血清总蛋白和白蛋白测定实验方案

一、实验目的1. 掌握双缩脲试剂法测定血清总蛋白的原理和方法；2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能；3. 了解血清总蛋白的临床意义及检测方法。

二、实验原理血清总蛋白（Total Protein，TP）是指血液中所有蛋白质的总和，包括白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原等。

双缩脲试剂法是一种常用的蛋白质定量分析方法，其原理是蛋白质分子中的肽键在碱性溶液中能与铜离子发生双缩脲反应，生成紫红色络合物。

该络合物在540nm处的吸光度与蛋白质含量在一定范围内呈线性关系，通过测定吸光度可计算出蛋白质含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）血清样本：采集患者空腹静脉血，分离血清；（2）双缩脲试剂：硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾；（3）NaOH溶液：6.0mol/L；（4）蛋白质标准液：60～70g/L；（5）试管、移液器、分光光度计等。

2. 仪器：（1）分光光度计；（2）恒温水浴锅；（3）移液器；（4）试管架。

四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：（1）取6支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL蛋白质标准液；（2）向各试管中加入6.0mol/L NaOH溶液1.5mL；（3）向各试管中加入双缩脲试剂A液1.0mL；（4）混匀，室温放置10分钟；（5）向各试管中加入双缩脲试剂B液4.0mL；（6）混匀，室温放置10分钟；（7）以空白管调零，在540nm波长下测定吸光度；（8）以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 血清总蛋白的测定：（1）取血清样本0.5mL，按照步骤1的操作进行测定；（2）以标准曲线为依据，计算血清总蛋白含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验数据绘制标准曲线，计算线性回归方程。

2. 血清总蛋白测定：根据标准曲线，计算血清总蛋白含量。

3. 结果分析：（1）根据实验结果，与正常参考范围进行比较，判断患者是否患有蛋白质代谢异常；（2）分析血清总蛋白含量变化与疾病的关系，为临床诊断提供依据。

血清总蛋白实验报告实验目的本实验旨在通过测定血清中的总蛋白含量，了解受试者血液中总蛋白的水平，进而为临床医学提供参考依据。

实验材料和方法材料1.血清样本：从受试者身体获取血液样本。

2.比色皿：用于容纳血清样本和试剂的透明容器。

3.分光光度计：用于测量比色皿中试剂反应后的吸光度。

方法1.准备工作：–将比色皿清洁干净，并确保其表面无污渍。

–使用无菌注射器采集受试者指尖或静脉血液样本。

–将血液样本置于离心机中，以3000 rpm的速度离心5分钟，分离血清。

–将离心后的血清样本转移到比色皿中，并确保血清不受污染。

2.操作步骤：–在一个比色皿中加入2 mL的血清样本。

–在另一个比色皿中加入2 mL的去离子水作为空白对照组。

–分别向两个比色皿中加入相同体积的试剂液，混匀后静置10分钟。

–使用分光光度计测量两个比色皿中试剂反应后的吸光度值。

–比较样本比色皿的吸光度值与空白对照组的吸光度值，得到差值。

3.数据分析：根据实验结果计算血清总蛋白的含量。

–使用校准曲线法或标准曲线法，将差值转化为血清总蛋白的浓度值。

实验结果通过测定血清样本和空白对照组的吸光度值，得到样本与空白对照组的吸光度差值。

根据校准曲线法或标准曲线法，将吸光度差值转化为血清总蛋白的浓度值。

实验讨论血清总蛋白是一个重要的临床指标，可以反映机体的营养状况、肝功能和炎症程度等。

通过本实验测定血清总蛋白的含量，可以为医生提供诊断和治疗的参考依据。

然而，本实验仅仅测定了血清总蛋白的含量，还需要结合其他临床指标和病史资料来进行综合分析。

同时，实验中的误差来源于多个方面，如样本采集和处理的不准确性、试剂的质量等。

因此，在进行临床诊断时，需要综合考虑实验结果的可靠性及其与其他指标的一致性。

此外，本实验只是血清总蛋白的初步测定，对于具体蛋白的种类和含量并没有进行深入研究。

如果需要对具体蛋白进行测定，可以选择其他实验方法，如酶联免疫吸附测定法（ELISA）等。

实验结论通过血清总蛋白实验，我们可以获得受试者血液中总蛋白的含量。

【操作】
取试管三支，标明测定、标准和空白管，按表 操作。
加入物 / ml 工作试剂 标准液 样品 生理盐水
测定管 4.0
0.02
标准管 4.0 0.02
空白管 4.0
0.02
充分混匀，置室温10min，用630nm波长比色，以空白管调零， 读取各管吸光度。
【计算】
血清清蛋白（g/L）＝ A测/A标×清蛋白标准 液浓度g/L
蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与铜离子作 用生成紫红色的络合物与两分子尿素缩合后生成 的双缩脲在碱性溶液中与铜离子作用形成的紫色 物质的反应相似，故称之为双缩脲反应。
双缩脲结构: H2N—OC—NH—CO—NH2试剂:
试剂
双缩脲试剂：称取硫酸铜(CuSO4·5H2O)3.0g, 溶于500mL新鲜制备的蒸馏水或刚煮沸冷却 的去离子水中，加酒石酸钾纳 (NaKC4H4O6·4H2O)9.0g，碘化钾5.0g，待完 全溶解后，加入6mol/L Na2OH 100ml,最后 加蒸馏水至1000mL。
血清总蛋白测定(双缩脲法) 血清白蛋白测定（溴甲酚绿法）
实验一、血清总蛋白测定
实验目的 ⒈掌握双缩脲法测定总蛋白的原理及注意事项。 ⒉熟练测定操作步骤。 ⒊了解TP测定的主要临床意义。
实验原理
蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与铜离子作 用生成紫红色的络合物，产生的颜色强度在一定 范围内与蛋白质的含量成正比，与同样处理的蛋 白标准液比较，经计算或查标准曲线即可求出血 清蛋白质含量。
【方法评价】 1.高胆红素血症和溶血标本对本法不产生干扰。严重高脂血症可使结
果偏高，应采用标本空白校正。若标本混浊，可做标本空白（血清 0.02ml，加琥珀酸缓冲液4ml），用测定管吸光度减去标本空白管吸 光度后再计算结果。 2. BCG系一种pH指示剂，它受酸、碱影响较大，所用器材必须清洁， 无酸、碱污染。 3.BCG试剂的pH必须严格控制在pH4.15±0.05，pH升高可使染料 空白增高，与清蛋白结合率下降。所以，控制反应液的pH是本法测 定的关键。 4.BCG与蛋白质结合的特异性较低。它不仅与清蛋白结合呈色，还与 血 触 不清珠同中蛋，其白与它（清蛋属蛋白白α2质可球呈立蛋色即白，发）其生最中反为以应明α（显1快球，反蛋B应C白G）、与，运不与铁同其蛋蛋它白白蛋（质白属的质β反球反应蛋应速白较率）慢、 （慢反应）。实验证明，血清与BCG试剂一经混合，“慢反应”即可 发生，约持续1h才完成。 5. Brij-35是一种非离子去垢剂，它可增强BCG-清蛋白复合物的溶解 度，消除BCG同清蛋白反应时可能产生的沉淀，它的浓度高于或低于 所指定的浓度时，均导致敏感度降低和直线性丧失，对测定结果有较 大影响。故其配制浓度和所加试剂量一定要准确。

• 待测血清用生理盐水按1:10稀释。
精品文档
生理盐水 双缩脲试剂
蛋白质标准液 待测血清稀释液
实验步骤：
取3支试管，按下表操作。
测定管 标准管 空白管
血清/mL
1.00 —
—
蛋白质标准液/mL — 1.00 —
生理盐水/mL
—
— 1.00
双缩脲试剂/mL
5.0 5.0 5.0
混匀，37度水浴放置10min，以空白管调零点， 在540nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。 计算:血清总蛋白含量= A—测—定 *蛋白质标准液浓度*稀释倍数（g/L）
（1）血液稀释，导致总蛋白浓度相对降低：如静脉注射过 多低渗溶液或因各种原因引起的钠、水潴留。
（2）摄入不足和消耗增加：食物中长期缺乏蛋白质，慢性 胃肠道疾病引起的消化吸收不良，患消耗性疾病等，均可造 成血清蛋白浓度降低。
（3）合成障碍：主要见于肝脏患疾。血浆清蛋白及大部分 球蛋白均由肝脏合成，肝功能严重损害时，血浆蛋白质的合 成量减少，其中以清蛋白浓度降低最为明显。
精品文档
一、血清总蛋白的测定
实验原理：
1、双缩脲反应：两个尿素分子缩合生成双缩脲（H铜离子作用，生成稳
定的紫红色配合物，即双缩脲反应。CuSO4的碱性溶液称
双缩脲试剂。
碱性溶液
双缩脲+铜离子
紫红色
2、蛋白质的定量测定：蛋白质与双缩脲相似，分子中的 肽键能与双缩脲试剂形成紫色配合物。这种紫色配合物 在540nm处有明显吸收峰。吸光度在一定范围内与蛋白质 含量成正比，常用于蛋白质的定量测定。
精品文档
实验试剂：
• 溴甲酚绿储存液：BCG 419mg溶于10ml 0.1mol/L NaOH，加 NaN3 100mg，定容至1L，储存于棕色瓶中备用。 • 0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH=4.2）：分别配制 0.1mol/L柠 檬酸和柠檬酸钠溶液，按体积比 12.3 : 7.7 混合。每1L混合 液加入NaN3 100mg。 • 30%聚氧化乙烯月桂醚溶液：取Brij-35 30g，加少量水，60 度水浴溶解加水至100ml。 • BCG应用液：BCG储存液 250ml、0.1mol/L柠檬酸缓冲液 (pH=4.2) 750ml、30% Brij-35混合而成。 • 标准蛋白溶液(10mg/ml)：称取人白蛋白 1.00g，用生理盐 水溶解并定容至100ml。

血清总蛋白和白蛋白测定实验方案实验方案：血清总蛋白和白蛋白测定实验引言：材料和试剂：1.血清样本2.0.9%生理盐水3.高纯度白蛋白标准品4.生物碱性溶液5.生物酸性溶液仪器设备：1.比色皿2.分光光度计3.吸光度计实验步骤：1.样本制备：a.收集血液样本，并离心10分钟以去除血细胞。

b.将离心后的血清转移到一个新的离心管中。

c.确保血清无凝块或颗粒，如有则进行过滤处理。

d.将血清储存在-20°C的冰箱中，以防止蛋白质降解。

2.样本稀释：a.取一定数量的血清样本（200µL），加入一个10倍稀释液（1800µL 的0.9%生理盐水），得到被稀释的样本。

b.将稀释液标记为“200μL：1800μL”，并将其储存在试管中。

3.标准曲线制备：a.准备一系列浓度递增的白蛋白标准品：0g/L、2g/L、4g/L、6g/L、8g/L。

b.取一定体积的每个标准品（200µL），分别加入一个10倍稀释液（1800µL的0.9%生理盐水），得到一系列被稀释的标准溶液。

c.根据标准曲线所需白蛋白的浓度，将其标记在曲线上。

4.吸光度测定：a.取一定体积的对照组、血清样本和标准溶液，并分别转移到比色皿中。

b. 使用分光光度计，将比色皿置于光路中并调整至指定波长，通常为546 nm。

c.对每个样本和标准溶液的吸光度进行测量，并记录下读数。

5.计算白蛋白含量：a.根据标准曲线上的吸光度读数，计算每个标准品的白蛋白浓度。

b.根据被稀释的样本的吸光度读数和标准曲线上的浓度，计算样本中的白蛋白含量。

6.计算总蛋白含量：a.根据白蛋白含量和总蛋白与白蛋白的比例，计算总蛋白的含量。

实验注意事项：1.在操作过程中，尽量避免血清样本接触空气，以免影响蛋白质含量。

2.实验中使用的试剂和仪器，应根据实验室的标准操作程序进行操作。

3.保持实验环境的清洁和无菌，以防止外源性污染。

4.对比色皿进行校准，以确保吸光度测量的准确性。

血清总蛋白实验报告血清总蛋白实验报告血清总蛋白是指血液中所有蛋白质的总和，包括白蛋白和球蛋白等多种蛋白质成分。

血清总蛋白的测定可以为临床诊断和疾病监测提供重要的参考依据。

本实验旨在测定血清总蛋白的浓度，并探讨其在健康和疾病状态下的变化。

实验方法：1. 实验材料准备：- 血清样本：从健康志愿者中采集血液样本，离心获得血清。

- 标准品：使用已知浓度的血清总蛋白标准品。

- 试剂：包括染色剂、缓冲液等。

- 仪器：分光光度计、离心机等。

2. 样本处理：- 将采集的血清样本离心，以去除细胞和杂质。

- 取适量血清样本，加入染色剂和缓冲液，混匀后静置一段时间。

3. 光度测定：- 使用分光光度计，设置波长为标定波长。

- 以纯水为零点校准仪器，然后分别测定标准品和样本的吸光度值。

4. 计算浓度：- 根据标准品的吸光度与浓度的线性关系，绘制标准曲线。

- 根据样本的吸光度值，通过标准曲线插值计算出血清总蛋白的浓度。

实验结果：根据实验数据，我们得到了一组血清总蛋白的浓度数据。

通过计算，我们发现血清总蛋白的浓度在正常范围内，符合健康人群的标准。

这表明被检测者在本次实验中没有明显的蛋白质异常。

讨论与分析：血清总蛋白是反映人体蛋白质代谢和营养状况的重要指标。

正常情况下，血清总蛋白的浓度应在一定范围内，过高或过低都可能与某些疾病相关。

高血清总蛋白浓度常见于脱水、感染、炎症等情况下，这是因为在这些情况下，机体会释放更多的蛋白质来应对外界的挑战。

而低血清总蛋白浓度则可能与肝功能不全、营养不良、肾病等疾病有关。

值得注意的是，血清总蛋白的测定结果需要综合考虑患者的临床症状和其他实验指标，才能作出准确的诊断。

因此，在临床应用中，血清总蛋白的测定常与其他指标联合使用，以提高诊断的准确性。

结论：通过本次实验，我们成功测定了血清总蛋白的浓度，并发现被检测者的血清总蛋白浓度处于正常范围内。

血清总蛋白的测定在临床诊断和疾病监测中具有重要意义，可以为医生提供有价值的参考信息。

血清总蛋白及白/球比值的测定
实验目的：
1.混合物中某种物质浓度的测定方法 2.熟悉血清总蛋白和白蛋白的测定方法 3.掌握血清总蛋白和白/球比值的临床意义 4.熟悉721分光光度计的使用
生物化学实验基本技能训练
一、血清总蛋白的测定
（双缩脲法）
二、血清白蛋白的测定
（溴甲酚绿法）
血清总蛋白的测定
双缩脲（
•双缩脲反应示意图
实验试剂 （1）生理盐水（2）双缩脲试剂
： 实（验3）操蛋作白质标准液（4）待测血清
取三支试管按下表加入式样，混匀 37摄氏度水浴放置十 分钟，以空白管调零，540nm波长测定吸光度
血清总蛋白的测定
项目 血清/ml
蛋白质标准液/ml 理生盐水/ml
双缩脲试剂/ ml
测定管
1.00
白蛋白增高：主要由于血液浓缩而致相对性增高，如严重 脱水和休克、严重烧伤、急性出血、慢性肾上腺皮质功能减 低症。
白蛋白减低：见于肝硬变合并腹水及其他肝功能严重损害 （如急性肝坏死、中毒性肝炎等）营养不良、慢性消耗性疾 病、糖尿病、严重出血肾病综合征等。当降低至25g/L以下易 产生腹水。
血清球蛋白是机体免疫器官制造的，球蛋白正常值为20-40 g/L。球蛋白大部分在肝细胞外生成，与人体的免疫力有关系。 球蛋白要保持一定的量，球蛋白检测值超过正常值说明体内
双缩脲法 酚试剂(Follin-酚)法测定蛋白质 紫外吸收法测定蛋白质 凯氏(Kjeldahl)微量定氮法 考马斯亮蓝G—250染色法 如何测定血清中某一种蛋白质的浓度？ 分离后再测定
Folin-酚试剂法测定蛋白质含量是双缩脲法的发民，所用 的试剂是由两部分组成的。第一部分相当于双缩脲试剂， 第二部分为Folin-酚试剂(磷钨酸和磷钼酸混合液)。因此， 反应的程序也是分两步进行的。第一步相当于双缩脲反应， 在碱性条件下蛋白质中的肽键与Cu2+作用生成络合物； 第二步是基于Folin试剂(磷钼酸和磷钨酸试剂)在碱性条件 下极不稳定，易被酚类化合物还原生成钼蓝和钨蓝混合物 (呈蓝色反应)。由于蛋白质中含有带酚羟基的酪氨酸，故 有此呈色反应。而且溶液颜色的深浅与蛋白质的含量成正 比关系。此法也适用于测定酪氨酸和色氨酸的含量。本法 可测定范围是25—250μg蛋白质

的含量。
紫外吸收法可测定0.1-0.5mg/ml的蛋白质溶液，此操作简便，测定 迅速，不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。因此，此法在蛋白质的
制备中广泛应用。 此法的缺点是：（1）对于测定那些与标准蛋白质
中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定的误差；（2）若 样品中含有嘌呤，嘧啶等吸收紫外线的物质，会出现较大的干扰。
思
考
问题：如何测定血清中蛋白质的总浓度？蛋白质的 浓度测定方法？ 双缩脲法 酚试剂(Follin-酚)法测定蛋白质 紫外吸收法测定蛋白质 凯氏(Kjeldahl)微量定氮法 考马斯亮蓝G—250染色法 如何测定血清中某一种蛋白质的浓度？ 分离后再测定

Folin-酚试剂法测定蛋白质含量是双缩脲法的发民，所用
的试剂是由两部分组成的。第一部分相当于双缩脲试剂， 第二部分为Folin-酚试剂(磷钨酸和磷钼酸混合液)。因此， 反应的程序也是分两步进行的。第一步相当于双缩脲反应， 在碱性条件下蛋白质中的肽键与Cu2+作用生成络合物；
第二步是基于Folin试剂(磷钼酸和磷钨酸试剂)在碱性条件
下极不稳定，易被酚类化合物还原生成钼蓝和钨蓝混合物 (呈蓝色反应)。由于蛋白质中含有带酚羟基的酪氨酸，故
Hale Waihona Puke 时，白/球比值变小，甚至倒置。
血清总蛋白增高： （1）血液浓缩，导致总蛋白浓度相对增高：严重腹泻、呕吐、 高热时急剧失水，血清总蛋白浓度可明显升高。休克时，由于 毛细血管通透性增加，血液中水分渗出血管。血液可发生浓缩， 慢性肾上腺皮质功能减退的患者，由于丢失钠的同时伴随水的 丢失，血浆也可出现浓缩现象。 （2）血浆蛋白质合成增加：主要见于球蛋白合成增加，多发 性骨髓瘤患者。 血清总蛋白降低： （1）血液稀释，导致总蛋白浓度相对降低：如静脉注射过多 低渗溶液或因各种原因引起的钠、水潴留。 （2）摄人不足和消耗增加：食物中长期缺乏蛋白质或慢性胃 肠道疾病所引起的消化吸收不良，因患消耗性疾病，如严重结 核病，甲状腺功能亢进，恶性肿瘤等，均可造成血清蛋白浓度 降低。 （3）蛋白质丢失：严重烧伤时大量血浆渗出，大量失血，肾 病综合征时大量蛋白尿，溃疡性结肠炎时肠道长期丢失一定量 的蛋白质，这些病理改变均可使血清总蛋白浓度降低。

血清中总蛋白和白蛋白测定的实验方案血清总蛋白的测定：实验原理血清(浆)中蛋白质的肽键(-CO-NH-)在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。

此反应和2个尿素分子缩合后生成的双缩脲(H2N-OC-NH- CO-NH2)在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。

这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。

实验器材分光光度计实验试剂1.6mol/L NaOH溶液称取NaOH 240g，溶于新鲜制备的蒸馏水约800ml中，定容至1L，贮于有盖塑料瓶中。

2.双缩脲试剂称取硫酸铜结晶(CuSO4·5H2O)3g溶于新鲜制备的蒸馏水500ml 中，加入酒石酸钾钠(NaKC4H406·4H2O），用以结合Cu2+，防止CuO在碱性条件下沉淀)9g和KI(防止碱性酒石酸铜自动还原并防止Cu2O的离析)5g。

待完全溶解后，在搅拌下加入6mol/L NaOH溶液100ml，并用蒸馏水定容至1L，置塑料瓶中盖紧保存。

此试剂室温下可稳定半年，若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。

3.60～70g/L蛋白质标准液可用定值参考血清或标准白蛋白作标准。

实验操作取试管3支，混匀，置25℃30min或37℃10min，在波长540mm处比色，用空白管调零，测各管吸光度。

参考范围60～80g/L。

注意事项1.黄疸血清，严重溶血，葡萄糖，酚酞及溴磺酞钠对本法有明显干扰，故用标本空白管来消除。

但如标本空白管吸光度太高，可影响测定的准确度。

2.高脂血症混浊血清会干扰比色，可采用下述方法消除：取2支带塞试管或离心管，各加待测血清0.1ml，再加蒸馏水0.5ml和丙酮10ml，塞紧并颠倒混匀10次后离心，倾去上清液，将试管倒立于滤纸上吸去残余液体。

向沉淀中分别加入双缩脲试剂及双缩脲空白试剂，再进行与上述相同的其他操作和计算。

三、操作步骤
加入物（ml） B
血清
/
标准液
/
双缩脲试剂 3.0
S×2 /
0.05 3.0
U×2 0.05
/ 3.0
混匀，37℃，10分钟，540nm处 比色，1cm光径比色杯，B管调零
注： 1.非严重黄疸、脂血及高脂血 症血清不用做血清自身对照管。
2.可以用蒸馏水调零，目的是检 验各个试剂的好坏
四、结果 Au
血清总蛋白（g/L） = —— X 60 As
五、正常参考范围 60-80g/L
六、临床意义 1、 总蛋白浓度升高 （1）蛋白质合成增加：大多见于多发性
骨髓瘤患者 （2）血浆浓缩，如急性失水、外伤性休
克、慢性肾上腺皮质功能减退。
2、 总蛋白浓度降低 （1）蛋白质合成障碍：肝功能严重受
简单、试剂易得，但影响因素 太多。
血清总蛋白双缩脲测定法
一、原理：蛋白质中的肽键（-CONH-） 在碱性环境中能与铜离子作用产生紫红 色络合物。
此反应和2个尿素分子缩合后生成的 双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性 环境中与铜离子作用产生紫红色络合 物的反应相似，故称为双缩脲反应。
颜色的深浅在一定浓度范围内与 蛋白质含量成正比，经与同样处理的 蛋白标准液比较，即可求得蛋白质含 量
（三）、 酚试剂法 运用蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸
残基能还原磷钨酸-磷钼酸试剂生成钼蓝 来测定蛋白质的浓度。
改良法：在酚试剂中加入碱性铜离 子。集中了双缩脲法和酚试剂法的优点
灵敏度高，但受许多还原物质的 干扰，限制了它在临床上的应用。
（四）、 紫外分光光度法 蛋白质分子中的酪氨酸和色氨酸
残基在280nm处有一吸收峰，可用于 蛋白质含量的测定。

实验血清蛋白测定
实验：血清蛋白测定
实验介绍
本次实验旨在通过测定血清中的总蛋白和白蛋白浓度，计算出
非白蛋白的含量，并探究人体健康状况与血清蛋白含量之间的关系。

实验步骤
1. 取得样本血液，并离心分离得到血清
2. 使用比色法测定血清总蛋白浓度，并记录结果
3. 使用免疫层析法测定血清白蛋白浓度，并记录结果
4. 计算非白蛋白含量，并记录结果
实验原理
- 比色法：利用生化试剂和光度计对血清中的蛋白质进行量化
测定。

- 免疫层析法：利用免疫学原理选择性地分离出目标蛋白质，
通过测量蛋白与抗体复合物的浓度来计算目标蛋白质浓度。

- 计算公式：非白蛋白含量＝总蛋白浓度−白蛋白浓度。

实验结果分析
通过实验，我们可以得到每个样本的总蛋白质含量、白蛋白含量和非白蛋白含量。

根据实验结果，我们可以探讨人体健康状况与血清蛋白含量之间的关系，并且该方法可以用于临床诊断中，如肝功能不全、肾病综合征等。

结论
本次实验成功地测定了血清蛋白质浓度，并计算出非白蛋白的含量，同时探究了人体健康状况与血清蛋白含量之间的关系。

该方法可以用于临床诊断中，具有重要的临床应用价值。

一、实验目的1. 了解血清鉴定的原理和方法。

2. 掌握血清总蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶、血清醋酸纤维薄膜电泳等检测方法的操作步骤。

3. 分析实验结果，判断血清样本的生化指标。

二、实验原理1. 血清总蛋白和白蛋白测定：基于双缩脲反应，蛋白质的肽键在碱性溶液中与铜离子反应生成紫红色络合物，吸光度与蛋白质含量呈正比。

2. 谷丙转氨酶测定：谷丙转氨酶催化丙氨酸与酮戊二酸反应，生成丙酮酸，丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应生成棕色产物，吸光度与酶活力呈正比。

3. 血清醋酸纤维薄膜电泳：根据蛋白质在pH为8.6的巴比妥缓冲溶液中的等电点，蛋白质在电场作用下向阳极移动，根据移动距离和蛋白质组分，判断血清蛋白成分。

三、实验器材与试剂1. 实验器材：分光光度计、移液器、离心机、电泳槽、直流稳压电泳仪、醋酸纤维薄膜等。

2. 实验试剂：NaOH溶液、双缩脲试剂、蛋白质标准液、谷丙转氨酶底物、2，4-二硝基苯肼、巴比妥-巴比妥钠缓冲液、染色液、漂洗液等。

四、实验步骤1. 血清总蛋白和白蛋白测定：（1）取血清样本0.1ml，加入2ml双缩脲试剂，混匀。

（2）用分光光度计在540nm处测定吸光度。

（3）根据标准曲线计算蛋白质含量。

2. 谷丙转氨酶测定：（1）取血清样本0.1ml，加入0.9ml谷丙转氨酶底物，混匀。

（2）用分光光度计在540nm处测定吸光度。

（3）根据标准曲线计算酶活力。

3. 血清醋酸纤维薄膜电泳：（1）将血清样本加入醋酸纤维薄膜，进行电泳。

（2）用染色液染色，漂洗。

（3）观察电泳图谱，分析蛋白质组分。

五、实验结果与分析1. 血清总蛋白和白蛋白测定：根据实验结果，计算血清样本总蛋白和白蛋白含量，与正常参考范围进行比较，判断血清蛋白水平是否异常。

2. 谷丙转氨酶测定：根据实验结果，计算血清样本谷丙转氨酶活力，与正常参考范围进行比较，判断肝功能是否异常。

3. 血清醋酸纤维薄膜电泳：根据电泳图谱，分析血清蛋白组分，判断是否存在异常。

一、实验目的1. 了解血清总蛋白在人体生理和病理过程中的作用。

2. 掌握血清总蛋白测定的原理和方法。

3. 通过实验操作，提高实验技能和数据分析能力。

二、实验原理血清总蛋白是血液中所有蛋白质的总和，包括白蛋白、球蛋白和纤维蛋白原等。

血清总蛋白含量的测定对临床诊断具有重要意义，如肝脏疾病、肾脏疾病、营养不良等。

实验原理：血清（浆）中蛋白质的肽键（-CO-NH-）在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。

这种紫红色络合物在540nm处的吸光度与血清蛋白含量在一定范围内呈正比关系。

三、实验材料1. 实验试剂：6.0mol/L NaOH溶液、双缩脲试剂（硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾）、蛋白质标准液、血清样品等。

2. 实验器材：分光光度计、移液器、试管、试管架、吸管等。

四、实验步骤1. 标准曲线绘制（1）取6个试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL蛋白质标准液，然后加入2.0mL 6.0mol/L NaOH溶液。

（2）在每支试管中加入0.4mL双缩脲试剂，摇匀。

（3）室温放置10分钟。

（4）在540nm波长下，以空白管调零，测定各管吸光度。

（5）以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品测定（1）取3个试管，分别加入0.2mL血清样品、0.2mL蒸馏水和0.2mL 6.0mol/L NaOH溶液。

（2）按照标准曲线绘制步骤进行操作。

（3）在540nm波长下，以空白管调零，测定各管吸光度。

3. 结果计算（1）根据样品测定吸光度，从标准曲线上查得蛋白质浓度。

（2）计算血清总蛋白含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制根据实验数据绘制标准曲线，得到线性方程：y = 0.062x + 0.015，R² = 0.99。

2. 样品测定血清样品1、2、3的吸光度分别为0.60、0.55、0.50，查得蛋白质浓度分别为60.0mg/L、55.0mg/L、50.0mg/L。

Lowry法(Follin-酚法 p10)等 – 染色性质：考马斯亮蓝染色法(p97)

在选择方法时应考要求的灵敏度和精确度； 蛋白质的性质； 溶液中存在的干扰物质； 测定所要花费的时间。
实验原理
蛋白质与双缩脲（？）一样，在碱性溶液中能 与铜离子形成紫色络合物(即双缩脲反应) 其呈色深浅与蛋白质的含量成正比，因此可用 于蛋白质的定量测定。
操作步骤
1、取中试管4支，分别标以“1”、“2”、“3”、“4”，吸 取27.8％Na2SO3 1ml，置管“1”中(空白管)。 2、吸取血清0.2ml于另一试管（“5”号管）中，加入 27.8% Na2SO3 4.8ml，用拇指压住管口倒转混合5-6次， 放置15秒，吸取1ml置于管“4”中(总蛋白测定管)。 3、将剩余的血清混悬液过滤至“6”号管中(如滤液不清，可 重复过滤，直至滤清为止)，吸取滤液1ml，置于管“3” 中(白蛋白测定管)。 4、吸取1% BSA（标准对照）1ml，置于管“2”中(标准管)。 5、于上述4支试管中分别加入双缩脲试剂4ml，摇匀。 6、在室温中放置10分钟后，以“1”管调零点，在540nm 波长处进行比色，分别测定“2”、“3”、“4”管的吸光 度。
实验三 血清总蛋白及白/球比值测定 (双缩脲法)
蛋白质的定量分析是生物化学和其他生 命学科最常涉及的分析内容，是临床上诊 断疾病及检查康复情况的重要指标，也是 许多生物制品、药物、食品质量检测的重 要指标。在生化实验中，对样品中的蛋白 质进行准确可靠的定量分析，则是经常进 行的一项非常重要的工作。
2、掌握血清总蛋白和白/球比值的临床意义
3、掌握721E分光光度计的操作方法
问题1：如何测定蛋白质的浓度？

目前测定蛋白质含量的方法有很多种，下面列 出根据蛋白质不同性质建立的一些蛋白质测定 方法：

血清总蛋白测定标准操作规程1.实验原理：（双缩服法）本试剂采用双缩胭反应，即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与两价铜离子反应生成蓝紫色络合物，其中每个铜离子与五至六个肽键络合。

双缩胭反应被广泛应用于临床检验，具有简便、快速可靠的特点。

在试剂中加入碘化物有助于防止碱性铜络合物的自动还原，反应形成的蓝紫色物质与样本中总蛋白浓度成正比，通过测定520-56Onm处吸光度值的变化，即可计算出样本中总蛋白的浓度。

Cu"+蛋白质3→Cu蛋白质复合物2〜8C保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释6.1线性范围：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，本试剂线性范围可样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本。

达100g∕Lo最大稀释5倍。

6.2单位换算:g∕dL=g∕L×O.17检验结果的局限性6.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。

7.2若试剂浑浊或以水空白在540nm处吸光度大于0.200时不能使用。

8.产品性能指标8.1试剂外观：蓝色透明液体，无悬浮物及沉淀物。

8.2装量：不低于标识值8.3空白吸光度：在54Onm处，光径ICm时，空白吸光度AWO.200。

8.4分析灵敏度：在540nm处，光径ICm时，测量70g∕L的总蛋白，吸光度差4A20.1509.5线性区间：试剂的线性区间为[30.0T00.0]g∕L,在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.995；b）线性相对偏差不超过±6.0机8.6精密度8.6.1重复性：重复测试（70.0÷10.0）g/L的样本,所得结果的变异系数（CV）应W2.0%8.6.2批间差：重复测试（70.0±10.0）g/L的样本，所得结果批间相对极差（R）应W5.0%8.7准确性：相对偏差应不大于±5.0机8.8稳定性：（2-8）C下，原包装存放的试剂有效期为18个月.取到期后一个月的试剂进行测试，应满足-6.1、7的要求。

一、实验目的1. 掌握白蛋白测定原理和方法。

2. 了解白蛋白在临床医学中的重要性。

3. 熟悉白蛋白测定实验操作步骤。

二、实验原理白蛋白（Albumin）是血清中含量最高的蛋白质，占血清总蛋白的50%以上。

白蛋白具有维持血浆胶体渗透压、运输多种物质、调节pH值等功能。

本实验采用溴甲酚绿法测定血清白蛋白含量。

溴甲酚绿法：在酸性条件下，溴甲酚绿与白蛋白结合形成蓝绿色复合物，复合物的颜色深浅与白蛋白含量成正比。

通过比色法测定吸光度，计算白蛋白含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料- 血清标本- 标准白蛋白溶液- 溴甲酚绿试剂- 醋酸缓冲液- 0.4%氢氧化钠溶液- 吸管- 移液器- 50ml容量瓶- 10ml量筒- 721型分光光度计2. 仪器- 电子天平- 磁力搅拌器- 移液器四、实验步骤1. 标准曲线绘制- 将标准白蛋白溶液用醋酸缓冲液稀释成不同浓度（例如：0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml）。

- 每个浓度取1ml，加入溴甲酚绿试剂1ml，混匀。

- 60℃水浴15分钟，取出冷却至室温。

- 在540nm波长下，测定吸光度。

- 以吸光度为纵坐标，白蛋白浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2. 血清白蛋白测定- 将血清标本用醋酸缓冲液稀释成适宜浓度。

- 每个样品取1ml，加入溴甲酚绿试剂1ml，混匀。

- 60℃水浴15分钟，取出冷却至室温。

- 在540nm波长下，测定吸光度。

- 根据标准曲线，计算样品中白蛋白含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制- 标准曲线呈线性关系，相关系数R²大于0.99。

2. 血清白蛋白测定- 样品中白蛋白含量为X mg/ml。

六、讨论与心得1. 白蛋白测定在临床医学中具有重要意义，可用于评估患者营养状况、肝功能、肾功能等。

2. 溴甲酚绿法操作简便，结果准确可靠，是临床常用的白蛋白测定方法。

3. 在实验过程中，应注意以下事项：- 标准曲线绘制时，需严格控制温度和时间。

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