植物生理生化指标测定(精)

植物生理学实验测试植物生理学是研究植物生长和发育等生理过程的科学学科，通过实验测试可以揭示植物对外界环境因素的响应和适应机制。

本文将介绍几种常见的植物生理学实验测试方法，包括植物生长实验、叶绿素测定实验和逆境胁迫实验等。

一、植物生长实验植物生长实验是研究植物对不同环境条件下的生长反应的一种常见方法。

可以通过改变光照、温度、水分等环境因素来观察植物生长的变化。

在实验中，选取相同种子并进行处理，如将一组种子暴露在高温环境下，另一组放置在低温环境中，然后记录植物的生长情况，并进行数据统计和分析。

通过这种实验方法可以了解植物对温度的适应性以及不同温度对植物生长的影响。

二、叶绿素测定实验叶绿素是植物中起着关键作用的色素，其含量可以反映植物光合作用的强弱。

叶绿素测定实验可以通过测量植物叶片中叶绿素的含量来评估光合作用的效率。

实验中，首先需要采集新鲜叶片样品，并将其研磨得到绿色叶汁，然后通过光度计等仪器测定叶绿素的吸光度值，并根据标准曲线计算叶绿素的含量。

通过叶绿素测定实验可以评估植物对不同环境因素（如光照强度、养分浓度）的响应和适应能力。

三、逆境胁迫实验逆境胁迫实验是模拟植物在环境恶劣条件下的生理反应，如盐胁迫、干旱胁迫、冷热胁迫等。

通过逆境胁迫实验，可以研究植物在逆境条件下的生理适应和耐受机制。

实验中，可以使用不同浓度的盐水浇灌植物或让植物在干旱条件下生长，然后观察植物的生长情况、生理指标的变化，并与正常生长的植物进行比较分析。

逆境胁迫实验可以揭示植物对逆境的敏感性和胁迫响应机制，为育种和改良耐逆植物品种提供理论依据。

总结：植物生理学实验测试是研究植物生理过程的重要手段，通过不同的实验方法可以揭示植物对环境因素的响应和适应机制。

植物生长实验、叶绿素测定实验和逆境胁迫实验是常见的植物生理学实验方法，分别用于研究植物生长、光合作用和逆境胁迫的情况。

通过这些实验测试的结果，可以进一步了解植物的适应性和耐受能力，为培育适应不同环境的优良植物品种提供理论基础。

实验一植物叶绿素含量的测定（分光光度法）(张宪政，1992)一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。

根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。

当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。

各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。

如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。

这就是吸光度的加和性。

今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。

在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。

高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。

叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用效率的大小，比值高则大，则反之。

二、材料、仪器设备及试剂试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮）三、实验步骤称取剪碎的新鲜样品0.2～0.3g，加乙醇10ml，提取直至无绿色为止。

把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在波长663nm和645nm下测定吸光度。

四、实验结果按计算丙酮法（Arnon法）【可以用于丙酮乙醇混合法和80%丙酮提取法的计算】叶绿素a的含量（mg/g）=（12.71⨯OD663 – 2.59⨯OD645）V/1000*W叶绿素b的含量（mg/g）=(22.88OD645 – 4.67OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(8.04⨯OD663 +20.29⨯OD645) V/1000*W 按Inskeep公式叶绿素a的含量（mg/g）=（12.63⨯OD663 – 2.52⨯OD645）V/1000*W叶绿素b的含量（mg/g）=(20.47OD645 – 4.73OD663) V/1000*W叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(7.90⨯OD663 + 17.95⨯OD645) V/1000*W注：1、叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用率【1】比如阳生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较大【2】阴生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较小2、丙酮-------熔点:-94℃；沸点:56.48℃；是一种无色透明液体，有特殊的辛辣气味易溶于水和甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、吡啶等有机溶剂.下一步实验方法比较【1】95%乙醇直接提取（√）【2】95%乙醇加热提取（冯瑞云，1985）【3】无水酒精和80%丙酮等体积混合提取实验二、不良环境对植物细胞膜的伤害（(张宪政，1992)）一、原理植物组织在受到各种不利的环境条件（如干旱、低温、高温、盐渍和大气污染）危害时，细胞膜的结构和功能首先受到伤害，细胞膜透性增大。

植物生理生化指标测定植物生理生化指标测定是研究植物生长发育和适应环境的重要手段之一、通过测定植物的生理生化指标，可以了解植物的代谢活动、光合作用强度、水分状况、营养状况等，从而为植物生长调控、抗逆性研究提供依据。

下面将从光合作用测定、水分状况测定和营养状况测定三个方面对植物生理生化指标测定进行详细介绍。

光合作用是植物生长发育的重要过程之一，也是植物蓄积养分和能量的主要途径。

常用的光合作用测定指标有净光合速率、光饱和点、光补偿点和光抑制。

净光合速率是指单位时间内单位叶面积净光合产物的量，可以通过测定二氧化碳吸收量和氧气释放量来计算。

光饱和点是指植物的净光合速率达到最大值时的光强度，可以通过测定不同光强下的净光合速率来得出。

光补偿点是指净光合速率和呼吸速率相等的光强度，可以通过测定不同光强下的净光合速率和呼吸速率来确定。

光抑制是指过高或过低的光强度对植物光合作用的影响，可以通过测定光强对净光合速率的影响来评价。

水分状况是植物生理生化指标测定的重要方面之一，也是植物生长发育和适应环境的关键因素之一、常用的水分状况测定指标有相对含水量、蒸腾速率和水分利用效率。

相对含水量是指植物组织中的相对含水量与干重的比值，可以通过称量植物组织的湿重和干重来计算。

蒸腾速率是指单位时间内单位叶面积水分蒸腾的量，可以通过测定植物的蒸腾量和叶面积来计算。

水分利用效率是指植物单位干物质产量所需要的水分量，可以通过测定植物的干物质产量和水分消耗量来计算。

营养状况是植物生理生化指标测定的另一个重要方面，也是植物生长发育和代谢活动的基础。

常用的营养状况测定指标有叶绿素含量、叶绿素荧光参数和土壤养分含量。

叶绿素含量是评价植物叶绿素合成和叶绿素降解的指标之一，可以通过植物叶片中叶绿素的提取和测定来得出。

叶绿素荧光参数是评价光能利用效率和光能转化效率的重要指标之一，可以通过叶绿素荧光仪来测定。

土壤养分含量是评价土壤中不同营养元素含量的指标之一，可以通过土壤样品的提取和测定来得出。

植物生理指标测定方法植物生理指标是指用来衡量植物生理状况的具体参数或指标，在植物生理研究中起到了非常重要的作用。

植物生理指标测定方法主要包括以下几个方面：光合作用指标、呼吸作用指标、蒸腾作用指标、叶绿素指标、产量指标和抗逆性指标等。

1.光合作用指标的测定方法：(1)净光合速率的测定方法：通过光合速率仪测定植物叶片在光照条件下的净光合速率；(2)光饱和点和CO2抗饱和点的测定方法：通过对光合速率与光照强度或CO2浓度的关系进行测定，确定光饱和点和CO2抗饱和点；(3)光合色素含量的测定方法：通过分光光度计或高效液相色谱法测定叶片中的叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素等光合色素的含量；(4)光合机构有效光能利用率的测定方法：通过光合色素荧光分析仪测定叶片的光能利用效率。

2.呼吸作用指标的测定方法：(1)总呼吸速率的测定方法：通过呼吸速率仪或气体分析仪测定植物组织在不同温度条件下的总呼吸速率；(2)细胞内呼吸速率的测定方法：通过氧和二氧化碳分压差法或氧电极法测定细胞内的呼吸速率。

3.蒸腾作用指标的测定方法：(1)蒸腾速率的测定方法：通过蒸腾速率仪测定植物叶片在不同光照和湿度条件下的蒸腾速率；(2)水分利用效率的测定方法：通过测量蒸腾速率和光合速率的比值来反映植物对水分的利用效率。

4.叶绿素指标的测定方法：(1)叶绿素含量的测定方法：通过叶绿素荧光分析仪或高效液相色谱法测定叶片中叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量；(2)叶绿素荧光动力学特性的测定方法：通过荧光指数、叶绿素荧光参数和叶绿素荧光成像等技术来评估叶绿素在光抑制和光保护状态下的变化。

5.产量指标的测定方法：(1)单株产量的测定方法：通过对植株生物量、籽粒数或实际产量的测定来计算出单株产量；(2)单穗产量的测定方法：通过对穗长、穗粒数和粒重的测定来计算出单穗产量；(3)单粒产量的测定方法：通过对单穗粒数和粒重的测定来计算出单粒产量。

6.抗逆性指标的测定方法：(1)抗氧化酶活性的测定方法：通过测定植物组织中抗氧化酶活性，如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和抗坏血酸过氧化物酶等的活性来反映植物的抗氧化能力；(2)渗透调节物质含量的测定方法：通过测定植物组织中渗透调节物质（如脯氨酸、脯氨酸激酶等）的含量来评估植物的胁迫适应能力；(3)膜脂过氧化程度的测定方法：通过测定植物组织中膜脂过氧化程度的指标，如丙二醛和过氧化氢含量来评估植物膜的稳定性。

植物生理生化》实验指导（适用专业：农学类相关专业）黑龙江八一农垦大学植物科技学院生理生化教研室生物化学实验部分:实验一、氨基酸的纸层析.................................................... 1实验二、蛋白质含量测定（设计性实验）...................................... 5实验三、酶的基本性质.................................................. 7实验四、维生素C含量的测定 .............................................. 12实验五、还原糖和总糖的测定............................................... 14实验六、淀粉酶活性的测定................................................ 17实验七、脂肪浸提一一索氏脂肪浸提法....................................... 20实验八、一种简单实用的提取植物DNA的方法 ............................... 22实验九、聚丙烯酰胺电泳法测定大麦、小麦种子纯度...................... 24实验十、淀粉酶的诱导、提取和活性测定（综合性实验） (26)植物生理学实验部分：实验一、植物组织水势的测定（小液流法）................................ 28实验二、植物伤流量的测定.............................................. 30实验三、根系活力的测定................................................... 31实验四、蒸腾强度的测定................................................... 35实验五、叶绿体色素的提取、分离、性质和定量测定（综合性实验）.............. 37实验六、光合强度的测定（改良半叶法）....................................... 39实验七、呼吸强度的测定................................................. 41实验八、植物抗逆性的鉴定（电导仪法）.................................. 43实验九、植物缺水程度的测定（脯氨酸法） (45)生物化学实验部分实验一氨基酸的纸层析一、目的：层析分析法已广泛用于氨基酸、核酸、激素、维生素、糖类的分离与分析。

植物生理生化指标的测定方法与意义解读植物生理生化指标的测定方法与意义解读对于研究植物生长、适应环境以及疾病防治等领域至关重要。

本文将介绍几种常用的植物生理生化指标的测定方法，并解读其意义。

一、叶绿素含量的测定方法与意义解读叶绿素是植物光合作用的关键物质，反映了植物的光合能力和光合效率。

常用的测定叶绿素含量的方法有多种，如色素提取法、光度法和荧光法等。

其中，色素提取法是最常用的方法之一。

该方法通过乙醇提取叶片中的叶绿素，然后用紫外-可见光谱仪分析提取液的吸光度，从而计算出叶绿素含量。

叶绿素含量的测定对植物的研究具有重要意义。

首先，叶绿素含量可以直接反映植物的光合能力和光合效率。

一般来说，叶绿素含量越高，植物的光合作用效率越高，并且可以更好地利用阳光进行光合作用。

其次，叶绿素含量也可以作为植物受到生态环境和生理状态变化的指示器。

例如，在氮素缺乏的条件下，植物体内的叶绿素含量会下降，表明植物养分供应不足。

因此，测定叶绿素含量有助于了解植物在不同环境和条件下的光合适应能力和生长状态。

二、抗氧化酶活性的测定方法与意义解读抗氧化酶是植物体内起重要保护作用的一类酶，包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和抗坏血酸过氧化物酶（APX）等。

这些酶能够清除植物体内产生的有害氧自由基，保护细胞免受氧化损伤。

常用的抗氧化酶活性测定方法有多种，如显色法、发光法和酶活测定法等。

抗氧化酶活性的测定在研究植物的环境适应能力和应对氧化胁迫方面具有重要意义。

首先，抗氧化酶活性可以反映植物受到氧化胁迫的程度。

当植物受到氧化胁迫时，抗氧化酶活性会显著增加，以应对有害氧自由基的累积。

其次，抗氧化酶活性还可以用来评估植物的环境适应能力。

例如，在干旱或高温等胁迫条件下，植物体内的抗氧化酶活性通常会增加，以维持细胞内的氧化-还原平衡。

三、渗透调节物质含量的测定方法与意义解读渗透调节物质是植物在干旱、盐碱等逆境环境下维持细胞渗透平衡和稳态的重要物质。

植物各项生理指标植物的生理指标是指用来反映植物健康状态和生长发育过程的各种参数，可以通过测量和分析这些指标来评估植物的营养状况、生理功能和环境适应能力。

下面详细介绍几个常见的植物生理指标：1.光合作用：光合作用是植物对阳光能量的利用过程，可以通过测量光合速率来评估植物的自养能力。

光合速率受到光照强度、温度、二氧化碳浓度和水分等因素的影响，可以通过光合作用速率仪或测量叶片的气体交换来进行测定。

2.蒸腾作用：蒸腾作用是植物水分和气体交换的过程，通过叶片的气孔释放水分和二氧化碳，并吸收大气中的二氧化碳。

蒸腾速率可以通过测量蒸腾速率仪或水分损失来进行评估，反映植物的水分利用效率和胁迫适应能力。

3.叶绿素含量：叶绿素是植物中主要的光合色素，可以通过测量叶片的叶绿素含量来评估光能的吸收和光合作用的活性。

叶绿素含量可以通过叶绿素仪或酸碱提取法进行测定。

4.叶片氮含量：氮是植物生长所必需的关键元素，叶片的氮含量可以反映植物的养分状况和营养利用效率。

可以通过测量叶片的氮含量来评估植物的营养状态和生长潜力。

5.相对水分含量：相对水分含量是指植物叶片组织中的水分含量与完全脱水状态下的干重之比，可以反映植物体内的水分利用能力和胁迫适应能力。

可以通过测量叶片的相对水分含量来评估植物的水分状况和干旱耐受性。

6.温度响应曲线：温度响应曲线是通过测量植物在不同温度条件下的生理生化指标来研究植物对温度的响应，可以评估植物的热耐性、光合作用活性和生长发育过程。

7.水势：水势是指植物体内和周围环境之间的水分差异，可以通过测量植物的叶片水势来评估植物的水分利用能力和胁迫适应能力。

除了以上提到的指标，还有许多其他的植物生理指标，如叶片气孔导度、叶片蛋白含量、叶片潜热释放率等，这些指标可以更全面地评估植物的生理状态和环境适应能力。

综合应用这些生理指标可以帮助我们更好地了解植物的生长机理和生态功能，并为植物育种、农业生产和生态恢复等提供科学依据。

植物生理生化实验实验一植物组织游离氨基酸含量测定―茚三酮试剂显色法p199原理：游离氨基酸与茚三酮共热时能定量生成二酮茚-二酮茚胺，产物呈蓝紫色，称rubemans紫。

其吸收峰在570nm，且在一定范围内吸光度与游离氨基酸浓度成正比，因此可用分光光度法测定其含量。

①微酸、90℃：氨基酸被氧化形成co2、nh3和醛，茚三酮被还原成还原型茚三酮。

②水解：还原型茚三酮与另一分子茚三酮和一分子氨展开酯化水解，分解成二酮茚-二酮茚胺。

材料：清水浸种吸涨的水稻、清水浸种萌发两天的水稻。

实验步骤：分别取1g萌发、未萌发水稻于研钵中，加入5ml醋酸（使蛋白质变性，沉淀），研磨成匀浆后，用无氨蒸馏水稀释至100ml。

用干燥滤纸过滤到三角瓶中。

如下操作试管编号试剂样品提取液ml无氨蒸馏水ml0.1抗坏血酸ml水合茚三酮ml570nmod值每管含氮量00空白102.00.130.1301.26样品1（未萌发）2200.130.1231.193200.130.1881．83样品2（萌发）4200.130.1681.835200.13置于沸水中加热15min，取出用冷水迅速冷却并不时摇动，使之呈蓝紫色，用60%乙醇定容20ml，在570nm波长下测定吸光度。

样品氨基态含氮量（ug/100g鲜重）=cvt/vsw*100；c=a/k(k=0.103)；vt=100/2；vs=1；w=1注意事项：1.测定前所用的玻璃仪器要干燥，所用的蒸馏水必须为无氨水；2.样品要磨匀，用无氨蒸馏水定容，并用干燥滤纸过滤；3.抗坏血酸极易被还原成；重新加入的量必须严格控制，因为还原剂抗坏血酸可以与茚三酮反应；4.水浴锅的液面要高于试管内的液面，使其加热均匀，并在加热后几秒再塞上塞子，水浴锅温度要高于90℃，15min后抽出快速加热，再重新加入60%乙醇；5.吸收后必须快速比色；6.谷物等蛋白质样品可用酸水解法讲蛋白质水解后，用本法测定氨基酸含量，可计算出样品蛋白质含量；7.反应要在无水、有机、微酸的环境下进行。

植物⽣理学中各项⽣理指标的测定⽅法⼀.实验内容实验1 MDA(丙⼆醛)含量测定所需试剂：10%三氯⼄酸（TCA）（纯） 0.25%硫代巴妥酸 (纯)实验2：可溶性蛋⽩含量测定所需试剂：考马斯亮蓝G-250 95%⼄醇 85%磷酸实验3：SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂：dl-甲硫氨酸（Met） NBT EDTA-Na2 核黄素实验4：CAT(过氧化氢酶)活性（过氧化氢酶）测定所需试剂：PBS（PH=7.0） 30% H2O2实验五：Apx(抗坏⾎酸过氧化物酶)活性（即ASA—POD活性）测定所需试剂：ASA（分⼦量167.12） (⼄=胺四⼄酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O实验6： ASA(维⽣素C)含量测定偏磷酸 95%⼄醇磷酸 4% 2,2-⼆联吡啶 FeCl3（或FeCl3·6H2O）实验7：GSH(⾕胱⽢肽, 媚⼒肽GSH GSH是由⾕氨酸、半胱氨酸和⽢氨酸结合⽽成的三肽化合物)含量测定所需试剂：NaH2PO4·2H2O DTNB（⼆硫代硝基苯甲酸） PBS (PH6.8)实验8：脯氨酸测定所需试剂：磺基⽔杨酸甲苯茚三酮冰⼄酸 85%磷酸试验9：叶绿素含量测定。

80%丙酮试验9：GR活性测定试验10：过氧化氢含量测定。

三氯⼄酸试验11：超氧阴离⼦含量测定⼆．酶液和母液提取1. 酶液提取所需试剂：50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）(内含1% (m/v) 聚⼄烯吡哆烷酮PVP），0.1mmol/L EDTANa2或EDTA)，也可为（内含2% (m/v)PVP），0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA）（先配制后⽤缓冲液定容）2. ASA . GSH母液提取所需试剂：5%偏磷酸1．抗氧化酶酶液提取（SOD.POD.CAT）：1g（根据样品的量,少的可以适当减少）叶⽚加⼊预冷5ml. 50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）↓4℃冷冻15000g离⼼20分钟↓上清液即为酶液（5℃下保存⼀两天内备⽤，中短期⽤-20℃保存）2．ASA . GSH母液提取：0.1g叶⽚加⼊3ml预冷5%偏磷酸溶液↓4℃冷冻14000g离⼼10分钟↓上清液即为母液（5℃下保存备⽤）（偏磷酸可显著沉淀蛋⽩质和保护ASA）酶液提取所需试剂：PVP（聚⼄烯吡哆烷酮）：1%（1g溶于100ml⽔），1000ml需称取10g，此处⽤PBSEDTA-Na 2 : 0.1mmol/L (37.2mg EDTA-Na2溶于1000ml蒸馏⽔)，此处⽤PBSPBS（缓冲液）配制⽅法：① Na2HPO4·12H2O ② NaH2PO4·2H2O取① 71.64g，蒸馏⽔定容⾄1L，取② 31.21g定容⾄1L，放置4℃冰箱备⽤PH=7.8 取① 91.5ml+② 8.5ml=100ml (浓度0.2mol/L)需要0.05mol/L→将上述溶液烯释⾄400ml （0.2mol/L*0.1=0.05mol/L*V）母液提取所需试剂：5%偏磷酸：称5g纯偏磷酸，定容⾄100 ml蒸馏⽔（需加热溶解，温度在50-60℃）偏磷酸有剧毒（偏磷酸难溶解，先得⽤研钵提前研碎，后⽤磁⼒搅拌器溶解⼀到两天后再定容）（现所⽤为38%HPO3，所以需称65.7895g，定容⾄500ml）三．实验步骤实验1：MDA含量测定1.1所需试剂：10%三氯⼄酸（TCA）（纯）称10g定容⾄100ml0.25%硫代巴妥酸 (纯) 称0.25g⽤10%TCA定容⾄100ml（配制时，可⼀次完成，先配TCA，不要定容，再加⼊硫代巴⽐妥酸，然后定容，若难溶解，可以在磁⼒搅拌器上微热）1.2步骤：取0.3g叶⽚，加4ml磷酸缓冲液研磨，加⼊ 4ml 0.25%的硫代巴⽐妥酸（溶于10%的三氯⼄酸）溶液↓摇匀95℃加热15分钟↓快速冷却3000g离⼼15分钟↓取上清测定 OD532，OD600，OD450值↓按公式求 MDA浓度=6.45×（OD532-OD600）-0.56OD450 (µmol/L)可溶性糖浓度=11.71×OD450 (mmol/L)最后计算 MDA含量（µmol/g FW）= [4×（MDA浓度x）×10-3/0.1]同时，可测得可溶性糖含量（m mol/g FW）= 4×（可溶性糖浓度χ）×10-3/0.1（⽤多波长测定，在测定之前⼀定要矫正基线，公式中的参数可以直接在分光光度计上输⼊）注意：以0.25%的硫代巴妥酸溶液作空⽩调零MDA含量测定的改进1.可以⽤做酶活性时提取的酶液来直接测定MDA含量，⽤量可以定为1.0、1.5或2.0（较好）ml。