[小学]南京师范大学生命科学学院2012年《细胞工程》期末重点总结

细胞工程知识点总结细胞工程，是一门涉及生命科学和工程学的交叉学科，它关注的是利用细胞和分子技术来实现生物医学和生物工程的应用。

细胞工程的发展不仅对医学诊疗和疾病治疗领域有着重要的意义，也对生物工程的发展起到了推动作用。

在这篇文章中，我们将对细胞工程的一些重要知识点进行总结。

1. 细胞培养技术细胞培养技术是细胞工程的基础，它是指将细胞从体内或体外分离出来，在适当的环境条件下进行培养、增殖或分化。

细胞培养技术涉及到细胞培养基的配制、细胞传代方法、培养条件的调控等。

对于细胞工程的实验研究以及细胞药物的生产和培养，细胞培养技术都起到了至关重要的作用。

2. 细胞凋亡与细胞增殖细胞凋亡和细胞增殖是细胞工程中两个重要的生物学过程。

细胞凋亡是指受到内部或外部刺激后，细胞通过一系列的生化反应主动死亡。

细胞凋亡在细胞工程中有着广泛的应用，例如用于肿瘤治疗和组织工程的构建。

而细胞增殖则是指细胞的数量增加，通过细胞的分裂和增生来实现。

细胞增殖在组织修复和再生医学方面具有重要的意义。

3. 基因工程技术基因工程技术是一种将外源基因导入目标细胞中的方法，以实现特定功能或表达特定蛋白质的技术。

基因工程技术在细胞工程中被广泛应用，例如用于基因治疗和基因表达的研究。

基因工程技术的主要方法有转染法、电穿孔法、病毒介导转导等。

4. 细胞信号传导与细胞外基质细胞信号传导是细胞与细胞之间或细胞与环境之间进行信息传递的过程。

细胞信号传导是细胞工程领域研究的重点之一，它对细胞内信号传递路径的研究以及细胞外基质的调控具有重要意义。

细胞外基质是细胞外环境中的一种复杂的生物大分子结构，它不仅对身体组织的结构和功能有着重要的影响，同时也对细胞外基质中的信号传导起到了调控作用。

5. 组织工程与再生医学组织工程是一门将细胞、材料科学和工程学相结合的学科，它旨在通过构建人工组织和器官来替代或修复受损的组织和器官。

组织工程在细胞工程领域具有重要的地位，它涉及到细胞培养、支架材料的设计与构建、组织的生物学特性等。

细胞工程：按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性生物工程。

一、无菌操作1、无菌操作时注意事项：1、点燃酒精灯，所有操作均在火焰近处并经过烧灼进行；2、冷却后才能使用；3、操作时，打开试管盖，进行烧灼灭菌，但是时间要短。

在火焰上烧瓶口。

保证容器倾斜。

4、进行操作时动作要准确敏捷，但是不宜太快，防止空气流动，增加污染的机会；5、超净工作台上的器具和用品要摆放合理。

6、操作时器具不能触及瓶口以防止污染；7、不要说话；8、接种时在近火焰处打开瓶口，使瓶倾斜，以免空气中微生物落入瓶中9、整个接种操作应在近火焰处进行，且动作要迅速10、防止操作带来的污染接种过程中尽可能达到悬空要求11、接种时不得用手接触瓶盖内壁或瓶口12、瓶盖朝上放，接种完毕后立即盖好瓶口;13、接种完一瓶用火烧用具以防止交叉污染产生。

14、种子和分生组织培养时通常将其贴放在培养基表面，，以保证供氧充足。

15、接种植株茎段时注意形态学下端插入培养基内，而形态学上端露于空气中.16.污染材料应及时清除，高压灭菌。

2、无菌室 1.要求：密封、防尘、防菌，2.结构：更衣间、缓冲间、操作间，3.空气消毒：紫外灯或无臭氧紫外线消毒器， 4.操作：在超净工作台上.（超净工作台，侧流式：垂直式，气流由左侧或右侧通过工作台面流向对侧，也有从上向下或从下向上流向对侧。

有挡板。

外流式：水平式，净化的空气面向操作者流动，多为开放式，没有防护挡板，易污染。

）二、动物细胞工程1.细胞贴壁率：细胞贴壁率又称接种存活率，用于观察贴壁附着生长细胞，主要反映细胞的生存能力和部分底物材料的相容性。

2、细胞周期：也称细胞分裂周期，是指一个细胞经生长、分裂增殖成两个细胞所经历的全过程。

3、细胞系：由原代培养产生的能进行无限次传代培养的细胞群。

4、细胞株：是指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。

细胞工程名词解释：细胞工程：是应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。

植物组织培养：将植物组织在适当培养条件下诱导长成完整植株的技术。

试管植物：植物组织培养再生的植物。

器官发生：离体培养的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根、不定芽等器官的过程。

细胞全能性：在多细胞生物每个体细胞的细胞核具有个体发育的全部基因，具有发育成完整个体的潜力。

细胞脱分化：已有特定结构和功能的植物组织的细胞在一定条件下被诱导改变原有的发育途径，逐步失去原有的分化状态，转变为具有分生能力的胚性细胞的过程。

愈伤组织：脱分化后的细胞经过细胞分裂产生无组织结构、无明显极性的松散的细胞团。

外植体：植物体上切取下来进行培养的部分组织或器官。

体细胞胚（胚状体）：离体培养条件下，没有受精过程而形成的胚胎类似物。

胚性细胞：细胞悬浮培养中，聚集成簇、成团的体积小而胞质致密细胞，具有成胚能力。

原生质体：去除细胞壁后裸露的球形细胞。

大量元素：植物需要量或含量较大的元素。

如氮、硫、磷、钾、钙、镁。

钾对酶有活化作用；钙在植物信号传导中有重要作用；镁是叶绿素的组成成分。

微量元素：植物正常生长发育极少需要的元素。

铁、锰、铜、锌、氯、硼、钼。

这些元素对于蛋白或酶的生物活性十分重要。

肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素利用等方面具有促进作用，并能刺激细胞快速生长。

腺嘌呤是合成细胞分裂素的前体物质之一。

添加腺嘌呤能促进细胞合成分裂素，有利于细胞的分裂和分化，促进芽的形成。

植物激素包括：生长素、细胞分裂素、赤霉素、乙烯等。

生长素：是一类含有一个不饱和芳香族环和一个乙酸侧链的内涵激素。

细胞分裂素：一类促进细胞分裂、诱导芽的形成，并促进其生长的植物激素。

分裂素大多为嘌呤族衍生物，其生理作用主要是引起细胞分裂，诱导芽的形成和促进芽的生长。

常使用的分裂素有6-苄氨基嘌呤（6-BA）、激动素（KT）、玉米素。

《细胞工程》教学大纲一、课程在教学中的地位、作用细胞工程是现代生物技术的重要组成部分，同时也是现代生物学研究的重要技术工具。

要求学生通过本课程的学习掌握生物组织、器官及其细胞离体培养的原理与技术，为从事生物学领域的相关研究及其与细胞工程有关的生物技术产业奠定良好的理论和技术基础。

理论知识方面，重点掌握本学科的基本原理和基本技术。

即：细胞全能性学说在细胞工程中的指导作用；培养条件下的细胞分化和器官发生的调控；离体培养条件下的遗传与变异特点。

掌握不同组织、器官的培养特点和控制方法。

了解细胞工程的各类技术在现代生物学与生物技术领域的应用途径与发展潜力。

实践技能方面，重点掌握细胞工程的基本操作技术—无菌操作；掌握外植体选择、愈伤组织和胚状体诱导、器官发生调控等基本技术；了解细胞大批量培养方法，原生质体分离与体细胞杂交技术。

二、课程内容、基本要求第1章绪论基本要求：全面了解细胞工程与现代生物技术的关系；了解细胞工程的发展与相关学科的联系；了解细胞工程在现代世界经济中的潜力。

1.1 细胞工程定义1.2 细胞工程基本技术1.3 细胞工程发展简史1.4 细胞工程的主要应用第2章细胞工程中常用设备基本要求：掌握细胞工程中常用的部分仪器设备及常用器具，掌握常用器材的清洗方法。

2.1 实验室常用仪器设备2.2 常用器具2.3 常用器材的清洗第3章无菌技术基本要求：初步掌握细胞工程实验技术中的灭菌方法以及无菌操作的原理与操作方法。

掌握实验室常见污染原因及预防措施。

3.1 常用灭菌方法及原理3.2 无菌操作注意事项3.3 实验室生物安全第4章植物细胞工程的基本原理和技术基础基本要求：了解和掌握植物细胞培养的重要概念，并掌握植物组织培养培养基配制及所需环境条件，掌握组织培养中外植体的选择、消毒和接种培养方法。

4.1 植物细胞工程基本原理4.2 植物细胞培养的营养和环境条件4.3 外植体的选择及消毒4.4 外植体的切取和培养第5章植物离体快速繁殖和脱病毒技术基本要求：了解和掌握植物离体快速繁殖的一般技术，掌握植物离体脱毒的方法及脱病毒植株的鉴定方法。

细胞工程—期末总复习第一章：细胞工程简介主要问题：1. 细胞工程的定义与特点2. 细胞工程的应用本章小结：1. 什么是细胞工程2. 细胞工程包含哪几个主要的研究内容？（参照细胞工程的应用）细胞工程是指主要以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新品种的一门综合性科学技术。

研究对象：动植物细胞（原生质体），也包括细胞器、染色体、细胞核、胚胎。

细胞工程特点：综合性（生物、材料、机械等多学科交叉）、应用性（更侧重于产品和技术）、前沿性（现代生物技术和生命科学技术的热点前沿）、争议性应用：1．动植物人工繁殖技术植物组织培养、人工种子、试管动物、克隆动物2. 新品种培育通过细胞工程技术对现有生物的遗传性状进行改良和培育新型物种。

包括细胞水平（原生质体诱变、细胞融合）、细胞器水平上的细胞重组、染色体水平（多倍体、单倍体育种）3. 生物工程制品生产技术利用动植物细胞、组织培养或者转基因动植物反应器生产生物制品（食品、药物、化工原料、生物能源）。

包括以杂交瘤细胞培养大量制备单克隆抗体、动物细胞培养生产疫苗、转基因动植物生物反应器4. 细胞疗法与组织修复利用培养的细胞或者离体再造的组织修复受损细胞、组织或器官的技术第二章植物人工繁殖主要内容：1. 组织培养再生植物2. 人工种子本节重要问题：1. 激素在细胞分化中的调节作用2. 植物经组织培养的再生途径细胞全能性：分化细胞保留全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜力。

细胞分化；细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程，包括时间和空间上的分化。

脱分化（去分化）：分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程，即分化的细胞在适当条件下转化成胚性状态而重新获得分裂能力的过程。

愈伤组织：脱分化后的植物细胞经过细胞分裂产生无组织结构、无明显极性的松散细胞团。

细胞工程期末复习（必考）细胞工程：研究真核细胞的核—质关系以及细胞器、细胞质基因转移的技术。

组织工程：研究开发用于修复或改善人体病损组织或器官的结构、功能的生物活性替代物的一门科学。

染色体工程：是按照一定的设计，有计划的消减添加或替换同种或异种染色体从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术。

细胞连接：使细胞间的联系结构。

细胞表面的特化结构或特化区域，是细胞间建立长期组织上联系的结构基础。

涉及细胞外基质蛋白、跨膜蛋白、胞质溶胶蛋白、细胞骨架蛋白等。

细胞全能性：指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体成长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。

细胞分化：指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程。

包括时间和空间上的分化。

脱分化：又称去分化，指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程。

即分化的细胞在适当条件下转变为胚性状态而重新获得分裂能力的过程。

再分化：是指在离体条件下，无序生长的脱分化细胞在适当条件下重新进入有序生长和分化状态的过程。

细胞培养：指从体内组织分离细胞，模拟体内环境，在无菌适当的条件使其生长繁殖的技术。

人工种子：又称合成种子或体细胞种子，指将植物离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中形成的类似种子的颗粒。

植物胚胎培养：指对植物的胚及胚器官进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。

试管受精：指在无菌条件下离体培养未受精子房或胚珠和花粉萌发产生的花粉管进入胚珠从而完成受精过程。

细胞核移植：一种利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内的技术。

体外受精：指使哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。

胚胎移植:指将受精卵或发育到一定阶段的胚胎移植到与供体同时发情排卵但为配种的受体母畜输卵管或子宫的技术。

人工受精：指将采集的精子注入人发情处理的母体内完成受精过程。

试管婴儿：指将卵子与精子取出在体外受精，培养发育成早期胚胎，再植回母体子宫内发育出生的婴儿，也就是采用体外受惊联合胚胎移植技术培育的婴儿。

《细胞工程》知识点总结一、细胞工程(Cell Engineering）:在体外对生物的细胞进行生长与分化的调控、遗传重组与改良，使其生产出人类所需要的产品。

包括：细胞培养、细胞融合、细胞器移植、核质移植、染色体移植、转基因等产品：生物的组织、器官、个体；抗体、多肽药物、蛋白质、酶；天然药物、色素、香精；等二、生物工程包括:发酵工程、酶工程、细胞工程、基因工程、蛋白质工程.三、1996年Dolly羊的克隆是通过核移植技术，最后在体内生长、分化、发育而成的。

四、植物组织培养：在人工培养基上无菌培养整株植物或植物的器官、组织、细胞或原生质体。

又称为无菌培养（aseptic culture）、离体培养(in vitro culture）。

五、植物组织培养的类型:1、植株培养(Plant Culture）：在容器(玻璃瓶、透明塑料瓶等）中无菌培养完整的植株。

植株来源：由种子无菌萌发而来；通过植物器官、组织、细胞再生而来。

在快速繁殖中，后期的成苗和壮苗阶段属于植株培养。

（一般时间较短）2、胚培养（Embryo Culture）：无菌培养植物的成熟胚或未成熟胚，使其形成正常的植株.目的:错误!促进胚的提早萌发，缩短育苗时间；错误!克服远源杂种胚的夭折，以获得新的育种材料；错误!在科学研究中,用胚培养所得到的幼苗作为其它试验的材料。

3、器官培养（Organ Culture）：无菌培养植物的根、茎、叶、芽、花、果等器官,使其增殖或形成其它的组织或器官等。

4、组织培养(Tissue Culture):指无菌培养植物各种组织（如分生组织、形成层、木质部、韧皮部、皮层、薄壁组织、胚乳等），或由外植体分化形成的愈伤组织（callus）,使其增殖或者分化。

注:Callus（愈伤组织）:具有旺盛分裂能力,但没有组织和器官分化的细胞群。

5、花药与花粉培养：无菌培养植物的花药（带花粉）或花粉,形成单倍体植株。

补充：有效的育种辅助手段：单倍体植株获得以后，通过染色体加倍，即得到可以稳定遗传的纯和二倍体，缩短植物育种年限。

细胞工程重点归纳植物部分归纳一、细胞全能性1.定义：指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体生长，发育成所需要的全部信息，细胞经分裂和分化后仍具有形成完整有机体的潜能或特性。

2.分类：根据动物细胞全能性大小，可分为全能性细胞（如动物早期胚胎细胞），多能性（如原肠胚细胞），专能性（如造血干细胞）；根据植物细胞表达全能性大小排列是：受精卵、生殖细胞、体细胞；全能性的物质基础是细胞内含有本物种全套遗传物质。

一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的遗传基础，在一个适当的条件下可以通过分裂、分化再生成一个完整植株，这就是所谓的植物细胞全能性。

这是植物组织培养的理论基础。

二、.培养基：成分、大量、微量、铁、Vc等的作用1.植物组织培养是指在含有营养物质及植物生长物质的培养液中，培养离体植物组织（器官、组织、原生质体或细胞）并诱导使其长成完整植株的技术。

2.成分：无机盐：大量元素（蛋白质、氨基酸、核酸及酶重要组成）：N、S、P、K（酶活化）、Ca（细胞壁组成）、Mg（叶绿素组成）；微量元素：Fe、Mn、Cu、Zn、cl、B、Mo.（参与生物调节）有机物：糖(碳源；维持渗透压)、氨基酸、维生素（参与酶合成及蛋白质和脂肪代谢）、肌醇（刺激细胞生长；促进糖转换、维生素利用）、腺嘌呤（促进合成分裂素）等调节物质：生长激素：刺激细胞分裂和诱导根的分化；细胞分裂素：引起细胞分裂，诱导芽的形成和促进芽的生长；赤霉素：能促进细胞生长，与生长素一起诱导细胞分化其他添加物：活性炭（吸附有害物质）、琼脂（固定）、抗生素（抑制污染）、酵母抽提液或麦芽抽提液（生长调节剂）、柠檬酸等3.Fe是植物制造叶绿素不可缺少的催化剂。

4.Vc是维生素类化合物在植物细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多项代谢活动，对生长、分化等有很好的促进作用。

5.培养基的配置程序母液的配制和保存为了减少工作量，一般将常用的药品配成所需浓度的10～100倍，在配制大量元素母液时一定要注意在混合各种盐时产生沉淀。

细胞工程作业1（第一、三、五章）一、名解：1.细胞工程：以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的的利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。

2.细胞全能性：每一个活细胞都包含植物生长发育所必需的全部基因，都具有再生成一个完全的有机体的潜力。

3.愈伤组织：由脱分化的细胞经过分裂产生的无组织结构无明显极性的松散细胞团，它具有再分化成为完整植物体的潜能。

4.外植体：植物组织培养中用来进行无菌培养的离体材料，可以是器官、组织、细胞和原生质体等。

5.脱分化：又称去分化，是指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程，即分化的细胞在适当条件下转变为胚性状态而重新获得分裂能力的过程。

6.原生质体：植物细胞工程中脱去全部细胞壁的细胞叫原生质体。

7.胚胎培养：指对植物的胚及胚器官（如子房、胚珠）进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。

8.成熟胚培养：一般是指子叶期至发育成熟的胚的培养。

9.幼胚培养：是指胚龄处于早期原胚、球形期胚、心形期胚、鱼雷期胚的培养。

10.胚乳培养：指处于细胞期的胚乳组织的离体培养，它的功能是为胚发育和种子萌发提供营养。

11.胚珠培养：是指未受精或受精后的胚珠离体培养。

12.子房培养：是指授粉和未授粉的子房培养。

13.人工种子：将植物离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮形成的类似种子的颗粒。

14.植物脱毒：利用物理、化学或生物学方法脱除植物所感染的病毒，在无菌条件下培养不带病毒的植株，进行快速繁育无病毒种苗的技术。

二、问答题：1、细胞培养有哪些主要设备及途?超净工作台，压力蒸汽消毒器，电热干燥箱，CO2培养箱，倒置显微镜，酶标仪、液氮罐、滤器，自动双重纯水蒸馏器，纯水仪等。

自动双重纯水蒸馏器和纯水仪是水处理设备，细胞培养对水的要求较高，至少是使用双蒸水，最好使用三蒸水或超纯水。

超净工作台为细胞操作提供无菌环境。

绪论一、名词高技术：指那些能带来高经济效益、具有高增值作用，并能向经济和社会各领域广泛渗透的新技术。

生物技术：指通过技术手段，利用生物体或生物过程来生产有经济价值产品或创造新物种的综合技术。

狭义指基因重组、细胞融合、固定化酶与细胞、生物反应器等技术领域。

广义包括资源、能量、粮食、饲料生产以及为净化环境所进行的物质分解及发酵技术等。

细胞工程：是指以细胞为研究对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定细胞、组织产品或新型物种的综合技术。

生化工程：是由生物科学与化学工程相结合的交叉学科，研究生物技术的实验室成果转化为生产力过程的工程技术问题。

二、知识点1、生物技术的基本内容学术界普遍将生物技术概括为四大领域：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程。

后起之秀还有生物化学工程、蛋白质工程。

基因工程是关键；细胞工程是基础；酶工程和发酵工程是利用酶学和发酵原理相结合的一种技术产业体系，它有赖于基因工程和细胞工程的发展；蛋白质工程是利用生物技术手段对蛋白质的DNA编码序列进行有目的的改造并分离、修饰、纯化蛋白质；生化工程是由生物科学与化学工程相结合的交叉学科。

2、细胞工程主要的技术领域a细胞（组织、器官）培养：在体、活体、生物体内；离体、生物体外b细胞融合（体细胞杂交、细胞并合）c细胞拆合（细胞质工程、细胞器移植）d染色体（组）工程e繁殖生物学技术（胚胎冷冻技术、试管婴儿、生物复制、胚胎移植、发育工程、胚胎工程、胚胎分割技术、胚胎融合技术、嵌合体）f细胞遗传工程（组分移植技术）将细胞的组分（核、质、染色体、甚至基因）直接移植到另一个细胞中去的技术g干细胞与组织工程h转基因生物与生物反应器3、细胞工程的主要应用a 优质植物快速培育及繁殖；b 动物胚胎工程快速繁殖优良、濒危品种；c动、植物细胞培养生产活性产品、药品；d新型动、植物品种的培育；e 组织工程提供医学器官修复或移植第一章细胞培养的基本设施及条件一、名词生物安全：不同危害群的微生物必须在不同的物理性防护条件下进行操作，物理防护是由隔离的设备、实验室的设计及实验实施等三个方面所组成，根据其密封程度的不同，分为P1、P2、P3和P4四个生物安全等级。

思考题1．细胞工程实验室的基本组成与要求是什么？一、实验室组成1．基本实验室①准备室/化学实验室功能：就是进行一切与实验有关的准备工作要求：宽敞明亮，通风条件好，地面便于清洁并应防滑处理。

②接种室/无菌操作室功能：是进行接种、继代、细胞融合等无菌操作的场所。

要求：封闭性好，干燥清洁明亮，防止空气对流。

外应设缓冲室、更衣室。

防止微生物感染。

③培养室功能：是对接种到培养瓶的离体材料进行控制培养的场所。

要求：是要能控制光照和温度，应保持干燥和清洁，2．辅助实验室根据具体的实验需求而定。

细胞学实验室生化分析室摄影室及暗室3. 移栽设施/温室要求：配置人工光源并且能够控制室内温度，为试管苗的正常生长提供适宜的环境。

2．外植体消毒的基本方法是什么？3. 无菌操作在植物离体培养中的作用是什么？4. 配制培养基时，加入一定量的植物生长调节物质，它们在离体培养过程中有哪些作用? 激素调控的一般规律是什么？植物激素或生长调节剂（ growth regulators）包括：生长素类（ auxin）细胞分裂素类(cytokinin,CTK)赤霉素类 (GA)乙烯（ Eth)脱落酸(ABA)其中前三者为正向激素，后两者则为负向激素。

常用的主要有生长素类和细胞分裂素类两大类。

①生长素类（ auxin）：在作用或结构上类似于吲哚乙酸的一类物质的统称。

生长素是最早发现的植物激素。

作用：诱导愈伤组织形成，促进细胞的分裂和伸长，诱导根原基的发生和根系的生成，有调运养分的效应。

使用浓度0.1～10mg/L。

常用的生长素有:吲哚乙酸 (IAA)、2， 4，二氯苯氧乙酸 (2,4-D) 吲哚丁酸 (IBA) 。

奈乙酸 (NAA)、②细胞分裂素类(cytokinin,CTK) ：是一类促进细胞分裂的植物激素，细胞分裂素都为腺嘌呤的衍生物作用：促进细胞分裂和分化，诱导不定芽的形成，促进胚状体的发育，延缓组织的衰老，打破顶端优势，有利于芽的增殖，常用于继代和增殖培养。

第一章绪论1、细胞工程的概念，广义的细胞工程，狭义的细胞工程，⏹细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的方法，通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或一定细胞产品的一门综合性科学技术。

⏹广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术，狭义的细胞工程则是指细胞融合和细胞培养技术。

2、细胞工程的研究内容（研究生物类型，实验操作对象）⏹根据研究生物类型不同，细胞工程可分为动物细胞工程、植物细胞工程、微生物细胞工程。

⏹动物细胞工程包括：细胞培养技术（包括组织培养、器官培养）；细胞融合技术；胚胎工程技术（核移植、胚胎分割等）；克隆技术（单细胞系克隆、器官克隆、个体克隆）。

⏹植物细胞工程包括：植物组织、器官培养技术；细胞培养技术；原生质体融合与培养技术；亚细胞水平的操作技术等。

3、细胞工程的重要应用（植物、动物）⏹植物细胞工程的应用：脱毒和快速繁殖细胞工程育种：利用培养变异，筛选优良突变体利用远缘杂交幼胚培养，获得杂种植株，克服其杂交不亲和性利用细胞融合技术，克服远缘杂交不亲和性倍性育种离体种质保存细胞培养生产有用物质⏹动物细胞工程的应用动物细胞培养生产医药产品（单克隆抗体）新品种培育试管动物与婴儿组织工程珍稀动物资源的保存与保护第二章细胞工程基础1、细胞分化：个体细胞发育过程中，后代细胞在形态、结构和生理功能上发生差异的过程。

2、发育潜能：指细胞分化能力的强弱。

3、细胞全能性：指细胞具有发育成完整个体的潜能。

4、细胞多能性：指随着胚胎发育，有的体细胞失去全能性，具有分化出多种组织的潜能。

5、去分化：又称脱分化，指某些条件下分化细胞不稳定，又回到未分化状态的这一过程6、愈伤组织：脱分化后的细胞，经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性的、松散的细胞团称为愈伤组织。

愈伤组织的种类胚性愈伤组织（Embryonenic callus）：表面光滑、组织结构紧凑、细胞小、再生力强。

细胞工程:以细胞生物学和分子生物学为基础理论,采用原生质体,细胞或组织培养等试验方法或技术,在细胞水平上研究改造生物遗传性.以获得具有新的性状的细胞系或生物体以及生物的次级代谢产物,并发展有关理论和技术的学科.细胞工程的核心技术：细胞培养和繁殖。

目的:获得新性状,新个体,新物质.细胞系：原代培养物经首次传代成功后即成细胞系。

细胞株:通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养物.接触抑制：细胞接触而抑制细胞的现象。

密度抑制：当细胞密度进一步增大，培养液中的营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制，导致细胞分裂停止。

单克隆抗体：指针对某一抗原决定簇的抗体分子。

细胞融合（细胞杂交）：指两个或更多个相同或不同细胞，通过膜融合形成单个细胞的过程。

胚胎工程：是指所有对配子和胚胎经行人为的干预，使其环境因素，发育模式或局部组织功能，发生质和量的变化的综合技术。

体外受精：就是将哺乳动物的卵母细胞从母体取出，在体外经行精卵结合的过程。

胚胎分割：将一枚胚胎用显微手术的方法分割成两份、四分甚至八份胚，经体内或体外培养，然后移植入受体种，以得到同卵双生或同卵多生的后代的技术，也是胚胎克隆的一种方法。

干细胞：是一类具有自我更新与分化潜能的细胞。

分为胚胎干细胞和组织干细胞。

胚胎干细胞：是早期胚胎内细胞团或原始生殖细胞分离出来的并建系成功的多潜能细胞，与机体内发育的早期胚胎细胞有着相似的形态结构和分化潜能。

组织工程：应用工程学和生命科学的原理和方法来研究正常的或病理状况下的哺乳动物组织结构、功能和生长的机制，研究开发能够修复、维持和改善损伤组织的人工替代物的一门学科。

转基因动物：借助基因工程技术将外源即应导入受体动物染色体内，外源基因与动物基因整合后随细胞的分裂而扩增，在体内表达并稳定的遗传给后代的动物。

动物乳腺生物反应器：利用哺乳动物乳腺特异性表达的启动子原件，构建转基因动物，指导外源基因在乳腺中表达，并从转基因动物的乳液中获得重组蛋白。

1.生物工程：指人们运用现代生物科学、工程学和其他基础学科的知识，按照预先的设计对生物进行控制和改造或模拟生物及功能，用来发展商业性加工，产品生产和社会服务的技术领域。

2..细胞工程：指主要以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术3.原代培养(primary culture)：以直接取自生物体细胞、组织、或器官的培养。

4.4.传代培养（passage culture）：将原代培养的细胞继续转接培养的过程。

细胞的体外大量增殖是通过传代培养实现的。

5.5.细胞系(cell line)：由原代培养经传代培养纯化，获得的以一种细胞为主，能在体外生存的不均一细胞群体,。

第一次传代培养后的细胞即为细胞系。

6.6.细胞株(cell strain)：从一个经过生物学鉴定的细胞系由单细胞分离培养或通过筛选的方法由单细胞增殖形成的细胞群叫细胞株。

7.7.接触抑制：动物细胞体外培养的方式之一，指由于细胞相互接触而抑制细胞运动性现象。

由于这个特性，正常细胞并不会相互重叠，而是呈单层细胞生长。

8.8.无血清培养基：无血清培养基是不加动物血清，由基础培养基和添加组分组成。

试图全部替代血清成分。

9.9.微载体：是直径60-250微米的微珠。

由天然葡聚糖或各种合成聚合物组成。

10.10.干细胞（stem cell）：是具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体，即这些细胞可通过分裂维持自身细胞的特性和大小，又可进一步分化为各种组织细胞，从而在组织修复等方面发挥积极作用。

11.胚胎干细胞(Embryo Stem)：ES细胞，是一种全能干细胞，它是从着床前胚胎内细胞团经体外分化抑制培养分离的一种全能细胞系，可以分化成任何一种组织类型的细胞。

12.12.成体干细胞（adult stem cell)：成体组织内具有自我更新及分化产生1种或1种以上子代组织细胞的未成熟细胞。

细胞工程第十一、十二章知识重点20XX级生物技术23班陈思宇20124026211植物组织培养11.1植物组织培养的理论基础11.1.1植物的无性繁殖：不经过卵、精细胞的结合，而是通过母体的部分组织或器官来进行繁殖的方式。

11.1.2植物细胞全能性理论：植物细胞具有全能性，即一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息，具有发育成完整植株的潜能，在十一点条件下能够发育成一个完整植株。

11.1.3植物细胞的脱分化和再分化脱分化：细胞分化是可逆的，分化的细胞在一定条件下可以转变为胚性状态，重新获得分裂能力。

再分化：脱分化后的分生细胞（愈伤组织）在一定的条件下重新分化为各种类型的细胞，并进一步发育成完整植株。

植物生长素和分裂素食植物细胞再分化中不可缺少的激素，两者的浓度配比在脱分化中起着关键作用。

11.2植物组织培养11.2.1实验材料的清洗和消毒1、自来水冲洗5min，然后用中性洗衣粉液清洗，最后再用自来水流冲洗30min，一杯药剂灭菌。

2、清洗药剂灭菌法适用于培养材料的表面消毒。

药剂灭菌必须根据培养材料的特点，选择适合的药剂种类、浓度和消毒时间，原则上要求既达到灭菌的目的，又不能损伤植物组织和细胞。

11.2.2培养基1、培养基的组成：无机营养成分（无机元素：氮、磷、硫、钙、钾、镁、铁、锰、铜、锌、硼和钼）；有机营养成分（碳源、含氮物质、植物激素类（生长素类、细胞分裂素类、赤霉素类）、琼脂、pH值。

2、培养基的选择3、培养基的制备：用市售培养基干粉，其中含有无机盐、维生素和氨基酸。

把这种干法溶解在蒸馏水里（要比培养基的最终容积少10%），加上琼脂和其他必要的补加物，再加入蒸馏水使之达到最终的容积，调节pH，高压灭菌，于是制成所需培养基。

4、培养基的灭菌11.2.3接种：经过表面灭菌的实验材料，按照不同的要求，移至培养基上培养的过程称为接种。

培养基含有植物细胞生长发育所必需的各类营养物质，也是各种细菌、真菌孳生繁殖的极好场所。

[小学]南京师范大学生命科学学院2012年《细胞工程》期末重点总结南京师范大学生命科学学院细胞工程期末重点一(名词解释发育阻滞:体外受精的早期胚胎在体外发育过程中，往往会停滞在某一阶段不再发育，此现象称为发育阻滞。

胚胎移植:也称受精卵移植、借腹怀胎，是指将良种母畜配种后，从其生殖道内取出受精卵后早期胚胎，移植到同种的、生理状态相同的母畜体内，使之继续发育称为新个体的技术。

组织工程:指应用工程学和生命科学的原理和方法来研究开发用于修复或改善人体病损组织或器官的结构、功能的生物活性替代物的一门科学。

人-鼠嵌合抗体: 就是用人源性抗体的一部分代替鼠源性抗体的一部分，使之保留对抗原的特异性，又具备与补体和细胞结合的功能，并减少异源性蛋白的抗原性。

细胞融合: 在离体条件下，用人工方法将不同基因型的单细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的过程。

ES细胞:即胚胎干细胞，将细胞团的细胞分离出来进行培养，在一定条件下这些细胞可在体外“无限期”地增值传代，同时还保留其全能性的细胞。

乳腺生物反应器: 利用哺乳动物乳腺特异性表达的启动子元件构建转基因动物，指导外源基因在乳腺中表达，并从转基因动物的乳液中获得重组蛋白。

细胞全能性:指细胞分裂分化后，仍具有形成完整有机体的潜能或特性。

Ips(诱导性多能干细胞):利用病毒载体将四个转录因子(Oct4,Sox2,Klf4,c-Myc)的组合转入分化的体细胞中，使其重编程而得到的类似胚胎干细胞的一种细胞类型。

胚胎分割: 将一枚胚胎用显微手术的方法分割为二分、四分甚至八分胚，经体内或体外培养，然后移植入受体中，以得到同卵双生或同卵多生后代的技术。

核移植: 利用显微操作技术，将某一特定细胞的核转移和嵌入另一细胞中的过程。

细胞系、细胞株:细胞系是由原代培养经初步纯化。

获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。

细胞系经过进一步的克隆化，便得到由单一细胞组成的细胞株。

二、问答题1.如何鉴定转基因动物,1.分子杂交Southern 印迹杂交技术是通过探针和已结合于硝酸纤维素膜(或尼龙膜) 上的经酶切、电泳分离的变性DNA 链杂交,检测样品中是否存在目的DNA 序列的方法。