异体异位卵巢移植对卵巢切除后大鼠生理生化指标的影响
- 格式:pdf
- 大小:54.57 KB
- 文档页数:1
卵巢切除后大鼠骨小梁重建过程的电镜观察鞠传广;马庆军;党耕町【期刊名称】《中国骨伤》【年(卷),期】2004(017)006【摘要】目的:建立大鼠卵巢切除后骨质疏松模型,观察在卵巢切除诱发骨质疏松条件下骨小梁重建的电镜变化,分析骨小梁节点数减少而游离末端数增加的原因.方法:3月龄雌性Wistar大鼠36只,分4、8、12周组,每组分OVX(卵巢切除组)和SHAM(假手术组)两小组.用扫描电镜、透射电镜对胫骨近干骺端骨小梁的微结构进行观察.结果:①骨小梁骨重建活动分布于骨小梁微构筑各个部位,但以St、Nd-St 区最显著;②OVX后骨小梁穿孔、断裂多见于水平骨小梁,骨小梁网状结构4周时完整,第8周和第12周后逐渐被破坏,12周最严重;OVX后骨小梁表面的胶原纤维逐渐变得杂乱、稀薄.结论:OVX后St、Nd-St区骨重建最活跃,这可能是骨质疏松时骨小梁节点数减少而游离末端数增加的原因.【总页数】4页(P342-345)【作者】鞠传广;马庆军;党耕町【作者单位】文登整骨医院,山东,文登,264400;北京大学第三医院骨科;北京大学第三医院骨科【正文语种】中文【中图分类】R681【相关文献】1.卵巢切除后大鼠骨小梁形态的实验研究 [J], 鞠传广;马庆军;谭远超;张恩忠;徐卫国2.补肾健骨汤对去卵巢大鼠股骨颈骨小梁微血管和骨密度的影响 [J], 王勇;黄永松;李冬春;胡拥;王威3.大鼠卵巢切除后松质骨骨丢失的扫描电镜观察 [J], 黄遂柱;戴克戎;赵永强4.异体异位卵巢移植对卵巢切除后大鼠生理生化指标的影响 [J], 胡玉红;恽时锋;董敏;周森妹;田小芸;赵志刚5.切除卵巢后大鼠骨小梁重建组织学特征的电镜观察 [J], 鞠传广;马庆军;党耕町;王晓英因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
2020年第21巻第6期•“"阳每天&是新)”。
河-)./-012&无法“两78进同一条河-”。
习惯于ABC苹果)人永远也.会发现苹果内)NO星图案。
固有)学科WXTYZ成为]难以'掉)有色眼镜,请想一想它)局限,再看一看其他学科)发展,q意和灵U就产生了。
子宫内膜异位症动物模型制备方法研究概况Research progress on preparation methods of animal models of endometriosis孙瑞英,崔轶凡(山西中医药大学,山西晋中030619)摘要子宫内膜异位症(EMT)是一种严重影响妇女生活质量的妇科常见疾病,当前的手术及激素治疗效果不彻底,复发率高,可能与EMT的病因和发生机制尚不清晰有关,已成为妇产科领域研究的热门,EMT动物模型的构建是探求EMT的发生、发展以及诊治方法的重要方式,为EMT的研究提供了实验载体。
选取适当的动物模型有利于进一步揭露EMT的病因、发病机制和临床疗效评判。
因为仅有人和非人灵长类可以自觉形成EMT,制约了对EMT的探索,所以构建规范的动物模型已是探索EMT机制的重要因素的一部分。
关键词子宫内膜异位症;动物模型;造模方法中图分类号:R711.71文献标识码:A D01:10.19763/ki.2096-7403.2020.06.20子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)是一种具有活性的子宫内膜组织在宫腔被覆盖的黏膜外生长的雌激素依赖性疾病。
在中医学里并无EMT 的病名,根,病=症”=病”“癥范畴。
目前对该病的发病机尚,西药,具有的发,大的生活。
学的,在EMT患发病的,能对对照研究,也能性研究。
,创的EMT,有一研究病学亍学,对发病机制、研发新药中药用机的用,有该疾病。
EMT的,性,EMT的发病机尚,的一的。
并EMT在一的题,用范畴潜在的限性都要充分考虑。
研究总结近20年来EMT的发展经验,对各种EMT动物的现状题作出简述。
大鼠卵巢早衰标准-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述大鼠卵巢早衰是指大鼠卵巢功能低下或丧失之前出现的现象。
随着社会的发展和人口老龄化的趋势,卵巢早衰的研究变得越来越重要。
卵巢早衰不仅会导致不育,还与多种妇科疾病的发生相关,如卵巢囊肿、子宫内膜异位症等。
因此,对大鼠卵巢早衰的标准进行研究和制定是非常必要的。
本文旨在通过对大鼠卵巢早衰的定义、病理特征和影响因素进行分析,探讨预防和治疗大鼠卵巢早衰的方法。
通过对相关文献的查阅和分析,我们将全面了解大鼠卵巢早衰的标准以及如何应对和预防大鼠卵巢早衰的方法。
首先,我们将介绍大鼠卵巢早衰的定义和背景,明确该疾病的概念和研究的重要性。
进一步,我们将详细描述大鼠卵巢早衰的病理特征,包括卵泡数量减少、卵泡发育异常等方面。
通过对这些特征的了解,我们可以更好地判断大鼠卵巢早衰的发生和发展。
接下来,我们将探讨大鼠卵巢早衰的影响因素,包括遗传因素、环境因素、生活方式等。
我们将分析这些因素对大鼠卵巢早衰发生的影响程度和机制,为预防和治疗该病提供理论依据。
最后,我们将着重讨论预防和治疗大鼠卵巢早衰的方法。
这些方法涉及药物治疗、营养调理、生活习惯改变等方面。
我们将通过综合分析不同方法的优缺点,为大鼠卵巢早衰的防治提供参考和指导。
本文将基于大量的实验和临床研究,从科学和实用的角度探讨大鼠卵巢早衰的标准及其预防和治疗方法。
通过对这些内容的深入探讨,我们希望可以提供更好的理论和实践指导,促进大鼠卵巢早衰的研究和防治工作的进一步发展。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括对文章各个章节的简要介绍和展望。
在这个部分,可以提及每个章节的主要内容和目的,以及这些内容如何贯穿整篇文章,为读者提供全面了解大鼠卵巢早衰标准的信息。
以下是一个可能的内容:"2.正文"部分将系统地探讨大鼠卵巢早衰的定义、病理特征和影响因素,以及预防和治疗的方法。
在"2.1 大鼠卵巢早衰的定义和背景"一节,我们将介绍大鼠卵巢早衰的含义以及与人类的相关性。
卵巢摘除诱导围绝经期综合征动物模型的研究进展I. 概要随着现代医学的发展,围绝经期综合征(perimenopause syndrome,PMS)的研究日益受到重视。
卵巢摘除(Ovariectomy)作为一种常用的治疗方法,已被广泛应用于治疗多种妇科疾病,如乳腺癌、子宫内膜癌等。
然而卵巢摘除后围绝经期综合征的发生率较高,给患者的生活质量带来了很大影响。
因此研究围绝经期综合征的机制和治疗方法具有重要意义,本综述主要介绍了近年来关于卵巢摘除诱导围绝经期综合征动物模型的研究进展,包括动物模型的选择、建立方法、评价指标以及围绝经期综合征症状的表现等方面的内容。
通过对这些研究的梳理,旨在为今后围绝经期综合征的治疗提供理论依据和实验参考。
卵巢摘除是绝经前女性一种常见的手术,但其对围绝经期综合征的影响仍有争议卵巢摘除是绝经前女性一种常见的手术,主要用于治疗卵巢囊肿、子宫内膜异位症等疾病。
然而随着围绝经期综合征(PMS)的关注度逐渐提高,卵巢摘除对围绝经期综合征的影响也引起了广泛关注。
尽管许多研究已经探讨了卵巢摘除与PMS之间的关系,但目前仍存在一定的争议。
一方面有研究表明,卵巢摘除可以显著降低PMS的发生率和严重程度。
这可能是因为卵巢在女性生殖激素的分泌中起着关键作用,而这些激素在围绝经期综合征的发生和发展中具有重要作用。
因此通过去除卵巢,可以减少这些激素的产生,从而降低PMS的发生风险。
此外卵巢摘除还可以减轻其他与PMS相关的症状,如潮热、失眠和情绪波动等。
卵巢摘除对围绝经期综合征的影响仍存在一定争议,未来的研究需要进一步探讨卵巢摘除与PMS之间的确切关系,以便为临床医生提供更准确的指导。
同时也需要关注卵巢摘除术后女性的生活质量和健康状况,以确保手术的安全性和有效性。
II. 卵巢摘除与围绝经期综合征卵巢是女性生殖系统的重要组成部分,负责产生卵子和激素。
卵巢摘除(Ovariectomy)是一种常见的妇科手术,主要用于治疗卵巢囊肿、子宫内膜异位症等疾病。
《异体移植胞外基质促进小鼠卵巢内源性的原位再生》篇一一、引言随着医学的不断发展,生殖医学领域对于卵巢保护及功能恢复的研究日益深入。
卵巢内源性原位再生是解决女性卵巢功能衰退及不孕问题的重要途径。
近年来,异体移植胞外基质在促进卵巢内源性的原位再生方面取得了显著成果。
本文通过小鼠模型,探讨异体移植胞外基质在促进卵巢内源性再生的作用机制及效果。
二、材料与方法1. 实验动物与分组选用健康成年小鼠作为实验对象,根据实验目的分为对照组、异体移植组等。
2. 异体移植胞外基质的制备与处理从健康成年小鼠中提取异体胞外基质,进行纯化、处理,并制备成适当浓度的溶液。
3. 实验方法(1)将处理后的异体移植胞外基质注射至小鼠卵巢组织中;(2)观察并记录小鼠卵巢内源性原位再生的过程及效果;(3)采用免疫组化、PCR等技术检测相关指标的变化。
三、实验结果1. 异体移植胞外基质对小鼠卵巢内源性再生的促进作用实验结果显示,异体移植胞外基质能够显著促进小鼠卵巢内源性的原位再生。
注射异体移植胞外基质后,小鼠卵巢内的卵泡数量明显增加,卵泡质量得到改善,卵巢功能得到恢复。
2. 异体移植胞外基质的作用机制通过免疫组化、PCR等技术检测发现,异体移植胞外基质能够促进卵巢内源性再生相关基因的表达,如生长因子、细胞因子等。
这些基因的表达有助于卵泡的发育、成熟和排卵过程。
此外,异体移植胞外基质还能促进血管生成,为卵巢组织提供充足的营养和氧气。
3. 实验数据分析与图表展示将实验数据整理成表格,包括各组小鼠的卵泡数量、卵泡质量、相关基因表达水平等指标。
通过柱状图、折线图等形式直观展示实验结果。
四、讨论本实验结果表明,异体移植胞外基质能够促进小鼠卵巢内源性的原位再生。
这一发现为临床治疗女性卵巢功能衰退及不孕问题提供了新的思路和方法。
然而,异体移植胞外基质的具体作用机制仍需进一步研究。
此外,如何保证异体移植胞外基质的安全性和有效性也是亟待解决的问题。
在未来的研究中,可以进一步探讨异体移植胞外基质与其他治疗手段的结合应用,以提高治疗效果和安全性。
一、实验目的本研究旨在通过小鼠卵巢切除实验,模拟绝经后雌激素缺乏导致的骨质疏松症,为骨质疏松症的研究提供动物模型,并观察卵巢切除后小鼠骨代谢相关指标的变化。
二、实验材料与仪器1. 实验动物:健康雌性C57BL/6小鼠,体重20-25g,由动物实验中心提供。
2. 试剂与耗材:戊巴比妥钠、生理盐水、注射器、手术器械、缝合线等。
3. 仪器:电子天平、显微镜、生化分析仪、酶标仪等。
三、实验方法1. 实验分组:将小鼠随机分为两组,每组10只,分别为卵巢切除组(OVX组)和假手术组( Sham组)。
2. 实验操作:(1)卵巢切除组:小鼠戊巴比妥钠麻醉,消毒后,在无菌条件下进行手术。
首先,沿背部正中线切开皮肤,暴露背阔肌和脊柱,然后切开肌肉,显露脊柱。
在脊柱两侧找到卵巢,剪断卵巢韧带,将卵巢切除。
最后,缝合肌肉、皮肤,进行术后护理。
(2)假手术组:小鼠戊巴比妥钠麻醉,消毒后,在无菌条件下进行手术。
操作与卵巢切除组相同,但仅切开肌肉、皮肤,不切除卵巢。
3. 术后观察:(1)术后每日观察小鼠的精神状态、活动情况、食欲等。
(2)术后第1周、第2周、第4周分别进行体重、骨密度、血清骨代谢指标检测。
四、实验结果1. 体重变化:术后第1周、第2周、第4周,OVX组小鼠体重明显低于Sham组,差异具有统计学意义(P<0.05)。
2. 骨密度变化:术后第1周、第2周、第4周,OVX组小鼠骨密度显著低于Sham 组,差异具有统计学意义(P<0.05)。
3. 血清骨代谢指标:(1)血清骨钙素(BGP)水平:术后第1周、第2周、第4周,OVX组小鼠BGP水平显著低于Sham组,差异具有统计学意义(P<0.05)。
(2)血清碱性磷酸酶(ALP)水平:术后第1周、第2周、第4周,OVX组小鼠ALP水平显著高于Sham组,差异具有统计学意义(P<0.05)。
(3)血清骨钙素/碱性磷酸酶(BGP/ALP)比值:术后第1周、第2周、第4周,OVX组小鼠BGP/ALP比值显著低于Sham组,差异具有统计学意义(P<0.05)。
2020年12月第28卷㊀第6期中国实验动物学报ACTALABORATORIUMANIMALISSCIENTIASINICADecember2020Vol.28㊀No.6孟鑫ꎬ陈景伟.子宫内膜异位症小鼠模型研究进展[J].中国实验动物学报ꎬ2020ꎬ28(6):857-863.MengXꎬChenJWꎬetal.Researchprogressinamousemodelofendometriosis[J].ActaLabAnimSciSinꎬ2020ꎬ28(6):857-863.Doi:10 3969/j.issn.1005-4847 2020 06 018[基金项目]国家自然科学基金项目(82074483)ꎮFundedbyNationalNaturalScienceFoundationofChina(82074483).[作者简介]孟鑫(1995 )ꎬ女ꎬ研究生ꎬ研究方向:子宫内膜异位症的发病机制及中药干预研究ꎮEmail:182****9191@163.com[通信作者]陈景伟(1980 )ꎬ女ꎬ博士ꎬ副教授ꎬ研究方向:女性生殖功能障碍的中医药调控ꎮEmail:chenjingwei1999@126.com子宫内膜异位症小鼠模型研究进展孟鑫ꎬ陈景伟∗(河北中医学院中西医结合学院ꎬ中西医结合研究所ꎬ河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室ꎬ石家庄㊀050200)㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀子宫内膜异位症(endometriosisꎬEMs)是指具有活性的子宫内膜组织出现在宫腔被覆黏膜以外的部位ꎬ因其病因㊁发病机制尚不明确ꎬ中㊁西医诊断与治疗存在困难ꎬ使得EMs成为了近年来的研究热点之一ꎮ通过动物模型探讨EMs的病因㊁发病机制及药物治疗方法是研究EMs的重要手段ꎮ本文介绍了EMs小鼠模型的动物选择㊁构建方法以及各造模方法优缺点ꎬ旨在为EMs动物实验研究提供模型选择的参考ꎮʌ关键词ɔ㊀子宫内膜异位症ꎻ小鼠ꎻ模型ꎻ造模方法ʌ中图分类号ɔQ95-33㊀㊀ʌ文献标识码ɔA㊀㊀ʌ文章编号ɔ1005 ̄4847(2020)06 ̄0857 ̄07ResearchprogressinamousemodelofendometriosisMENGXinꎬCHENJingwei∗(HebeiKeyLaboratoryofIntegrativeMedicineonLiver ̄KidneyPatternsꎬInstituteofIntegrativeMedicineꎬHebeiUniversityofChineseMedicineꎬShijiazhuang050200ꎬChina)Correspondingauthor:CHENJingwei.E ̄mail:chenjingwei1999@126.comʌAbstractɔ㊀Endometriosis(EM)isdefinedbythepresenceofactiveendometrialtissueintheliningoftheuterinecavity.BecauseitsetiologyandpathogenesisareunclearꎬthediagnosisofEMandthecombineduseofTraditionalChinesemedicineandWesternmedicinearedifficultꎬandthusꎬEMhasbecomearesearchhotspotinrecentyears.AnimalexperimentsareimportantforexploringtheetiologyꎬpathogenesisꎬanddrugtherapyofEM.ThispaperdiscussedtheselectionofanimalsꎬconstructionmethodꎬandadvantagesanddisadvantagesofvariousEMmousemodelsinanefforttoprovideareferenceformodelselectioninanimalresearchofEM.ʌKeywordsɔ㊀endometriosisꎻmouseꎻmodelꎻbuildingmethodsConflictsofInterest:Theauthorsdeclarenoconflictofinterest.㊀㊀EMs是一种常见的妇科疾病ꎬ以盆腔疼痛㊁不孕㊁盆腔包块为主要临床表现[1]ꎮ迄今为止ꎬ该病的发病机制尚未明确ꎬ其临床药物疗效和手术治疗效果也欠佳ꎬ由于伦理道德等多方面现实原因的限制ꎬ在人体进行其发病机制和治疗方法的各项研究存在一定的局限性ꎮ动物实验为研究EMs提供了极大便利ꎬ逐渐成为了研究该病的重要手段ꎮ目前ꎬ已经成功建立了非人灵长类㊁家兔㊁鼠类及鸡胚绒毛尿囊膜等的EMs动物模型[2]ꎮ本文将从各类小鼠的造模方法㊁模型评价等方面作出较为综合的阐述及比较ꎬ以便研究者可以据此选择更贴合实验的造模方法ꎮ1㊀发病机制目前为止ꎬ国内外较为公认的发病机制有经血逆流学说㊁化生学说㊁转移学说㊁新生儿宫血学说[3]ꎮ经血逆流学说认为有活性的子宫内膜组织碎片经输卵管逆行至腹腔ꎬ并种植生长于盆腹腔或卵巢等其他组织上ꎮ该学说目前最为广泛接受ꎬ但依然不能完全解释EMs的发病原因ꎬ因此ꎬ在此基础上ꎬ郎景和[4]提出了 在位内膜决定论 ꎬ认为个体在位子宫内膜的生物学特性是其能否种植生长在其他部位的决定因素ꎮ化生学说认为异位子宫内膜细胞来自于其他组织的化生ꎻ转移学说认为组织碎片是经血管或淋巴管转移至其他部位并种植生长ꎻ新生儿宫血学说提出母体激素在新生儿出生后的减少导致了子宫出血ꎬ部分子宫出血逆流到腹腔ꎬ其中可能含有干细胞[5]ꎮ除此之外ꎬ中医认为瘀血是EMs的基本病因病机ꎬ瘀血阻滞ꎬ气血运行不畅是导致EMs的基本病因[1]ꎮ尽管各学说众说纷纭ꎬ但其发病机制依然不明确ꎬ因此ꎬ选择合理的动物模型就成为了研究其发病机制的首要任务ꎮ2㊀动物的选择目前的动物造模方法都基于经血逆流学说ꎬ主要包括自发性㊁诱发性(自体移植)和种植性(异体移植)三种[6]ꎮ自发性主要应用于非人灵长类动物[7]ꎬ如猕猴㊁狒狒和带尾纤猕猴ꎬ因其具有类似于人类的盆腔解剖结构和有规律的月经周期ꎬ可以自发形成EMsꎬ是研究EMs发病机制及治疗的理想方案ꎮ但因为灵长类动物价格昂贵ꎬ自发性造模成功率低ꎬ周期长等原因无法普及ꎮ诱发性主要适用于兔㊁鼠等啮齿类动物ꎬ种植性则多见于裸小鼠㊁SCID小鼠等ꎮ但因为啮齿类动物与人类之间有种属差异性ꎬ其实验结果可能与临床存在一定偏差ꎮ在众多动物中ꎬ啮齿类动物中的小鼠因其价格便宜ꎬ体型娇小ꎬ饲养管理方便ꎬ生长繁殖速度快ꎬ并且已经培育出了大量的近交系㊁突变系和封闭群ꎬ成为了EMs研究的主要选择ꎬ不仅可以用于EMs发病机制的研究ꎬ还可用于研究药物对EMs的影响作用ꎬ为EMs的实验研究作出了巨大贡献ꎮ3㊀造模方法及小鼠的选择3 1㊀术前处理使实验小鼠处于统一的动情周期ꎬ常用的方法为连续阴道涂片法[8]和直接给予外源性雌激素法[9](灌胃或肌注戊酸雌二醇㊁苯甲酸雌二醇㊁乙烯雌酚等)ꎬ但在操作过程中发现使大量的实验动物都处于统一的动情周期无疑加大了实验的难度与耗损ꎮ张薇等[10]分别选择在SD大鼠的动情期和非动情期进行自体移植术以建立EMs模型ꎬ发现非动情期和动情期的造模率及异位灶体积无显著差异ꎮ陈琼华等[11]通过建立BALB/C小鼠EMs模型并观察同样发现小鼠的造模成功率与其所处的动情周期无关ꎮ这一结果在简化造模实验㊁节约时长㊁节省资源等方面均具有重要意义ꎮ3 2㊀造模方法EMs小鼠的造模方法主要包括自体移植㊁同种异体移植和异体移植ꎮ3 2 1㊀自体移植即手术缝合法[12]ꎬ选取尿道口上方2cm处沿腹部正中线纵行切开ꎬ找到左侧子宫ꎬ于近卵巢端结扎子宫两端ꎬ剪下中间段ꎬ剪除其他多余组织血管后纵行剪开ꎬ将其内膜面贴于小鼠腹腔壁上ꎬ并将子宫对角缝合固定ꎬ完成后关腹并进行后续操作ꎮ王智超[13]通过分别移植到小鼠腹壁内侧㊁大网膜及肠壁三个部位来比较异位灶种植成功率ꎬ最终结果表明三者的种植率无明显差异ꎬ研究者可根据各自的研究目的选择最佳的种植部位ꎮ3 2 2㊀同种异体移植即腹腔注射法[14]ꎬ将小鼠分为供体组和受体组ꎬ将供体小鼠脱颈处死ꎬ剖开腹部ꎬ取出子宫ꎬ除去其多余组织后沿Y型子宫正中线剪开ꎬ分别放入生理盐水中ꎬ纵行切开暴露出子宫内膜后ꎬ用眼科剪将其剪碎至1mm3大小的小碎片ꎮ取受体小鼠ꎬ用16号针头注射器将含有子宫碎片的1mL生理盐水注射至受体小鼠腹腔内ꎬ进针点选取受体小鼠的小腹部偏腹中线0 5cm处的左下腹ꎬ一只供体小鼠子宫平分给两只受体小鼠ꎮ关于注射量ꎬ徐建波[15]进行了阶梯性注射实验ꎬ分别向受体小鼠注射1㊁2㊁4㊁8㊁16㊁32片1mm2大小的子宫内膜碎片观察ꎬ结果表明异位灶的成活率与注射量呈一定的曲线关系ꎬ当注射量ȡ4片时ꎬ注射量与成活率无显著关系ꎮ3 2 3㊀异体移植异体移植是指将人子宫内膜组织植入到动物体内加以研究观察ꎬ由于裸鼠和SCID小鼠属于免疫缺陷小鼠ꎬ不会发生异体移植的免疫排斥反应ꎬ种植的成功率较高ꎬ被作为异体移植的首选ꎮ其造模方法包括腹腔种植法㊁腹腔注射法和皮下种植法ꎮ腹腔种植法[16]:将新鲜的人子宫内膜组织标本置入含DMEM培养液的培养皿中ꎬ后用冷的0 1mol/L的无菌磷酸盐缓冲液(PBS)清洗3~4次ꎬ于无菌培养皿中将组织剪至2mmˑ3mm大小的碎块ꎬ分为每组约8~10个小碎块ꎬ分别放入PBS中ꎮ取麻醉后的裸鼠于下腹正中横切约1cm的切口ꎬ将处理好的一组碎块随机放置盆腹腔内的不同位置后ꎬ逐层关腹ꎮ腹腔注射法[17]:人子宫内膜组织的准备清洗同上ꎬ将组织剪至0 5~1mm2大小的碎片ꎬ平均分至PBS中ꎮ选取SCID小鼠下腹正中部位为进针点行腹腔穿刺ꎬ用16号针头注入含有组织碎片的PBS液0 2mL后ꎬ按压片刻ꎬ防止液体流出ꎮ皮下种植法[18]:将准备好的人子宫内膜组织用无菌PBS清洗3~4次ꎬ剪至1mm2大小的碎片ꎬ平均放置于含有DMEM培养液的培养皿中混匀ꎮ用9号针头将含有内膜组织碎片的培养液按每只0 5mL注入ꎬ裸鼠可选取背部皮下方便后续观察ꎬSCID小鼠则选取下腹部皮下ꎬ以腹部中线脐下为进针点ꎮ3 3㊀各造模方法优缺点比较EMs动物模型对研究其发病机制及临床治疗具有重大价值ꎬ其造模方法逐渐实现了由自发到诱发ꎬ有创到无创的进化ꎬ尽管如此ꎬ现有的造模方法仍然都存有各自的不足之处ꎬ因此ꎬ以实验目的和可行性作为选择条件ꎬ综合权衡各种模型方法的利弊ꎬ才能充分发挥不同造模方法的优势ꎮ常用的几种建立小鼠EMs模型方法的优缺点比较见表1ꎮ3 4㊀小鼠的选择随着实验小鼠培育技术的提升ꎬ小鼠的品种逐渐丰富ꎬ更大地满足了实验的需求ꎬ结合实验目的㊁操作技术及环境因素选择最佳的实验小鼠ꎬ可以进一步提高造模的成功率及实验的准确性ꎮ目前ꎬ用于建立EMs模型的小鼠品种ꎬ优缺点及各自适用的造模方法详见表2ꎮ4㊀模型评价4 1㊀模型建立成功标准肉眼可以观察到异位灶体积增大ꎬ呈透明囊状ꎬ内有黄色液体ꎬ异位灶表面可看到新生的细小血管ꎮ显微镜下可见异位灶中含有子宫内膜腺体和间质细胞ꎬ囊液内和间质层可见到炎症细胞[19]ꎮ4 2㊀观察指标及方法4 2 1㊀大体观察肉眼观察小鼠的精神状态ꎬ毛色质量ꎬ饮食情况及活动变化ꎻ采用皮下种植法时要观察皮下异位灶结节的大小ꎬ生长情况ꎮ处死开腹探查时ꎬ观察异位灶生成情况ꎬ形态ꎬ位置ꎬ有无粘连等ꎬ并用双脚规测量异位灶体积大小ꎮ4 2 2㊀组织学观察取异位灶进行HE染色镜下观察及免疫组化观察ꎬ可直接观察异位灶组织细胞形态ꎬ为EMs的发展㊁恶化提供了病理学依据ꎮ4 2 3㊀影像学观察影像学观察包括MRI㊁超声等都在EMs动物模型研究中有所应用ꎬ影像学检查可以通过图像来直观的获取所需信息ꎬ并可直接进行数据分析ꎬ有效地避免了动物死亡ꎬ减少了动物的应激反应ꎮ但该方法因其价格昂贵ꎬ在实验中未得到广泛普及ꎮ表1㊀建立EMs小鼠模型方法优缺点比较Table1㊀AdvantagesanddisadvantagesofthemousemodelofEMs造模方法Buildingmethods优点Advantages缺点Disadvantages自体移植Autologoustransplantation异位灶的种植部位准确ꎬ能较好的定位评估内异症的进展情况Theimplantationsiteofheterotopicfocusisaccurateꎬwhichcanbetterlocateandevaluatetheprogressofendometriosis操作相对复杂ꎬ创伤性较大ꎬ术后易发生粘连ꎻ另外ꎬ手术对腹腔免疫环境干预较大ꎬ不适用于内异症免疫学研究Theoperationisrelativelycomplexandtraumaticꎬandpostoperativeadhesioniseasytooccur.Inadditionꎬthesurgicalinterventionontheimmuneenvironmentoftheabdominalcavityisrelativelylargeꎬwhichisnotsuitablefortheimmunologicalstudyofendometriosis同种异体移植Allotransplantation操作简单ꎬ少有出血㊁感染死亡Simpleoperationꎬlessbleedingandinfectiondeath种植部位不能确定ꎬ不便于后期观察ꎬ定量评估内异症进展方面稍差Theimplantsiteisuncertainꎬwhichisnotconvenientforlaterobservationꎬandthequantitativeevaluationoftheprogressofendometriosisispoor异体移植Allografts有利于保持人类的组织形态和各类生化指标ꎬ减少了物种差异性ꎬ使实验结果更有临床意义Itisbeneficialtomaintainhumantissuemorphologyandvariousbiochemicalindicatorsꎬreducespeciesdifferencesꎬandmaketheexperimentalresultsmoreclinicallysignificant实验所用小鼠因免疫功能缺陷ꎬ不能应用于内异症相关的免疫机制方面的研究ꎬ且小鼠抵抗力低下ꎬ不易成活ꎬ饲养条件高Becauseofthedeficiencyofimmunefunctionꎬthemiceusedintheexperimentcannotbeusedtostudytheimmunemechanismrelatedtoendometriosisꎻandtheresistanceofmiceislowꎬitisnoteasytosurviveꎬandthefeedingconditionsarehigh表2㊀实验常用小鼠的优缺点及适用造模方法Table2㊀Advantagesanddisadvantagesofmouseandtheapplicablemodelingarecommonlyusedinexperiments品种Varieties实验常用Experimentused优势Advantages不足Disadvantages适用的造模方法Applicablemoldingmethod封闭群ClosedcolonyKM小鼠㊁ICR小鼠KMmiceꎬICRmice价格便宜㊁容易饲养㊁生命力顽强㊁可大量重复Lowpriceꎬeasytoraiseꎬstrongvitalityꎬcanberepeatedinlargequantities个体娇小㊁自体移植时操作较大鼠困难Petiteindividualꎬtheoperationofautotransplantationismoredifficultthanthatofrats自体移植㊁腹腔注射皆可ꎬ但更适用于自体移植Autotransplantationandintraperitonealinjectioncanbeusedꎬbuttheyaremoresuitableforautotransplantation近交系InbredstrainBALB/C小鼠㊁C57BL/6小鼠BALB/CmiceꎬC57BL/6mice个体间差异性小㊁基因高度纯和㊁基因型较稳定㊁几乎无异体排斥反应Thedifferencebetweenindividualsissmallꎬthegeneishighlyhomozygous:thegenotypeisrelativestableꎬandthereisalmostnoallograftrejection抵抗力较低下㊁易发生死亡Lowresistanceꎬpronetodeath自体移植㊁腹腔注射皆可ꎬ但更适用于腹腔注射Autotransplantationandintraperitonealinjectioncanbeusedꎬbuttheyaremoresuitableforintraperitonealinjection免疫缺陷性Immunodeficientanimal裸鼠㊁SCID小鼠NudemiceꎬSCIDmice无免疫排斥反应㊁可建立人子宫内膜异位症小鼠模型ꎻ其中SCID小鼠移植后的种植存活率较裸鼠高ꎬ更易发生侵袭和转移Noimmunerejectionꎬthemicemodelofhumanendo ̄metriosiscanbeestablishedꎻthesurvivalrateofSCIDmiceaftertransplantationishigherthanthatofnudemiceꎬandSCIDmicearemorepronetoinvasionandmetastasis价格昂贵㊁饲养条件高㊁无法进行免疫方面的研究Highpriceꎬhighfeedingconditionsꎬunabletocarryoutimmuneresearch异体移植中的腹腔种植㊁腹腔注射和皮下种植ꎻ其中SCID小鼠皮下种植法造模成功率较裸鼠高IntraperitonealimplantationꎬintraperitonealinjectionandsubcutaneousimplantationinallograftsꎻandthesuccessrateofSCIDmiceusingsubcutaneousimplantationishigherthanthatofnudemice4 2 4㊀荧光染色法观察荧光染色是一种活体成像技术ꎬ可应用慢病毒载体将荧光素酶和红色荧光蛋白基因转入内膜组织并注入裸鼠体内ꎬ利用活体成像仪来实时监测造模情况及疾病进展情况[20]ꎮ该方法不仅实现了无创监测ꎬ而且定位更加准确ꎬ最大限度地避免动物死亡所带来的实验耗损ꎬ具有很高的优越性ꎮ4 3㊀造模周期关于小鼠EMs造模的最佳周期ꎬ现阶段国内外的研究结果各不统一ꎬ不同的研究者选择的时间也不尽相同ꎮ徐建波[15]通过建立C57BL/6小鼠EMs模型研究ꎬ表明异位灶的重量在第5天趋于稳定ꎬ大小在第9天也达到稳定ꎬ故提示第9天可能为最佳观察时间ꎮ陈琼华等[11]从异位灶大小㊁分布及BALB/C小鼠的体重方面研究发现第4天与第21天无明显差异ꎬ提示第4天便是最佳观察时间ꎮ王智超[13]研究KM小鼠造模时间表明在术后第2周模型既已建立成功ꎬ但异位灶体积在第4周处于最大ꎮ任旭等[18]通过研究SCID小鼠造模发现模型在术后第2周已成功ꎬ且第2周与第4周异位灶体积无明显差异ꎬ但于第6周出现异位灶体积缩小现象ꎮ综上所述ꎬ目前小鼠异位灶模型的最佳造模周期并不统一ꎬ研究过程中观察指标只有异位灶体积及重量ꎬ不能全面地反应模型的生长情况ꎮ由此可见ꎬEMs造模的最佳周期ꎬ以及其时间是否与小鼠种类不同而存在差异性等问题仍然需要进一步深入研究ꎮ5㊀模型的发展与优化5 1㊀EMs合并症模型的建立EMs作为一个复杂的妇科疾病ꎬ其机理ꎬ症状表现涉及多个方面ꎬ主要症状表现为不孕ꎬ疼痛ꎻ其病变过程还包括炎症ꎬ纤维化等多方面的共同作用ꎮ现阶段的动物模型是否可以用于某一方面的深入研究ꎬ需要我们在此基础上进一步评价与发展ꎮEMs不孕模型:崔阳阳等[21]采用 腹腔+皮下 注射法建立EMs小鼠模型并通过生育功能检测ꎬ证实了模型小鼠的生殖能力较正常小鼠低下ꎮ王汝倩等[22]采用了供体小鼠模拟经期内膜的方法ꎬ以腹腔注射法建立EMs小鼠模型后ꎬ再以2ʒ1的机率与雄鼠合笼ꎬ得到不孕小鼠ꎬ成功建立EMs不孕小鼠模型ꎮEMs疼痛模型:陈景伟等[12]采用自体移植法成功复制小鼠EMs模型ꎬ于术后连续灌胃补佳乐12d后ꎬ腹腔注射缩宫素ꎬ通过观察其小鼠的扭体反应建立了EMs痛经模型ꎬ为EMs疼痛的研究提供了理想的动物模型ꎮEMs纤维化模型:锁漉萱等[23]采用腹腔注射法成功复制EMs小鼠模型后ꎬ用Masson染色法分别检测小鼠造模后第7㊁14㊁21天的异位病灶和在位内膜纤维化程度ꎬ发现于造模后第14天纤维化面积比率达到最佳ꎮ路攀等[16]用腹腔种植法复制人EMs裸鼠模型并观察后ꎬ同样于造模后第14天发现难以分离的致密粘连ꎬ可见EMs小鼠模型建立后14d即可作为研究EMs纤维化机制的可靠动物模型ꎮ5 2㊀中医病证结合模型的建立辨证论治是中医理论体系重要的组成部分ꎬ为了更好的从中医传统理论角度认识EMs的发病机制及探究中医药治疗EMs的作用机理ꎬ单纯的EMs动物模型已不能满足实验需要ꎬ因此ꎬ开展中医病证结合EMs动物模型的研究势在必行ꎮ气滞血瘀型EMs模型:王哲等[24]在自体移植的造模术后1周采用了:(1)肾上腺素皮下注射ꎻ(2)食用油灌胃ꎻ(3)在夹子上贴附纱布并夹小鼠尾部ꎬ每次5minꎻ(4)45ʎ倾斜鼠笼2hꎻ(5)束缚大鼠ꎬ限制其自由2hꎻ(6)冰水浴5minꎻ(7)禁食水1dꎻ(8)昼夜颠倒1dꎮ每天随机选择以上3种方法干预并观察两周ꎬ成功用药物加情志刺激干预方法建立了气滞血瘀的EMs模型ꎬ实验动物出现精神活跃ꎬ脾气暴躁ꎬ易激惹等气滞症状ꎬ血清CA125值升高ꎬ提示造模成功ꎮ镜下观察可见异位灶内膜上皮细胞扁平ꎬ积层较薄ꎬ结构不清的组织病理学改变ꎮ寒凝血瘀型EMs模型:孙博等[25]在自体移植术1周后ꎬ将其置于0~1ħ冰水混合物中浸泡20minꎬ连续2周成功建立了寒凝血瘀小鼠模型ꎮ周世卿等[26]则采用盐酸肾上腺素皮下注射加冰水浸泡的方法成功建立了寒凝血瘀的裸鼠模型ꎮ实验动物出现精神萎靡ꎬ反应迟钝ꎬ易扎堆等寒邪致病症状ꎬ耳唇㊁爪甲㊁尾部暗淡ꎬ舌质紫暗ꎬ舌下脉络增粗等血瘀症状ꎬ结合血液流变学和凝血功能指标的变化提示造模成功ꎮ镜下观察可见异位灶内膜上皮细胞呈柱状排列ꎬ偶有假复层结构ꎬ上皮细胞层较薄ꎬ间质细胞明显增多ꎬ腺体数量增多ꎬ腺上皮呈立方排列ꎬ且血管丰富ꎮ肾阳虚血瘀型EMs模型:贾云波等[27]先在大鼠笼中放入一定量的冰水ꎬ置于4ħ冰箱20minꎬ每天2次ꎬ1个月后行自体移植术ꎬ术后再次重复术前的冷冻行为成功建立了虚寒型EMs模型ꎮ实验动物出现体温降低ꎬ动情周期紊乱ꎬ反应迟钝ꎬ倦缩懒动ꎬ大便溏等虚寒症状ꎬ结合脏器指数㊁激素水平均降低的结果提示造模成功ꎮ镜下观察可见异位内膜较厚ꎬ腺体不明显ꎬ管腔消失ꎬ炎症细胞增多ꎬ细胞排列不整齐[28]ꎮ以上三个证型目前已有发展ꎬ但依然有许多中医理论和问题无法在实验中体现ꎬ此外ꎬ还有湿热㊁痰瘀等等中医表现暂不能实现ꎬEMs的中医病证结合模型仍需进一步研究发展与完善ꎮ5 3㊀特殊动物模型的建立与应用5 3 1㊀基因敲除小鼠EMs模型的建立通过基因敲除技术建立转基因动物模型近年来也逐渐在EMs研究过程中备受关注ꎬ基因敲除技术是利用一定的生物手段ꎬ允许特定的目的基因缺失或失活ꎬ对敲除的基因进行有效的控制ꎬ从而排除其他因素对实验结果的干扰ꎬ使实验结果变得更加可靠和直观[29]ꎮ基因敲除小鼠技术是指通过基因工程的办法使小鼠体内某种基因功能缺失的生物技术[30]ꎮ宫庭钰等[31]应用雌激素受体β基因敲除小鼠结合自体移植法建立了EMs模型ꎻBurns等[32]分别用IL ̄6基因敲除小鼠和ER基因敲除小鼠结合腹腔注射法成功构建了EMs模型ꎮ应用基因敲除小鼠建立EMs模型ꎬ有利于了解已知基因在EMs形成过程中的作用及与相关因子之间的关系ꎬ为明确EMs发生发展的影响因素提供科学的实验数据ꎬ为临床合理选择有效的治疗药物提供靶向依据ꎮ5 3 2㊀毒物暴露动物模型的建立及应用EMs是一种多因素复杂的疾病ꎬ受到多种因素的互相影响与调控ꎬ根据近年来相关的流行病学调查和实验依据发现ꎬ暴露于具有内分泌干扰作用的环境毒物之下可能在其发病机制中发挥了一定的作用[33]ꎬ因此建立可靠的EMs毒物暴露动物模型是获得准确研究结果的首要条件ꎮ崔照领等[34]采用灌胃强饲的方法使受孕雌鼠暴露于TCDD中并产下子鼠ꎬ再采用自体移植法建立子鼠EMs模型ꎬ成功构建了二恶英暴露的EMs小鼠模型ꎻBruner ̄Tran等[35]采用了宫内+哺乳期暴露模式直接暴露雌鼠胎儿及其生殖细胞ꎬ成功培育出毒物暴露小鼠并进一步研究了暴露毒素在EMs中的潜在机制ꎮ越来越多的研究表明ꎬEMs的多基因遗传易感性与环境因子有关[36]ꎬ毒物暴露小鼠模型的建立及应用可以更好地研究环境㊁内分泌因素与遗传因素在EMs病因学中的相互密切关系ꎬ为探索EMs的机制与治疗提供了新的思路ꎮ6 总结与展望EMs作为一种复杂的妇科疾病一直以来都是研究的焦点ꎬ虽然随着动物模型的不断发展与完善ꎬ为EMs发病机制ꎬ治疗等方面的认识提供了很大帮助ꎬ但由于该病很多方面的研究依然不甚完善ꎬ故而在未来的研究中ꎬ动物模型的创新与选择仍是实验的重要且首要部分ꎮ小鼠构建的模型因小鼠的各种优点而具有较其他动物的优越性ꎬ操作方便ꎬ成功率高ꎬ已然成为了众多实验的首选ꎮ尽管如此ꎬ现阶段各种小鼠模型中仍旧存在着不可避免的不足之处ꎬ限制了EMs的研究进展ꎬ故各研究者应该根据其研究目的ꎬ综合衡量考虑ꎬ充分发挥各种模型的最优点ꎬ选择最合适的模型ꎬ以便更好的研究中医药治疗EMs的作用机理ꎬ为中医药治疗EMs提供客观依据ꎮ参㊀考㊀文㊀献(References)[1]㊀俞超芹ꎬ段华ꎬ许泓ꎬ等.子宫内膜异位症中西医结合诊治指南[J].中国中西医结合杂志ꎬ2019ꎬ39(10):1169-1176.YuCQꎬDuanHꎬXuHꎬetal.DiagnosisandtreatmentofendometriosiswithintegratedtraditionalChineseandwesternmedicine[J].ChinJIntegrTraditWesternMedꎬ2019ꎬ39(10):1169-1176.[2]㊀宫庭钰ꎬ关铮.子宫内膜异位症动物模型及其应用进展[J].国际生殖健康/计划生育杂志ꎬ2008ꎬ17(1):36-39.GongTYꎬGuanZ.Advancesinanimalmodelsofendometriosis[J].JIntReprodHealth/Familꎬ2008ꎬ17(1):36-39. [3]㊀王国云ꎬ袁明ꎬ姬苗苗.子宫内膜异位症发病机制研究进展[J].山东大学学报(医学版)ꎬ2019ꎬ57(6):33-39.WangGYꎬYuanMꎬJiMM.Researchadvancesinthepathogenesisofendometriosis[J].JShandongUniv(HealthSci)ꎬ2019ꎬ57(6):33-39.[4]㊀郎景和.对子宫内膜异位症认识的历史㊁现状与发展[J].中国实用妇科与产科杂志ꎬ2020ꎬ36(3):193-196.LangJH.Thehistoryꎬcurrentsituationanddevelopmentofunderstandingendometriosis[J].ChinJPractGynecolObstꎬ2020ꎬ36(3):193-196.[5]㊀朱大秀ꎬ张真真ꎬ朱利ꎬ等.子宫内膜干/祖细胞在子宫内膜异位症发病中的作用及研究进展[J].华西医学ꎬ2020ꎬ35(1):84-88.ZhuDXꎬZhangZZꎬZhuLꎬetal.Theroleandadvancesofendometrialstem/progenitorcellsinthepathogenesisofendometriosis[J].WestChinMedJꎬ2020ꎬ35(1):84-88. [6]㊀金济云ꎬ夏亲华.子宫内膜异位症动物模型研究进展[J].中国医药导报ꎬ2016ꎬ13(5):28-31.JinJYꎬXiaQH.Researchprogressofendometriosisanimalmodels[J].ChinMedHeraldꎬ2016ꎬ13(5):28-31.[7]㊀冯雪ꎬ黄薇.子宫内膜异位症动物模型研究进展[J].中国比较医学杂志ꎬ2014ꎬ24(12):67-70.FengXꎬHuangW.Researchadvancesinanimalmodelsofendometriosis[J].ChinJCompMedꎬ2014ꎬ24(12):67-70. [8]㊀MartinsRRꎬPereiraNMꎬSilvaTM.Liquid ̄basecytology:anewmethodforoestralcyclestudyinWistar srats[J].ActaCirBrasꎬ2005ꎬ20(1):78-81.[9]㊀FowlerREꎬEdwardsRG.Inductionofsuperovulationandpregnancyinmaturemicebygonadotrophins[J].JEndocrinolꎬ1957ꎬ15(4):374-384.[10]㊀张薇ꎬ沈洪沁ꎬ黄启玲ꎬ等.非动情期SD大鼠子宫内膜异位症模型的建立[J].中国实验动物学报ꎬ2004ꎬ12(1):21-24.ZhangWꎬShenHQꎬHuangQLꎬetal.EstablishofendometriosismodelinSDratsduringnon ̄estrus[J].ActaLabAnimSciSinꎬ2004ꎬ12(1):21-24.[11]㊀陈琼华ꎬ邱娜璇ꎬ颜晓红ꎬ等.BALB/c小鼠子宫内膜异位症模型的建立及其形态学的动态观察[J].中国微创外科杂志ꎬ2010ꎬ10(3):238-242.ChenQHꎬQiuNXꎬYanXHꎬetal.EstablishmentofBALB/cendometriosismodelanddynamicobservationofetopicmorphous[J].ChinJMinimInvasiveSurgꎬ2010ꎬ10(3):238-242. [12]㊀陈景伟ꎬ仝瑞晓ꎬ范丽洁ꎬ等.BALB/c小鼠子宫内膜异位症痛经模型的建立[J].中国实验动物学报ꎬ2014ꎬ22(1):83-86.ChenJWꎬTongRXꎬFanLJꎬetal.Establishmentofamousemodelofendometriosisdysmenorrhea[J].ActaLabAnimSciSinꎬ2014ꎬ22(1):83-86.[13]㊀王智超.子宫内膜异位症影响妊娠的相关因素分析及动物模型的建立[D].合肥:安徽医科大学ꎬ2017.WangZC.Theanalysisoftherelevantfactorsaffectingpregnancyinendometriosisandtheestablishmentofanimalmodels[D].Hefei:AnhuiMedicalUniversityꎬ2017.[14]㊀李冰冰ꎬ刘雁峰ꎬ和翔宇ꎬ等.BALB/c小鼠子宫内膜异位症模型建立和异位病灶纤维化评价[J].现代中西医结合杂志ꎬ2019ꎬ28(29):3197-3201.LiBBꎬLiuYFꎬHeXYꎬetal.EstablishmentofBALB/cmouseendometriosismodelandevaluationofendometrioticlesionsfibrosis[J].ModernJIntegrTraditChinWesternMedꎬ2019ꎬ28(29):3197-3201.[15]㊀徐建波.腹腔注射法建立C57BL/6小鼠子宫内膜异位症模型[D].苏州:苏州大学ꎬ2013.XuJB.TheestablishmentofC57BL/6mouseendometriosismodelbyintraperitonealinjection[D].Suzhou:SoochowUniversityꎬ2013.[16]㊀路攀ꎬ米雪ꎬ苗劲蔚ꎬ等.人子宫内膜异位症纤维化动物模型的建立[J].中国医药导报ꎬ2016ꎬ13(32):8-11.LuPꎬMiXꎬMiaoJWꎬetal.Establishmentofafibroticnudemousemodelofhumanendometriosis[J].ChinMedHeraldꎬ2016ꎬ13(32):8-11.[17]㊀罗碧云ꎬ李莉ꎬ江玲.利用SCID小鼠建立子宫内膜异位症模型的方法探讨[J].实验动物与比较医学ꎬ2018ꎬ38(5):390-393.LuoBYꎬLiLꎬJiangL.EstablishmentofendometriosismodelinSCIDmice[J].LabAnimCompMedꎬ2018ꎬ38(5):390-393. [18]㊀任旭ꎬ王沂峰ꎬ戴丽冰.子宫内膜异位症SCID小鼠动物模型的构建[J].昆明医科大学学报ꎬ2018ꎬ39(1):30-34.RenXꎬWangYFꎬDaiLB.TheestablishmentofSCIDmicemodelonendometriosis[J].JKunmingMedUnivꎬ2018ꎬ39(1):30-34.[19]㊀杨莉ꎬ周忠明.小鼠子宫内膜异位症模型的建立及组织学观察[J].湖北中医学院学报ꎬ2010ꎬ12(5):16-18.YangLꎬZhouZM.Endometriosismicemodelestablishmentandhistologicalobservation[J].JHubeiUnivChinMedꎬ2010ꎬ12(5):16-18.[20]㊀关绮蕙ꎬ史文静ꎬ周龙书ꎬ等.人子宫内膜异位症的可示踪裸鼠模型构建[J].重庆医学ꎬ2019ꎬ48(7):1110-1113ꎬ1117.GuanQHꎬShiWJꎬZhouLSꎬetal.Establishmentofnudemousemodelofendometriosisbuiltbytracinghumanendometrium[J].ChongqingMedꎬ2019ꎬ48(7):1110-1113ꎬ1117.[21]㊀崔阳阳ꎬ孙伟伟ꎬ赵瑞华ꎬ等.子宫内膜异位症对小鼠生育能力的影响[J].中国实验动物学报ꎬ2015ꎬ23(5):479-483.CuiYYꎬSongWWꎬZhaoRHꎬetal.Effectsofendometriosisonthereproductiveabilityofmice[J].ActaLabAnimSciSinꎬ2015ꎬ23(5):479-483.[22]㊀王汝倩ꎬ张洁ꎬ刘璐茜ꎬ等.用模拟经期内膜组织建立子宫内膜异位症小鼠模型及其生殖能力的研究[J].生殖医学杂志ꎬ2017ꎬ26(6):592-598.WangRQꎬZhangJꎬLiuLXꎬetal.Establishmentofmouseendometriosismodelbyinjectingsimulatedmenstrualendometrialtissueanditsreproductiveability[J].JReprodMedꎬ2017ꎬ26(6):592-598.[23]㊀锁漉萱ꎬ张真真ꎬ开红英ꎬ等.子宫内膜异位症纤维化与M2型巨噬细胞的关系[J].实用医学杂志ꎬ2017ꎬ33(12):1928-1932.SuoLXꎬZhangZZꎬKaiHYꎬetal.RelationshipbetweenfibrosisandM2macrophagesinendometriosis[J].JPractMedꎬ2017ꎬ33(12):1928-1932.[24]㊀王哲ꎬ王家历ꎬ李明ꎬ等.气滞血瘀型子宫内膜异位症大鼠模型的复制[J].中国临床研究ꎬ2016ꎬ29(5):682-684.WangZꎬWangJLꎬLiMꎬetal.Replicationofendometriosismodelofqistagnationandbloodstasistypeinrats[J].ChinJClinResꎬ2016ꎬ29(5):682-684.[25]㊀孙博ꎬ马遇春ꎬ张天婵ꎬ等.病证结合制备寒凝血瘀型子宫内膜异位症大鼠模型[J].中医药导报ꎬ2016ꎬ22(18):17-22.SongBꎬMaYCꎬZhangTCꎬetal.Establishmentoftheendometriosisratmodelwithbloodstasisduetocoldaccumulationbycombinationofdiseaseandsyndrome[J].ChinMedHeraldꎬ2016ꎬ22(18):17-22.[26]㊀周世卿ꎬ张婷婷ꎬ李甜甜ꎬ等.寒凝血瘀证裸小鼠模型的建立及评价[J].辽宁中医杂志ꎬ2019ꎬ46(2):415-417.ZhouSQꎬZhangTTꎬLiTTꎬetal.Establishmentandevaluationofnudemousemodelofbloodstasis[J].LiaoningJTraditChinMedꎬ2019ꎬ46(2):415-417.[27]㊀贾云波ꎬ杜惠兰ꎬ姚颖玉.肾阳虚血瘀证子宫内膜异位症大鼠造模方法的建立与评价[J].河北中医药学报ꎬ2017ꎬ32(3):9-12ꎬ18.JiaYBꎬDuHLꎬYaoYY.Endometriosisofkidneyyangdeficiencyandbloodstasissyndrome[J].JHebeiTCMPharmacolꎬ2017ꎬ32(3):9-12ꎬ18.[28]㊀贾云波ꎬ杜惠兰ꎬ高星ꎬ等.补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症肾阳虚血瘀证模型大鼠HIF ̄1α㊁PHD2㊁VHL表达的影响[J].中国中西医结合杂志ꎬ2015ꎬ35(10):1210-1217.JiaYBꎬDuHLꎬGaoXꎬetal.EffectsofWenyangHuayuRecipeonexpressionsofHIF ̄1αꎬPHD2ꎬandVHLinendometriosisratswithShenYangDeficiencyBloodStasisSyndrome[J].ChinJIntegrTraditWesternMedꎬ2015ꎬ35(10):1210-1217. [29]㊀黄小荣ꎬ黄衍恒ꎬ叶霖ꎬ等.巨噬细胞条件性Atg5基因敲除小鼠的构建及鉴定[J].中国实验动物学报ꎬ2019ꎬ27(6):770-775.HuangXRꎬHuangYHꎬYeLꎬetal.Constructionandidentificationofmacrophage ̄conditionalAtg5 ̄knockoutmice[J].ActaLabAnimSciSinꎬ2019ꎬ27(6):770-775.[30]㊀王超玄ꎬ孙航.基因敲除小鼠技术的研究进展[J].生物工程学报ꎬ2019ꎬ35(5):784-794.WangCXꎬSongH.Progressingeneknockoutmice[J].ChinJBiotechnolꎬ2019ꎬ35(5):784-794.[31]㊀宫庭钰ꎬ关铮ꎬ张卓梅ꎬ等.雌激素受体β基因敲除小鼠子宫内膜异位症模型的建立[J].中国实验动物学报ꎬ2008ꎬ16(2):148-149ꎬ159.GongTYꎬGuanZꎬZhangZMꎬetal.EstablishmentandhistologicalobservationofanER ̄βknockoutmousemodelofendometriosis[J].ActaLabAnimSciSinꎬ2008ꎬ16(2):148-149ꎬ159.[32]㊀BurnsKAꎬThomasSYꎬHamiltonKJꎬetal.Earlyendometriosisinfemalesisdirectedbyimmune ̄mediatedestrogenreceptoralphaandIL6cross ̄talk[J].Endocrinologyꎬ2018ꎬ159(1):103-118.[33]㊀HuangPCꎬLiWFꎬLiaoPCꎬetal.Riskforestrogen ̄dependentdiseasesinrelationtophthalateexposureandpolymorphismsofCYP17A1andestrogenreceptorgenes[J].EnvironSciPollutResIntꎬ2014ꎬ21(24):13964-13973.[34]㊀崔照领ꎬ黄向华ꎬ宫心鹏.二恶英暴露对子宫内膜异位症模型形成的影响[J].河北医科大学学报ꎬ2015ꎬ36(10):1162-1165.CuiZLꎬHuangXHꎬGongXP.Influenceofdioxinexposureonformationofendometriosismodel[J].JHebeiMedUnivꎬ2015ꎬ36(10):1162-1165.[35]㊀Bruner ̄TranKLꎬDulebaAJꎬTaylorHSꎬetal.Developmentaltoxicantexposureisassociatedwithtransgenerationaladenomyosisinamurinemodel[J].BiolReprodꎬ2016ꎬ95(4):73. [36]㊀Bruner ̄TranKLꎬYeamanGRꎬCrispensMAꎬetal.Dioxinmaypromoteinflammation ̄relateddevelopmentofendometriosis[J].FertilSterilꎬ2008ꎬ89(5):1287-1298.[收稿日期]㊀2020-05-18。
审评二部笪红远子宫内膜异位症(简称内异症,英文为:endometriosis,缩写为EMT。
)是子宫内膜间质细胞和上皮细胞种植于子宫腔之外的妇科良性疾病,就是指有活动功能的子宫内膜出此刻子宫内壁之外的部位生长。
内异症是一种常见到妇科疾病,育龄妇女发病率可达10~15%,是引发月经失调、痛经和不孕的主要原因之一,由于发病机理未被最终阐明,目前尚未有理想到根治方式,因此成为妇科领域的重要研究热点之一。
从140多年前报道该病以来,但对它的深入研究只有70多年的历史。
随组织培养学的发展及在体和体外的实验不断开展,动物模型的研究成果起到了使我们可以从不同层面了解和认识该病机制的重要作用。
一、EMT模型研究的现状(一)、体外模型:体外模型在医学研究中有着悠久的历史,目前EMT比较常用的体外模型是细胞培养。
将子宫内膜组织经过酶消化、筛网分离等,再进行体外培养。
体外细胞的分离和培养不影响细胞生物学特性及表面蛋白的表达。
由于异位内膜培养的成功率低于在位内膜,且取材的部位及方法对异位内膜的培养成功有较大的影响。
用在位子宫内膜体外培养可作为EMT的研究模型。
细胞培养不仅可以观察子宫内膜细胞增长、侵袭、转移等情况,而且还可以进行细胞化学、超微结构、生物学特性和分子生物学方面的研究。
但体外模型对EMT的研究缺乏整体环境,有明显局限性,毕竟疾病的发生与整体内、外环境都有密切的关系。
所以EMT体外模型在进行药物有效性研究方面,药物研究中目前应用很少。
(二)、体内模型:体内动物模型可用于EMT的遗传学、免疫学、分子生物学及内分泌等多方面的研究,也可探索EMT 的高危因素、预防措施、治疗措施及对各种治疗方法进行疗效评价。
目前常用的动物有狒狒、猴、大鼠和小鼠。
EMT动物模型可分为自发性和诱发性模型。
1、自发性EMT模型:自然发生的前提是有月经周期,除人以外,只有灵长类动物有月经,如:狒狒、恒河猴、猕猴等。
此类动物模型没有人为因素,比较接近自然发生的疾病,因此灵长类动物在EMT的研究中是最有潜力的。
大鼠胚胎与卵巢的移植技术胚胎移植俗称人工授胎或借腹怀胎,是指将雌性动物的早期胚胎,或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎,移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内,使之继续发育为新个体的技术。
本质上即生产胚胎的供体和孕育胚胎的受体共同繁殖后代的过程。
利用胚胎移植技术可以充分发挥雌性优良个体的繁殖能力。
胚胎移植具有以下几个生理学基础:①同种动物的供、受体的生殖器官的生理变化是相同的,为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境;②早期胚胎在一定时间内处于游离状态,为胚胎的收集提供了可能;③受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应,为胚胎在受体内的存活提供了可能;④供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系,但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受任何影响。
卵巢移植即将某一雌性动物的卵巢整体切除并移植给另一去除卵巢的雌性动物卵巢部位。
卵巢移植对于治疗卵巢癌等恶性疾病具有重要意义。
一、胚胎移植假孕受体的制作胚胎移植需要同期发情处理的假孕受体,一般用结扎公鼠与雌鼠交配获得。
公鼠结扎一般采用输精管结扎法,即将输精管用机械法弄断。
(一)雄性大鼠的输精管结扎雄性大鼠麻醉后,腹部向上,腹部75%乙醇消毒,在睾丸附近腹中线处开一小口;用镊子夹住脂肪垫将睾丸拉出;用精细镊子在睾丸附近找出输精管,用另一把镊子撕掉周围的结缔组织;将一把镊子在输精管内侧自然张开裸露输精管,另一把镊子将输精管镊住固定,用烧红的镊子分别在两侧烧灼将输精管切断;烧灼以后输精管的两断口均形成密封口,切下的一段丢弃。
将睾丸、附睾和输精管等放回腹腔内;用镊子夹住脂肪垫拉出另一侧睾丸,进行同样的结扎手术;将睾丸、附睾和输精管等放回腹腔内;缝合肌肉、皮肤;将大鼠放在保温台上保温,等待苏醒。
(二)假孕受体的制作挑选8周龄的健康性成熟雌性大鼠,挑发情;将发情雌性大鼠与同品系输精管结扎雄性大鼠进行交配;次日见栓记为0.5dpc。
假孕见栓0.5dpc可用于大鼠发育各阶段胚胎的胚胎移植,假孕见栓3.5dpc仅用于大鼠囊胚移植。
小鼠卵巢切除术的实验报告小鼠卵巢切除术的实验报告一、实验目的本实验旨在研究小鼠卵巢切除术对生物体生理状态和生殖能力的影响,以期为进一步探索小鼠生殖系统的生理功能提供参考。
二、实验材料与方法1. 实验材料本实验使用6-8周龄的雌性小鼠,数量为20只。
2. 实验方法(1)麻醉小鼠:将小鼠置于麻醉箱中,使其吸入氧气和0.3-0.5%的异氟烷,直至小鼠完全昏迷。
(2)消毒:将小鼠放在干净的手术台上,用75%的医用酒精对小鼠腹部进行消毒处理。
(3)切口:用剪刀和骨钳切开小鼠的腹壁,暴露出卵巢。
(4)切除卵巢:用细钳夹住卵巢,切除后缝合伤口。
(5)术后护理:在术后饲养中给予小鼠足够的食物和水,并定期观察小鼠的行为和身体状况。
三、实验结果经过手术切除卵巢后,小鼠术后恢复期约为3-5天。
1. 行为观察:小鼠在卵巢切除术后的恢复期内,显示出食欲不振、活动减少、体重下降等症状。
2. 生理参数监测:测量小鼠的体温、心率和呼吸频率。
结果显示,术后小鼠的体温正常,心率和呼吸频率略有升高。
3. 组织切片观察:对术后小鼠卵巢进行组织切片观察,发现卵巢被完全切除,并且切除部位周围组织有炎症反应。
四、实验讨论小鼠卵巢切除术对生物体的影响主要体现在行为、生理状态和生殖能力等方面。
1. 行为影响:小鼠在术后恢复期内出现食欲不振、活动减少等情况,可能是由于手术对小鼠的应激反应造成的。
2. 生理状态影响:术后小鼠的体温正常,心率和呼吸频率略有升高,这可能是由于手术刺激引起的炎症反应和机体对创伤的生理反应。
3. 生殖能力影响:通过切除小鼠卵巢,破坏了小鼠的生殖系统,导致其失去了准备和产生卵子的能力,从而丧失了繁殖的能力。
五、实验结论通过小鼠卵巢切除术的实验研究,我们发现卵巢的切除对小鼠的生理状态和生殖能力有显著影响。
术后小鼠表现出行为异常、生理指标略有改变,并丧失了生殖能力。
因此,我们可以得出结论,小鼠卵巢的完整和正常功能对于生物体的正常生理和繁殖具有重要的作用。
同种异体子宫内膜异位症大鼠模型用于GnRH激动剂类药物的药效评价研究钟瑞华;李国停;杨文捷;郭湘洁;周洁芸;胡颖怡;倪其承;杨野;张敏;朱焰【期刊名称】《实验动物与比较医学》【年(卷),期】2024(44)2【摘要】目的用同种异体移植的方法构建大鼠子宫内膜异位症模型,并评价促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasinghormone,GnRH)激动剂GenSci006对实验大鼠子宫内膜异位症模型的影响。
方法取供体SPF级雌性SD大鼠的子宫内膜移植于受体雌性大鼠的腹腔壁上,构建同种异体的子宫内膜异位症模型。
3周后,测量异位内膜的长、宽、高,计算给药前异位内膜的体积V1。
将进行假手术操作的大鼠设为假手术组,将造模大鼠随机分为模型组、曲普瑞林组(0.25mg/kg)、GenSci006-1组(0.125mg/kg)和GenSci006-2组(0.25mg/kg)共4组,每组大鼠16只。
各组大鼠单次给予相应的药物,假手术组和模型组给予同等体积的溶剂。
3周后,再次测量异位内膜,计算给药后异位内膜的体积V2和抑制率;通过比较脏器系数及病理切片的变化,判断GenSci006对大鼠子宫和卵巢组织的影响;ELISA法测定血清中雌二醇(estradiol,E2)、孕酮(progesterone,P4)、卵泡刺激素(follicle stimulatinghormone,FSH)和黄体生成素(luteinizinghormone,LH)水平的变化;实时荧光定量PCR法测定下丘脑和垂体中GnRH受体(GnRHreceptor,GnRHR)mRNA的表达水平。
蛋白质印迹法检测异位内膜组织中雌激素受体(estrogenreceptor,ER)α、ERβ和孕激素受体(progesteronereceptor,PR)蛋白的表达。
结果给药3周后发现,与模型组相比,曲普瑞林组和GenSci006-2组大鼠的体重显著增加(P<0.05),而异位内膜的体积显著减小(P<0.05)。