《 clsi及eucast更新要点及替加环素药敏测定难点解析》.

• 其它氟喹诺酮（如左氧）折点仍在评估中。
1.肠杆菌科
沙门菌推荐报告哪些药物？
• “对于分离自粪便的沙门菌或志贺菌，仅常规测
试并报告氨苄西林、一种氟喹诺酮类药物和复方 新诺明。另外，对于分离自肠道外的沙门菌，增 加测试并报告一种三代头孢菌素，如有需要亦测 试并报告氯霉素药敏结果。”
M100-S22. P44
MIC (µg/ml)
Susc Int
Res
≤2
4
≥8
≤0.25 0.5
≥1
≤0.5 1.0
≥2
Disk Diffusion (mm)
Susc Int
Res
≥19 16-18 ≤15
≥23 20-22 ≤19 ≥22 19-21 ≤18
New
*目前和FDA折点相同
1.肠杆菌科
为什么CLSI再次修订肠杆菌科对厄他培南的折点？
S. aureus
• 5% sheep blood agar • 1 unit penicillin disk • S. aureus ATCC 25923
as the indicator βlactamase negative (penicillin S) strain • Some difficulties reading
备注：并不是所有产碳青霉烯酶的肠杆菌科 细菌MHT均为阳性，有些菌株MHT阳性但对 碳青霉烯类药物耐药的机制并不一定是产碳 青霉烯酶。
M100-S22.P52－60
什么时候做MHT？
如果使用旧的折点 如果使用新的折点
碳青霉烯酶筛查阳性
流行病学需要
做MHT
做MHT
M100M100--S222. Comment (23) Page 47. Table 2A Supplemeental Tables 2 and 3. Pages 52 and 56.
1.肠杆菌科
粪便分离的沙门菌药敏报告策略
• 不常规报告AST，除非是门诊病人
– 沙门菌病通常是自限性疾病不常规推荐进行抗 生素治疗
• 在一些情况特殊的病人（如免疫功能受抑、HIV）
与医生讨论是否需要做AST – 保守地，要考虑强调更低的环丙沙星折点。
1.肠杆菌科
肠道外分离的沙门菌药敏报告策略
• 做药敏试验 • 环丙沙星使用新的折点 • 病人伴随出现分离株的应用自粪便分离株
M100-S22. Table 2C Supplemental Table 1. Page
葡萄球菌— 青霉素药敏可选择的策略
• 如青霉素“R”则报告 • 如青霉素“S”则不报告，并增加备注“如需青霉
素结果请联系实验室”
• 如青霉素“S”并且需要其结果，应做：
对于金黄色葡萄球菌： – 头孢硝塞酚β内酰胺酶试验 – 如阴性进一步做青霉素抑菌圈边缘试验 对于CoNS（包括路邓） – 诱导头孢硝塞酚β内酰胺酶试验 – 继续测试从病人后继分离菌株的药敏结果
EUCAST（欧洲药敏试验委员会） —2012新点
免费网站：
2011-2012 做的工作
• 1.折点表 v2.0（2012年1月网上发表） • 2.技术规范 v2.0（网上及CMI已发表） • 3.PK/PD in EUCAST （网上及CMI已发表） • 4.建立分会重要的耐药机制 • 5.发表了几个指南、文件、SOPs、RDs • 6.EUCAST AFST（念珠菌、曲霉菌） • 7与EMA合作新药鉴定：一种治疗MRSA的药物、
散法）
8/20/2019
• 研究方法：纸片扩散法 • 研究样本：血液、尿液、痰液等样本 • 判断标准：参照FDA批准的标准
肠杆菌科：敏感：≥19mm 中介：15-18mm 耐药：≤14mm
对不动杆菌，目前尚无批准折点，本研究参照国外文献 敏感：≥16mm，耐药：≤12mm
8/20/2019
替加环素药敏试验 难点解析
Pos
Neg
β内酰胺酶
• 诱导头孢硝塞酚β内酰胺酶试验通常但不总是能检
出葡萄球菌的β内酰胺酶；
• 其它的β内酰胺酶更为敏感：
– “三叶草”试验 – 青霉素纸片法边缘试验
• PCR检测blaZ基因不是检测β内酰胺酶理想的方法
– blaZ编码β内酰胺酶 – blaZ基因有许多型
Cloverleaf Assay for β-lactamase
替加环素药敏操作难点
1. 检测方法对测定结果的影响 2. 药物自身对测定结果的影响 3. 培养基对测定结果的影响 4. 菌种对测定结果的影响 5. 判定折点对测定结果的影响 6. 判读结果时的注意事项
1.检测方法对测定结果的影响
测定MIC的常用方法
• 宏量肉汤稀释法：实验耗材消耗大；每次只完成少数菌株；结果判读
≤64
-
≥128
≤16
32--64
≥128
≤64/2
- ≥128/2 ≤16/2 32/2--64/2 ≥128/2
对应纸片扩散法的折点亦修订。
M100-S22,P63
2.铜绿假单菌折点修订
Agent Doripenem2 Imipenem3 Meropenem3
Old (M100-(M100-S21)
– 降低亚胺培南、美罗培南的折点；增加多尼培南折点
3.葡萄球菌属
– 增加青霉素纸片抑菌圈边缘法检测β内酰胺酶。
1.肠杆菌科 厄他培南CLSI 折点更新过程
CLSI Document
M100-S20 (Jan. 2010)*
M100-S20U (June 2010)
M100-S22 (Jan 2012)**
Induced ß-lactamase Test
苯唑西林 (诱导剂)
- Sub isolate to agar (e.g., BAP, MHA) - Drop ß-lactam disk (e.g., oxacillin, cefoxitin) - Incubate overnight - Test cells from periphery of zone - If β-lactamase positive (with or without induction), report penicillin R
临床有效 ） – 同时，一些商品化药敏组合中厄他培南的最低浓度是0.5 µg/ml，
这样允许实验室通过验证后可直接应用CLSI折点。
1.肠杆菌科
Modified Hodge Test (MHT)
(Table 2A Supplemental Table 2 and 3)
“NOTE: Not all carbapenemase-producing isolates of Enterobacteriaceae are MHT positive and MHT-positive results may be encountered in isolates with carbapenem resistance mechanisms other than carbapenemase production.”
• 最好做环丙沙星MIC • 自动化药敏仪器无法给出新折点的最低稀释度——考虑用
E-Test?
• 如果用纸片扩散法，考虑同时做萘啶酸和环丙沙星纸片
– 萘啶酸对gyrA酶突变菌株检出效果好 – 环丙沙星对质粒编码的基因突变的菌株检出效果好
• 染色体介导的gyrA酶基因突变比质粒编码的基因突变致氟
喹诺酮敏感性降低更常见。
• 2011折点主要基于：
– MIC分布 – PK/PD（保守的≤0.25 µg/ml ） – 非常有限的临床数据（ 无MICs＝0.5 µg/ml ）
• 2012折点主要基于：
– 增加的调查数据显示分离株MICs＝ 0.5 µg/ml 但不产生碳青霉烯酶 – 进一步回顾了PK/PD – 增加了临床数据（包括产ESBL大肠埃希菌其MICs＝0.5 µg/ml提示
Tigecycline 替加环素
• 甘氨酰环素
– 结构与四环素药物类似 ，四环素衍生物
• 抗菌谱广
– Gram-positive, Gram-negative, and anaerobic organisms（MRSA）
– 对铜绿假单胞菌无效
• 适应征（18岁及以上）
– 成人复杂的皮肤及软组织感染 – 成人复杂的腹腔内感染
1.肠杆菌科
环丙沙星新、旧折点比较
DD (mm)
Susc
Int
Res
≥21
16--20
≤15
MIC (µ g/ml)
Susc
Int
Res
≤1
2
≥4
Organism
DD (mm)
Suscc
Int
Res
Enterobacteriaceae other than
≥21
16--20
≤15
S. typhi and extraintestinal
几种抗真菌药物
• 网站，增加了一些功能并有所改进 • 9.MIC/抑菌圈分布数据有增有减 • 10.确定一些抑菌圈直径的折点、网上已公布
2011年四川省 耐药监测网监测情况
多重耐药菌的分布
2010年四川省人民医院多重耐药菌分布情况
结果分析（葡萄球菌属）
金葡（3495株）、凝固酶阴性葡萄球菌（1819株）药物敏感率（S％）
的报告策略。
2.铜绿假单胞菌折点(ug/ml)修订
Agent 哌拉西林 哌拉西林－他唑巴坦 替卡西林 替卡西林－克拉维酸
Old (M100-(M100-S21)
Susc Int
Res
≤64
-
≥128
New M100M100--S22
Susc
Int
Res