HPLC―MSMS法测定鸭肉中氯霉素类药物残留8页
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动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
动物源性食品中氯霉素类药物残留的测定是一项重要的检测工作,这些药物残留的存在可能对人体健康产生一定的危害。
准确、快速地检测这些残留物的含量是非常必要的。
氯霉素类药物是一种广谱抗生素,常用于预防和治疗动物的感染病。
如果动物在屠宰前一段时间内使用了这些药物,残留物可能会在食品中存在。
对于人类来说,摄入这些残留物可能会引起过敏反应、中毒甚至诱发耐药菌株。
第一种是高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)。
该方法具有快速、准确、灵敏、选择性高等特点。
将样品进行提取,利用有机溶剂将残留物从食品中分离出来。
然后,使用HPLC将残留物进行分离,并通过串联质谱进行定性和定量分析。
该方法可以同时测定多种氯霉素类药物的残留,且可以达到非常低的检测限。
第二种是酶联免疫吸附测定法(ELISA)。
该方法是通过抗体与药物残留物结合来进行检测的。
将样品中的残留物与标记有酶的抗体结合,在搅拌的条件下进行反应。
然后,通过酶标仪检测残留物与酶的结合程度,从而确定残留物的含量。
由于该方法操作简便、快速,且具有较高的灵敏度和选择性,因此广泛应用于动物源性食品中氯霉素类药物残留的测定中。
测定动物源性食品中氯霉素类药物残留的方法有很多种,每种方法都有其优缺点。
在具体实验中,需要根据实际需要选择合适的方法进行测定,以确保结果的准确性和可靠性。
氟甲砜霉素2.净化方法选用Q u E C h E R S方法进行样品的净化。
本实验比较了吸附剂1(P S A 50m g,中性氧化铝50m g,无水硫酸镁500m g),吸附剂2(P S A 100m g,无水硫酸镁500mg),吸附剂3(PSA 50mg,C18 50mg,无水硫酸镁500mg)在三种不同基质1.0μg/kg水平加标时的平均回收率和精密度。
吸附剂1的回收率最佳(回收率详情见表3)。
3. 线性范围,检出限与定量限将氯霉素类药物混合标准溶液稀释成浓度为0.1n g/m l,0.5ng/ml,1.0ng/ml,5.0ng/ml,10n g/m l,内标浓度为1.0n g/m l 的系列标准溶液,得到线性回归方程在0.1~1.0n g/m l的浓度范围内线性关系良好,氯霉素:Y=1.427X+0.001943,R2=0.9979;甲砜霉素:Y=275X-0.02534,R2=0.9982;氟甲砜霉素:Y=12560X-0.08704,R2=0.9973,平行测定20次空白样品,得到空白值的标准偏差S b,仪器的测定低限为C L=3S b/b(b为标准曲线的斜率),方法的测定低限为C L乘以稀释倍数除以样品质量,确定本方法中三种氯霉素类药物的检出限均为0.1μg/kg,定量限均为0.3μg/kg(详见表4)。
4. 回收率与精密度向阴性基质样品中添加3个浓度水平的混合标准溶液,按照本试验优化所得的样品前处理方法及仪器条件进行试验(n=6)。
氯霉素类药物的回收率为95.7%~101%,相对标准偏差为4.38%~7.33%,符合相关国家标准和法律法规的要求(详情见表5)。
三、结论QuEChERS方法与传统方法相比,处理步骤简单快速,提取溶剂与净化吸附剂接触充分,回收率较好,通过调整提取溶剂和净化吸附剂的比例,优化了动物源性食品中的氯霉素类药物残留测定方法。
定性分析和定量分析都满足要求。
[参考文献][1]李俊锁, 邱月明, 王超. 兽药残留分析[M].上海:上海科学技术出版社, 2002.[2] 赵汉取, 王雨晨, 韦肖杭,等. 新一代抗生素——氟苯尼考及其在水产养殖中的应用[J]. 水产科技情报, 2007, 34(4):165-168.[3] 李鹏, 邱月明, 蔡慧霞,等. 气相色谱-质谱联用法测定动物组织中氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素的残留量[J]. 色谱, 2006,24(1):2.[4] 王志杰, 冷凯良, 孙伟红,等. 水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素残留量高效液相色谱-串联质谱内标测定方法的研究[J].渔业科学进展, 2009,30(2):115-119.(作者单位:中检科(上海)测试技术有限公司)提取溶剂猪肉鸡肉鱼肉平均回收率%96.495.798.1平均回收率%84.188.793.5平均回收率%10194.396.7精密度%6.536.174.38精密度%7.315.025.31精密度%6.113.374.26乙腈(1%氨水)丙酮(1%氨水)乙酸乙酯(1%氨水)表2 不同提取溶剂回收率(n=6)表3 不同吸附剂回收率(n=6)提取溶剂猪肉鸡肉鱼肉平均回收率%96.495.798.1平均回收率%92.190.495.2平均回收率%93.188.790.6精密度%6.536.174.38精密度%8.146.223.82精密度%4.173.662.83吸附剂1吸附剂2吸附剂3表5 氯霉素类药物的回收率和相对标准偏差样品添加水平μg/kg 平均回收率% RSD%猪肉0.10.21.097.696.096.46.956.336.53鸡肉0.10.21.096.796.295.77.336.56.17鱼肉0.10.21.0101.097.998.15.715.324.38表4 三种氯霉素类化合物的线性方程和测定低限氯霉素甲砜霉素氟甲砜霉素线性方程Y=1.427X+0.001943Y=275X-0.02534Y=12560X-0.08704LODμg/kg0.1μg/kg0.1μg/kg0.1μg/kgLOQμg/kg0.3μg/kg0.3μg/kg0.3μg/kgR20.99790.99820.9973《质量与认证》2020 ·11 79。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
氯霉素是一种广谱抗菌药,常用于治疗动物疾病。
过量使用氯霉素类药物可能导致残留物在动物源性食品中积累,对人体健康产生潜在风险。
准确测定动物源性食品中氯霉素类药物残留量成为保障公众健康的重要问题。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定方法有多种,包括色谱法、质谱法和免疫学法等。
高效液相色谱法(HPLC)被广泛应用于测定氯霉素类药物的残留量。
第一步:样品处理
将待测样品(如肉类、奶类等)称取适量,加入磷酸盐缓冲液中,进行均匀混合。
然后,使用离心机进行离心,将澄清的上层液体转移至新的离心管中。
第二步:萃取
将第一步得到的上层液体与乙酸乙酯混合,进行振荡和离心分离。
离心后,将乙酸乙酯层取出,并使用氮气吹干。
第三步:溶解
将第二步得到的干燥残留物用甲醇溶解,得到测试溶液。
第四步:色谱分析
将测试溶液通过HPLC进行分析。
选择适当的色谱柱和移动相,设置合适的流速和检测波长。
根据氯霉素类药物的特征峰进行定量分析。
根据已知浓度的标准品制备多个浓度的标准曲线,从而计算待测样品中氯霉素类药物的浓度。
第五步:结果判断
根据分析结果,判断待测样品中氯霉素类药物的残留量是否符合国家标准要求。
如果超过标准限量,则建议不使用该样品,以防止对人体健康造成潜在风险。
HPLC是一种常用于测定动物源性食品中氯霉素类药物残留量的方法。
通过样品处理、萃取、溶解和色谱分析等步骤,可以准确测定残留物的含量,并对公众健康提供保障。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定随着社会经济的不断发展,人们对食品安全和质量的关注也越来越重视。
动物源性食品是人们日常生活中必不可少的一部分,而在动物养殖过程中使用的药物残留问题一直备受关注。
氯霉素类药物是一类常见的抗生素,被广泛用于畜禽的预防和治疗疾病。
如果动物源性食品中残留有氯霉素类药物,就会对人体健康产生潜在的威胁。
对动物源性食品中氯霉素类药物残留量进行准确测定是非常重要的。
一、氯霉素类药物的常见种类和用途氯霉素是一种广谱的抗生素,常见的氯霉素类药物包括氯霉素、土霉素、金霉素等。
这些药物在畜禽养殖中主要用于预防和治疗细菌感染疾病,可以有效地保障动物的健康。
但是长期使用或过量使用会导致药物在动物体内积聚,最终导致药物在动物源性食品中残留,这对人体健康构成威胁。
二、动物源性食品中氯霉素类药物残留的危害动物源性食品是人们饮食的重要组成部分,如果其中残留有氯霉素类药物,就会对人体健康产生危害。
据研究表明,长期摄入氯霉素类药物残留的动物食品,会引发人体对抗生素的耐受性,降低人体的免疫力,还可能产生过敏反应、药物过敏等不良后果。
合理监测和控制动物源性食品中的氯霉素类药物残留量就显得尤为重要。
三、动物源性食品中氯霉素类药物残留的检测方法在动物源性食品中检测氯霉素类药物残留量的方法多种多样,其中包括生物学方法、物理化学方法和免疫学方法。
高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS/MS)是一种比较常用的方法,具有高灵敏度、高选择性和准确性的特点。
通过该技术,可以快速高效地定量检测动物源性食品中氯霉素类药物残留的含量,并对不同类型的动物源性食品进行分析。
四、动物源性食品中氯霉素类药物残留的监测标准为了保障食品安全和人民健康,国家对动物源性食品中氯霉素类药物残留的监测标准非常严格。
根据《食品安全国家标准-动物源性食品中氯霉素类药物残留限量》(GB31650-2019)规定,不同类型的动物源性食品中氯霉素类药物残留的限量标准是不同的。
高效液相色谱-串联质谱测定熟肉制品中氯霉素药物残留作者:肖植国,梅群,孔维芬,张馨来源:《现代食品》 2018年第12期摘要:目的:建立同时测定熟肉制品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素的液质联用方法。
方法:样品经乙腈提取,饱和乙腈正己烷脱脂,以甲醇水作为流动相,通过高效液相色谱,采用负离子模式多反应监测,氯霉素用同位素内标定量,甲砜霉素、氟甲砜霉素用外标法定量。
结果:本方法线性范围为0.25 ~20.0 μg/L,相关系数> 0.999,检出限0.01 μg/kg,定量限0.1 μg/kg,3 种物质添加水平分别为0.5、2.5、5.0 μg/kg,加标回收率分别为氯霉素82.2% ~ 103%,甲砜霉素81.8% ~ 108%,氟甲砜霉素67.6% ~ 104%,RSD < 10%。
结论:该方法具有简单快速、灵敏度高、准确性强等特点,适用于测定熟肉及熟肉制品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素的含量。
关键词:氯霉素;甲砜霉素;氟甲砜霉素;熟肉制品;高效液相色谱- 质谱法Abstract:Objective to establish a method for simultaneous determination of chloramphenicol,sulfosfamycin and flumosulfamycin in cooked meat products. Methods samples extracted by acetonitrile,saturated acetonitrile n-hexane degreasing, with methanol as mobile phase, the water by HPLC, adopt thenegative ion mode multiple reaction monitoring, chloramphenicol, using isotope internal standard quantitativethiamphenicol toxin, fluorine thiamphenicol drug quantitative byexternal standard method. Results the methodof linear range: 0.25 ~20.0 μg/L,the correlation coefficient > 0.999, the detection limit of 0.01μg/kg,quantitative limit of 0.1μg/kg, three kinds of material added level were0.5, 2.5, 5.0 μg/kg, the recoveryrate of chloramphenicol respectively 82.2% ~103%, thiamphenicol 81.8% ~ 108%, fluorine thiamphenicol67.6% ~ 104%, RSD < 10%. Conclusion this method is simple, fast, sensitive and accurate, and it issuitablefor the determination of chloramphenicol, methylamycin and flumethylamycinin cooked meat and cookedmeat products.Key words:Chloramphenicol; Sulfamycin; Fosfomycin; Cooked meat products; HPLC - massspectrometry中图分类号:O657.63氯霉素类药物具有广谱抗菌能力,在水产养殖和畜牧养殖中都广泛应用。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定动物源性食品是人们日常饮食中重要的一部分,然而其中可能存在着一些潜在的危险因素,比如动物体内的残留药物。
氯霉素类药物是一类广泛使用的抗生素,用于治疗动物的疾病。
大量使用氯霉素类药物可能导致其在动物体内残留,并通过食品链进入人体,对人体健康造成潜在威胁。
对动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定是非常重要的。
目前,国内外对动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定方法有很多种,常用的方法有高效液相色谱法、气相色谱法、质谱联用技术等。
这些方法在检测灵敏度、准确性和可操作性等方面各有优势,但也存在一些局限性,例如部分方法需要昂贵的设备和专业的操作技能。
在选择合适的测定方法时需要根据具体的实验条件和需要进行综合考虑。
高效液相色谱法是一种目前应用较为广泛的氯霉素类药物残留测定方法。
该方法操作简便,准确度高,且可以同时测定多种氯霉素类药物的残留量。
其原理是利用高效液相色谱仪对样品中的氯霉素类药物进行分离和检测,通过比对标准曲线来计算出样品中的氯霉素类药物残留量。
但是该方法也存在一些局限性,比如需要使用高昂的仪器设备,操作技能要求较高等。
在选择合适的氯霉素类药物残留测定方法时,需要根据实际情况进行综合考虑。
对于一般的常规检测工作,可以选择高效液相色谱法或气相色谱法进行分析;对于对检测结果精度和灵敏度要求较高的情况,可以选择质谱联用技术进行分析。
在进行氯霉素类药物残留测定时,还需要严格按照标准操作程序,进行严格的质量控制和质量保证,确保检测结果的准确性和可靠性。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定是一项十分重要的工作。
尽管不同的测定方法各有优势和局限性,但在实际工作中需要根据具体情况选择合适的方法,并严格按照标准操作程序进行操作,以保证检测结果的准确性和可靠性。
只有这样,才能确保动物源性食品的安全性和健康性,保障人民群众的身体健康。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
氯霉素类药物是一种广泛用于家禽、家畜和水产养殖业的抗生素,它们能够有效地预防和治疗动物疾病。
但是,如果过度使用这些药物,会导致药物残留在动物体内,从而对人们的健康造成威胁。
因此,为了确保食品安全,需要对动物源性食品中氯霉素类药物残留量进行检测。
氯霉素类药物包括氯霉素、磺胺甲基异噁唑、三种青霉素等多个种类,它们对不同的细菌有着不同的危害作用,但都具有较强的药物残留性质。
因此,精确地测定它们的残留量是非常重要的。
测定氯霉素类药物残留量的方法有多种,其中包括高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等等,这些方法都具有高灵敏度、高准确性的特点。
在现代食品检验实验室中,常用的方法是高效液相色谱法(HPLC)。
高效液相色谱法是一种常用的分离分析技术,它是一种基于液态固定相的分离技术,具有分离速度快、分离效果好、灵敏度高等多重优点。
利用高效液相色谱法可以分离出氯霉素类药物并进行定量分析。
该方法的样品处理步骤主要包括提取、纯化和分离,然后进行定量分析。
首先,将待测样品粉碎和混合,加入特定体积的溶剂进行提取,这样可以将样品中的氯霉素类药物提取出来。
然后,通过过滤和纯化净化样品,删除样品中的杂质,使得氯霉素类药物更加纯净。
接着,将样品注入高效液相色谱仪中进行分离和定量。
最后,根据所得的峰面积和对照品的峰面积计算出氯霉素类药物的含量。
水产品肌肉组织中氯霉素残留量检测方法的对比分析引言:氯霉素是一种广谱抗生素,常用于水产养殖中的疾病治疗和预防。
然而,由于氯霉素在人体中可以引起苯甘氮类药物引起的无异位脂肪移植症,因此世界各国都对水产品中的氯霉素残留量有严格的限制。
针对水产品肌肉组织中氯霉素残留量的测试,现有许多不同的方法和技术。
本文将对其中一些常用的方法进行对比分析,并评估它们的优缺点。
方法一:高效液相色谱法(HPLC)检测氯霉素残留量HPLC是一种常用的分离和定量分析方法,可以快速准确地检测氯霉素残留量。
该方法通过将水产品肌肉组织样品提取液经过色谱分离,利用紫外或荧光探测器测量不同物质的峰值面积,从而定量检测氯霉素的含量。
该方法的优点是操作简便、准确性高,可以同时检测多种氯霉素类药物。
然而,HPLC方法的缺点是设备昂贵、操作复杂,对操作人员的技术要求较高。
方法二:酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测氯霉素残留量ELISA是一种常用的生物学分析方法,可以通过酶标记的抗体与目标物质结合来检测氯霉素残留量。
该方法操作简便,具有高通量性和准确性。
ELISA方法的优点是对样品处理较少,检测时间短,适用于大批量样品分析。
然而,ELISA方法的缺点是可能存在交叉反应和假阳性结果,对操作人员技术要求较高。
此外,ELISA方法只能定性或半定量检测氯霉素残留量,不能提供准确的定量结果。
方法三:气相色谱质谱联用法(GC-MS)检测氯霉素残留量GC-MS是一种常用的分析方法,可以通过将水产品肌肉组织样品提取液经过气相色谱分离,然后利用质谱检测器对不同物质进行鉴定和定量。
GC-MS方法准确性高,可以进行定量检测,具有良好的选择性和灵敏性。
然而,GC-MS方法的缺点是操作复杂,需要较长的分析时间,设备昂贵,对操作人员的技术要求较高。
综合对比分析:从操作简便性、准确性、成本和设备要求等方面考虑,HPLC方法适合进行氯霉素残留量的定量检测。
而ELISA方法适合进行大批量样品的快速筛查,但不能提供准确的定量结果。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定【摘要】本文旨在研究动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定方法。
首先对样品进行收集和制备,然后采用提取方法提取氯霉素类药物残留物。
接着通过检测方法对氯霉素类药物残留进行分析,最后对数据进行分析和结果讨论。
研究结果将有助于评估动物源性食品中氯霉素类药物残留的情况,为食品安全提供参考。
本研究的意义在于保障消费者的健康,展望未来可以进一步研究氯霉素类药物残留对人体健康的影响,为食品安全提供更有效的控制措施。
【关键词】动物源性食品、氯霉素类药物、残留量、检测、数据分析、结果讨论、研究意义、未来研究方向1. 引言1.1 研究背景动物源性食品是人们日常生活中不可或缺的一部分,然而其中可能会存在着氯霉素类药物残留的问题。
氯霉素是一种广泛应用于畜禽养殖的抗生素,但过量使用或不当使用都会导致其残留在食品中,对人体健康造成潜在威胁。
对动物源性食品中氯霉素类药物残留量进行准确测定具有重要意义。
近年来,随着食品安全问题的日益受到关注,人们对食品中残留的农药、抗生素等物质的检测要求也越来越高。
针对氯霉素类药物残留的检测方法逐渐被研发和完善,但仍有待进一步提高检测的准确性和灵敏度。
本研究旨在建立一套可靠的氯霉素类药物残留检测方法,为保障动物源性食品安全提供参考依据。
通过对氯霉素类药物在动物源性食品中残留的检测,可以及时发现并处理潜在的安全隐患,促进食品生产的规范化和科学化。
希望本研究能为食品安全领域的相关研究提供有益参考,推动食品安全监管工作向更加精细化、绿色化的方向发展。
1.2 研究目的研究目的是为了探究动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定方法,以确保食品安全,并保护消费者的健康。
通过本研究,可以建立准确、快速、准确的检测方法,有效监测动物源性食品中氯霉素类药物残留的情况,及时发现潜在安全隐患。
本研究还旨在提高食品质量安全监管的水平,促进食品行业的健康发展。
最终目的是为了保障公众健康,推动食品安全监管体系的不断完善,为消费者提供更加安全的动物源性食品。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定随着社会的发展和人们对食品安全的关注度越来越高,动物食品中的药物残留问题成为一个热点话题。
氯霉素是一种广谱抗菌药物,常用于动物防治和治疗。
长期过量或滥用氯霉素类药物会导致药物残留问题,威胁动物源性食品的安全性。
对动物源性食品中氯霉素类药物残留的测定成为科研人员和食品检测部门的重要任务。
氯霉素类药物包括氯霉素、磺胺甲基异噁唑和苯甲酸等,这些药物通过抑制细菌蛋白质合成来达到抗菌效果。
为了测定动物源性食品中的氯霉素类药物残留量,研究人员通常采用高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)和质谱法等技术。
首先介绍HPLC法。
HPLC是一种高效分离技术,通过控制流动相在色谱柱中流动,实现对不同化合物的分离和定性定量分析。
在测定动物源性食品中的氯霉素类药物残留时,可以使用反相色谱柱,并采用紫外检测器进行检测。
HPLC法的优点是分离效果好、灵敏度高、定性定量准确,但需要耗费较多的试剂和仪器设备。
质谱法也是测定氯霉素类药物残留的常用方法之一。
质谱法是一种结合了质量分析仪器和分析化学的分析技术,可以通过分子离子的质荷比来确定化合物的分子结构和含量。
在测定氯霉素类药物残留时,可以采用液质联用技术(LC-MS)和气质联用技术(GC-MS)等。
质谱法的优点是分离效果好、灵敏度高、准确性高,但需要较为复杂的仪器设备和数据解析。
总结一下,动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定是食品安全领域的热点问题。
目前常用的方法有HPLC法、GC法和质谱法等。
这些方法在分离效果、灵敏度和准确性方面各有优势,但也存在一定的局限性。
随着科技的不断发展和进步,相信会有更加先进和高效的方法来解决动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定问题,从而保障食品的安全性。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定1. 引言1.1 研究背景动物源性食品中的氯霉素类药物残留一直是一个备受关注的问题。
氯霉素类药物是一类广泛应用于动物兽药中的抗菌药物,其在畜禽养殖中被广泛使用以预防和治疗各种疾病。
长期过量使用氯霉素类药物可能导致其在动物体内残留过多,进而通过动物食物链传播到人类食品中,对人体健康造成潜在风险。
近年来,随着人们对食品安全和质量的重视,检测动物源性食品中氯霉素类药物残留量的需求逐渐增加。
当前的检测方法主要是基于高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS/MS)或气相色谱-质谱联用技术(GC-MS/MS),这些方法具有高灵敏度、高选择性和高准确性,可以有效地检测动物源性食品中微量的氯霉素类药物残留。
本研究旨在深入探讨动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定方法及技术,为相关检测工作提供参考和支持。
通过分析检测结果和提出建议,希望能够为今后的研究和监管工作提供一定的指导和借鉴。
部分结束。
1.2 研究目的本研究的目的是为了建立一种准确、快速、简便的方法来测定动物源性食品中氯霉素类药物残留量,以保障人们的食品安全和健康。
当前,氯霉素类药物在畜禽养殖中的广泛应用,容易导致其在动物体内残留并通过食品链进入人体,对人体健康产生潜在威胁。
有必要对动物源性食品中氯霉素类药物残留量进行有效监测和控制。
本研究旨在探讨氯霉素类药物在动物源性食品中的危害程度,分析氯霉素类药物残留的检测方法及技术,在此基础上建立一种可靠的氯霉素类药物残留量测定技术,并探讨其在实际监测中的应用及意义。
通过本研究的开展,旨在为提高食品安全水平、促进食品监管工作的科学化和规范化提供参考和支撑。
2. 正文2.1 氯霉素类药物简介氯霉素(Chloramphenicol)是一种广谱抗生素,能够抑制细菌的蛋白质合成,因其广谱性和毒力适中而广泛应用于兽医学和临床医学领域。
氯霉素类药物包括氯霉素、磺胺类药物等,它们在动物源性食品中的残留问题备受关注。
HPLC―MSMS同位素内标法检测养殖用水中氯霉素残留量氯霉素(chloramphenicol,CAP)是一种有效的广谱抗菌素,曾广泛的应用于畜牧、水产养殖。
但是氯霉素能抑制人体骨髓造血功能,引起人类的再生障碍性贫血,白血病、过敏性变态反应等严重疾病,低浓度的药物残留还会诱发致病菌的耐药性[1-3]。
因此,氯霉素在许多国家被禁止在食品性动物中使用。
我国在农业行业标准《无公害食品渔用药物使用准则》(NY5071-2002)和《无公害食品畜禽饲养兽药使用准则》(NY 5030-2006)[4-5]中也已将氯霉素列为禁用药物。
但是由于氯霉素具有价廉、高效、用量少的特点,氯霉素仍然存在非法使用和误用的可能。
因此有必要建立养殖生产过程中氯霉素的有效检测方法,严控违禁药物的使用,确保养殖生产过程的无害化。
目前氯霉素的检测方法主要集中在动物源性食品的检测[6-8],因为水体和养殖产品的样品性质、制备以及取样量存在较大差异,所需检测方法也有所不同。
本研究建立了养殖用水中氯霉素的高效液相色谱-电喷雾串联质谱检测方法,该方法具有快速高效、灵敏度高的优点,可应用于养殖用水中的氯霉素残留监测。
1 实验部分1.1 仪器与试剂高效液相色谱(美国Agilent公司,1200系列),三重四极杆质谱仪(美国Agilent公司,6410系列),漩涡振荡器(德国IKA公司,MS2系列),旋转蒸发仪(德国IKA公司,RV 10 Basic V系列),纯水机(美国Millipore公司,Milli-Q系列)。
甲醇(HPLC级)、乙腈(HPLC级),购于Honeywell公司;氯化钠、乙酸铵均为AR级,购于广州化学试剂厂。
标准品氯霉素(CAP)、氘代氯霉素(CAP-d5),购自美国Sigma-Aldrich公司。
1.2 标准工作曲线配制准确称取0.0500 g氯霉素标准品,用甲醇溶解并定容至50 mL,配成1 g/L的标准贮备液。
于-20 ℃下保存。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定随着人们对食品安全和健康的关注度越来越高,食品安全问题也逐渐成为社会关注的焦点。
动物源性食品中残留的药物成为了一个备受关注的问题。
氯霉素类药物的残留问题尤为突出。
氯霉素类药物是一类广泛应用于兽药领域的抗生素,它们具有很强的杀菌和抗菌作用,在畜牧养殖时常被用于预防和治疗动物疾病。
过量或长时间滥用氯霉素类药物都可能导致其在食品中残留,对人体健康造成一定的危害。
对动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定成为了必要的工作。
一般来说,动物源性食品中氯霉素类药物的残留量主要通过色谱法、液相色谱法、光谱法等方法来进行测定。
通过这些方法可以确定食品中氯霉素类药物的含量,并依据国家相关法规标准对其残留量是否合格进行判定。
以下将对各种测定方法进行简要介绍。
色谱法是一种常用的氯霉素类药物残留测定方法。
通过色谱法,可以将样品中的氯霉素类药物分离开来,并通过检测器对其进行定量测定。
常用的色谱法有气相色谱法(GC)和液相色谱法(HPLC)。
气相色谱法适用于对氯霉素类药物进行脂溶性物质的分析,它具有分离效果好、灵敏度高等优点。
而液相色谱法则适用于对极性物质的分析,其分离效果也非常好。
借助色谱法,可以准确、快速地测定动物源性食品中氯霉素类药物残留的含量,确保食品的安全性。
光谱法也是一种常用的氯霉素类药物残留测定方法。
其原理是将样品中的氯霉素类药物溶解后,通过特定波长下,利用吸收、荧光、发射等光学现象进行分析。
光谱法具有快速、简便、无需特殊试剂等优点,适用于对动物源性食品中氯霉素类药物残留进行初步快速的检测。
除了以上介绍的方法外,近年来,还出现了一些新型的检测方法,如基于生物技术的检测方法、质谱法等。
这些新方法具有高灵敏度、高选择性、高准确性等优点,被广泛应用于动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定。
尽管有这么多的测定方法,但是动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定仍然存在一定的挑战。
由于氯霉素类药物在动物体内代谢、分布等的复杂性,使得其在动物源性食品中的残留形式各异,因而样品制备方法的选择及操作条件相对更为复杂。
氯霉素(Chloramphenicol)属广谱抗生素,曾在畜牧业中广为应用,但在动物可食组织中的残留会通过食物链传给人类,长期微量摄入,不仅使人体肠道正常菌群失调[1],而且还会抑制人体骨髓造血功能导致引起再生障碍性贫血症和粒状白细胞缺乏症等疾病[2]。
氯霉素残留问题已引起国际组织和世界上许多国家和地区的高度重视,欧盟、美国等均在法规中规定氯霉素残留限量标准为“零容许量”,即不得检出。
近年来,我国出口到欧盟、美国等地区的畜禽、水产品等多次因为氯霉素超标被限制,损失达到数十亿美元。
我国禁止使用氯霉素,但仍存在用氯霉素治疗畜禽、水产品疾病的现象。
目前国内外对氯霉素残留的研究集中在畜禽肌肉、水产品、虾及牛奶等的测定[3-6],常用的检测方法包括气相色谱法、高效液相色谱法及气相色谱-质谱联用法等,现在多采用高效液相色谱-串联质谱联用方法(HPLC-MS/MS)。
为了保障我国人民的健康及扩大动物性食品的贸易往来,有必要建立动物组织中氯霉素残留量专属、灵敏、定性、定量的高效液相色谱-串联质谱联用方法。
1材料与方法1.1样品制备畜禽肉类,取可食用肌肉组织;畜禽肝脏可取整块;水产品类去皮后,取鱼肉部分,用高速匀浆机将其均质。
1.2仪器和试剂仪器:液相色谱-串联四级杆质谱仪Quattro Premier XE(美国Waters公司);去离子水发生器; TL-18M型高速冷冻离心机;BS210S型电子天平(北京startorius公司);OA-SYS型恒温水浴氮吹浓缩仪;MS1/MS2型涡旋振荡器;S180H型超声波。
试剂:所用乙腈、乙酸乙酯、正己烷、甲醇均为进口色谱纯;水为去离子水;氯化钠为分析纯,4% NaCl溶液临用前配制;水饱和乙酸乙酯用50mL水加400mL乙酸乙酯超声30min,静置分层后取上层乙酸乙酯用。
1.3HPLC色谱条件Waters超高效液相色谱柱(WATERS ACQUITY UPLC?BEH C18柱50×2.1mm,1.7μm);流动相:甲醇:水(50:50),用前过0.20μm滤膜,除杂脱气;柱温:40℃;流速:0.25mL/min;进样量:10μL;运行时间1.5min。
高效液相色谱仪用于肉制品氯霉素残留检测的探讨李梦琪;卢伟峰;褚应君;马淑丽;于雪双;李阳;马悦;孙威;葛杰【期刊名称】《中国卫生产业》【年(卷),期】2018(015)012【摘要】该文通过对氯霉素药物残留检测方法的建立及探讨以期对我国食品(尤其是动物性食品)中氯霉素类药物的残留检测方法提供一定的技术支持.该实验通过建立高效液相色谱法(HPLC)市售禽畜肉氯霉素含量,以便了解市售禽畜肉氯霉素的残留现状并对检测方法进行探讨,为食品安全监管部门提供检测方法和信息.通过建立高效液相色谱法对禽畜肉食品中氯霉素残留检测,该方法可靠、准确、灵敏度高;线性范围、回收率、精密度较好,同时参考其部分缺点应适当考虑联合其他方法改进完善,建立更为高效、更为适合的禽畜肉食品中氯霉素残留检测方法.【总页数】4页(P173-176)【作者】李梦琪;卢伟峰;褚应君;马淑丽;于雪双;李阳;马悦;孙威;葛杰【作者单位】齐齐哈尔医学院,黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔医学院,黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔医学院,黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔医学院,黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔医学院,黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔医学院,黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔医学院,黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔医学院,黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔医学院,黑龙江齐齐哈尔 161006【正文语种】中文【中图分类】R1【相关文献】1.高效液相色谱-串联质谱测定熟肉制品中氯霉素药物残留 [J], 肖植国;梅群;孔维芬;张馨2.用于水产品中氯霉素残留检测的发光细菌的筛选 [J], 朱兰兰;王静雪;林洪;王亚群;王晶;梅册霞3.动物性食品中氯霉素残留检测方法--高效液相色谱法 [J], 农业部畜牧兽医局4.高效液相色谱-串联质谱测定熟肉制品中氯霉素药物残留 [J], 肖植国;梅群;孔维芬;张馨;;;;5.高效液相色谱-串联质谱测定熟肉制品中磺胺嘧啶和氯霉素药物残留 [J], 张厚森;杨凤岩;周存山;贾涛;李新丽;赵厚民因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
HPLC―MSMS法测定鸭肉中氯霉素类药物残留[HJ1.3mm]收稿日期:2015-11-16基金项目:江苏省泰州市社会发展项目(编号:TS032)。
通信作者:蒋春茂,博士,教授,主要从事新兽药研究。
E-mail:cmj109@126。
动物源食品(肉、蛋、奶、水产及其制品)的安全是全世界关注的焦点,其中兽药残留问题是影响动物源食品安全的重要因素之一[1]。
氯霉素类药物属于广谱抗生素,对革兰氏阴性及阳性细菌均有抑制作用,主要包括氯霉素(chloramphenicol,CAP)、甲砜霉素(thiamphenicol,TAP)、氟苯尼考(florfenicol,FF)等。
氯霉素可抑制人类骨髓的造血功能,引起再生障碍性贫血,在美国、欧盟及我国均被禁用于食品动物,同时规定了禽肉中甲砜霉素、氟苯尼考的最高残留限量分别为50、100 ng/g。
目前,氯霉素类药物残留的检测方法主要有微生物法[2]、酶联免疫法[3]、共振生物传感器法[4]、气相色谱法[5]、液相色谱法[6]、超高效液相色谱法[7]、气相色谱-质谱法[8]、液相色谱-质谱法[9]、超高效液相色谱-串联质谱法[10-12]等。
目前,动物性食品中氯霉素类及其代谢物的残留检测前处理方法较为传统,药物与杂质间分离度差,且?驮拥那按?理程序影响了样品回收率。
如何简化前处理方法是目前该类药物检测中亟待解决的关键问题。
仅采用HPLC技术或GC技术已无法满足多残留检测的要求,且其在鸭肉残留检测方法中的应用尚未见国内外报道。
鉴于此,本研究拟将快速溶剂萃取(ASE)技术应用于样品前处理,采用HPLC-MS/MS法建立快速、简易、高灵敏、高通量的禽肉中氯霉素类及其代谢物的多残留快速检测技术,为兽药残留监控体系的建立和完善提供先进的技术资料,对于我国动物性食品出口贸易更好地与国际接轨、保障人类健康具有重要意义。
1材料与方法1.1药物与试剂氯霉素对照品购自中国食品药品检定研究所,批号为130555-201203。
甲砜霉素对照品购自中国兽医药品监察所,批号为k0240706。
氟苯尼考对照品购自中国兽医药品[JP2]监察所,批号为k0301305。
7-羟基双香豆素标准品购自Sigma-Aldrich公司,批号为STBD2336V。
氯霉素原料药购自郑州津北化工有限公司。
甲砜霉素粉(5%)、氟苯尼考粉(10%)均购自江苏中牧倍康药业有限公司。
乙腈为色谱纯,购自Fisher scientific公司。
二甲基亚砜(DMSO)为色谱纯,购自国药集团化学试剂有限公司。
乙酸为色谱纯,购自Sigma-Aldrich公司。
1.2仪器与设备API4000 Q-trap型三重四级杆/离子阱质谱仪,包含电喷雾电离源(ESI 源)(美国应用生物系统公司);1200系列高效液相色谱系统(美国安捷伦科技有限公司);CTC PAL型自动进样器(CTC Analytics,AG,瑞士);FA25型高速匀浆机(Fluko公司)。
1.3试验动物及处理雏鸭购自江苏省海安县某孵化场,选择无抗饲料饲养至30日龄。
将鸭分为2组,其中一组给以氯霉素原料药、甲砜霉素粉、氟苯尼考粉,均按说明书剂量拌料给药,连用3 d;另一组为对照组,不给以任何药物。
分别在给药后3 d将其剖杀,取各组肌肉,于-20 ℃保存备用。
1.4试验方法1.4.1系列标准工作溶液的配制精确称取适量氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考标准品,分别置于20 mL 容量瓶中,采用DMSO溶解并定容,超声促溶,充分摇匀,配制成1 mg/mL 的标准储备液。
采用移液枪各取100 μL标准储备液于700 μL乙腈中,配制成100 μg/mL的混合工作液。
采用乙腈梯度稀释至5.000、2.000、1.000、0.500、0.200、0.100、0.050、0.025 μg/mL 的混合系列标准工作溶液。
1.4.2内标工作溶液的配制精确称取适量7-羟基双香豆素标准品,置于10 mL容量瓶中,采用DMSO溶解并定容,超声促溶,充分摇匀,配制成2 mg/mL的标准储备液。
采用乙腈稀释至200 ng/mL,储存备用。
1.4.3空白肌肉匀浆液称取一定量的鸭空白肌肉样品,剪碎,加入10倍体积的50%乙腈,将样品置于冰浴,采用高速匀浆机进行匀浆处理,得到均一的匀浆液。
1.4.4标准工作曲线的前处理取5 μL系列标准工作液(5.000、2.000、1.000、0.500、0.200、0.100、0.050、0.025 μg/mL)加入至50 μL空白肌肉匀浆液中,涡旋振荡 30 s,加入150 μL内标工作溶液,涡旋振荡3 min,使蛋白充分沉淀;于4 ℃、14 000 r/min条件下离心10 min,取150 μL上清液加入至150 μL超纯水中,混合均匀后待进样。
标准曲线的系列浓度为2.50、5.00、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0 ng/mL;肌肉?蚪?为10倍体积匀浆液,因此在肌肉中的定量范围为25.0、50.0、100.0、200.0、500.0、1 000.0、2 000.0、5 000.0 ng/g。
1.4.5给药鸭肌肉样品前处理取给药鸭肌肉匀浆液50 μL,加入5 μL乙腈,使其与空白添加样品(标准曲线)的基质保持一致;加入150 μL含内标的乙腈,涡旋振荡3 min,于4 ℃、14 000 r/min条件下离心10 min,取150 μL上清液加至150 μL超纯水中,混合均匀后待进样。
1.4.6HPLC色谱条件采用CAPCELLPAK型色谱柱(MG,50 mm×2.0 mm,I.D. 5 μm)(日本资生堂),流动相A为01%乙酸,流动相B为乙腈-甲醇(体积比1 ∶[KG-*3]1),进样体积为10 μL,梯度洗脱条件见表1。
质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),应用负离子模式,检测方式为多反应监测(MRM)。
质谱离子源参数分别为CUR 40.00、CAD-2.00、IS-4 500.00、TEM 400.00、GS1 40.00、GS2 50.00、ihe ON。
化合物质谱参数见表2。
采用Analyst 1.4.2质谱采集与分析软件。
1.4.7加标回收率在空白鸭肉中,分别添加25、50、100 g/kg 质量浓度水平的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考对照品,每个质量浓度水平设3个平行试验,计算3种物质的加标回收率和相对标准偏差(RSD)。
2结果与分析2.1质谱条件的优化氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考的平均分子量分别为 323.13、356.22、358.20,这3个化合物均含有2个Cl-离子。
Cl在自然界中有2种同位素,即35Cl、37Cl,其分子量分别为34.969、36.966,丰度分别为75.77%、24.23%。
为获得更高的灵敏度,以含35Cl的化合物作为目标化合物进行检测,经计算,含35Cl的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考的准确分子量分别为322、355、357。
预先配制50、100、150 ng/mL质量浓度的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考标准溶液,以流动注射的方式在负离子模式下进行一级质谱母离子全扫描,分子离子m/z分别为320.9、353.9、355.9,其中50 ng/mL分子离子的响应在106 cps附近,即为最佳优化质量浓度。
以50 ng/mL质量浓度在负离子模式下进行自动优化,以确定最高响应二级离子m/z以及相应的DP、CE、CXP参数(表2)。
最终优化ESI源的碰撞电压、离子化温度、气帘气等参数。
2.2色谱条件的优化氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考均为弱极性化合物,极易溶解于甲醇、乙腈。
本研究以含0.1%乙酸作为水相,0.1%乙酸能促进分子的电离,大幅增强检测信号的强度;以等比例甲醇-乙腈作为有机相,随着有机相比例的提高,目标物保留时间缩短,但分离效果较差,如果有机相比例过低,其色谱峰较宽,灵敏度将随之降低。
等度洗脱要将3个目标化合物同时分离,单个样品的检测时间较长,因此最终选择梯度洗脱,可在较短时间内将3个化合物很好地分离,同时提高了分析效率及检测灵敏度。
2.3样品的提取在动物组织样品中,氯霉素类药物的常用提取溶剂为乙腈、甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯等。
本试验采用较为简单的乙腈蛋白沉淀法,过程提取回收率约为95%,符合要求且步骤简单,可大幅提高样品前处理的效率。
2.4方法的线性范围、定量限和检测限标准工作曲线的处理见“1.4.4”节,进样10 μL。
在本方法所确定的试验条件下,采用Analyst 1.4.2软件进行数据的采集与分析。
将各待测化合物和内标峰面积的比值与理论浓度采用一元二次回归方程(quadratic)拟合,得到权重因子为1/x2。
氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考的线性方程、相关系数、线性范围见表3,回归曲线见图1、图2、图3。
氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考的定量下限均为25 ng/g,定量下限的信噪比分别为77.2、53.5、320.4(图4、图5、图6),符合信噪比(RSN)>10作为定量下限的要求。
当信噪比为3时,最低检测限分别为2.50、2.50、1.25 ng/g。
2.5加标回收率3种药物在20、50、100 μg/kg添加水平下的平均回收率为93.26%~97.25%,RSD为0.47%~1.83%(表4)。
可见,本方法可满足鸭肉中同时检测氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考的要求。
2.6给药动物肌肉中药物浓度的测定[CM(24]给药样品经处理后进样,通过Analyst 1.4.2软件计算,[CM)]肌肉样品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考的平均浓度分别为735、1 470、1 540 ng/g(图7)。
3结论与讨论本研究建立了应用HPLC-MS/MS检测禽肉中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考残留的检测方法,采用负离子选择反应监测模式同时检测3种化合物。
本方法仅取0.5~1.0 g样品,经50%乙腈高速匀浆后,取50 μL匀浆样品,加入5 μL乙腈,以7-羟基双香豆素为内标。
无需脱脂和固相萃取等操作,且无需氮吹浓缩。
该方法简单易行,出峰时间为1~3 min,分析快速,且方法的最低检测限低于国家氯霉素类残留最低检测限(100 ng/g)。
该方法的回收率和准确率高,完全可满足禽肉中氯霉素类药物的残留确?C。
有关鸭肉中氯霉素类药物残留检测的报道很少,但在其他有关动物组织中,氯霉素类药物残留检测方法的报道很多。
陶昕晨等采用HPLC-MS/MS 建立虾肉和猪肉中氯霉素类药物的多残留检测方法,以2%碱性乙酸乙酯提取,其平均回收率为78.17%~99.86%,但保留时间为2.63~3.72 min[13];本试验的分析时间更短,仅为1~2 min,且样品处理方法更为简单。
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