血清白蛋白ALB溴甲酚绿BCG法测定

溴甲酚绿 法测定血 清 白蛋 白， 以定值 参考血 清作标 准物 ， 应 反应
［ 关键词］ 溴 甲酚 绿 ； 白蛋 白； 白蛋 白标 准液 ； 定值参考血清 ； 反应 时问
［ 中图分 类号】 Ｒ ４ ６ １ ［ ４ ． １ 文献标识码 ］ Ｂ ［ 文章编号 ］ １７ ６４—３０ （ ０２ ０ ０５ ０ ８ ６ ２ １ ） ８— ７ ７— ３
中 国 第 ５卷
第 ８期
・７ ７ ・ ５
溴 甲酚 绿 法 测 定 血 清 白蛋 白标 准 物 与 反 应 时 间 的选 择
黄新根 ， 孙桂 莲 ， 伍 军根 ， 陈春 秀
作者单位 ：３ １０ 江西 ， ３４９ 峡江县人民医院检 验科
作者简介 ：黄新根（ ９ ８ ， ， 学本科 ， １６ 一）男 大 医学学士 ， 主管技 师 ， 研究方向 ： 临床生化 。Ｅ ｍ ｌ ｕｎ ｘ ｇｎ ６ ．ｏ — ￣ ： ａｇｉ ｅ ＠１３ ｃｍ ｈ ｎ
ｍｉ Ｈ Ａ ＧＸｎｇｎ Ｓ Ｎ ｕ・ａ ， ｕ－ｅ ，ｔ １Ｄｐ ｒ ｅｔｆＬ ｂｒｔｙ ｈ ｅｐｅ ＳＨ ｓｉ ｌ Ｘａ ｎ Ｕ Ｎ ｄ —ｅ ，Ｕ Ｇ ｉｉｎ ＷＵ Ｊｎｇｎ ｅ ａ． ｅａｔ ｎ ｏ ａ ｏ ｏ ，ｔｅＰｏｌ’ ｏ ｔ ｉ— ｌ ｍ ａｒ ｐａ ｏ ｆ
ｓ ｌｉ ｈ ｒｍｏ ｒ ｓ ｌｇ ｅ ｎ ｍｅｌ ｏ ｅｅ ｍｉ ｉ ｇ ｓ Ｆ ｍ ｌ ｕ ｎ，ｎ ｏ ｄ ｒｔ ｅｅ ｔｔｅ ｂ ｓ ｓａ ｄ ｒ ｔｒａ ｎ ｕ ｔｅ ｂ ｏ ｃ ｅ ｏ ｒｅ ｔ ｎ ｍｄ ｆ ｒｄ ｔｒ ｎ ｎ ｅ ｌ ａｂ ｍｉ ｉ ｒ ｅ ｏｓ ｌ ｃ ｈ ｅ ｔ ｔ ｎ ａｄ ｍａｅ ｌａ ｄ ｌ ｉ
应时 间 ３ 、０ １０Ｓ ０ ６ 、２ 三者之 间结果 比较差异无统计学意义（ ０ ０ ） １０ ３ ０Ｓ ３ 组测定值 比较 差异有 Ｐ＞ ． ５ ，８ 、０ 与 ０ Ｓ 统计学意义（ ０ ０ Ｐ＜ ．５或 Ｐ＜ ． １ 。结论 ００ ）

白蛋白（溴甲酚绿法）作业指导书1概述白蛋白是肝脏合成的，因此血清白蛋白浓度可以反映肝脏的功能，同时血清白蛋白水平的改变能导致一系列的病理性继发症，因此，测定血清白蛋白常用于病人状态的非特异监视。

病理性降低：(1) 蛋白质丢失，常见于大量出血或严重烧伤和肾脏疾病。

(2) 合成障碍，肝脏功能异常。

(3) 营养不良或吸收不良。

空腹12小时取静脉血[1]。

2标本的收集新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血。

血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。

样本在4摄氏度可稳定7天。

采血前病人应禁食12小时，采集静脉3ml,待凝固后（最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。

3000r/min离心5-10分钟，分离出血清备用。

不建议采用血浆标本。

3：方法原理本法以溴甲酚绿染料为最常用，即采用溴甲酚绿染料，在ph为4.0—4.2条件下，白蛋白与溴甲酚绿结合成蓝绿色化合物，反应生成的蓝绿色化合物与样本中白蛋白的浓度成正比，通过测定580-630nm处吸光度值的变化，即可计算出样本中白蛋白的浓度。

4剂来源，配置及储存试剂来源：迪瑞试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂，可直接使用。

启用后在2-8度可稳定30天。

若试剂混浊，或以蒸馏水为空白在6300nm处的光吸收值低于0.2A,应予丢弃。

试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。

5分析仪器CS-600B全自动生化分析仪分析参数：样品量2 u/l 试剂量：300 u/l测光点15 测定模式：1点终点法正反应分析波长：600nm/700nm(主波长/副波长)6计算方法白蛋白浓度（g/L）=样本管吸光度×校准液浓度（g/L）校正管吸光度7 线性范围：本实验的线性范围：0---60g/L8参考范围成人37—53g/L9 失控控理1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。

2：新开一瓶质控品，重测失控项目，如新开的质控血清结果正常，那么原来质控血清可能过期或在室温防止时间过长而变质，如结果仍不再允许范围，则进行下一步。

【实验目的】
掌握： 1、溴甲酚绿法测定血清清蛋白的基本原理。
2、学习方法学评价之一批内重复性试验。
熟悉：1、 血清清蛋白测定的临床意义。
2、 批内重复性试验测定意义。 了解：溴甲酚绿法测定血清清蛋白的特点和注
意事项 。
【实验原理】
1．血清清蛋白在pH4.2的缓冲液中带正电荷，在有
非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的染料 溴甲酚绿结合形成蓝绿色复合物，在波长600nm处 有吸收峰，其颜色深浅与清蛋白浓度成正比例，与 同样处理的清蛋白标准比较，可求得血清中清蛋白 含量。
0.01 0.01 0.01 0.01
----- --- ---
3.0
3.0 3.0 3.0
37℃孵育10分钟后，在波长600nm处用空白管调零，读取 吸光度。
2. 如标本因严重高脂血症而混浊，需加做标本空白管：
取血清0.01ml，加入BCG空白试剂3.0ml，在波长 600nm处用BCG空白试剂调零，测定标本空白管吸 光度。用测定管吸光度减去标本空白管吸光度后， 再计算结果。
在630nm处测定的吸光度应为0.811土0.035，如达不到此 值，表示灵敏度较差。
5. 蛋白质标准是一个复杂问题。实验证明，BCG不但与清蛋
白呈色，而且与血清中多种蛋白质成分呈色，其中以a1球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其反应速度较 清蛋白稍慢。由于在30s内呈色对清蛋白特异，故BCG与 血清混合后，在30s读取吸光度，可明显减少非特异性呈 色反应。为了减少本法基质效应的影响，最好用参考血清 作标淮。
如：32，32.5， 42，43，42.5，42.3，43.5…… ，先检测 32.5是否是离群值。
(3) 如果离群值有两个或两个以上,而且又分布于均数两侧,例如 X1和Xn都同属于离群值,则分别检验X1和Xn是否应该舍去. 如有一个数据决定舍去,那么再检验另一个数据时,测定次数 应该作为减少一次来处理,而且此时应该选择99%的置信水平。

下储存时间长短对血清白蛋白检测结果影响的探索，探究BCG试剂室温下储存的稳定性。方法：用溴甲酚绿（BCG）法测定血清白蛋白，比较在室温下储存了不同时间的3种BCG试剂和久存的贮存液配制的BCG试剂测定血清白蛋白含量的效果差异。结果：用比色法测得运用不同BCG试剂检测白蛋白的吸光度值分别是：（2012年：AS=0.689 AU=0.512; 2014年:AS=0.575 AU=0.502;新BCG贮存液:AS=0.645 AU=0.559;旧BCG贮存液: AS=0.690 AU=0.503）。通过吸光度计算出白蛋白的含量分别是：（2012年：29.724 g/L；2014年：34.922g/L；新BCG贮存液：34.667 g/L；旧BCG贮存液：29.159 g/L）。（血清质控品参考范围X:34.1g/L; X±SD:（31.5-36.7）g/L; X±2SD:（29.0-39.2）g/L）。结论：在室温下储存了不同时间的BCG试剂测定的白蛋白含量测定值均在质控品参考值范围内,因此BCG试剂在室温下很稳定，能够较长时间储存。且2014年和新配制的BCG试剂测定的结果准确性较高，稳定性较好；使用新鲜配制贮存液配制的BCG试剂较使用旧BCG贮存液配制的BCG试剂的测定效果好。
关键词：血清白蛋白；BCG试剂；吸光度；比色法
人血浆白蛋白（albumin ,ALB）是血浆含量最多的蛋白质［1］，是血浆中多种物质重要的结合物与运输蛋白，并且是维持血浆胶体渗透压的重要组分，临床上测定血清白蛋白具有重要意义[2]。因此，其检测是临床实验室的常规检测项目之一[3]，其常用检测的方法为溴甲酚绿法和溴甲酚紫法[4]。目前BCG法是临床实验室应用最广泛的一种测定清蛋白的染料结合法[5], ALB作为一种阳离子,结合阴离子染料BCG形成蓝绿色复合物,在628 nm处有吸收峰,其吸光度与ALB浓度成正比[6]。且BCG试剂是一种PH指示剂，变色域为PH3.8（黄色）-5.4（蓝色）[7]，试剂的PH改变可使染料与白蛋白结合率改变。溴甲酚绿（BCG）法因其灵敏度高、操作简单、重复性好，能自动化等优点被广泛应用于临床实验室[8]。按姜旭淦主编的第2版《临床生物化学检验实验指导》可知，显色时间与PH值改变对溴甲酚绿法测定血清白蛋白结果有显著的影响。据文献显示BCG浓度对清白蛋白测定准确度也有明显的影响[9]。但目前还没有文献表明BCG试剂在室温条件下储存时间长短因素对血清白蛋白的检测结果是否有影响，为此我们设计了BCG试剂的贮存液与应用液在室温条件下储存时间对血清白蛋白测定进行探究，通过研究表明BCG试剂在室温条件下储存2年对血清白蛋白测定结果没有太大的影响。实验研究报告如下：

甲胎蛋白
血浆蛋白质概述
血浆蛋白质的分类：
按分离方法分类 盐析法 ：可将血浆蛋白质分为清蛋白和球蛋白两大类。
清蛋白
血浆蛋白质概述
清蛋白(Alb)是血浆中含量最多的蛋白质，约占血
浆蛋白总量的57％～68％。在pH7.4的环境中，每分子
可带200个以上的负电荷，可作为许多物质的运输载体。
Alb由肝细胞合成，合成速度受蛋白质摄入量及血
实验六 血清白蛋白测定
学习要求
1 掌握溴甲酚绿法测定血清白蛋白的基 本原理和方法
2 了解血清白蛋白的测定方法
3 掌握血清白蛋白的参考区间和临床意义
血浆蛋白质概述
血浆中几种主要的蛋白质：
前清蛋白
清蛋白
铜蓝蛋白
转铁蛋白
结合珠蛋白
α1-酸性糖蛋白 C-反应蛋白 癌胚抗原
蛋白质
α1-抗胰蛋白酶
α2 -巨球蛋白 纤维蛋白原
BCP结合法
优点 灵敏度高，与人及动物 与Alb以外的血浆蛋白质结合少， 标本中的Alb结合力差异 干扰小 不大
缺点
除了与Alb结合外，还可 灵敏度较低，与动物标本中的
与血清中其他多种蛋白 Alb结合力相当弱，质控血清多
质也可结合
采用动物血清制备，因此应用
ห้องสมุดไป่ตู้
受限
试剂与器材
试剂与标本 1、0.5 mol/L 琥铂酸缓冲贮存液（PH4.1） 2、BCG贮存液（10mmol/L）（溴甲酚绿、NaOH 溶液） 3、叠氮钠贮存液 4、BCG试剂 5、白蛋白标准液（40g/L） 主要器材 分光光度计
第二节 体液蛋白质检验
血清清蛋白测定：
测定Alb的方法中，目前实验室应用最广的是染料结合法 与Alb结合的染料有多种，其中溴甲酚绿(BCG)和溴甲酚

两种检测方法测定质控血清及样本血清白蛋白的结果分析范德胜
【期刊名称】《实验与检验医学》
【年(卷),期】2006(024)006
【摘要】目的了解白蛋白(ALB)两种测定方法测定质控血清和临床样本血清存在的偏倚及省室间质评ALB成绩不理想的原因.方法用溴甲酚绿(BCG)和溴甲酚紫(BCP)两种方法,每天测定10份临床样本,每份测定两次,共测定5天,记录检测结果,进行相关分析和偏差的评估,同时进行质控血清的测定.结果不同厂家、不同批号质控血清偏差不同,有的质控品相对偏倚达45.6%;临床样本血清ALB的浓度分别为50、40、30、20g/L时,各阶段的相对偏倚分别为5.8%、113%、20%、38%.结论用溴甲酚绿(BCG)和溴甲酚紫(BCP)两种方法测定质控血清白蛋白时,由于方法学的不同和基质原因,测定结果偏倚不同,有的质控品偏倚很大;用两种方法测定临床标本时,随白蛋白浓度的降低,偏倚逐渐增大.
【总页数】3页(P535-536,559)
【作者】范德胜
【作者单位】23500,安徽省淮北市矿工总医院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】R4
【相关文献】
1.血清淀粉样蛋白A两种检测方法相关性的比对及相关疾病样本检测结果分析 [J], 黄建央;沈敏敏;刘东海
2.水中氟化物两种检测方法测定结果分析 [J], 赵妙珍;张秋霞
3.不同质控血清在同一生化分析仪上的测定结果分析 [J], 夏克明
4.BCG试剂配方与测定温度对测定猪质控血清白蛋白的影响 [J], 王时南
5.自备胰岛素,C肽质控血清测定结果分析 [J], 储小宏;丛安丽
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授课对象：06级检验1-5班课时：1学时血清清蛋白测定(溴甲酚绿法)目标：1.掌握BCG法测血清清蛋白的原理及注意事项。

2.熟练进行实验操作。

3.了解血清清蛋白测定的主要临床意义。

实验用品：721型分光光度计，BCG试剂，生化质控血清，蛋白标准液（40g/L）等。

内容：原理:清蛋白具有与阴离子染料结合的特性，在pH4.2的环境中,在有非离子去垢剂聚氧乙烯月醚存在时，带有正点荷的清蛋白(PI4.7)可与阴离子染料溴甲酚绿形成蓝绿色复合物，颜色的深浅在一定的范围内与清蛋白含量成正比，与同样处理的清蛋白标准液比较，可求得血清清蛋白量。

试剂:1.10mol/L溴甲酚绿储存液(BCG储存液)：称取溴甲酚绿 1.75g，溶于5mL 1mol/LNaOH溶液中，加蒸馏水至250mL，置棕色瓶保存。

2.0.5mol/L琥珀酸缓冲储存液(pH4.0)：称取氢氧化钠10g，琥珀酸56g，溶解于800mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液调pH至4.10±0.05，加蒸馏水至1L，置4℃保存。

3.叠氮钠储存液：称取叠氮钠40g溶于1000mL蒸馏水中。

4.聚氧乙烯月桂醚(Brij-35)溶液：称取聚氧化乙烯月桂醚25g，加蒸馏水80mL，置60℃左右水浴使其溶液，然后加蒸馏水至100mL。

5.BCG试剂：于1L容量瓶中加蒸馏水400mL，琥珀酸缓冲储存液100mL，用吸管准确加入BCG试剂储存液8mL，再加入叠氮钠储存液2.5mL，最后用蒸馏水稀释至刻度，配好的BCG试剂的pH应为4.10±0.05。

6.清蛋白标准液：市售。

操作:见下表加入物(mL) R S B待测血清0.02——清蛋白标准液(40g/L) —0.02—蒸馏水——0.02BCG试剂 4.0 4.0 4.0充分混匀，置温室10min,，以B管校(0)，λ=630nm比色。

计算：血清清蛋白（g/L）＝ＡR／ＡS×Ｃs结果报告：被检者＿＿＿血清清蛋白（Ａ）_______g/L [35g/L~55g/L]检验者___ , 年___月____日注意事项：1.BCG与蛋白质结合的特异性较低。

第七章血清(浆)蛋白质测定实验34双缩脲法测定血清总蛋白【原理】血清(浆)中蛋白质的肽键(-CO-NH-)在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。

此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲(H2N-OC-NH-CO-NH2)在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。

这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。

【试剂与器材】可购商品试剂或自配。

1．6 mol/L NaOH溶液称取NaOH 240g，溶于新鲜制备的蒸馏水(或刚煮沸冷却的去离子水)约800ml中，冷却后定容至1 L，贮于有盖塑料瓶中。

若用非新开瓶的NaOH，须先配成饱和溶液，静置2周左右，使碳酸盐沉淀，其上清饱和NaOH溶液经滴定后，算出准确浓度再使用。

2．双缩脲试剂称取硫酸铜结晶(CuSO4·5H2O) 3g溶于新鲜制备的蒸馏水(或刚煮沸冷却的去离子水)500ml中，加入酒石酸钾钠(NaKC4H4O6·4H2O，用以结合Cu2+，防止CuO在碱性条件下沉淀)9g和KI(防止碱性酒石酸铜自动还原并防止Cu2O的离析)5g，待完全溶解后，在搅拌下加入6mol/L NaOH溶液100ml，并用蒸馏水定容至1L，置塑料瓶中盖紧保存。

此试剂室温下可稳定半年，若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。

3．双缩脲空白试剂除不含硫酸铜外，其余成分与双缩脲试剂相同。

4．60～70g/L蛋白质标准液常用牛血清白蛋白或收集混合血清(无黄疸、无溶血、乙型肝炎表面抗原阴性、肝肾功能正常的人血清)，经凯氏定氮法定值，亦可用定值参考血清或标准白蛋白作标准。

但定值质控血清定值准确性较差，不能用作血清总蛋白测定的标准物。

5．仪器 自动生化分析仪或分光光度计。

【操作步骤】1．生化自动分析仪法 按试剂盒说明书提供的参数进行操作。

白蛋白ALB溴甲酚绿法作业指导书1、前言试验名称：白蛋白测定，英文名称：ALB，方法：溴甲酚绿法。

本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室，目的是指导工作人员正确的在科华KHB450全自动生化分析仪上测定血清、血浆样本中的白蛋白浓度，以保证测定结果的准确可靠。

本试验用体外定量测定人血清或血浆样本中白蛋白的浓度。

白蛋白是主要的血浆蛋白，其主要功能包括调节细胞外液的分布；运输诸如激素、脂类、维生素、钙和其它微量元素；构成体内部分氨基酸库；维持渗透压。

测定血清白蛋白常用于病人状态的非特异监视。

高白蛋白血症常见于脱水或血液浓缩。

低白蛋白血症通常是由于血液稀释；蛋白质丢失过多，如肾病综合症，烧伤等；摄入不足、吸收不良或肝脏疾病而导致的蛋白合成降低；分解代谢增加，如甲状腺机能亢进、糖尿病和发热。

2、测定原理本试验采用溴甲酚绿染料结合法，即在pH4.2条件下，白蛋白与溴甲酚绿结合形成蓝绿色络合物，反应形成的蓝绿色络合物与样本中白蛋白浓度成正比。

通过在630nm处测定吸光度值的变化值，即可测得样本中白蛋白的浓度。

3、试剂试剂生产商：长海科华公司。

剂型：液体单试剂。

包装量：6*50ml注册号：沪食药监械（准）字2010第2400058号。

生产许可证号：沪药管械生产许20030916号。

基本成份：溴甲酚绿0.35mmol/l丁二酸缓冲液50mmol/l储存条件和有效期：试剂避光储存于2―25℃可稳定18个月。

若试剂混浊，或空白在630nm下吸光度值高于0.3A时，则不能使用。

在本实验室试剂启用后可稳定4天，以后测定结果将偏低，重新定标后可以正常使用。

4、标准品：使用试剂盒附带标准品5、质控品：生产商：英国Randox公司。

剂型：干粉试剂，用5ml去离子水复溶，完全溶解30分钟后使用。

保存条件：未溶解时2―8℃稳定至有效期，复溶后2―8℃稳定一周。

6、、样品要求：样品采集前病人准备无特殊要求，空腹用肝素锂抗凝管或促凝管常规方法肘静脉采血，血标本4000转离心3分钟，分离血清或血浆样品，在无微生物污染时，血清或血浆样品中白蛋白2－8℃可稳定20天。

其它适合的质控品
贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
5仪器
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-11
白蛋白（Alb）测定
版序：ABCD
页码：第2页，共3页
低。在严重的低蛋白情况下，血浆白蛋白的浓度可以低达2.5g/dl。由于血浆的渗透压将低，水分通过毛细血管渗透进入组织。在白蛋白低于20g/l时，临床出现水肿症状。白蛋白的浓度监测可以提供进行饮食供给的提示和监测肝脏功能。
ALb参数设置表
TEST NAME [ ALB ]
R.VOLUME(R4) [ 0 ]
9注意事项
9.1应该在1小时内分离血浆或者血清。
9.2血清标本出现溶血、脂血、黄疸或抗坏血酸的干扰情况参见抗干扰能力。
9.3换算公式：g/dl×10 = g/l
9.4仅应用于体外诊断。
9.5扔弃废物应符合当地的法规。
10抗干扰能力：
10.1标准：回收率在90％－110％之间。
10.2黄疸：黄胆指数达到21时不会有明显干扰。（直接和间接胆红素浓度约为21mg/dl）。
高白蛋白没有很重要的临床意义，常见于脱水、休克等造成血液浓缩的情况下。
低白蛋白血症可以在很多种疾病和因素下发生：如肾脏疾病，肝脏疾病以及蛋白摄入过少，组织损伤以及蛋白丢失性肠道疾病均可以造成白蛋白水平的降
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-11
白蛋白（Alb）测定
版序：ABCD
页码：第3页，共3页

【临床意义】
3、血清白蛋白浓度增高：常见于严重脱水所 致的血浆浓缩；
4、A/G 某些病人可同时出现白蛋白减少和 球蛋白升高的现象，严重者比值可＜1。这种 情况称为A/G比值倒置。
5、文献报道还有极少见的因白蛋白合成障碍， 血清中几乎没有白蛋白的先天性白蛋白缺乏 症。
二、商品BCG试剂重复性能评价试验
血液清蛋白测定
与 重复性实验
血液清蛋白测定与重复性实验
一、BCG法测定血液清蛋白试验 二、商品BCG试剂重复性能评价试验
一、BCG法测定血液清蛋白试验
1.血液清蛋白测定的临床意义 2.BCG法测定血液Alb的实验原理 3.实验材料 4.实验方法 5.实验结果 6.结果处理、分析（讨论）
1.血液清蛋白测定的临床意义
(2) 如果离群值是两个或两个以上都分布在同一侧，X1、 X2都是离群值，则首先检验最内侧的一个数据（X2），即 通过检验G2来决定X2是否应该舍弃。如果X2应该舍弃，X1 自然应该舍弃。如果X2不应舍弃，则再检验X1，但在检验 X1时，测定次数不应该做为少了一次。
(3) 如果离群值有两个或两个以上，而且又分布于均数两 侧，例如X1和Xn都同属于离群值，则分别检验X1和Xn，是 否应该舍弃。如果有一个数据决定舍去，那么在检验另一 个数据时，测定次数应该作为减少一次来处理，而且此时 应该选择的99%置信水平。
天内：对低、中和高浓度，分别在上午、中 午、下午、晚上，进行m轮，每轮n次重复 测定，分别求取三种浓度的精密度数据
天间：对低、中和高浓度，每天测定1次，连 续监测20天以上，分别求取三种浓度的精 密度数据
3.实验材料
试剂：商品试剂盒 器材：试管、加样枪、722分光光度计
4.实验方法

血清白蛋白溴甲酚绿比色法原理：白蛋白具有与阴离子染料结合的特性。

在pH4左右，溴甲酚绿与白蛋白结合后由黄色变成绿色，绿色的深浅与白蛋白浓度成正比，因此，应用溴甲酚绿溶液可以直接比色测定血清白蛋白含量。

试剂：1、溴甲酚绿贮存液：在25ml烧杯中称入溴甲酚绿419mg，加入0.1N 氢氧化钠10ml，用玻璃棒搅拌，使溴甲酚绿完全溶解（如用溴甲酚绿钠盐，则称取432mg，用蒸馏水溶解）。

用蒸馏水将此溶液全部转注入1L容量瓶中，再加入叠氮钠100mg，最后加蒸馏水至1L刻度。

2、0.1M枸橼酸缓（柠檬酸）冲液，pH4.2：分别配制0.1M枸橼酸及0.1M 枸橼酸钠，然后按12.3：7.7的体积比例混合，每升混合液中加入叠氮钠100mg。

试测pH，如不符合要求，再在混合液中加入适量0.1M枸橼酸或0.1M枸橼酸钠以校正pH至4.2.3、30%聚氧化乙烯月桂醚溶液：称取聚氧化乙烯月桂醚（Brij-35）30g，加入适量蒸馏水，在约60℃水浴中使溶液，然后加蒸馏水至100ml。

4、溴甲酚绿应用液：取溴甲酚绿贮存液250ml，加0.1M、pH4.2枸橼酸钠缓冲液750ml，再加30%聚氧化乙烯月桂醚溶液8ml，混合。

以上试剂可在室温保存数月。

如不加叠氮钠则枸橼酸缓冲液和溴甲酚绿应用液应保存于冰箱中。

操作：将血清标本及标准血清用生理盐水作1/10稀释（例如血清0.20ml加生理盐水1.8ml），然后按表进行操作：空白管标准管测定管ul ul ul 血清标本20 标本血清40g/L 20生理盐水20溴甲酚绿应用液500 500 500充分混合，室温放置10min后在1小时后用628nm处比色。

以空白管校正光密度到0点，读取各管光密度读数计算：测定管光密度/标准管光密度*40 g/L=血清白蛋白g/L。

目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理血清中的白蛋白与溴甲酚绿在PH=4.2的条件下结合生成绿色复合物，溶液由黄色变为绿色，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比，通过在630nm处测定其吸光度可得出白蛋白的含量。

PH = 4.2白蛋白+ 溴甲酚绿--------------- 绿色复合物2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

2.3 抗凝剂：血浆使用EDTA-Na2（1mg/mL）作为抗凝剂。

2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。

3．试剂3.1 试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司ALB试剂盒，为液体单一试剂，各组分如下：白蛋白校准液40.0g/L3.2 校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。

校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。

全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。