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570... 天津中医药..Tianjin Journal of Traditional Chinese Medicine 2017年8月第34卷第8期Aug. 2017,Vol.34 No.8DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2017.08.20黄连HPLC M a x p l o t指纹图谱的建立*张春艳u,成睿珍2,刘海2(1.天津中医药大学中医药研究院，天津300193; 2.天津市滨海新区中医医院药学科，天津300451)摘要:[目的]以髙效液相色谱-二极管阵列检测器(H PLC-PDA)M axPlot色谱图为基础，建立黄连指纹图谱分析方法。
[方法]米用高效液相色谱(HPLC)法，色谱柱为AgilentSB-C18(4.6m m x l50mm,3.5|x m);流动相为乙腈-0.1% 三氟乙酸水溶液，线性梯度洗脱;210~400 nm波长下提取M axplot色谱图。
以黄连对照药材随行测定所得M axPlot色谱图作为黄连的标准对照指纹图谱，通过相似度评价黄连药材质量。
[结果]结果显示,PDA M axPlot模式下黄连指纹 图谱共获得11个共有峰，较单一波长345 nm下多1个微量成分峰。
12批样品指纹图谱与对照药材随行对照标准指 纹图谱相似度达0.994以上。
[结论]M axPlot指纹图谱显著提髙了黄连中各类成分检测的灵敏度，有效增加了黄连药材共有峰数量,为该药材多成分的质量控制提供了借鉴。
关键词:黄连;PDA M axPlot;随行对照;指纹图谱;质量评价中图分类号:R284 文献标志码:A文章编号：1672-1519(2017)08-0570-04中药为多成分复杂体系，其所含化学成分种 类、含量及理化性质存在着差异，而中药指纹图谱 是一种综合、可量化的质量控制手段，能够确切地 反映中药有效部位中化合物的化学信息。
目前，高 效液相色谱(HPLC)指纹图谱技术是公认的应用最 广的方法[1]。
中蒙药制剂指纹图谱建立和辨认的方法和步骤杨永生 2009级研究生学号：2009110100摘要目的：介绍中蒙药制剂指纹图谱建立和辨认的方法和步骤，为祖国传统医药走向世界提供手段方法。
方法：归纳国内近年关于指纹图谱的大量文献，分析其研究的方法，在中蒙药制剂质量控制中起到了重要作用。
结果：中蒙药制剂指纹图谱技术进展很快完全可以利用其作为中蒙药质量控制的手段。
结论：中蒙药制剂指纹图谱的研究进展很快其科学的方法和步骤可以更好的提升中蒙药质量，中蒙药制剂指纹图谱技术一定可以加速祖国传统医药走向世界。
关键词中蒙药制剂指纹图谱；方法和步骤中蒙药是我国人民在数千年治疗疾病过程中积累起来的宝贵财富，中蒙药生产和质量的规范化和现代化是祖国传统医药走向世界的重要前提，目前中蒙药正处于迈向现代化的瓶颈阶段，中蒙药制剂指纹图谱的出现为解决这个问题提供了现代技术手段、中蒙药制剂指纹图谱近年来进展很快，本文综合了国内近年的有关文献对中蒙药制剂指纹图谱的建立和辨认的方法和步骤作一论述。
1、中蒙药指纹图谱的定义、特点、分类1.1 定义：中蒙药指纹图谱是指某种（或某产地）中蒙药材或中成药经适当处理后，采用一定的分析手段,得到的能够标志该中蒙药材或中成药特征的色谱或光谱的图谱。
利用色谱技术进行指纹图谱分析的中蒙药材因生长年限，生长环境的变化而可能产生个体间较为明显的差异，但个体间必然有群体共有的相似性[1]。
1.2 特点：①通过指纹图谱的特异性，能有效鉴别样品的真伪或产地；②通过指纹图谱主要特征峰的含量或比例的制定，能有效控制样品的质量，确保质量的相对稳定。
中蒙药指纹图谱有两个基本属性[2]：整体性和模糊性。
1.3 分类：按应用对象来分类，可分为中蒙药材(原料药材)指纹图谱、中蒙药原料药(包括饮片、配伍颗粒)指纹图谱、中蒙药中间体（工艺生产过程中间产物）指纹图谱和中蒙药制剂指纹图谱。
按测定手段可分为：中蒙药化学指纹图谱和中蒙药生物指纹图谱。
1.不同地方购买的金银花可能为不同品种金银花药材，色谱峰面积相差很大是否跟此有关，因此得出的结论无具体实用价值，需补充。
答：是存在品种不同的问题，所以在实验之前专门要找专家从形态、显微结构等方面进行种属鉴定，然后投入实验（此部分内容在材料部分有显示）。
本实验测定结果中每种样品都有11个共有峰（金银花特征峰），证明属于该药材，峰面积差别反映了药材质量。
HPLC可以用于鉴别药材真伪及评价药材质量。
2.作者并没有就主要活性成分（绿原酸、木犀草苷）进行定量分析研究，建议继续进行深入研究。
答：感谢老师的建议，我收益匪浅。
绿原酸、木犀草苷定量分析已经完成，目前还未形成文字。
尚在进一步撰写中。
3.文章并没有比较所用HPLC法与参考方法的优劣，故文章重点在于质量评价的确定（而不是HPLC法的建立及验证）。
请注意相应篇幅的调整。
答：多谢老师指点，文章题目已经调整为“川渝地区金银花HPLC指纹图谱的研究”，文章正文中内容也有所调整。
4.“1.2试验方法”和“3 小结与讨论”部分内容简单重复，应适当精炼，得出本文的结论及其他研究结果的比较。
答：试验方法”和“3 小结与讨论重复内容已经精炼，属于结论部分的内容已经移至结论部分；根据建议添加了修改稿图1、图2；删除了原稿中表2，表4；原稿中图1，图2已经重做，分离效果较好。
但线条不能变成黑色，由于用软件作出来就是彩色的。
5.论文的错误较多，具体建议参见审改稿，请仔细修改。
答：论文中细节错误都一一改正，有很多无法标注的也已经按要求修改。
参考文献已经核对，两篇卷期没有写反，故未作修改。
另外原稿中表格中15个特征峰在修改稿中删减至11个。
参照峰选择是随机的，没有依据；另外稳定性试验是在冰箱放置，不是室温，所以未改动。
个人简介：赵君峰（1978-），女，河南洛阳，讲师，博士，主要从事食品生物技术及药用植物资源开发方面的研究。
中图分类号：TS275.4文献标识码：A川渝地区金银花HPLC指纹图谱的研究赵君峰1马丽苹1白志川2(1河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471023；2西南大学园艺园林学院重庆北碚400715)摘要：采用HPLC法测定十个不同商品来源的金银花样品，建立川渝地区金银花药材甲醇溶解部分的HPLC指纹图谱，为科学评价与有效控制金银花质量提供新方法。
（一）建立指纹图谱的一般原则中药指纹图谱的建立，应以系统的化学成分研究和药理学研究为依托，体现系统性、特征性和稳定性三个基本原则。
唯此，才能保证指纹图谱的标准化、规范化、客观化，从而便于推广和应用。
1.系统性是指指纹图谱中反映的化学成分应包括该中药有效部位所含大部分成分，或指标性成分的全部，如中药两头尖中抗肿瘤的有效成分为皂苷类化合物，则其指纹图谱应尽可能地反映其中的皂苷类成分；银杏叶的有效成分是黄酮类和银杏内酯类，则其指纹图谱可采用两种方法，针对这两类成分分别分析，达到系统全面的目的。
2.特征性是指指纹图谱中反映的化学信息（如保留时间）应具有较强的选择性，这些信息的综合结果，将能特征性地区分中药的真伪与优劣，成为中药自身的“化学条码”。
如北五味子的HPLC指纹图谱和TLC指纹图谱，不仅包括多种的五味子木脂素类成分，而且具有许多未知类成分，这些成分的峰位顺序、比值在一定范围内是固定的，并且随药材品种不同而产生差异，依此可以很好地区别其来源、产地，判别药材的真伪优劣。
3.稳定性是指所建立的指纹图谱在规定的方法、条件下的耐用程度，即不同操作者、不同实验室所重复做出的指纹图谱应在所允许的误差范围内，以体现其通用性和实用性。
因而要求包括样品制备、分析方法、实验过程、数据采集、处理、分析等全过程都要规范化操作，同时，还应建立相应的评价机构，对其进行客观评价。
（二）建立指纹图谱的一般步骤1.方案设计与思路（1）研究对象的确定在调研有关文献、新药申报资料(质量部分和工艺部分)及其它研究结果的基础上，尽可能的详尽地了解药材、中间体及成品中所含成分的种类及其理化性质，综合分析后找出成品中的药效成分或有效成分，作为成品和中间体指纹图谱的研究对象，即分析检测目标。
例如，黄芪含黄酮、皂苷及多糖三类有效组分，黄芪多糖注射液及其中间体的指纹图谱则以多糖为研究对象，黄芪原药材的指纹图谱应把黄酮、皂苷及多糖作为研究对象。
复方注射剂应根据君臣佐使的原则，以君药、臣药中的有效成分作为指纹图谱的研究对象，佐使药中的成分可采用其它指纹图谱方法进行辅助、补充研究。
HPLC同时测定何首乌中5种成分及指纹图谱的建立何首乌是一种常见的中药材，主要用于滋养肝肾、益气活血、补肝肾以及黑发。
为了保证何首乌的质量，必须对其中有效成分进行准确测定。
建立何首乌的指纹图谱也是评价其质量的重要手段。
本文将利用高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）技术同时测定何首乌中5种主要成分的含量，并建立其指纹图谱。
为了保证实验的准确性和可靠性，选择合适的HPLC条件是非常关键的。
对于何首乌中的5种成分，经过文献调研和实验探索，确定了以下HPLC条件：使用C18色谱柱，流动相为甲醇-水（含0.1%磷酸调节pH至3.0），流速为1.0 mL/min，检测波长为254 nm。
这些条件在实验前需要进行优化和验证，以保证测得的结果准确可靠。
收集一批优质何首乌样品，并进行样品的处理。
将何首乌样品粉碎成细粉，然后精确称取一定量的样品，并加入适量的甲醇进行超声提取。
待提取液离心沉淀后，将上清液取出，过滤后即可进行HPLC分析。
在测定何首乌中5种成分的含量时，首先需要准备好5种成分的标准品。
根据前期的研究和文献报道，选择广性向量曲线法（Wide Linear Range Calibration Curve, WLRC）进行定量分析。
即分别准备5个浓度不同的标准品溶液，通过HPLC测定其峰面积，并绘制标准曲线。
然后，测定何首乌样品中5种成分的峰面积，并通过标准曲线反推其含量。
在建立何首乌的指纹图谱时，需要将一批何首乌样品进行HPLC分析，获得它们的色谱图。
然后，根据样品的峰面积和保留时间，通过计算相似度和聚类分析等方法建立指纹图谱。
相似度由0到1，数值越大表示两个样品的相似度越高，说明它们的成分越相近。
对测定结果进行统计分析和评价。
根据测定样品的含量和指纹图谱的相似度，可以对何首乌的质量进行评价。
可以对不同产地、不同加工工艺或不同储藏条件下的何首乌样品进行比较，以找出质量的差异和原因。
