紫外分光光度法测定胃蛋白酶片中蛋白酶活力

分光光度法测定蛋白酶酶活1适用范围本方法适用于中性蛋白酶、酸性蛋白酶酶活得测定。

2测定原理蛋白酶在一定得温度与pＨ条件下，水解酪素（酪蛋白)底物，产生含有酚基得氨基酸（如:酪氨酸、色氨酸等),在碱性条件下，将福林试剂（Ｆolｉn）还原,生产钼蓝与钨蓝,用分光光度计于波长68０nm下测定溶液吸光度.酶活力与吸光度成正比，由此可以计算产品得酶活力。

酶活单位得定义:每１mL粗酶液，在一定温度与pＨ值条件下,10min水解酪素产生１μｇ酪氨酸为一个酶活力单位，以(u/mL)表示。

3仪器与设备3.1分析天平：精度为0、000１ｇ。

3.2紫外分光光度计.3.3恒温水浴锅:精度±０、2℃。

3.4ＰH计:精度为0、01PH单位.4试剂与溶液除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂与蒸馏水。

4.1福林（Foliｎ）试剂市售分析纯福林试剂。

4.2福林使用溶液一份福林试剂与两份水混合，摇匀。

4.3碳酸钠溶液（42、4g/L）称取无水碳酸钠(Nａ2ＣＯ3）42、4g，用水溶解并定容至１000mｌ。

4.4三氯乙酸ｃ(ＣCl３COOH）=0、4ｍｏl/L称取三氯乙酸65、4g，用水溶解并定容至１000 mL。

4.5氢氧化钠溶液c(NａOH）=０、5mol/L称取氢氧化钠片剂20、0g，加水900ml并搅拌溶解，待溶液到室温后加水定容至10００ml,摇匀。

4.6盐酸溶液c（HCL)=1 mol/L及０、１ mol/L1 ｍol／L ＨCL:取90mL浓盐酸溶解于蒸馏水中,定容至１000ｍL.0、1 mｏl/ＬHCL:取9mL浓盐酸溶解于蒸馏水中,定容至1０00mL。

4.7缓冲溶液4.7.1磷酸缓冲液(pＨ=７、5,适用于中性蛋白酶)称取磷酸氢二钠(Nａ２HPO4•12H2O）6、02g与磷酸二氢钠（NaH2PO４•1２H2O)0、５g，加水溶解并定容至１０00mL。

4.7.2乳酸缓冲液（pH＝３、0,适用于酸性蛋白酶）甲液：称取乳酸(8０％～90％）10、6g，加水溶解并定容至1000 mL。

分光光度法测定蛋白酶酶活1适用范围本方法适用于中性蛋白酶、酸性蛋白酶酶活的测定。

2测定原理蛋白酶在一定的温度与pH条件下，水解酪素（酪蛋白）底物，产生含有酚基的氨基酸（如：酪氨酸、色氨酸等），在碱性条件下，将福林试剂（Folin）还原，生产钼蓝和钨蓝，用分光光度计于波长680nm下测定溶液吸光度。

酶活力与吸光度成正比，由此可以计算产品的酶活力。

酶活单位的定义：每1mL粗酶液，在一定温度和pH值条件下，10min水解酪素产生1μg酪氨酸为一个酶活力单位，以（u/mL）表示。

3仪器和设备3.1分析天平：精度为0.0001g。

3.2紫外分光光度计。

3.3恒温水浴锅：精度±0.2℃。

3.4PH计：精度为0.01PH单位。

4试剂和溶液除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和蒸馏水。

4.1福林（Folin）试剂市售分析纯福林试剂。

4.2福林使用溶液一份福林试剂与两份水混合，摇匀。

4.3碳酸钠溶液（42.4g/L）称取无水碳酸钠（Na2CO3）42.4g，用水溶解并定容至1000ml。

4.4三氯乙酸c（CCl3COOH）=0.4mol/L称取三氯乙酸65.4g，用水溶解并定容至1000 mL。

4.5氢氧化钠溶液c（NaOH）=0.5mol/L称取氢氧化钠片剂20.0g，加水900ml并搅拌溶解，待溶液到室温后加水定容至1000ml，摇匀。

4.6盐酸溶液c（HCL）＝1 mol/L及0.1 mol/L1 mol/L HCL:取90mL浓盐酸溶解于蒸馏水中，定容至1000mL。

0.1 mol/L HCL：取9mL浓盐酸溶解于蒸馏水中，定容至1000mL。

4.7缓冲溶液4.7.1磷酸缓冲液（pH＝7.5，适用于中性蛋白酶）称取磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O）6.02g和磷酸二氢钠（NaH2PO4•12H2O）0.5g，加水溶解并定容至1000mL。

4.7.2乳酸缓冲液（pH＝3.0，适用于酸性蛋白酶）甲液：称取乳酸（80％～90％）10.6g，加水溶解并定容至1000 mL。

2013/05/13紫外分光光度法测蛋白酶酶活1、原理蛋白酶在一定的温度与pH条件下，水解酪素底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并使未水解的酪素沉淀除去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定。

根据吸光度计算其酶活力。

酶活单位的定义：每1mL粗酶液，在一定温度和pH值条件下，1min水解酪素产生1ug酪氨酸为一个酶活力单位，以（u/mL）表示。

2、试剂和溶液三氯乙酸、氢氧化钠、盐酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乳酸、乳酸钠、硼酸钠（硼砂）均为分析纯，酪素、酪氨酸为生化试剂。

2.1 三氯乙酸c（CCL3·COOH）=0.4mol/L称取三氯乙酸65.4g，用水溶解并定容至1000 mL。

2.2 氢氧化钠溶液c（NaOH）=0.5mol/L按GB601配制。

2.3 盐酸溶液c（HCL）＝1 mol/L及0.1 mol/L1 mol/L HＣＬ:取90mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。

0.1 mol/L HＣＬ：取9mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。

2.4 缓冲溶液a、磷酸缓冲液（pH＝7.5）适用于中性蛋白酶称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）6.02g和磷酸二氢钠（NaH2PO4·12H2O）0.5g，加水溶解并定容至1000mL。

b、乳酸缓冲液（pH＝3.0）适用于酸性蛋白酶甲液称取乳酸（80％～90％）10.6g，加水溶解并定容至1000 mL。

乙液称取乳酸钠（70％）16g，加水溶解并定容至1000 mL。

使用溶液取甲液8 mL，加乙液1 mL，混匀，稀释一倍，即成0.05moi/L乳酸缓冲溶液。

c、硼酸缓冲溶液（pH＝10.5）适用于碱性蛋白酶甲液称取硼酸钠（硼砂）19.08g，加水溶解并定容至1000 mL。

乙液称取氢氧化钠4.0g，加水溶解并定容至1000 mL。

使用溶液取甲液500 mL、乙液400 mL混匀，用水稀释至1000mL。

分光光度法测定蛋白酶酶活分光光度法测定蛋白酶酶活1适用范围本方法适用于中性蛋白酶、酸性蛋白酶酶活的测定。

2测定原理蛋白酶在一定的温度与pH条件下，水解酪素（酪蛋白）底物，产生含有酚基的氨基酸（如：酪氨酸、色氨酸等），在碱性条件下，将福林试剂（Folin）还原，生产钼蓝和钨蓝，用分光光度计于波长680nm下测定溶液吸光度。

酶活力与吸光度成正比，由此可以计算产品的酶活力。

酶活单位的定义：每1mL粗酶液，在一定温度和pH值条件下，10min水解酪素产生1μg酪氨酸为一个酶活力单位，以（u/mL）表示。

3仪器和设备3.1分析天平：精度为0.0001g。

3.2紫外分光光度计。

3.3恒温水浴锅：精度±0.2℃。

3.4PH计：精度为0.01PH单位。

4试剂和溶液除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和蒸馏水。

4.1福林（Folin）试剂市售分析纯福林试剂。

4.2福林使用溶液一份福林试剂与两份水混合，摇匀。

4.3碳酸钠溶液（42.4g/L）称取无水碳酸钠（Na2CO3）42.4g，用水溶解并定容至1000ml。

4.4三氯乙酸c（CCl3COOH）=0.4mol/L称取三氯乙酸65.4g，用水溶解并定容至1000 mL。

4.5氢氧化钠溶液c（NaOH）=0.5mol/L称取氢氧化钠片剂20.0g，加水900ml并搅拌溶解，待溶液到室温后加水定容至1000ml，摇匀。

4.6盐酸溶液c（HCL）＝1 mol/L及0.1 mol/L1 mol/L HCL:取90mL浓盐酸溶解于蒸馏水中，定容至1000mL。

0.1 mol/L HCL：取9mL浓盐酸溶解于蒸馏水中，定容至1000mL。

4.7缓冲溶液4.7.1磷酸缓冲液（pH＝7.5，适用于中性蛋白酶）称取磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O）6.02g和磷酸二氢钠（NaH2PO4•12H2O）0.5g，加水溶解并定容至1000mL。

4.7.2乳酸缓冲液（pH＝3.0，适用于酸性蛋白酶）甲液：称取乳酸（80％～90％）10.6g，加水溶解并定容至1000 mL。

紫外可见分光光度计法测定郫县豆瓣制曲过程中的蛋白酶活力李璘佼,车振明3(西华大学生物工程学院,成都　610039)摘要:文章对紫外可见分光光度计法测定郫县豆瓣制曲过程中的蛋白酶活性进行了详述。

以蛋白酶的活力为指标,最终确定郫县豆瓣最佳制曲条件:制曲温度34℃、制曲时间3d、曲精量∶豆瓣量为1∶6666。

关键词:郫县豆瓣;蛋白酶活性;紫外分光光度计;制曲条件中图分类号:TS201.25 文献标识码:B 文章编号:1000-9973(2009)05-0098-03 Activity of protea se determination method for Pixian bean sauce starter propagation with UV2Visible sp ectrophotometerL I Lin2jiao,C H E Zhen2ming3(School of Bioengineering of Xi hua University,Chengdu610039,China)Abstract:The activity of protease determination met hod for pixian bean sauce starter propagation wit h UV2Visible spectrop hotometer has been p ro bed in t he article.t he activity of protease just as a norm,which make sure t he best factors of Pixian bean sauce starter propagation:temperat ure is 34℃;time is3d;t he proportion of Aspergillus oryzae and bean is1∶6666.Key words:Pixian bean sauce;t he activity of protease;UV2Visible pect rop hotometer;factors of starter p ropagation 郫县豆瓣属发酵调味品,具有二百余年悠久历史[1]。

紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理介绍紫外分光光度法是常用的一种测定蛋白质浓度的方法。

本文将详细介绍紫外分光光度法的原理以及其在蛋白质浓度测定中的应用。

紫外分光光度法原理紫外分光光度法利用蛋白质溶液对紫外光的吸收特性进行测量，从而确定蛋白质的浓度。

蛋白质分子中的色氨酸（Trp）、苯丙氨酸（Phe）和酪氨酸（Tyr）等芳香族氨基酸在紫外光区域具有吸收峰，通过测量吸光度可以间接测定蛋白质的浓度。

实验步骤以下是使用紫外分光光度法测定蛋白质浓度的一般实验步骤：1. 制备蛋白质样品制备含有待测蛋白质的溶液样品。

确保溶液浓度适中，避免过高或过低浓度对测定结果产生影响。

2. 预热紫外分光光度计打开紫外分光光度计并进行预热，使其达到稳定的工作温度。

3. 校准光程使用标准样品校准紫外分光光度计的光程，确保准确测量待测样品的吸光度。

4. 测定吸光度将待测样品倒入光度池，使用紫外分光光度计测量样品溶液在特定波长下的吸光度。

常用波长为280nm，其对色氨酸具有最大吸收峰。

5. 绘制标准曲线制备一系列已知浓度的蛋白质标准溶液，分别测定它们的吸光度。

利用这些测定值绘制标准曲线，用于计算待测样品的蛋白质浓度。

6. 计算蛋白质浓度根据标准曲线，计算出待测样品的蛋白质浓度。

根据不同的光吸收系数和波长，可以得出不同氨基酸的摩尔吸光系数，再根据摩尔吸光系数进行计算。

紫外分光光度法的优势紫外分光光度法具有以下优势：1.灵敏度高：对浓度较低的蛋白质样品也能够进行准确测量。

2.快速便捷：测量过程简单，不需要复杂操作。

3.非破坏性：样品在测量过程中不受损伤，可以进行进一步的分析。

紫外分光光度法的局限性紫外分光光度法也存在一定的局限性：1.干扰物质：一些样品中可能含有其他吸收波长与蛋白质相近的物质，会对测定结果产生干扰。

2.重复性：在批量测定时，光度池的装填和清洗对结果的重复性有一定影响。

3.波长选择：根据不同蛋白质的吸收特性，选择适当的波长进行测量，否则会导致测定结果不准确。

胃蛋白酶拼音名：Weidanbaimei英文名：Pepsin书页号：2005年版二部－389本品系自猪、羊或牛的胃黏膜中提取制得的胃蛋白酶。

每1g中含蛋白酶活力不得少于3800 单位。

【性状】本品为白色至淡黄色的粉末；无霉败臭；有引湿性；水溶液显酸性反应。

【鉴别】取本品的水溶液，加鞣酸、没食子酸或多数重金属盐的溶液，即生成沉淀。

【检查】干燥失重取本品，在100 ℃干燥4 小时，减失重量不得过5.0 ％（附录ⅧL）。

【效价测定】对照品溶液的制备精密称取酪氨酸对照品适量，加盐酸溶液〔取1mol/L 盐酸溶液65ml，加水至1000ml 〕制成每1ml 中含0.5mg 的溶液。

供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，用上述盐酸溶液制成每1ml 中约含0.2 ～0.4单位的溶液。

测定法取试管6 支，其中3 支各精密加入对照品溶液1ml ，另3 支各精密加入供试品溶液1ml ，置37℃±0.5℃水浴中，保温5 分钟，精密加入预热至37℃±0.5℃的血红蛋白试液5ml ，摇匀，并准确计时，在37℃±0.5℃水浴中反应10分钟。

立即精密加入5%三氯醋酸溶液5ml ，摇匀，滤过，取续滤液备用。

另取试管2 支，各精密加入血红蛋白试液5ml ，置37℃±0.5℃水浴中保温10分钟，再精密加入5％三氯醋酸溶液5ml ，其中1支加供试品溶液1ml ，另1 支加上述盐酸溶液1ml ，摇匀，滤过，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA），在275nm 的波长处测定吸光度，算出平均值ＡS和Ａ，按下式计算。

在上述条件下，每分钟能催化水解血红蛋白生成1μmol 酪氨酸的酶量，为一个蛋白酶活力单位。

【类别】助消化药。

【贮藏】密封，在干燥处保存。

【制剂】(1)胃蛋白酶片(2)胃蛋白酶颗粒(3)含糖胃蛋白酶。

分光光度法测定蛋白酶酶活1适用范围本方法适用于中性蛋白酶、酸性蛋白酶酶活得测定。

2测定原理蛋白酶在一定得温度与pH条件下,水解酪素(酪蛋白)底物,产生含有酚基得氨基酸(如:酪氨酸、色氨酸等),在碱性条件下,将福林试剂(Ｆolin)还原,生产钼蓝与钨蓝,用分光光度计于波长680nm下测定溶液吸光度。

酶活力与吸光度成正比,由此可以计算产品得酶活力。

酶活单位得定义:每１mL粗酶液,在一定温度与ｐH值条件下,10min水解酪素产生1μg酪氨酸为一个酶活力单位,以(u／ｍL)表示。

3仪器与设备3.1分析天平:精度为0。

0０01g。

3.2紫外分光光度计。

3.3恒温水浴锅:精度±0。

2℃。

3.4PＨ计:精度为0.0１PＨ单位。

4试剂与溶液除非另有说明,在分析中仅使用分析纯试剂与蒸馏水。

4.1福林(Foｌin)试剂市售分析纯福林试剂、4.2福林使用溶液一份福林试剂与两份水混合,摇匀。

4.3碳酸钠溶液(42、4ｇ／L)称取无水碳酸钠(Na2CＯ3)4２.4ｇ,用水溶解并定容至1０0０ml。

4.4三氯乙酸c(ＣCl3COOH)=0、4mｏｌ/Ｌ称取三氯乙酸６５、4g,用水溶解并定容至１000 mL、4.5氢氧化钠溶液ｃ(NaOH)＝0.5ｍol／L称取氢氧化钠片剂２0。

0g,加水90０ml并搅拌溶解,待溶液到室温后加水定容至1000ml,摇匀。

4.6盐酸溶液c(HCL)=1 mol/L及0。

１mol/L1 ｍol/L HＣL:取９０mL浓盐酸溶解于蒸馏水中,定容至1000mＬ。

０、1 ｍol/Ｌ HCL:取9mL浓盐酸溶解于蒸馏水中,定容至100０ｍＬ、4.7缓冲溶液4.7.1磷酸缓冲液(pH＝７。

5,适用于中性蛋白酶)称取磷酸氢二钠(Na２ＨPO4•12Ｈ2Ｏ)6、02ｇ与磷酸二氢钠(NaＨ2ＰO4•1２Ｈ2O)0、5ｇ,加水溶解并定容至1000mL。

4.7.2乳酸缓冲液(ｐH=3。

0,适用于酸性蛋白酶)甲液:称取乳酸(80％～９0％)10、6g,加水溶解并定容至1000 ｍL。

啤酒中蛋白酶A活性的紫外分光光度检测法优化目前,啤酒行业中蛋白酶A活性检测的方法主要包括紫外分光光度法、Lowry 法、Bradford法、底物荧光法和RLS法(共振散射法),它们都适用于较高蛋白酶A浓度样品的检测。

大量的研究证明,线性范围在为200~2000μg/mL内,紫外分光光度法获得的结果还是可信的,但仍旧有可待完善之处。

结合四川南充燕京啤酒厂的实际情况,本研究主要是针对啤酒中蛋白酶A活性的紫外分光光度检测法进行优化,以期实现对啤酒蛋白酶A活性的快速而又准确的测定。

本报告以9.5°P啤酒(包括鲜啤和普啤)和8°P啤酒(包括鲜啤和普啤)作为研究对象,在采用原有紫外分光光度法检测其蛋白酶A活性时,结果出现随着稀释倍数的增加而吸光值呈现负数、吸光值波动较大以及无法正确确定啤酒中的实际酶活等问题。

因此,本研究分别从空白对照组的更改、最佳波长、反应时长、试剂反应浓度等几个方面对原方法进行优化,最后总结归纳得到改良过后的方法。

其改良方法为:酪素浓度更改为5000mg/L,三氯乙酸的浓度为1.25mol/L,反应时长仍为10min,检测波长仍为275nm。

最后,为了验证改良后的方法是否优于改良前的方法,对酒体稀释2、3、4倍后,分别采用前后两种方法检测蛋白酶A的活性。

结果表明,改良后的方法所测定的吸光值均为正数,计算得到的蛋白酶A酶活接近实际生产啤酒中的蛋白酶A 酶活。

同时,在本文最后,结合自身的研究结果和查阅相关参考文献,对提高啤酒泡沫稳定性这一问题上,在实际生产中的操作以及啤酒储藏等方面提出了相应的建议,并对于今后的发展情况进行了展望。