. 细胞信号调控:通过合成化学的方法来调控和干预细胞信号传导系统,研究细胞功能和代谢途径。
细胞工程的发展趋势主要包括以下几个方向:1. “定制化医疗”:根据个体的基因组信息和生理状态,设计和生产个性化的治疗产品和医疗器械,提高治疗效果。
高三生物细胞工程知识点总结笔记细胞工程作为生物学领域的一个新兴学科,研究的是如何利用生物体内的微生物、细胞等进行工程化的技术应用。
本文将从细胞工程的基本概念入手,介绍一些常见的细胞工程技术和应用,以及细胞工程带来的发展前景。
一、细胞工程的基本概念细胞工程是指将细胞作为工程器具,利用现代生物技术改造和利用细胞的过程。
它包括三个方面的内容:细胞培养技术、细胞操作技术和细胞提取技术。
细胞工程的基本原理是通过对细胞的处理和加工,改变其性能和功能,使其在生产、医学和环境等方面发挥重要作用。
二、常见的细胞工程技术1. 基因工程技术基因工程技术是指对细胞的遗传物质进行改造的技术。
常见的基因工程技术有基因克隆、基因转导、基因敲除等。
通过这些技术,可以改变细胞内的基因组成,进而改变细胞的性状和功能。
2. 细胞培养技术细胞培养技术是指利用人工培养基和特定条件,使细胞在体外进行繁殖和增殖的技术。
细胞培养技术主要包括细胞的分离、培养和保存等步骤。
通过细胞培养技术,可以大量生产细胞用于药物研究或生物制品的生产。
3. 细胞信号转导技术细胞信号转导技术是指利用细胞内信号传递分子进行细胞功能调控的技术。
常见的细胞信号转导技术有蛋白激酶酶活性检测、细胞凋亡检测和细胞周期分析等。
通过这些技术,可以研究细胞内的信号传递机制,进一步了解细胞的生命周期和功能。
三、细胞工程的应用1. 医学领域细胞工程在医学领域的应用非常广泛。
通过细胞工程技术,可以培育人工皮肤、修复组织和器官等。
此外,细胞工程还能用于肿瘤的诊断和治疗,例如通过基因工程技术制备靶向抗肿瘤药物。
2. 环境领域细胞工程在环境领域的应用主要包括环境污染物的检测和处理。
例如,利用细胞工程技术可以研究水体中的微生物污染和细菌降解污染物的能力,进而制定相应的环境保护政策和措施。
3. 生物制药领域细胞工程在生物制药领域的应用非常重要。
通过基因工程技术,可以将目标基因导入细胞中,使其产生特定的蛋白质,进而用于药物的生产。
《细胞工程》知识点总结一、细胞工程(Cell Engineering):在体外对生物的细胞进行生长与分化的调控、遗传重组与改良,使其生产出人类所需要的产品。
包括:细胞培养、细胞融合、细胞器移植、核质移植、染色体移植、转基因等产品:生物的组织、器官、个体;抗体、多肽药物、蛋白质、酶;天然药物、色素、香精;等二、生物工程包括:发酵工程、酶工程、细胞工程、基因工程、蛋白质工程.三、1996年Dolly羊的克隆是通过核移植技术,最后在体内生长、分化、发育而成的。
四、植物组织培养:在人工培养基上无菌培养整株植物或植物的器官、组织、细胞或原生质体。
又称为无菌培养(aseptic culture)、离体培养(in vitro culture)。
五、植物组织培养的类型:1、植株培养(Plant Culture):在容器(玻璃瓶、透明塑料瓶等)中无菌培养完整的植株。
植株来源:由种子无菌萌发而来;通过植物器官、组织、细胞再生而来。
在快速繁殖中,后期的成苗和壮苗阶段属于植株培养。
(一般时间较短)2、胚培养(Embryo Culture):无菌培养植物的成熟胚或未成熟胚,使其形成正常的植株.目的:错误!促进胚的提早萌发,缩短育苗时间;错误!克服远源杂种胚的夭折,以获得新的育种材料;错误!在科学研究中,用胚培养所得到的幼苗作为其它试验的材料。
3、器官培养(Organ Culture):无菌培养植物的根、茎、叶、芽、花、果等器官,使其增殖或形成其它的组织或器官等。
4、组织培养(Tissue Culture):指无菌培养植物各种组织(如分生组织、形成层、木质部、韧皮部、皮层、薄壁组织、胚乳等),或由外植体分化形成的愈伤组织(callus),使其增殖或者分化。
注:Callus(愈伤组织):具有旺盛分裂能力,但没有组织和器官分化的细胞群。
5、花药与花粉培养:无菌培养植物的花药(带花粉)或花粉,形成单倍体植株。
补充:有效的育种辅助手段:单倍体植株获得以后,通过染色体加倍,即得到可以稳定遗传的纯和二倍体,缩短植物育种年限。
细胞工程:以生物细胞或组织为研究对象,应用生命科学理论,借助工程学原理与技术,有目的的利用或改造生物遗传特性,以获得特定细胞、组织、产品或新型物种的一门综合性学科。
1.微繁殖:是指在离体培养条件下、将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进行无菌培养,经过不断地切割和重复培养,使其增殖并再生形成完整植株,在短期内获得大量遗传性均一的个体的方法。
2.繁殖系数:经一次增值培养或在一定时间段内由一个繁殖体所增殖获得的总繁殖体数或苗数。
3.玻璃化:也称超水化作用,是离体培养过程中试管苗发生形态、生理和代谢异常的现象。
4.褐变:是指组织培养中,由于材料被切割而使多酚氧化酶活化将组织中的酚类物质氧化形成棕褐色的醌类物质,并向培养基中扩散,抑制培养物生长甚至导致其死亡的现象。
5.原球茎:兰科植物的种子在萌发初期并不出现胚根,只是胚逐渐膨大,以后种皮的一端破裂,膨大的胚呈小圆锥状,称作原球茎。
6.茎尖分生组织:指茎尖最幼龄叶原基上方的由2或3层分生细胞组成的很小区域、一般最大直径不超过0.1mm,长度0.25mm,最小的茎尖长度仅有几十微米,有时也称顶端分生组织。
7.不定芽:相对于顶芽和腋芽、由植物的其他部位或器官、组织上通过器官发生重新形成的、无固定着生位置的芽统称为不定芽。
细胞细胞工程知识点绪论研究内容(根据操作对象):1)器官组织和细胞培养2)原生质体培养3)植物胚胎培养4)动物胚胎工程5)转基因动植物6)胚胎干细胞7)染色体工程研究内容(研究水平);个体、器官、组织、细胞、亚细胞、分子等不同研究层次动物细胞发展经历了哪些阶段?答:①细胞培养技术②细胞融合技术③动物胚胎移植技术④体外受精技术⑤动物克隆技术⑥转基因动物技术⑦胚胎干细胞技术生物工程:1)发酵工程2) 基因工程3)酶工程4)细胞工程5)蛋白质工程(第二章没有放进来!!!!)第三章培养原理细胞学说:1838年,主要观点:细胞是生物体的基本结构单位,由它构成整个生物个体。
细胞工程学第三版知识点总结归纳一、细胞工程概述。
1. 定义。
- 细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的理论和方法,按照人们的设计蓝图,进行在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。
2. 研究内容。
- 动植物细胞与组织培养,细胞融合(如植物体细胞杂交、动物细胞融合),细胞核移植,染色体工程,胚胎工程等。
3. 细胞工程的发展历程。
- 起步阶段:20世纪初,植物组织培养技术开始发展,Haberlandt提出细胞全能性概念,为细胞工程奠定了理论基础。
- 发展阶段:20世纪中叶后,植物细胞工程取得了一系列成果,如植物体细胞杂交等。
动物细胞工程也逐渐兴起,包括动物细胞培养技术的不断完善等。
- 现代细胞工程:随着基因工程等现代生物技术的发展,细胞工程与之相结合,在生物制药、动植物品种改良等多方面发挥着越来越重要的作用。
二、植物细胞工程。
1. 植物细胞的全能性。
- 概念:植物的每个细胞都包含着该物种的全部遗传信息,从而具备发育成完整植株的遗传能力。
- 实现全能性的条件:细胞处于离体状态、提供适宜的营养物质(如大量元素、微量元素、有机物等)、植物激素(如生长素和细胞分裂素的比例合适)、适宜的环境条件(温度、光照、pH等)。
2. 植物组织培养。
- 基本过程。
- 外植体选取:通常选择植物的幼嫩组织或器官,如茎尖、根尖、叶片等。
- 消毒:对外植体进行严格的消毒处理,以防止微生物污染。
- 接种:将消毒后的外植体接种到含有营养物质和植物激素的培养基上。
- 脱分化:外植体在适宜条件下形成愈伤组织,愈伤组织细胞的特点是排列疏松、无规则,是一种高度液泡化的薄壁细胞。
- 再分化:愈伤组织在一定条件下重新分化形成根、芽等器官,进而发育成完整植株。
- 培养基的组成。
- 大量元素:包括N、P、K、Ca、Mg、S等,提供植物生长所需的基本营养。
- 微量元素:如Fe、Mn、Zn、Cu、B、Mo、Cl等,虽然需求量少,但对植物生长发育不可或缺。
一、名词解释:
细胞工程(cell engineering)是以细胞生物学和分子生物学为基础理论,采用原生质体、细胞或组织培养等试验方法或技术,在细胞水平上研究改造生
物遗传特性,以获得具有新的性状的细胞系或生物体以及生物的次生代谢产物,并发展有关理论和技术方法的学科。
1.脱分化:脱分化:具有特异结构和功能的细胞转化成没有特异结构和功能的细胞的过程称为脱分化。
(如根、茎、叶)
2.饲喂培养:将饲喂的细胞用培养基作平板,此平板称饲喂层,用X射线或紫外线照射,使核失活但细胞存活,然后将原生质体以液体浅层培养或平板技术铺在饲喂层上。
3.核重编成:使在体细胞中被关闭,而在正常胚胎发育中表达的基因重新被激活的过程。
4.细胞株:通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株(Cell Strain
5.热力灭菌:主要是利用高温使菌体变性或凝固,酶失去活性,而使细菌死亡。
6.人工种子:是将植物立体培养产生的体细胚包埋在含有营养成分和保护功能的物质中,在适宜的条件下发芽出苗
7.植板率:每个平板接种细胞总数中形成细胞团的百分率。
植板率=每平板形成的细胞团数/每平板接种的细胞总数
8.胚胎移植: 是指将雌性动物的早期胚胎,或者通过体外受精及及其他方式得到的胚胎,移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内,使之继续发育为新个体的技术。
9.体细胞无性系:以单体细胞为材料,采用无性繁殖法繁殖的品种(品系)称无性系品种(品系),简称无性系
10.过滤灭菌:过滤灭菌法,即用筛除或滤材吸附等物理方式除去微生物
仓鼠细胞Hamster cells 白细胞抑制因子leukocyte inhibitory factor, LIF 干细胞Stem cells
二、简答
1.细胞活力鉴定方法:取纯化后的植物原生质体悬浮液0.5ml置于小试管中,加入含2mg/L 的FDA的丙酮溶液,使最终浓度为0.01%,混匀,放置5分钟,荧光显微镜观察(激发光滤光片QB-24,压制滤光片JB-8),有活力原生质体发绿色荧光,不产生荧光为无活力。
对于叶肉、子叶、下胚轴而言,由于叶绿素的关系,原生质体发黄绿色荧光的为有活力的,发红色荧光的为无活力的。
此外,还可用细胞壁染色法来鉴定活力.
2.双层培养法固体培养和液体培养浅层培养相结合的方法,效果最佳。
原生质体采用平板培养方法包埋在培养皿底层,上面再加入相同成分的液体培养基,暗培养。
需更换新鲜液体培养基。
特点:原生质体分布均匀,有利于分裂,易获单细胞株系,能除去抑制分裂的有害物质,细胞植板率高。
原生质体易受热伤害,易破碎
3.体细胞杂交应用:两个遗传性状不同的体细胞融合的过程。
应用:体细胞杂交能克服有性杂交的配子不亲合性,获得一些含有另一亲本非整倍体的杂种或胞质杂种。
它们的遗传变异范围极广,大大丰富了育种的原始材料,从而创造出自然界中没有的新物种。
如马铃薯与番茄融合得到的薯番茄和番茄薯,白菜甘蓝。
4.杂种植株鉴定:通过形态学、细胞学、分子生化、抗性鉴定、育性鉴定、叶绿
体、线粒体、核DNA、rubp羧化酶分析和同工酶酶谱分析等方法,对获得的再生植株进一步分析和鉴定以证实再生植株的真实性。
5.体细胞杂交分类:按照所用亲本原生质体的性质分为三类:常用的体细胞杂交、配子间的细胞杂交、配子体细胞杂交。
6.物理灭菌方法、特点:A.热力灭菌是最常用的方法包括干热灭菌和湿热灭菌法——1.干热灭菌对象不含水、耐高温器皿、工具等; 2.湿热灭菌热蒸汽,穿透力强、灭菌时间短的一种常用方法(a.间歇灭菌对象不耐高温100度的高温物品或有机溶剂压力100°30min 取出后30°培养24min b高压灭菌时间20min121度0.05-0.15kpa灭菌)B辐射灭菌常用紫外线避免直接在灯下操作C过滤灭菌孔径0.45酶系或小量液体培养基0.20毫米滤膜出去病毒以外的所有微生物
7.无菌操作规程1.每次无菌操作前30min,首先用70%酒精棉擦拭超净工作台,然后把所需的接种器具和培养基等移入超净工作台,打开紫外灯照射接种室20-30min后,再开启工作台气流20-30min 2工作人员手洗干净后进入缓冲室,穿上无菌工作服,然后用70%酒精喷洒全身3进入无菌操作室,检查接种所用的物品4接种前,用70%酒精擦拭双手,按常规操作在酒精灯上进行各种操作5.对清洗过的植物材料进行灭菌,然后进行接种6接种过程不要与人交谈,将器具拿到操作台外,接种时用酒精擦拭后再酒精灯上用外焰灼烧,放凉后再用7工作结束后,及时将接种的材料移出培养室,清理工作台,打开紫外灯照射半小时后将其关闭。
8.体细胞核移植过程:细胞核移植技术,就是将供体细胞核移入除去核的卵母细胞中,使后者不经过精子穿透等有性过程即无性繁殖即可被激活、分裂并发育成新个体,使得核供体的基因得到完全复制。
9.治疗性克隆步骤:首先取病人体细胞核,移植到去核的成熟受体卵母细胞2在早期胚胎形成后,从中分离获得人ES细胞3对ES细胞进行基因修饰和定向分化研究4将定向分化的细胞移给病人
10.诱导变异方法:物理、化学诱变和转座子插入
11.变异的细胞学基础细胞遗传学基础aDNA重复复制但不发生在细胞分裂,其结果是染色体体数目增加,形成同源多倍体.一些中间类型的倍数性的形成,可能是由于DNA经过重复复制后,在以后的复制中出现非同步复制或和融和所致.b.染色体结构变异是体细胞变异的另一重要类型。
染色体断裂与重组是离体培养中染色体结构变异的主要原因之一,也是体细胞变异中经常发生的现象,其细胞学特征是分裂中期出现断裂的染色体片段、落后染色体易位及染色体桥,其结果是在体细胞中出现染色体易位、缺失、倒位等多种类型的结构变异。
c近年的研究认为,染色体断裂与DNA甲基化程度有关,增加DNA甲基化,也引起染色体断裂.分析认为,甲基化程度曲增加可能抑制DNA的复制效率,使得DNA 复制不能同步,从而造成后期桥的产生和染色体的断裂.
分子遗传学基础:a碱基突变dna序列中碱基的改变,突变的碱基序列处于结构基因的位置或调控序列的位置导致bdna序列的选择性扩增和丢失基因的选择性扩增是为满足细胞短期内的某种需要而产生足够基因产物的一种手段;dna序列的丢失多发生在rDNA及其他们的间隔序列,某些重复序列也易发生c 转座子活化体细胞无性系变异的原因之一dDNA甲基化和去甲基化不仅能通过调控基因的表达与关闭来调控生物的发育,也可以通过甲基化途径来适应环境对生物体的压力
12超低温保护技术应用快冻法慢冻法逐级冰冻法干冻法包埋脱水法
意义1保持细胞培养物的遗传稳定性2长期保存植物种质资源3长期保存农作物的优良品种激情育种亲本材料的种质4建立长期保存的茎尖分生组织种质库及无病毒原种5保存实验材料,防止再培养中的遗传变异
超低温保护试剂:冷冻诱导保护性脱水的超低温保存和玻璃化处理的超低温保存是主要方法液氮DMSO和高分子量化合物聚乙烯二醇海藻糖
13提高次生代谢产物的途径:a选择适宜的起始材料--种类、部位栀子(ZHIZI)(Gardenia jasminoides)胚轴银杏子叶当归根红豆杉幼嫩的茎茜草叶柄b培养基既要满足植物细胞的生物量增长,还要满足细胞合成及积累次生产物的需要c前体的应用对某一目的产物来讲可能有多种前体物质,同一种前体物质又可能有多条代谢路径从而形成不同的代谢产物。
针对其合成的关键生化过程进行前体物质添加。
d激发子的应用也称诱导子,是指能够诱导植物细胞中某些反应,并形成细胞特征性自身反应的分子非生物激发子,如辐射、金属离子、茉莉酸类似物(茉莉酸甲酯)等,生物诱发子内源性(来源于植物结构的化合物)和外源性(包括菌丝、微生物机体)f培养技术的选择包括反应器的选择和培养方式的选择培养技术的选择不仅要考虑细胞生长和产物积累的效率,同时还应考虑技术基础和生产成本
14.影响悬浮培养因素:a起始愈伤组织的质量
b接种细胞密度:悬浮细胞的起始密度一般在0.5~2.5×105个细胞/毫升。
接种初期的细胞密度过低往往使延迟期加长。
c培养条件:培养基、方式、温度、继代周期。
•培养基
–应用条件培养基(生长过愈伤组织或悬浮细胞的液体培养基)提供单细胞生长和分裂所需的特殊代谢物。
–基本培养基成分的调节视不同的培养目的而定培养基设计时,一般均以诱导愈伤组织形成的培养基为基础进行调整。
常用的培养基
有MS、B5、LS 、N6等。
–植物激素和其他附加成分的应用
•培养方式:摇瓶,反应器(气动式、搅拌式);分批培养,半连续培养和连续培养
•温度25℃
•继代周期
–指具有一定起始密度的细胞,从开始培养到细胞数目和总重量增长停止的一个过程。
–培养周期的长短是由起始细胞密度、延迟期的长短、生长速率等决定。
–继代培养(Subculture):继初代培养之后的连续数代的扩繁殖培养过程。
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