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一、基础知识填空1、培养基（1）概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养基质。
（2）营养构成：一般都含有水、、和无机盐。
此外，还要满足微生物生长对、以及氧气的需求。
例如，培养乳酸菌时需要在培养基中添加，培养霉菌时p H调至，培养细菌时pH调至。
培养厌氧微生物提供环境。
（3）种类：按物理性质可分为培养基和培养基。
固体培养基中需添加。
（注：加入培养基中的琼脂只能起到凝固作用，一般不能被微生物利用。
）2、无菌技术（1）获得纯净培养物的关键是。
（2）对实验操作空间，操作者的衣着和手，进行；对培养器皿、接种工具、培养基进行；实验操作应在进行，3、制备培养基（1）配制步骤：计算、、、、倒平板。
调pH应在灭菌前进行。
（2）牛肉膏蛋白胨固体培养基所需的原料：、、、、。
（3）在烧杯中加入琼脂后，要不断用玻棒搅拌，防止。
待培养基冷却至左右时，在附近倒平板，严格遵循课本上的操作步骤。
4、纯化大肠杆菌5、菌种的保存对于频繁使用的菌种，采用的方法；需要长期保存的菌种，采用的方法。
二、简答题注：自养微生物所需碳源、氮源来自含碳、含氮无机物，异养微生物所需碳源来自含碳有机物；含氮无机物既可作为氮源，也可提供能源，如NH3。
2、牛肉膏蛋白胨培养基中的碳源、氮源分别是什么？提供能源的物质是什么？3、无菌技术的目的？使用后的培养基能否直接丢弃，为什么？4、倒平板时，为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？如果将培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？5、平板划线操作中第一次、每次划线之前及划线结束后灼烧接种环的目的？在第二次以及其后的划线中，为什么总是从上一次划线的末端开始？6、为什么将接种后的培养基和未接种的培养基或接种无菌水的培养基都放入恒温箱中培养？7、培养大肠杆菌结束后，若无菌操作基本符合要求，观察到的现象是怎样的？如果培养基上的菌落连成一片，可能的原因是什么？。
药品微生物学基础知识培训内容目录第一章微生物概述一. 什么是微生物二. 微生物的分类三. 微生物的作用及危害第二章微生物的类群和形态结构一. 细菌二. 真菌三. 病毒第三章消毒与灭菌一. 物理消毒灭菌法二. 化学消毒灭菌法第四章 GMP与微生物一. 药品生产中微生物的生态学分布二. 微生物污染导致药物变质的因素三. 防止微生物污染的原则四. 药品生产人员卫生注意事项第一章微生物概述一. 什么是微生物微生物是一类肉眼不能直接看见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大几百倍、几千倍甚至几万倍才能观察到的微小生物的总称。
微生物具有形体微小、结构简单；繁殖迅速、容易变异；种类繁多、分布广泛等特点。
二. 微生物的分类：根据微生物有无细胞基本结构、分化程度、化学组成等特点，可分为三大类。
1. 非细胞型微生物无细胞结构，无产生能量的酶系统，由单一核酸（DNA/RNA）和蛋白质衣壳组成，必须在活细胞内增殖。
病毒属于此类微生物。
2. 原核细胞型微生物细胞核分化程度低，只有DNA盘绕而成的拟核，无核仁和核膜。
这类微生物包括细菌、衣原体、支原体、立克次体、螺旋体和放线菌。
3. 真核细胞型微生物细胞核的分化程度高，有核膜、核仁和染色体，能进行有丝分裂。
如真菌、藻类等。
三. 微生物的作用及危害1. 微生物的作用绝大多数微生物对人和动物是有益的，已广泛应用于农业、食品、医药、酿造、化工、制革、石油等行业，发挥了越来越重要的作用。
例如与我们日常生活密切相关的如酸奶、酒类、抗生素、疫苗等。
2. 微生物的危害微生物中也有一部分能引起人及动、植物发生病害，这些具有致病性的微生物，称为病原微生物。
如人类的许多传染病（感冒、伤寒、痢疾、结核、脊髄灰质炎、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。
从药品生产的卫生学而言，微生物对药品的原料、生产环境和成品的污染是造成生产失败、成品不合格的重要因素。
第二章微生物的类群和形态结构一. 细菌细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方式无性繁殖的原核微生物，分布广泛。
微生物的实验室培养基础梳理一、微生物的营养1．碳源2．氮源【注意】①对许多微生物来说，既可利用无机含氮化合物作为氮源，也可利用有机含氮化合物作为氮源。
②固氮微生物可以利用氮气作为氮源。
③铵盐、硝酸盐等既可作为微生物最常用的氮源，也可作为某些化能自养微生物的能源物质。
④自养微生物与异养微生物类型的划分主要是依靠能否以CO2作为生长的主要或唯一的碳源，而不是由氮源决定。
3．水水是微生物生命活动必需的一种重要物质。
4．无机盐无机盐对微生物的生理功能有：构成微生物细胞的组成成分；作为酶的组成成分，也是某些酶的激活剂；调节和维持微生物细胞的渗透压和pH；某些无机盐具有特殊功能，如化能自养细菌的能源物质NH4+等。
5．生长因子6．其他条件培养微生物时还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
二、培养基1．培养基的概念人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供适合其生长繁殖的营养基质。
2．配制原则目的要明确；营养要协调；pH要适宜；要经济节约。
3．培养基的类型（1）按物理性质分：（2）按化学性质分：（3）按功能分：①全程要求无菌操作，无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效地避免操作者自身被微生物感染。
②培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。
可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，当感觉到锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板。
操作时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，以防止瓶口的微生物污染培养基。
③平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，若将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
④在倒平板的过程中，不能将培养基溅到皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
三、无菌技术1．无菌技术的主要内容①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
微生物培养知识点总结高中一、微生物培养的基本概念微生物培养是指在实验室条件下，利用培养基等培养物质，使微生物在一定的温度、湿度和气氛条件下生长繁殖的过程。
微生物培养是微生物学实验的基础，通过微生物培养可以获得大量的微生物菌株，进行鉴定、生理生化性质和应用价值的研究。
微生物培养技术在医学、环境科学、食品工业等领域都具有重要的应用价值。
二、微生物培养的基本要素1. 培养基培养基是支持细菌或真菌生长繁殖的物质，一般由碳源、氮源、磷源、无机盐和生长因子等组成。
根据微生物生长的特点和营养需求，培养基可分为无机培养基和有机培养基。
无机培养基是以无机盐为主要成分，有机培养基则含有有机物质。
微生物培养需要根据不同微生物的特性选择合适的培养基，以促进微生物的生长和繁殖。
2. 温度微生物培养的温度是微生物生长的关键条件，不同微生物对温度的适应范围不同。
一般来说，细菌适宜的培养温度为30-37摄氏度，而真菌则适宜的培养温度通常为25摄氏度左右。
因此，在微生物培养实验中，要根据具体的微生物种类选择适宜的培养温度。
3. 湿度微生物在培养过程中需要适当的湿度条件来维持细胞内外环境的稳定性。
通常情况下，微生物培养所处的环境湿度应保持在60-80%之间，这样可以促进微生物的生长和繁殖。
4. 氧气氧气是微生物生长所必需的气体，绝大多数微生物都需要氧气来进行呼吸作用。
在微生物培养过程中，需要保持适当的氧气供应以促进微生物的生长。
不同微生物对氧气的需求量和适应能力不同，因此在微生物培养实验中需要根据具体微生物的需求来调节氧气的供应。
5. pH值微生物的生长和繁殖需要适宜的pH条件，不同微生物对pH值的适应范围各有不同。
一般来说，细菌的适宜pH范围为6.5-7.5，而真菌则适宜的pH范围通常为4-6。
因此，在微生物培养实验中需要根据具体的微生物种类来调节培养基的pH值，以促进微生物的生长和繁殖。
三、微生物培养的常用技术方法1. 细菌单菌落分离在微生物培养实验中，通过单菌落分离可以获得纯种细菌，为细菌的鉴定和分类提供了基础。
微生物工程知识点整理1.微生物基础知识：-微生物的分类和鉴定：包括原核生物和真核生物的分类，以及鉴定微生物的方法，如形态学观察、生理生化特性等。
-微生物培养方法：包括液体培养和固体培养的原理和操作方法，以及微生物的培养条件和培养基的配制。
-微生物生长动力学：包括微生物的生长曲线、最大生长速率、最佳生长温度和pH等影响微生物生长的因素。
2.微生物遗传学：-微生物基因组学：包括微生物基因组的测序技术、基因功能预测和生物信息学分析等。
-微生物基因工程：包括基因克隆、转化和表达等常用技术，以及临床应用中的基因检测和基因治疗等。
3.微生物酶工程：-微生物酶的筛选和改良：包括通过自然筛选和分子筛选等方法寻找有用的酶类，以及通过蛋白工程和亲和力改良等方法提高酶的性能。
-微生物酶的应用：包括酶催化的反应机制，如酶催化的底物选择性、催化剂活性和催化效率等，以及酶在工业生产和环境修复中的应用。
4.微生物代谢工程：-代谢途径与调控：包括微生物的代谢途径和相关酶的功能与调控机制，以及酶的合成和抑制等。
-微生物代谢工程的应用：包括微生物代谢途径的构建和功能的调控，以提高微生物对废弃物、有机化合物、药物和酿造食品等原料的利用效率。
5.微生物发酵工程：-发酵工艺的设计和优化：包括发酵产物、培养基和工艺参数等在发酵过程中的优化调整，以提高产量或降低成本。
-发酵过程的监测与控制：包括对发酵过程中微生物的生长和代谢情况进行监测，以及对发酵参数进行控制和调节，以提高产品质量和稳定性。
6.微生物资源和环境微生物工程：-微生物资源的保护和利用：包括对微生物多样性的研究和保存，以及对具有潜在应用价值的微生物资源的开发和利用。
-环境微生物工程：包括利用微生物降解有机废物和生物修复环境污染等技术，以保护环境和提高生态系统的稳定性。
以上只是微生物工程的一些重要知识点的简单整理，实际上微生物工程是一个非常广泛和深入的领域，涉及到生物技术、工程学和环境科学等多个学科的交叉融合。
专题二微生物的培养知识清单1.为微生物的生长繁殖提供营养的基质叫做__________。
从物理性质上划分，主要可分为_____________与____________，其中的_________培养基主要用于工业生产与扩大培养，而扩大培养的目的是__________________，要让培养基呈固态，一般需向其中加入_________这一凝固剂。
_________培养基可以用于菌株的_________、鉴定、计数、菌种保存等。
从功能上划分，可分为_________培养基与_________培养基，其中的_________培养基，是在培养基中加入某种化学物质,_________不需要的微生物的生长，_________所需要的微生物的生长，如__________________的培养基来筛选纤维素分解菌；以_________的培养基来筛选自身固氮微生物；在培养基中加入__________________筛选金黄色葡萄球菌；培养基中加入青霉素等抗生素抑制__________________，从而筛选__________________；以__________________的培养基来筛选尿素分解菌。
而鉴别培养基是根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种_________，来鉴别相应微生物，如在培养基中加入__________________，可鉴别大肠杆菌，使其菌落呈_________色。
选择培养基_________（是/不是）都是固体培养基。
2、不管哪种培养基，一般都含有___________________________等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。
如在培养乳酸杆菌时需在培养基中添加_________；培养霉菌时需将PH调节至_________；培养细菌时需将PH调节至__________________；培养厌氧微生物时则需提供_________条件。
微生物实验知识点微生物实验是指对微生物进行观察、培养、检测及相关实验操作的科学研究方法。
下面是一些关于微生物实验的知识点：1.实验室安全：进行微生物实验时，必须遵守实验室的安全规范，包括佩戴实验手套、口罩和实验服。
同时，实验室的环境要定期消毒，以防止微生物的交叉污染。
2.微生物培养基：微生物实验常用的培养基有固体培养基和液体培养基。
固体培养基可以用于分离纯培养和观察菌落形态，而液体培养基常用于大规模培养微生物。
3.纯培养与混合培养：纯培养是指从一种微生物中分离出单一的菌株进行培养，得到纯净的培养物；混合培养是指将两种或多种微生物一起培养，观察它们之间的相互作用。
纯培养和混合培养的选择取决于实验的目的和研究内容。
4.微生物的分离与鉴定：微生物实验常用的分离方法包括涂布法、稀释法和过筛方法。
通过形态特征观察、生理生化测试、分子生物学技术等方法，可以鉴定微生物的种属和菌株。
5.微生物生长曲线：微生物生长曲线是研究微生物生长动力学的重要实验方法，通过连续测量微生物的生物量、代谢产物或生长速率，可以得到微生物在一定条件下的生长曲线，以了解微生物的生长特性。
6.抗菌药物敏感性试验：抗菌药物敏感性试验是评价微生物对不同抗菌药物的敏感性和抗性的实验方法。
通过测定微生物对抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC）或抑菌圈直径，可以判断微生物对抗菌药物的敏感程度。
7.酶活性检测：微生物实验中常用酶活性检测来评估微生物酶的产生与活性。
通过观察酶的底物转化情况、染色反应、电泳分析等方法，可以确定微生物是否具有特定酶的活性。
8.微生物的遗传转化：遗传转化是指微生物通过吸收外源性的遗传物质，如质粒DNA或线性DNA片段，加入到自身的遗传物质中。
通过转化实验可以在微生物中引入外源基因、观察基因的表达和相关功能的变化，进一步研究微生物基因的功能。
这些知识点涵盖了微生物实验的基本概念、常用实验方法和技术应用，希望对你有帮助！。
第一章发酵工程第2节微生物的培养技术及应用一、微生物的基本培养技术1.研究和应用微生物的前提（即发酵工程的重要基础）：防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物。
（P9）2.在实验室培养微生物的要求：(1)为微生物提供合适的营养和环境条件(培养基）。
(2)要确保其他微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来（无菌技术）。
（P9）（一）培养基的配制1．培养基概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
（P9）2.培养基作用：用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
（P9）3．培养基的分类（按照物理性质分类）（P9）（1）液体培养基：不含凝固剂（如琼脂），呈液体状态。
用途：扩大培养获得大量菌种、常用于工业生产。
（2）固体培养基：含凝固剂（如琼脂），呈固体状态。
用途：分离、计数、鉴定等。
拓展了解：培养基的分类（按照化学成分分类）（1）天然培养基：含化学成分不明确的天然物质。
用途：工业生产。
（2）合成培养基：培养基成分明确。
用途：分类、鉴定。
培养基的分类（按照用途分类）（1）选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长。
用途：培养、分离出特定微生物。
（2）鉴别培养基：在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物。
用途：鉴别不同种类微生物。
4.怎样将液体培养基制成固体培养基？加入适量琼脂。
（P9）5.实验室中最常用的培养基之一：琼脂固体培养基。
（P9）6.微生物在琼脂固体培养基的表面或内部生长，可以形成菌落。
（P9）7.培养基的基本成分：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物的需求。
（P10）质，此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O28.碳源:（1）概念：提供碳元素的物质。
（2）分类:无机碳源，如CO2、CO32-、HCO3-等。
有机氮源，如葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等。
（3）适用范围（一般情况下）添加无机碳源培养基用来培养自养微生物；添加有机碳源培养基用来培养异养微生物。
专题二微生物的培养与应用1.实验室培养微生物需要解决哪两方面的问题?液体培养基和固体培养基的作用分别是什么?培养基中应具备哪些营养物质?实验室培养微生物要解决两方面问题:(1)需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件；(2)防止外来杂菌的入侵。
液体培养基的作用:广泛应用于实验研究及大规模工业生产中，有利于广泛获得大量菌体或代谢产物。
固体培养基的作用:广泛应用于微生物的分离培养、菌种鉴定和保藏。
培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。
2.霉菌和细菌适宜的pH分别是什么?消毒和灭菌的区别是什么?培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性；培养细菌时需将pH调至中性或微碱性。
消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。
灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
3.消毒和灭菌方法分别有哪些?适用范围分别是什么?实验室中常用的消毒方法:巴氏消毒法(如牛奶)、化学药制进行消毒(如酒精擦拭双手、氧气消毒水源)、实验室还用紫外线或化学药物消毒(如接种室、接种箱或超净工作台)、煮沸消毒法。
实验室中常用的灭菌方法: 灼烧灭菌(如接种环、接种针、或其他金属用具)、干热灭菌(如玻璃器皿、吸管、培养皿和金属用具)、高压蒸汽天菌(培养基)。
4.配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是?什么时候调节叫值?平板为什么要倒置?配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤:计算一称量+溶化→灭菌→倒平板。
调pH值应该在溶化后，灭菌前。
平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠。
将平板倒置，可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。
5.平板划线法的操作过程是什么?平板划线法的操作流程:(1)将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红；(2)在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的棉塞；(3)将试管口通过火焰；(4)将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液；(5)将试管口通过火焰，并塞上棉塞；(6)左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。
《微生物的实验室培养》知识清单一、微生物培养的基本概念微生物是肉眼难以看清的微小生物的总称，包括细菌、真菌、病毒、原生生物等。
在实验室中培养微生物，是为了研究它们的生理特性、代谢过程、遗传规律以及在各种环境中的作用。
二、实验室培养微生物所需的条件1、合适的培养基培养基是为微生物生长提供营养物质的基质。
根据微生物的种类和研究目的，培养基的成分和性质会有所不同。
常见的培养基成分包括碳源（如葡萄糖、蔗糖等）、氮源（如铵盐、硝酸盐等）、无机盐（如磷酸盐、硫酸盐等）、生长因子（如维生素、氨基酸等）和水。
2、无菌环境为了避免其他微生物的污染，实验室培养微生物必须在无菌环境中进行。
这包括使用无菌的培养基、器材和操作技术。
在操作前，通常需要对实验器材进行高温高压灭菌，对培养基进行灭菌处理，操作人员要进行严格的消毒和无菌操作。
3、适宜的温度不同的微生物有其最适生长温度。
一般来说，细菌的适宜生长温度在20-40℃之间，真菌的适宜生长温度在25-30℃之间。
在培养过程中，要通过恒温培养箱等设备来控制温度。
4、合适的酸碱度（pH）大多数微生物在 pH 值为 65-75 的环境中生长良好，但也有一些特殊的微生物对 pH 有特殊的要求。
可以通过在培养基中添加酸碱缓冲剂来维持适宜的 pH 环境。
5、充足的氧气供应根据微生物对氧气的需求，可分为好氧微生物、厌氧微生物和兼性厌氧微生物。
对于好氧微生物，要提供充足的氧气，可以通过振荡培养或通气等方式实现；对于厌氧微生物，则要创造无氧环境，通常采用厌氧培养箱或特殊的培养方法。
三、培养基的制备1、计算根据要培养的微生物种类和培养的规模，计算所需培养基成分的用量。
2、称量使用天平准确称量各种培养基成分。
3、溶化将称量好的成分加入适量的水中，加热搅拌至完全溶解。
4、调节 pH使用 pH 计或酸碱指示剂来测定溶液的 pH，并使用酸碱溶液进行调节。
5、分装将培养基分装到无菌的培养容器中，如培养皿、三角瓶等。
微生物的培养与应用知识清单班级姓名课题一、微生物的实验室培养（一）培养基1、为微生物的生长繁殖提供营养的基质叫做。
从物理性质上划分，主要可分为与，其中的培养基（成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料）主要用于工业生产与扩大培养，而扩大培养的目的是，要让培养基呈固态，一般需向其中加入这一凝固剂。
（该凝固剂为从海藻中提取的多糖，44℃以下凝固，98℃以上溶化。
不会被微生物利用，这也是所有凝固剂的特点。
）固体培养基可以用于菌株的、鉴定、计数、菌种保存等。
从功能上划分，可分为培养基与培养基，其中的培养基，是在培养基中加入某种化学物质,以不需要的微生物的生长,所需要的微生物的生长，如的培养基来筛选纤维素分解菌；以的培养基来筛选自身固氮微生物；在培养基中加入筛选金黄色葡萄球菌；培养基中加入青霉素等抗生素抑制，从而筛选；以的培养基来筛选尿素分解菌。
而鉴别培养基是根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种，来鉴别相应微生物，如在培养基中加入，可鉴别大肠杆菌，使其菌落呈色。
选择培养基（是/不）都是固体培养基。
2、不管哪种培养基，一般都含有、、、等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质(如:细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。
如在培养乳酸杆菌时需在培养基中添加；培养霉菌时需将PH调节至；培养细菌时需将PH调节至；培养厌氧微生物时则需提供条件。
牛肉膏蛋白胨培养基中的牛肉膏能够为微生物提供，主要提供；蛋白胨能够为微生物提供，主要提供。
培养基中含量最多的化合物是，如果营养物质的浓度过高，会导致微生物脱水死亡（二）无菌技术1、获得纯净培养物的关键是，主要包括消毒与。
对实验操作空间、操作者的衣服、双手应该进行清洁与；培养皿、培养基、接种用具应该；实验操作应该在进行。
已经处理的材料用具不与周围的物品接触。
2、消毒：用较的方法杀死物体表面的微生物，不能杀死、。
芽孢：细菌（芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌、少数球菌）形成的逆性强的休眠体；孢子：某些低等植物、真菌（如蘑菇、酵母菌）、放线菌产生的脱离母体的繁殖体消毒方法：(1)煮沸消毒法100℃煮沸5～6min （2）巴氏消毒法高温短时处理，常用来消毒奶制品，①70-75℃，30min；②80℃，15min；可以杀死牛奶中的微生物，并且牛奶中的不被破坏。
（3）化学药剂消毒操作者的双手一般用进行消毒；饮水水源用进行消毒；（4）紫外线消毒接种室、超净工作台、接种箱在使用前可以用照射30min，进行消毒处理。
为了加强消毒效果，在照射前，适量喷洒或等消毒液。
3、灭菌：用的理化因素杀死物体内外的所有微生物，包括和。
方法：(1)灼烧灭菌将需要灭菌的物体通过酒精灯火焰的（）灼烧。
接种环、涂布器、接种针、试管口等应该用灭菌；（2）干热灭菌：将灭菌物品放入干热灭菌箱，在160~170℃加热1~2h灭菌的方法。
玻璃器皿(吸管、培养皿、玻棒、烧瓶、试管、滴管)、金属用具等器材一般用法进行灭菌，所用器械是；(3)高压蒸汽灭菌将物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内的，目的是有利于锅内温度升高；随后关闭排气阀继续加热，气压升至，温度为，并维持15～30min；切断热源使温度自然降温，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器中的液体暴沸。
培养基、无菌水等一般用法进行灭菌，所用器械是。
不论是消毒还是灭菌，其主要的原理都是在理化因素的作用下使微生物变性或者破坏损伤，以杀灭微生物。
（三）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1、固体培养基的制备一般包括计算、称量、、、、。
（1）计算：根据配方比例，计算配制一定量的培养基所需各种成分的用量。
（2）称量：准确称取各成分。
称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是。
牛肉膏通常放在称量纸上称量，溶化后再将称量纸取出。
（3）溶化：①加水加热熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯化钠继续加热；③加入琼脂；④用定容到100mL。
整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止。
（4）调pH：用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。
（5）灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用灭菌。
（6）倒平板：待培养基冷却至左右时在附近操作进行。
其过程是：①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过；③左手将培养皿打开，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。
④待平板冷却凝固后，将平板放置。
注意：①.锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是。
②.倒平板的目的是。
③.若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？。
④.配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的目的是。
⑤.试管培养基形成斜面的作用是。
（四）纯化大肠杆菌1、接种方法：微生物的接种最常用的方法是、，其中除了可以用于微生物的分离、纯化外，还可以用于菌落的计数。
除此之外还包括、等方法。
虽然方法各不相同，核心都是要，保证培养物的。
2、平板划线法：平板划线法是通过在琼脂固体培养基表面的操作，将的菌种逐步到培养基表面，在数次划线后，可以分离得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的。
在划线操作中，第一次划线前要灼烧接种环的目的是；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是；划线结束后还需灼烧接种环的原因是；灼烧接种环后必须待其，才能进行划线操作，原因是；划线时，将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划3-5条平行线，盖上皿盖，不要划破，否则会影响菌落的形态、生长。
注意不要将最后一区划线与第一区划线，在做第二次以及以后的划线操作时，必须从开始，原因是。
在打开试管棉塞后以及塞上棉塞前都必须使试管口。
3、稀释涂布平板法：稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面，在的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成，从而在培养基表面形成单个。
该方法主要包括两个步骤，即操作与操作。
在稀释时，应该将分别盛有9ml水的各支试管进行，并编号。
在将菌液用加入相应稀释倍数的试管时，应该用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次，使充分混匀。
移液管事先应该处理，操作中试管口和移液管应在离火焰处。
整个操作过程中使用了支移液管。
涂布平板操作，用到的涂布工具是，应该事先将其放入盛有的烧杯中，然后在涂布前将其取出在火焰上引燃，并，方可进行涂布。
（是/不是）用涂布器从试管中取菌液，而是用，取的菌液一般不超过 ml。
4、若用平板划线法接种后培养基上的某条线上的菌落分布呈沟槽状，其原因是；若第二划线区域的第一条线上没有菌落长出，其原因可能是。
若用稀释涂布平板法接种后的培养基的右下方没有菌落长出，而其他地方有较多的菌落长出，其原因最可能是。
（是/不是）每次划线的菌种都来源于上次划线的末端；如果在平板上有5个划线区域，则接种环应该被灼烧次。
培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么？(列举两项) 5、在接种后，应该将一个与接种的培养基都放入进行同步培养，其目的是。
在微生物培养时，有时候需要进行振荡培养，其主要目的是。
接种后的培养基在12h与24h时，菌落的颜色、位置、形状，大小有无明显差异?。
原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但增多。
6、对于频繁使用的菌种，可以采用的方法，首先将菌种接种在培养基上，在合适的温度下，待后，将试管放入的冰箱中保藏。
但该方法的缺点是。
对于需要长期保存的菌种，可采用的方法，在的冷冻箱中保存。
微生物的培养与应用知识清单班级姓名课题二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（一）课题背景尿素是一种农业氮肥，（能/不能）被农作物直接吸收，必须被土壤中的细菌分解成后，才能被植物吸收利用，土壤中的细菌之所以能分解尿素，直接是因为它们能合成，根本原因是，尿素被细菌分解的反应式是。
（二）研究思路。
1．筛选菌株(1)在寻找目的菌株时，思路是。
(2)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。
(3)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时或其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
(4)配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。
例如，培养基中不加入有机物可以选择培养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。
2．统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有（或称）和（或称）。
其中的稀释涂布平板法能够统计是的数目，因此统计结果一般不用活菌数。
在统计时一般选择菌落数在的平板进行计数，其目的是。
选择30---300的原因主要包括以下几点：①稀释度过高，容易计数不准确，造成实验误差②稀释度过低，可能导致两个或者两个以上的菌体连在一起形成一个菌落，造成实验误差③稀释度过低，会造成培养基中的微生物的种内斗争、种间竞争激烈，使得一些个体无法形成菌落，而造成实验误差④稀释度过高，形成的菌落数过少，不具有代表性。
该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目，原因是。
在用该方法进行菌落计数时，每个稀释度下至少涂布个平板，当几个平板上的菌落数都在30---300时，且数据相差不是很大的情况下，应该用几个数据的作为该稀释度下的菌落值做计算。
计算公式为：每克土壤（ml）样品菌株数=（其中，C代表某一稀释度下的平均菌落数，V 代表涂布时用的稀释液体积，M代表稀释倍数）。
显微镜直接计数的计算公式可描述为：1ml原液中的菌体数=每中格平均菌落数×25（或16）×× =每小格平均菌体数×400××。
该方法得到的数据比实际的活菌数目。
（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。
此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。
3．设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。
例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。
（三）实验设计关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：1．取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。
（能/不能）直接选择表层土。
用于取样的小铁铲和盛土样的信封在使用前必须，称取和稀释土样都应该在完成。
土壤取样时，应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的中。
2．制备培养基：制备______________培养基作为对照组，尿素为唯一氮源的培养基作为________，用来判断选择培养基是否具有____________。
