任务一大肠杆菌病实验室诊断所需培养基的制备实训指导.

大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。

二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g酵母粉 5.0g氯化钠 10.0g水 1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。

2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。

如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。

3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。

所有锥形瓶如上述操作。

用记号笔注明培养基名称、配制日期。

4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。

5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。

液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。

将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。

6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。

四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。

2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。

大肠杆菌实验报告大肠杆菌实验报告引言：大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，广泛存在于人和动物的肠道中。

尽管大肠杆菌在正常情况下对人体没有害处，但某些菌株可能引起食物中毒和其他健康问题。

本实验旨在探究大肠杆菌的特性和其对环境的适应能力。

实验目的：1. 了解大肠杆菌的形态和结构特征；2. 探究大肠杆菌的生长条件和适应能力；3. 研究大肠杆菌在不同环境下的生长情况。

实验材料和方法：1. 实验材料：- 大肠杆菌培养基- 灭菌培养皿- 灭菌试管- 灭菌移液管- 微量移液器- 恒温培养箱- 显微镜2. 实验步骤：1. 准备培养基：将大肠杆菌培养基按照说明书配制好，并灭菌处理。

2. 接种：使用微量移液器，将大肠杆菌接种到灭菌培养皿中。

3. 培养：将接种好的培养皿放入恒温培养箱中，并设置适当的温度和湿度条件。

4. 观察生长情况：每隔一段时间，观察培养皿中大肠杆菌的生长情况，并记录下来。

5. 形态和结构观察：取一部分培养物放在载玻片上，使用显微镜观察大肠杆菌的形态和结构特征。

实验结果：1. 大肠杆菌的形态和结构特征：在显微镜下观察，大肠杆菌呈现为短杆状，长度约为2-4微米，直径约为0.5微米。

细菌的表面有许多纤毛，这些纤毛有助于细菌的运动和附着。

大肠杆菌呈现为革兰阴性菌，其细胞壁主要由脂多糖和蛋白质组成。

2. 大肠杆菌的生长条件和适应能力：大肠杆菌在适宜的环境条件下能够迅速生长和繁殖。

它对温度、pH值和营养物的要求较为宽容。

一般来说，大肠杆菌的最适生长温度为37摄氏度，pH值在6.5-7.5之间。

此外，大肠杆菌对葡萄糖等简单糖类具有较高的利用能力，能够利用这些营养物进行代谢和生长。

3. 大肠杆菌在不同环境下的生长情况：大肠杆菌在不同环境条件下的生长情况可能有所不同。

例如，在高温环境下，大肠杆菌的生长速度会加快，而在低温环境下则会减慢。

此外，在酸性环境中，大肠杆菌的生长可能受到抑制。

然而，尽管大肠杆菌对环境的适应能力较强，但在极端条件下，如高温、高盐度等，它的生长可能会受到抑制或甚至死亡。

实习报告：大肠杆菌的实验室检测一、实习背景与目的本次实习在老师的指导下，对大肠杆菌进行了实验室检测。

实习的主要目的是了解大肠杆菌的基本特性，掌握实验室检测方法，提高自己的实验操作能力。

二、实习内容与过程1. 培养基配置在实验室检测大肠杆菌之前，首先需要配置LB液体培养基。

LB培养基是一种常用的营养丰富的培养基，适用于大肠杆菌的生长。

配置过程包括称量、溶解、灭菌等步骤。

2. 菌株接种将大肠杆菌菌株取出，用无菌水冲洗后，用接种环取一定量的菌株，均匀地涂抹在LB液体培养基上。

然后将培养皿放入培养箱中，保持适宜的温度和时间，让菌株在培养基上生长。

3. 观察与记录在菌株生长过程中，需要定期观察并记录菌落的大小、形状、颜色等特征。

这些特征可以作为判断大肠杆菌生长状况的依据。

4. 生化试验为了进一步确认大肠杆菌的身份，需要进行生化试验。

主要包括糖类发酵试验、乳糖发酵试验、尿素分解试验等。

通过观察试验结果，可以判断大肠杆菌的生化特性。

5. 药物敏感试验为了了解大肠杆菌对各种抗生素的敏感性，进行了药物敏感试验。

将大肠杆菌菌株均匀涂抹在含有不同抗生素的培养基上，观察菌落的生长情况，从而判断大肠杆菌对各种抗生素的敏感性。

三、实习心得与体会通过本次实习，我对大肠杆菌的实验室检测有了更深入的了解。

在实验操作过程中，我学会了如何配置培养基、接种、观察菌落特征、进行生化试验和药物敏感试验等。

同时，我还明白了实验操作的严谨性和规范性对于实验结果的重要性。

此外，本次实习也让我认识到了团队合作的重要性。

在实习过程中，我和同学们一起讨论实验问题、分享实验心得，共同解决实验中遇到的困难。

这种团队合作的精神对我今后的学习和工作中具有很大的启示。

四、实习总结本次大肠杆菌实验室检测实习，使我掌握了实验操作技能，提高了自己的实验能力。

同时，我也认识到了团队合作的重要性。

在今后的学习和工作中，我将不断努力，争取更好地将所学知识运用到实际工作中。

大肠杆菌自动诱导培养基配方及操作方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，也是实验室中常用的菌种之一、下面是大肠杆菌自动诱导培养基的配方及操作方法。

一、自动诱导培养基配方：1.碳源：-葡萄糖（10g/L）：作为主要的碳源供给菌体能量。

-乳糖（5g/L）：用于诱导乳糖酶的表达。

2.氮源：-酵母粉（5g/L）：提供菌体生长所需的氮源。

3.盐类：-氯化钠（5g/L）：维持培养基的渗透压和离子平衡。

4.调节剂：-草酸二钠（1.36g/L）：调节培养基的pH值，保持适宜的生长环境。

5.其他添加剂：-磷酸二氢钾（5g/L）：提供磷酸盐的源，促进菌体生长。

-氯化钾（0.25g/L）：提供钾盐的源，满足菌体对钾的需求。

-氯化镁（0.5g/L）：提供镁盐的源，满足菌体对镁的需求。

配方中的所有化学品都可以在实验室常见试剂供应商处购买得到。

二、自动诱导培养基操作方法：1.准备培养基：a.根据配方将所需的化学品称量并溶解在适量的去离子水中。

b.用自动滤器（pH7.0）滤过溶液以去除可能存在的微生物污染。

c.调节培养基的pH至7.0，再用去离子水补足总体积至所需浓度。

2.灭菌：a.将调好pH的培养基倒入适量的培养瓶中。

b.放入高压灭菌锅中，进行高压灭菌。

3.菌种接种：a.选取一株适宜的大肠杆菌菌株，用无菌技术将其接种至培养基中。

b. 将接种好的培养基培养瓶放入恒温摇床中，以28°C恒温、200 rpm的条件下培养。

4.观察生长：a.在培养过程中，定期取一部分培养基进行测量分析。

b.测量菌液的光密度（OD值），以评估菌体生长情况。

5.收获细胞：a.在菌液达到一定浓度后，用无菌操作将菌液转移到离心管中。

c.将沉淀用缓冲液重悬。

6.文库构建：a.从收获的菌体中提取DNA，并使用合适的方法构建文库。

以上即为大肠杆菌自动诱导培养基的配方及操作方法。

在实验过程中，要注意使用无菌技术，尽量避免微生物污染。

一、实验目的1. 学习大肠杆菌的培养方法，掌握其生长规律。

2. 掌握无菌操作技术，培养纯化大肠杆菌。

3. 了解大肠杆菌在食品、环境及医学等领域中的应用。

二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性杆菌，广泛存在于人和动物的肠道中。

在实验室条件下，大肠杆菌可以通过人工培养获得纯化菌株。

本实验采用LB培养基培养大肠杆菌，通过观察菌落形态、显微镜观察等方法，了解大肠杆菌的生长特点。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）大肠杆菌菌种；（2）LB培养基；（3）无菌水；（4）无菌试管、培养皿、移液管、镊子、酒精灯等。

2. 实验仪器：（1）恒温培养箱；（2）显微镜；（3）酒精灯；（4）高压蒸汽灭菌器。

四、实验步骤1. 菌种复苏（1）将大肠杆菌菌种接种于LB培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。

（2）待菌液生长旺盛后，取适量菌液，用无菌水进行稀释。

2. 培养基制备（1）按照LB培养基配方，称取相应的成分，加入去离子水溶解。

（2）将溶液煮沸，去除其中的氧气。

（3）将溶液冷却至50-55℃，加入适量的无菌水。

（4）用无菌滤膜过滤除菌。

3. 接种与培养（1）将制备好的LB培养基倒入培养皿中，待凝固后，用无菌移液管吸取菌液，均匀涂布于培养基表面。

（2）将培养皿倒置，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。

4. 观察与鉴定（1）观察菌落形态，记录菌落颜色、大小、边缘等特征。

（2）用无菌镊子挑取菌落，制成涂片。

（3）将涂片置于显微镜下观察，观察细菌的形态、排列等特征。

5. 结果与分析（1）菌落形态：大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为乳白色。

（2）显微镜观察：大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短粗，两端钝圆，呈杆状。

五、实验结果1. 菌落形态：大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为乳白色。

2. 显微镜观察：大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短粗，两端钝圆，呈杆状。

六、实验讨论1. 在实验过程中，无菌操作非常重要，以免污染菌种。

实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲实验目的1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。

2.进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。

3.说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。

实验材料1.配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解。

2.配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。

实验步骤1.培养基灭菌。

在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。

既可以通气，又不使细菌进入。

)。

将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时）。

同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌。

2.倒平板，倒斜面。

灭菌后。

待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。

超净工作台操作：打超净工作台的紫外灯（注意：打开紫外灯后人必须离开），持续30min，关闭紫外灯，打开过滤风和白炽灯。

将有培养基的三角瓶和培养皿放在灭菌后的超净工作台上后，点燃酒精灯，用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面，并用酒精棉球擦手。

待固体培养基冷却到60℃时（手放上还有些热的时候），在酒精灯火焰旁，以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封口膜，右手其他三个手指拿着三角瓶；左手拿着培养皿，并打开上盖的一边，将三角瓶的培养基约10～20mL倒入1 个培养皿中。

倒入后立即置于水平位置上，轻轻摇晃，使培养基铺满培养皿底，待凝，使之形成平面。

倒斜面（试管内空白斜面），用玻璃漏斗倒入试管内，每试管2mL。

试管斜靠在平放的铅笔上，冷却凝固。

3.液体培养基用于大肠杆菌的扩大培养。

任务一大肠杆菌病实验室诊断方案设计及所需培养基的制备教案
授课内容大肠杆菌病实验室诊断方案设
计及所需培养基的制备
授课时数 2
授课教师授课班级
授课类型技能课授课场地教学做一体化实验室教学材料PPT及各种试验器材教学方法举例、讲授、示教、操作教学重点相关实训的操作及结果判定
教学难点培养基的灭菌
教学目标会制备实验室常用的培养基
教学内容及过程 导入新课：（0.5学时）
组织学生汇报大肠杆菌病的实验室诊断方案，并进行讨论。

教学内容（约17学时）
任务一大肠杆菌病实验室诊断方案设计及所需培养基的制备（约2学时）
一、大肠杆菌病实验室诊断方案设计介绍
二、实习周作业：提交综合试验论文---大肠杆菌病的实验室诊断报告
1.事先讲清楚综合试验论文的书写要求，提交电子版，实验结果拍照片并插入论文相应位置
2.强调对试验结果的记录和分析
三、所需培养基的制备
（一）说明所需制备的培养基类型及用途，布置任务
1.细菌分离培养---麦糠凯琼脂平板（1个/人）
2.细菌的纯培养---普通营养琼脂平板（1个/人）
3.细菌的生化试验---H
2
S试管斜面（1支/人）
4.细菌的敏感药物筛选---MH琼脂平板（1个/人）
5.菌种保存---营养琼脂试管斜面（1支/人）
（二）讲授各类培养基制备的方法并示教
配料→溶化→分装灭菌→冷却→无菌检验→冷藏备用。

（三）学生操作该试验
（四）点评各实验组培养基制备情况，收集培养基冷藏保存
习题作业 1.试述普通营养琼脂平板的制备步骤？
课后反思事先给各实验组分配好制作的培养基类型及数量注：标记★的内容为重点，标记◎的内容为难点。

一、实习背景大肠杆菌（Escherichia coli），是常见的革兰氏阴性杆菌，广泛存在于自然界和人体肠道中。

作为一种重要的模式生物，大肠杆菌在生物学、医学、食品科学等领域具有广泛的应用。

本次实习旨在通过实验室操作，加深对大肠杆菌的认识，掌握其培养、鉴定、分离等基本技能。

二、实习目的1. 了解大肠杆菌的生物学特性及在各个领域的应用。

2. 掌握大肠杆菌的培养、鉴定、分离等基本技能。

3. 提高实验室操作能力，培养严谨的科学态度。

三、实习内容1. 大肠杆菌的培养（1）培养基的配制：称取适量的LB培养基粉末，加入蒸馏水溶解，调整pH值至7.0，分装于锥形瓶中，高压蒸汽灭菌。

（2）培养：将灭菌后的LB培养基倒入培养皿中，待凝固后，用无菌接种环挑取适量菌种接种于培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养。

2. 大肠杆菌的鉴定（1）革兰氏染色：将培养好的菌落涂片，进行革兰氏染色，观察菌体的形态和颜色。

（2）生化实验：进行葡萄糖发酵、乳糖发酵、氧化酶试验等生化实验，以鉴定菌种。

3. 大肠杆菌的分离（1）平板划线法：将培养好的菌液用无菌接种环涂布于平板上，进行平板划线，观察菌落的生长情况。

（2）稀释涂布平板法：将培养好的菌液进行梯度稀释，取适量稀释液涂布于平板上，进行分离。

四、实习结果与分析1. 大肠杆菌的培养通过培养，成功获得了大肠杆菌菌落，菌落呈圆形、光滑、湿润、透明，边缘整齐。

2. 大肠杆菌的鉴定革兰氏染色结果显示，大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，呈短杆状。

生化实验结果显示，大肠杆菌能发酵葡萄糖，不发酵乳糖，氧化酶试验阴性。

3. 大肠杆菌的分离平板划线法和稀释涂布平板法均成功分离出大肠杆菌菌落，菌落特征与培养得到的菌落一致。

五、实习体会1. 通过本次实习，我对大肠杆菌的生物学特性、培养、鉴定、分离等基本技能有了更深入的了解。

2. 实验室操作过程中，我学会了无菌操作、微生物培养、显微镜观察等基本技能，提高了自己的动手能力。

大肠杆菌培养基制备过程
制备大肠杆菌培养基的过程如下：
1. 准备培养基成分：大肠杆菌培养基的成分包括碳源、氮源、矿物质盐及其他添加物。

常用的
碳源有葡萄糖、蔗糖等；氮源可以选择氨基酸、氨基酸类化合物等；矿物质盐可以选择无机盐、有机盐等。

添加剂有pH调节剂、辅因子等。

2. 杀菌处理：将所需的碳源、氮源、矿物质盐及其他添加物加入适量的蒸馏水中，经过高温高
压灭菌处理。

3. 酶解处理：将培养基中添加的蛋白质进行酶解处理，以提供大肠杆菌生长所需的氮源。

4. 调整pH值：使用pH调节剂调整培养基的pH值，常见的调节剂有氢氧化钠和氢氧化钾等。

5. 分装和灭菌：将制备好的培养基分装到培养瓶或培养皿中，然后进行高温高压灭菌处理，以
保证培养基的无菌状态。

6. 储存和使用：将灭菌后的培养基在低温下储存，以延长其使用寿命。

使用时，将培养基回溶，配制成适当浓度的液态培养基，用于大肠杆菌的培养和研究。

需要注意的是，大肠杆菌培养基的制备过程可能存在一定的差异，具体的制备步骤和成分比例
可根据实验需求进行调整。

此外，操作过程中需要注意无菌操作，并保持培养基的无菌状态，
以避免杂菌污染。

大肠杆菌培养步骤方法一、目的大肠杆菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然环境中，如土壤、水源、动植物体内等。

大肠杆菌对人类和动物具有一定的致病性，因此了解如何进行大肠杆菌的培养对于食品安全、生物安全和公共卫生等方面具有重要意义。

本方法旨在提供一种简单、快速、有效的大肠杆菌培养方法，帮助实验室和研究人员准确地进行大肠杆菌的检测和鉴定。

二、材料1.培养基：大肠杆菌培养基是专门用于培养大肠杆菌的特殊培养基。

常用的有大肠杆菌培养基（EMB培养基）、麦康凯培养基等。

这些培养基通常含有大肠杆菌所需的营养物质，如碳源、氮源、维生素和矿物质等，以及能够选择性区分大肠杆菌的抑制剂。

2.接种环：用于将菌种接种到培养基上的金属环。

3.显微镜：用于观察细菌的形态和生长情况。

4.灭菌锅：用于消毒和灭菌器具和材料，保证实验结果的准确性和实验过程的安全性。

5.恒温培养箱：用于在适宜的温度下培养细菌。

三、步骤方法1.准备培养基：根据所选择的培养基配方，将所需的成分混合在一起，加入适量的水，搅拌均匀后加热煮沸，然后倒入灭菌的培养皿中，待其冷却凝固。

2.灭菌：将所有实验器具和材料放入灭菌锅中进行消毒灭菌，确保无菌操作，避免杂菌污染。

3.接种：从保存菌种的冰箱中取出接种环，在火焰上加热接种环并灭菌。

用接种环蘸取少量菌种，轻轻划线或点涂在培养基表面，尽量分散开接种点。

将接种环放回原处。

4.培养：将接种好的培养皿放入恒温培养箱中，设定适宜的温度（一般为37℃）进行培养。

根据需要培养的时间不同，一般培养18-24小时后即可观察结果。

5.观察与记录：观察培养好的培养皿中大肠杆菌的生长情况，记录菌落特征、颜色、形态等信息。

如有需要，可以进行进一步的生化鉴定或分子生物学鉴定。

6.实验后处理：实验结束后，将使用过的器具、材料进行消毒处理，防止交叉污染和疾病传播。

同时，对实验产生的废物进行无害化处理，保护环境安全。

四、注意事项1.实验操作应在无菌条件下进行，避免杂菌污染。