磷脂酶A1水解大豆浓缩磷脂的研究

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大豆中磷脂的提取技术研究

Ａｂｔａｔｓｒｃ：Ｅｎｙｔｃｈｄｏｙｉｉｓｄｔｏｖｒｏｂａｅｌｔｅｉｈｎｉｔｏｂａｎｅｌｔｃｌｃ— ｚｍａｉｙｒｌｓｓｓｕｅｏｃｎｅｔｓｙｅｎｈｍｏｙｉｌｃｔｉｏｓｙｅｎａｈｍｏｙｉｅｉｃｎ
收藕日期；０６０－１２０ —１１作者简介ｔ高林霞（９７）女，１７一，硕士，主要从事工业企业改造的清洁生产研究。
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第２期
高林霞等：豆中磷脂的提取技术研究大
酸链，的不同构成了不同的磷脂口。Ｘ］纯净磷脂在室温下是一种白色固体物质，子分结构中有亲水性和亲油性的两种官能团，一种很是好的乳化剂。磷脂易溶于有机溶剂（乙醚、等）部苯，
关麓词：大豆磷脂｛膜｛酶解
中围分类号：Ｓ２Ｔ２９
文献标识码：Ａ
文章编号：６１１５（０６００８０１７— ５６２０）２０９２
ＳｕｙｏｔａｔｎｏｂａｃｔｉｔｄｆＥｘｒｃｉｇＳｙｅｎＬｅｉｈｎ
或等于１ ×１一，膜去除杂质后，离心分离出００过再
磷脂。通过实验发现膜技术和离心法联用较为经济
实惠，作简单。操附加值较高。
１磷脂的结构与特点
磷脂是成分十分复杂的混合物，其一般的化学
结构为
Ｈ

磷脂酶A2水解大豆浓缩磷脂的研究(Ⅰ)富水相的水解及反应速度的测定

磷脂酶A2水解大豆浓缩磷脂的研究(Ⅰ)富水相的水解及反应
速度的测定
汪勇;王兴国;欧仕益;唐书泽;付亮;李爱军
【期刊名称】《中国粮油学报》
【年(卷),期】2003(018)004
【摘要】研究了磷脂酶A2在水相(富水)中水解大豆浓缩磷脂,经过正交试验得到最佳工艺条件:底物浓度10%,反应温度55℃,pH值8.5,ca2+浓度0.2mol/L.反应的水解率在75%～85%.并研究了水解时间和水解速度的关系.
【总页数】5页(P33-37)
【作者】汪勇;王兴国;欧仕益;唐书泽;付亮;李爱军
【作者单位】暨南大学食品科学与工程系,广州,510632;江南大学食品学院,无锡,214036;暨南大学食品科学与工程系,广州,510632;暨南大学食品科学与工程系,广州,510632;暨南大学食品科学与工程系,广州,510632;暨南大学食品科学与工程系,广州,510632
【正文语种】中文
【中图分类】TS22
【相关文献】
1.磷脂酶A1水解大豆浓缩磷脂研究 [J], 管伟举;谷克仁;李永端
2.磷脂酶A2水解蛋黄磷脂工艺及改性蛋黄性质的研究 [J], 徐榕榕;董世建;胡新平;王淼;杨严俊
3.磷脂酶A2水解大豆浓缩磷脂的研究(Ⅱ)贫水相的水解及产品性能的测定 [J], 汪勇;王兴国;欧仕益;唐书泽;付亮;李爱军
4.复合酶法水解大豆浓缩磷脂制备甘油磷脂酰胆碱工艺研究 [J], 孟燕楠;梁少华;魏贤之;刘二蒙
5.磷脂酶A_2水解浓缩大豆磷脂最佳技术条件的研究 [J], 富校轶;孙树坤;朱秀清因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

酶改性大豆磷脂乳化稳定性比较

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・
油脂工程・
‘
狠游善
酶改性大豆磷脂乳化稳定性比较
谷克仁金华丽
（河南工业大学）
【摘要】大豆浓缩磷脂、酶改性大豆浓缩磷脂、酶改性大豆粉末磷脂作为乳化剂经均质制备乳化液
（水＝：）油／１１，调乳化液ｐ值分别为（、５、９，常温下４、８￣保温４、分别添加０ＩＨ３、７）ｈ０Ｃｈ．％Ｎａ１Ｃ和０５ａ：常温下放置４．％ＣＣ１０，ｈ后比较各乳化液的稳定性。添加大豆浓缩磷脂的乳化液受环境影响较大，在碱性或酸性较强条件下稳定性差。而添加酶改性大豆浓缩磷脂和酶改性粉末大豆磷脂乳化液在ｐ值Ｈ５９下都保持良好的乳化稳定性，ｐ值３时亦保持较好的乳化稳定性。在温度８ ℃ 条件下，添加酶剂通常受ｐＨ环境影响较大。这
是由于离子型表面活性剂只有在其分子处于电离状态时才
能表现出表面活性作用，而ｐ环境的变化必然引起表面Ｈ
活性分子电离状态的变化，而对相应的乳状液乳化稳定进性产生影响。酶改性磷脂外露的亲水基团增加，亲脂基团向内且减少。因而ｐ环境的变化对酶改性磷脂影响不Ｈ大，而对大豆浓缩磷脂影响显著。
《油工食机）６第期＠粮加与品械０年５２０

浓缩磷脂的酶法改性研究

９％，２７并研究了水解速度与时间的关系水解得到的溶血磷脂产品的ＨＢ大于８Ｌ。美键词：缩磷脂；脂酶Ａ；浓磷２溶血磷脂；法改性酶
磷脂是植物油工业重要的副产品，是良好的它乳化剂，泛应用于食品、药、工、料等领广医化饲域。浓缩磷脂是丙酮不溶物含量大于６％的磷２脂和植物油的混合物，品的浓缩磷脂的９％来自商０
浓缩磷脂（ＬＨＢ：４，国中央大豆公司；缩）美浓磷脂（ＬＨＢ＝８，国中央大豆公司；）美粉状磷脂，国美稻田公司；磷脂酶Ａ：ＯＯ公司Ｌｅａｅ１，２ＮＶｅｉｓ０Ｌ酶活ｔ
收稿日期：０１０—０ —叭作者简介：汪功能性油脂等。勇（９７）男，１７一，在读博士；究方向为研
１１材料．
展开，挥干溶剂后，在碘蒸气下显色。将显色好的薄板在测定波长５０ｎｉ比波长７０ｉｉ扫描，定５ｌ，／参０１ｉ下／测正交实验产品的各组分的组成。１３３液相色谱分析产物含量柱条件：ｉｏａ．．ＭｃＰｋｒ
ｓ５柱长３ｍ，径４６ｎｌｌ－０ｃ柱．ｌ，柱温２ ℃，压ｌａ５柱
ｌ２Ｐ，速０９ｍ／ｉ。检测波长２５１１７２５ｋａ流．ｌｍｎ０１。流３１动相：己烷：丙醇：．％醋酸溶液８８：（：：正异１８：１ｖｖｖ，定由正交实验所得最佳条件下水解产品的各）测组分含量。１３４水解反应速度的测定１％底物浓度的反．．０应液，碱液维持在一定ｐ加人酶液反应，已标用Ｈ，用定的碱液滴定反应生成的游离脂肪酸，持体系的维口Ｈ恒定。以反应时间和反应速度作圈测定水解反应速度。

大豆卵磷脂的分离纯化研究

磷脂按分子结构组成可分为甘油磷脂和鞘磷脂两大类【３１。（１）甘油磷脂（ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）
Ｏ
１１
０
ＧＨ２一。一ｅ—Ｒ１
Ｉ
ｏ
Ｉｌ
Ｒ２一ｃ—ｏ一午Ｈ
ＣＨ２——Ｏ—Ｐ——０Ｘ
Ｉ
ＯＨ
图１－１甘油磷脂的分子结构Ｆ蟾１－１Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｆｏｒｍｕｌａ
ｏｆｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃ’ｅｒｉｄｅ
第一章前言
个（Ｒ２）是不饱和的，如油酸（Ｃ１８：１），亚油酸（Ｃｔ８：２），亚麻酸（Ｃ１８：３）和花生四
烯酸（Ｃ２０：４）等。甘油醇磷脂主要有ＰＣ、ＰＥ、ＰＩ、ＰＳ与ＬＰＣ等。ＰＣ分子中根据磷酸胆碱连接的碳位置不同会产生ａ、ｐ两种异构体，连接在甘油基的第３位碳上称为ｉｘ型，第２位碳上称为１３型。自然界存在的ＰＣ为Ｌ—ｉｘ磷脂，
成果，论文中有关资料和数据是实事求是的。尽我所知，除文中已经加以标注和致谢外，
本论文不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得中国石油大学（华东）或其它教育机构的学位或学历证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对研究所做的任何贡献均已在论文中作出了明确的说明。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。
ｏｎ
ｅｔｈａｎｏｌ
ｓｏｌｕｔｉｏｎ，
ｏｆ
ｓｏｙｂｅａｎ
ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ
ｃｏｎｔｅｎｔ
ｔｈｅｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆｅｔｈａｎｏｌ，
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ
ｔｈｅｙｉｅｌｄａｎｄＰＣ
ｗｅｒｅ
ｅｖａｌｕａｔｅｄ．Ｏｐｔｉｍｕｍ
ｐｏｗｄｅｒ
ｐａｒａｍｅｔｅｒｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄａｓ
ｆｏｌｌｏｗｓ：ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅＷａｓ

亲磷脂酸磷酯酶A1研究进展

亲磷脂酸磷酯酶A1研究进展摘要】亲磷脂酸磷脂酶A1（PA-PLA1）在细胞内水解磷脂酸分子上sn-1脂肪酸生成sn-2-脂酰溶血磷脂酸，从而影响脂类信号分子磷脂酸和溶血磷脂酸的信号转导，提示该酶在细胞的信号转导中发挥重要的作用。

本文拟就有关PA-PLA1的基因克隆，一级结构特点，酶学特性以及生理功能的研究作一综述。

【关键词】亲磷脂酸磷脂酶A1 磷脂酸溶血磷脂酸信号转导【中图分类号】R392.11 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）10-0129-02亲磷脂酸磷脂酶A1（phosphatidic acid-preferring phospholipase A1，PA-PLA1）生理条件下对磷脂酸（phosphatidic acid，PA）具有高度的亲和性，在细胞内水解PA分子上sn-1脂肪酸生成sn-2-脂酰溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid, LPA）。

PA和LPA是细胞内重要的脂类信号分子，其信号转导涉及细胞生长、增殖、囊泡输送和激素应答等多种细胞过程。

PA-PLA1活性影响细胞内PA和LPA信号水平，提示该酶在细胞的信号转导中发挥重要的作用。

近年来,随着牛PA-PLA1被分离，纯化与克隆，该酶的功能研究已见端倪。

本文拟就有关PA-PLA1的基因克隆，分子结构特点，酶学特性以及生理功能的研究作一综述。

1 PA-PLA1的克隆与组织分布牛PA-PLA1最先由华盛顿大学Glomset实验室报道[1]，并被从牛的睾丸组织中分离、纯化与克隆[2,3]。

牛PA-PLA1基因编码一个由875个氨基酸残基组成的蛋白多肽，分子量为97576道尔顿，等电点5.61。

PA-PLA1有特定的组织分布，在成年牛的睾丸和脑组织中该酶具有较高的活性，其中成年牛睾丸组织的PA-PLA1活性比新生牛睾丸组织的PA-PLA1活性高10倍，而在心脏、肝脏、脾脏和血液中检测不到该酶的活性。

大豆浓缩磷脂脂肪酶

大豆浓缩磷脂脂肪酶大豆浓缩磷脂脂肪酶是近年来被广泛研究的食品添加剂，它是萃取自大豆中的一种酶。

大豆浓缩磷脂脂肪酶具有良好的水溶性、耐热性和pH稳定性，使得它广泛应用于食品加工中。

本文将对大豆浓缩磷脂脂肪酶的原理、制备和应用进行详细阐述。

一、原理大豆浓缩磷脂脂肪酶的作用机理是通过加速脂肪酯的水解来切断脂肪酯中的酯键，将其分解成脂肪酸和甘油。

该酶能够降低油脂的粘度和黏度，使得其更易于加工、储藏和消化。

二、制备制备大豆浓缩磷脂脂肪酶的方法通常有两种：自然提取法和化学法。

自然提取法是指将生物物质（如大豆）通过物理、化学等手段在液体中提取目标酶的方法。

该方法主要包括超声波提取法、微波辅助提取法、超临界流体提取法等。

而化学法则是指用化学手段从生物体中提取目标物质的方法。

该方法主要分为溶解法、萃取法和分离法等。

无论哪种方法，最终都需要将提取得到的酶浓缩纯化，以提高其纯度和活性。

其中，超滤、离子交换层析和逆流层析是常用的纯化方法。

三、应用大豆浓缩磷脂脂肪酶的应用广泛，主要包括以下几个方面：1. 食品加工大豆浓缩磷脂脂肪酶可以用于食品加工中，如蛋糕、饼干、巧克力等。

添加适量的酶能够改善食品的表观质量、口感和储藏性，降低消费者对味精、糖和盐等食品添加剂的需求。

2. 转化生产大豆浓缩磷脂脂肪酶可以在工业上进行磷脂的加工，将其转化成其他有用的产物，如磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰卵磷脂等。

这些产物广泛应用于医药、农业、动物饲料等领域。

3. 生物技术大豆浓缩磷脂脂肪酶在生物技术领域也有广泛应用。

它可以用于蛋白质测序、蛋白质纯化和重组蛋白的表达等方面。

此外，该酶还可以用于生物传感器、检验检测等领域。

总之，大豆浓缩磷脂脂肪酶作为一种常用的食品添加剂，具有广泛的应用前景和市场潜力。

未来，随着科技的发展和研究的深入，大豆浓缩磷脂脂肪酶的应用范围还将不断扩大，为人们的健康和生活带来更多的便利和好处。

磷脂酶A1(Lecitase Ultra)水解磷脂酰胆碱的动力学方程和热力学研究

ｏＣ）中加热，通过机械搅拌混匀（转速４５０ｒ／ｍｉｎ，均质２０ｍｉｎ），然后添加０．５ｇ无水ＣａＣ１２和４７５０Ｕ的ＬｅｃｉｔａｓｅＵｌｔｒａ进行反应。反应５ｍｉｎ，停止搅拌快速取样２ｍＬ（５ｍＬ的移液枪从反应液的中部快速取样），添加９５％乙醇１ｍＬ终止反应，在８Ｏ℃进行真空浓缩去水，然后溶于２ｍＬ氯仿：甲醇（２：１，：Ｖ），再用漩涡振荡器进行混合，在１００００ｒ／ｍｉｎ的离心机上离心，取上清液在一２０ｃＩ＝下保存，最后进行ＨＰＬＣ—ＥＬＳＤ分析。１．２．２ＬｅｃｉｔａｓｅＵｌｔｒａ催化水解反应初速度
１．１材料１．１．１原料与试剂
食品级大豆粉末磷脂（磷脂质量分数９６％，主要成分２０％ＰＣ，１５％ＰＥ，２０％ＰＩ，５％ＰＡ）：天津市博帅工贸有限公司；ＰＣ（９９％）和Ｌ—Ｏｔ—ＧＰＣ（９９％）标准品：Ｓｉｇｍａ公司（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）；ＬｅｃｉｔａｓｅＵｌ— ｔｒａ（酶活力９５００Ｕ／ｍＬ）：ＮｏｖｏｚｙｍｅｓＡ／Ｓ；ＣａＣＩ２（分析纯）、乙腈（色谱纯）和醋酸铵（色谱纯）：国药集团化学试剂有限公司；试验用水为Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ超纯水（１８．２Ｍｆｔ·ｃｍ，ＴＯＣ：３ｇ／ｍＥ）；其他试剂均为分析纯。１．１．２仪器
基金项目：国家自然科学基金（３１３０１５０２），河南省农业科学院优秀青年科技基金（２０１３ＹＱ２５）

磷脂酶A_1用于大豆油酶法脱胶技术的研究

Study on enzyme catalyzed degum m ing of soybean oil by a phospholipase A 1
PAN M ing - zhe1 , CHA IY u - hua1 , D U Peng2, 3
(11Chengdong College of Northeast A gricultural U niversity, Harbin 150030, China; 21Food College of Northeast Agricultural U niversity, Harbin 150030, China)
1 材料与方法
111 材料与仪器
收稿日期 : 2007- 10- 19 3 通讯联系人作者简介 :潘明喆 (1979- ) ,男 ,助教 ,研究方向 :食品科学与工程。
水化大豆毛油哈尔滨惠民食品有限公司提供 ;磷脂酶 A1 (L ec ita se U ltra) Novozym e公司提供 , 实验时实测酶活力为 8620 IU / g; 氢氧化钠、盐酸、硫酸、氧化锌、硫酸联氨、钼酸钠、磷酸二氢钾、柠檬酸等试剂均为市售分析纯。
220 2008年第 05期
图 3 反应温度与磷含量的关系
214 pH 对脱胶效果的影响
在酶浓度为 0104% , 温度 50℃的条件下 , 加入 011mo l /L Ca2 + 溶液 50μL 和一定量的去离子水 ,使该体系中的含水量达到 1% ,反应时间 180m in,分别在 pH 410、413、416、419、512、515、518时 ,进行脱胶实验 ,测定样品中含磷量。由图 4 可知 , pH 对脱胶效果有明显影响。pH 为 419、512 时 ,达到较好的效果 ,脱胶后油脂中含磷量分别为 813、819m g / kg,达到油脂精炼的要求 ; pH 为 416 时 , 也能达到一定的脱胶效果 ; 而 pH < 410 和 pH > 518 时 ,油脂的脱胶效果很不理想 ; 而 pH 在 419～512范围时 , L ecitase U ltra酶具有较高的活力 ,本实验选用柠檬酸 - N aOH 缓冲液。

大豆溶血磷脂的制备及其生物安全性分析

Henan University of Technology，Zhengzhou 450001，China）
Abstract： Soybean lysophospholipids are modified phosphatides of losing a fatty acid group in the original
had hemolytic phenomena，and their hemolysis rates at 200 μg / mL were less than 5% ，which could be
considered as biosafety． The cell survival rates were all higher than 80% when soybean phospholipids
摘要：大豆溶血磷脂是原有大豆磷脂结构中失去一个脂肪酸基团的改性磷脂的统称，较大豆磷脂增强了亲水性和抗氧化性，被广泛地用于医药、食品和畜牧业。采用磷脂酶 A1 对大豆磷脂进行改性，以水解率和红外光谱检测其改性程度，以溶血试验和细胞毒性试验检测其生物安全性。结果表明：采用磷脂酶 A1 在 60 ℃ 、40% 大豆磷脂－水的体系中酶解大豆磷脂所制备的大豆溶血磷脂，纯化后为棕色、块状物质且无明显豆腥味；其水解率为 101． 6% ；大豆溶血磷脂中双键和酰胺键的吸收峰明显低于大豆磷脂；大豆溶血磷脂和大豆磷脂均有溶血现象，且二者在 200 μg / mL 以下溶血率均低于 5% ，视为生物安全；大豆溶血磷脂在 20 μg / mL、大豆磷脂在 50 μg / mL 以下时，Caco － 2 细胞的存活率均高于 80% 。综上，采用磷脂酶 A1 制备的大豆溶血磷脂，在一定质量浓度下使用，具备生物安全性。关键词：大豆磷脂；磷脂酶 A1；大豆溶血磷脂；溶血性；细胞毒性中图分类号： TQ645． 9 + 6；Ｒ318 文献标识码： A 文章编号： 1003 － 7969（ 2019） 06 － 0124 － 05

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ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）程序对２６个实验点的响应值进行回归分析。２结果与讨论２．１原料磷脂的理化指标对原料大豆磷脂进行常规理化分析，得结果如下：
表１理化指标酸值（ＫＯＨｍｇ／ｋｇ）过氧化值（ｍｇｑ／ｋｇ）水分（％）乙醚不溶物（％）丙酮不溶物（％）碘值的测定大豆浓缩磷脂的理化指标大豆浓缩磷脂
１３６
论文选集
中国粮油学会油脂专业分会第十四届学术年会
【１５】赵锡武．蔗糖脂肪酸酯的制备及用途【Ｊ】．广西化工，１９９６，２５（２）：３６－３８．
【１６１黄恩才，刘先桥，刘诗飞，等．蔗糖酯合成的动力学研究［Ｊ】．郑州工业大学学报，２０００，２１（４）：４－６．【１７】冯光炷，谢文磊，卫延安．合成松香酸蔗糖酯的研究【Ｊ】．精细化工，１９９８，１５（２）－４—６．［１８】王芬，马烽，等．由天然油脂棕榈油合成蔗糖酯的
１９．１
１．１８
０．１６１．００５５７．０
９８．７４
电热真空干燥箱ＤＺＧ枷ｌ型：天津天宇机电有
限公司；恒温磁力搅拌器８１—２型：上海司乐仪器厂；电子天平ＢＳ－２２４Ｓ型：北京赛多利斯仪器系统有限公司；气相色谱仪ＧＣｌ１２Ａ：上海精密仪器厂。１．３分析方法大豆磷脂水解程度的测定：把浓缩磷脂混入不同ｐＨ值的柠檬酸一柠檬酸钠缓冲溶液中配成不同浓度的反应液，加入一定量的酶液在设定的温度下反应。反应一段时间，将产物脱溶测酸值。大豆磷脂水解前后脂肪酸组成的测定：采用气相色谱法对水解前后大豆磷脂脂肪酸组成进行分析。气相色谱分析前，先制备脂肪酸甲酯；测定条件为气相色谱仪ＧＣｌｌ２Ａ型；检测器：氢火焰离子化检测器（ＦＩＤ）；毛细管柱：ＰＥＧ一２０Ｍ交联毛细管柱为２５ｍｘ０．３３ｍｍ；膜厚０．５ｕｍ；温度：检测器（２５０℃）、进样口（２４０。Ｃ）、柱温（１７５℃）；载气（氮气）流速：３２ｍｌＪ
ｍｅｔｈｏｄｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｓｏｌｖｅｎｔｍｅｔｈｏｄ，ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ｅｔｃ．ｗｅｒｅｉｎｔｒｏ—
ｗ－ａｓ
ｄｕｃｅｄ．ＴｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＳｕｃｒｏｓｅｆａｔｔｙ．ａｃｉｄＥｓｔｅｒ
研究叨．郑州工业大学学报，１９９９，２０（１）：６６—６８．
［１９】赵裕蓉等．生物法制蔗糖酯～生物表面活性剂［Ｊ】．北京
化工大学学报，１９９６，２３（４）：６—１０．【２０］谢得明，郑建仙，高大维．蔗糖酯的脂肪酶法合成【Ｊ】．食品工业，１９９８，（３）：２３—２４．【２ｌ】易封萍，李伟光，梁智群．蔗糖酯的合成研究咖．广西大学学报（自然科学版），１９９６，２１（４）：３３８—３４０．
表２响应面试验数据表
羹兰序号
ｌ
温度
（℃）
４７５７
时间（ｈ）
４４６
加酶量ｐＨ值 ”１４
（％）
２．４
ＰＬｓ，溶液（ｇ，ｍＬ）
图１
溶血磷脂分子式，Ｘ基团常见的有胆碱、
ＰＬｓ／溶液５因素共２６个实验点（５个中心点）的响应面分析实验，运用ＳＡＳＲＳＲＥＧ（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ
ｓｕｒｆａｃｅ
乙醇胺、丝氨酸、肌醇等。Ｒ是脂肪酸基团。
１材料与方法１．１主要原料与试剂大豆浓缩磷脂：市售；磷脂酶Ａｌ（ＬｅｃｔｉａｓｅＵｌｔｒａ）：丹麦ＮｏＶｏ公司；柠檬酸、柠檬酸钠、石油醚、无水乙醇、正己烷、氢氧化钾试剂均为分析纯；邻苯二甲酸氢钾为基准试剂。１．２主要仪器设备水浴恒温振荡器ＳＨＡ—Ｃ型：巩义市英峪予华仪器厂；旋转蒸发器ＲＥ５２－９８型：上海亚荣升华仪器厂；
溶液试验点为：１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％；其它
固定条件：Ｔ：５２ｃｃ、ｔ：６ｈ、加酶量３．６％、ｐＨ值５．０，反应的总体积为２０ＩＩｌｌ的缓冲溶液。由图可看出随着
中国粮油学会油脂专业分会第十四届学术年会
论文选集２．４大豆磷脂水解前后脂肪酸组成的测定
酸值
（Ａｖ）
６２．３
１３９
测６０澎５０
４００．００％２．００％４．００％６．００％８．００％
加酶量（酶／磷脂）图２－３加酶量对酸值的影响２．２．４
二，是零点，为区域的中心点，零点实验重复５次，用以估计试验误差，以酸值为响应值。经回归拟合后，各实验因子对响应值的影响可用下面的函数表示：
ｐＨ值对反应的影响
固定其它四个因素：
ｍｉｎ；
２．２单因素试验
２．２．１
温度对反应的影响
在本次试验中固定其
它因素：ｔ：６ｈ、Ｌｄ：３．６％、ｐＨ值：５．０、ＰＬｓ／溶液：２５％，反应总体积２０ｍＬ缓冲溶液，考察温度对反应的影响。由图可知温度从４４℃到５２℃时，酸值呈上升；当温度由５２℃到６０℃时，酸值几乎随温度上升呈下降；温度对酶反应是很重要的因素，每一种酶都存在最佳反应温度段，所以在温度变化的初始阶段，随温度升高酸值增加，最终达到其最佳反应温度，随后升高温度引起酶失活，从而导致酸值随温度升高而降低。
磷脂酶Ａ，水解磷脂分子中１位酯键，得到溶血磷脂和脂肪酸。溶血磷脂分子式见图１。用磷脂酶Ａ－水解浓缩磷脂制备溶血磷脂是界面反应，浓缩磷脂在水中较难分散，而磷脂酶Ａ。溶解于水中，磷脂酶Ａ－并不和单个的磷脂分子结合，对其进行水解。只有当磷脂在水中的浓度超过临界胶束浓度（ＣＭＣ）时，磷脂在水中形成单层（ｍｏｎｏｌａｙｅｒ）或双层（ｂｉｌａｙｅｒ）的胶束。磷脂酶Ａ，游离到胶束和水的界面，酶的活性部位和磷脂胶束结合，发生水解，反应中不需要金属离子的参与。反应界面的大小直接影响到反应的速度和水解的程度【４】。由于磷脂不同部位的脂肪酸
Ｅｖ＝６４．４６—１２．５９Ａ＋６．５８Ｂ－３．７０Ｃ一７．０７Ｄ一２２．４４Ｅ一１１．３５Ａ２—５．５９８２＋７．２３Ｃ２—０．７Ｄ２一１．５ｌＥ２—１９．９８ＡＢ一９．７３ＡＣ一
Ｔ：５２℃、ｔ：６ｈ、Ｌｄ：３．６％、ＰＬ√溶液：２５％，反应总体积２０ｍＬ缓冲溶液，考察ｐＨ值对酶水解的影响。在此反应系统中，＇ｐＨ值作为主要因素之一，酶一般都有最适ｐＨ值，在该条件下酶的活性最大，其催化能力也强。由图可看出酸值随ｐＨ值的变化趋势。ｐＨ值从４．２到５．０时，酸值呈上升趋势。而５．０到５．８这一过程中，酸值呈下降趋势。２．２．５磷脂与溶剂比对反应的影响本次试验ＰＬｓ，
ｆａｔｔｙａｃｉｄｅｓｔｅｒ；Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ；Ｐｒｏｇｒｅｓｓ
磷脂酶Ａ，水解大豆浓缩磷脂的研究
管伟举，谷克仁，李永端
（河南工业大学化学化工学院，４５００５２郑州市）
摘要：本试验进行了磷脂酶Ａ，水解大豆浓缩磷脂，利用响应面实验的方法，得到磷脂酶Ａ，水解大豆磷脂最佳工艺条件为：反应温度５１０Ｃ、反应时间６ｈ、加酶量３．６％、ｐＨ值５．０、底物浓度０．２５９／ｍＥ。利用气相色谱，分析了水解前后磷脂的脂肪酸组成。关键词：磷脂；磷脂酶Ａ，；溶血磷脂；酶法改性
７０
６５
诣
４５４０４０４５５０５５６０６５
氢气流速：５０ｍＬ／ｍｉｎ；空气流速：５００ｍＬ／ｍｉｎ；进样量：１／＿ＬＬ；灵敏度：１０９；分流比：１：５０。脂肪酸含量用面积归一法求得。
温度（℃）图２一ｌ温度对酸值的影响
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论文选集固定其它四个因素：Ｔ：
中国粮油学会油脂专业分会第十四届学术年会
ＣＨ２——０Ｈ
Ｌｄ、ｐＨ值、磷脂与溶液比ＰＬｓ／溶液５个可能影响磷脂酶Ａ－水解浓缩磷脂的因素做单因素实验，以确定
Ｏ
Ｒ—Ｃ—Ｏ—ｃＨ
ＩＩ
相关因素及各因素的合适范围。１．４．２响应面实验根据参考文献［５－７１及单因素实
ｃＨ２一Ｏ—Ｐ——ｘ
ｏＨ
｜｜
验结果，选择对有影响的因素，采用响应面设计实验做温度Ｔ、时间ｔ、加酶量Ｌｄ、ｐＨ值、磷脂与溶液比
２．２．２时间对反应的影响
ＰＬｓ／溶液的增大，水解产物的酸值也显著增加；而当
５２℃、Ｌｄ：３．６％、ｐＨ值：５．０、ＰＬ／溶液：２５％，反应总体积２０ｍＬ缓冲溶液，考察时间对酶水解的影响。从图表可以看出时间对酸值的影响比较显著，２ｈ到６ｈ随时间的延长酸值增加。因增加反应时间，酶不断水解，产生的脂肪酸增多，所以酸值随之升高。但６ｈ后反应趋于平衡，再延长时间酸值基本不变。
ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｆｔｈｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＳｕｃｒｏｓｅｆａｔｔｙａｃｉｄＥｓｔｅｒ
Ｌｉ
Ｆａｓｏｎｇ，ＭａＸｕｅｐｉｎｇ，Ｆｅｎｇ
ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ
Ｇｕａｎｇｚｈｕ，ＬｉＨｅｐｉｎｇ，ＬｕＫｕｉ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５００５２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ
７０
整６０
５０１０％２０％３０％４０％５０％
底物浓度（ｇ，ｒｎＵ图２－５底物浓度对酸值的影响
２．３响应面实验选择温度、时间、加酶量、ｐＨ值、磷脂与溶液比５个因素，做５因素２６个实验点（５个中心点）的响应面分析实验．实验数据及方差分析见表２，表３。２６个实验点分成两类：其一，析因点，自变量取值在各因素取值构成的三维顶点，共有２１个析因点；其
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ＰＬ／溶液达到３０％后酸值几乎不在增加；到ＰＵ溶
液为３０％以后，酸值随着ＰＬ／溶剂的增加而降低，最后趋于平衡。磷脂酶的水解反应是一界面反应。当磷酯浓度低时，磷脂能较好的分散于水中，当底物浓度大时磷脂形成胶束。很难分散。磷脂较难与酶接触，导致反应程度降低。
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ｊ四６５
器６０
５５Ｏ５时ｌＨＪ（ｈ）１０１５