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实训二大豆磷脂的提取、分析及卵磷脂咀嚼片的的制备与检验大豆磷脂的提取及含量测定一、试剂与仪器1、试剂⑴氯化锌溶液：精确称取氯化锌6.86g，定容于500ml容量瓶中。
⑵大豆市售⑶无水乙醇------10瓶⑷磁力搅拌器⑸对苯二酚溶液：取对苯二酚0.5g，加水适量使溶解，加硫酸1滴，加水稀释成100ml。
⑹钼酸铵硫酸试液：取钼酸铵2.5g，加硫酸15ml，加水使溶解成100ml，即得。
本液配制后两周即不适用。
⑺亚硫酸钠试液：取无水亚硫酸钠20g，加水100ml使溶解，即得。
本液应临用新制。
⑻磷酸二氢钾⑼浓硫酸⑽过氧化氢⑾石油醚、⑿氯仿、甲醇、冰乙酸⒀20％硫酸铵⒁羧甲基纤维素钠⒂硅胶GF254⒃载玻片2、仪器凯氏烧瓶，恒温水浴锅，滤纸；电热恒温鼓风干燥箱；电热套，天平，分光光度计，刻度比色管，硅胶G板，抽滤装置二、实验操作㈠、大豆磷脂的提取及含量测定1、5斤大豆用粉碎机粉碎得大豆粉2、卵磷脂的提取⑴称取一定质量的大豆粉末，加入一定体积95%的乙醇，置于不同温度的水浴锅内，一定时间后取出，减压过滤。
见下表料液比1:201:201:151:151:151:101:101:201:10提取时间2.51.52.521.52.51.522提取温度354040354545354540氯化锌101551510155510(2)试验步骤：将溶有卵磷脂的乙醇溶液置于磁力搅拌器下，一边搅拌一边加入一定量ZnCl2溶液，继续搅拌20min;取出，减压过滤，并将滤液置于蒸发皿上蒸干;取出产品进行定性检测。
㈡磷含量测定标准溶液的制备：取105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾约0.13g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取10ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，每1ml中含磷（P)约为30ug。
样品溶液的制备：取本品约0.15g，精密称定，置凯氏烧瓶中,加硫酸20ml 与硝酸50ml，缓缓加热至溶液呈淡黄色，小心滴加过氧化氢溶液，使溶液褪色，继续加热30分钟，冷却后，转移至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
大豆软磷脂的实验原理是大豆软磷脂是一种重要的磷脂，广泛存在于植物和动物细胞膜中。
它是由甘油、脂肪酸和磷酸酯化的酯类化合物组成。
大豆软磷脂可以通过萃取和分离纯化得到，并且具有多种生物活性和应用价值。
本文将探讨大豆软磷脂的实验原理。
首先，大豆软磷脂的实验原理可以从萃取方法着手。
常用的大豆软磷脂的萃取方法有溶剂萃取法和超临界流体萃取法。
其中，溶剂萃取法是将研磨后的大豆产物与合适的溶剂进行搅拌和浸泡，提取大豆软磷脂。
超临界流体萃取法则是利用高压和高温的超临界流体对大豆进行萃取。
这两种方法的原理都是利用合适的物质从大豆中分离出软磷脂。
其次，得到大豆软磷脂后，可以通过净化和分离来获得纯度较高的大豆软磷脂。
一种常用的方法是使用薄层色谱，根据大豆软磷脂的不同成分之间的分离度差异，通过将大豆软磷脂样品在特定的固定相和流动相条件下进行分离。
另外，也可以使用柱层析和逆向高效液相色谱等方法。
这些方法的原理都是根据大豆软磷脂样品的特性和分子结构进行选择合适的分离方法。
大豆软磷脂的分离纯化后，可以进行一系列的化学和生化分析，以研究和评价其生物活性和应用价值。
例如，可以使用质谱和核磁共振等技术对大豆软磷脂进行结构分析和成分鉴定。
同时，也可以测定大豆软磷脂的理化性质，如溶解度、表面活性和氧化稳定性等。
这些分析方法的原理都是利用大豆软磷脂样品的特性和性质来测定和验证其结构和功能。
此外，大豆软磷脂还可以通过酶解和改性等方法进行进一步的处理和利用。
酶解是指利用酶对大豆软磷脂进行水解，产生磷脂酰胆碱和磷脂酸等产物，以改善大豆软磷脂的适应性和功能性。
改性则是指通过化学反应，如酯化、酰化和磷酸化等方法，对大豆软磷脂的结构进行改变，以提高其稳定性和活性。
最后，值得注意的是，大豆软磷脂的实验原理需要结合具体的实验目的和方法来考量。
根据不同的实验需求，可以选择不同的实验原理和方法。
例如，如果研究大豆软磷脂的抗氧化性能，可以采用氧化反应和抗氧化指标等方法。
从大豆中提取卵磷脂通常有化学法“丙酮提取法”和物理法“低温超滤法”。
丙酮提取法：是指利用含有卵磷脂的大豆油能够溶于化学溶剂丙酮的原理，在卵磷脂原料中不断的加入丙酮，逐步将大豆油去掉，从而留下卵磷脂。
此方法卵磷脂的提取效率较高，工艺成熟，因此成本较低，是大部分卵磷脂产品采用的生产方法，但是因生产过程中使用有机溶剂，因此卵磷脂中会有化学溶剂丙酮的残留，并且大豆中天然的植物香味和色素也会被丙酮一同除去，所以产品颜色较白，气味较淡。
低温超滤法：是指利用卵磷脂分子体积大于大豆油的原理，在低温、高压状态下将大豆油用分子筛过滤，使得分子体积较小的大豆油通过滤网，而留下分子体积较大的卵磷脂。
此方法工艺要求高、产量较低，因此成本较高，但因使用物理方法生产，因此无化学溶剂残留，并且较好的保留了大豆中天然的香味和颜色，因此产品颜色较鲜艳、豆香味明显。
一、实验目的1. 了解卵磷脂的化学组成和生物学功能。
2. 掌握卵磷脂的提取方法和实验步骤。
3. 学会使用各种实验仪器，如离心机、紫外分光光度计等。
4. 鉴定提取的卵磷脂纯度。
二、实验原理卵磷脂是一种甘油磷脂，由甘油、脂肪酸、磷酸和胆碱等组成。
卵磷脂具有多种生物学功能，如降低血液胆固醇、改善记忆力、增强大脑活力等。
本实验采用乙醇-乙醚混合溶剂提取蛋黄中的卵磷脂，通过离心分离、乙醇洗涤和丙酮沉淀等步骤，得到高纯度的卵磷脂。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、95%乙醇、乙醚、丙酮、氢氧化钠、钼酸铵、硫酸氢钾、溴的四氯化碳溶液、紫外分光光度计、离心机、烧杯、漏斗、蒸发皿、试管等。
2. 实验试剂：无水乙醇、乙醚、丙酮、氢氧化钠、钼酸铵、硫酸氢钾、溴的四氯化碳溶液等。
四、实验步骤1. 卵磷脂的提取（1）称取约10g新鲜鸡蛋蛋黄，加入30mL温热的95%乙醇，边加边搅拌均匀。
（2）将混合液冷却至室温，用漏斗过滤，收集滤液。
（3）将滤液置于蒸发皿中，水浴加热蒸干，得到卵磷脂粗制品。
2. 卵磷脂的纯化（1）将蒸干的卵磷脂加入适量乙醚，溶解后过滤。
（2）将滤液置于蒸发皿中，水浴加热蒸干，得到卵磷脂纯制品。
3. 卵磷脂的鉴定（1）三甲胺的检验：取少量卵磷脂，加入2～5mL氢氧化钠溶液，水浴加热15min，观察红色石蕊试纸是否变蓝，并嗅其气味。
（2）不饱和性检验：取少量卵磷脂，加入3%溴的四氯化碳溶液，振摇观察是否褪色。
（3）磷酸的检验：取少量卵磷脂，加入5～10滴95%乙醇溶液和5～10滴钼酸铵试剂，水浴加热5～10min，观察是否产生蓝色沉淀。
（4）甘油的检验：取少量卵磷脂，加入0.2g硫酸氢钾，小火加热，观察是否有水蒸气放出，嗅其气味。
五、实验结果与分析1. 卵磷脂的提取通过实验，成功从蛋黄中提取出卵磷脂，得到白色蜡状物质。
2. 卵磷脂的纯化经过乙醇洗涤和丙酮沉淀，得到高纯度的卵磷脂。
3. 卵磷脂的鉴定通过三甲胺、不饱和性、磷酸和甘油的检验，验证了提取的卵磷脂纯度较高。
大豆精制油中磷脂的提取与纯化技术研究磷脂是一种重要的生物活性物质，在食品、医药、化妆品等多个领域起着关键作用。
大豆油是一种重要的植物油，其中含有丰富的磷脂。
因此，研究大豆精制油中磷脂的提取与纯化技术对于提高油品质量、开发油品的功能性和增加经济效益具有重要意义。
一、磷脂的提取技术1. 溶剂提取法溶剂提取法是目前较常用的磷脂提取技术之一。
该方法利用有机溶剂与大豆油中的磷脂发生化学反应，将其从油中分离出来。
主要的有机溶剂包括乙醇、丙酮、正己烷等。
溶剂提取法的优点是操作简单、提取效率高。
但是，溶剂的选择和回收对环境造成一定的污染，并且溶剂回收成本较高。
2. 超临界流体萃取法超临界流体萃取法是一种环保的磷脂提取技术，它利用具有较高温度和较高压力的超临界流体作为萃取剂。
超临界流体萃取法可以在较温和的条件下实现对磷脂的高效提取，并且不会对环境造成污染。
然而，超临界流体萃取设备的成本较高，限制了该技术的应用。
二、磷脂的纯化技术1. 沉淀法沉淀法是一种常用的磷脂纯化技术，该方法通过控制油中磷脂的溶解度，使其在特定条件下沉淀出来。
常用的沉淀法包括酸化法、碱沉淀法等。
沉淀法操作简单，成本低廉。
但是，沉淀法的纯化效果较差，容易产生色泽变黑等问题。
2. 膜分离技术膜分离技术是一种在较低温度和不需要添加化学试剂的情况下实现磷脂纯化的方法。
常用的膜分离技术包括超滤、微滤和逆渗透等。
膜分离技术的优点是操作简单、无污染、无需添加化学试剂，纯化效果较好。
然而，膜分离技术对膜的选择和膜的阻垢等问题仍然存在挑战。
三、磷脂的应用前景随着人们对健康的关注度增加，磷脂在食品、医药、化妆品等领域的应用前景日益广泛。
在食品工业中，磷脂可以在面包、饼干、乳制品等食品的加工中作为乳化剂和稳定剂使用，能够改善食品的质感和延长保质期。
在医药领域，磷脂可以用于制备肝素钠、磷脂酰胆碱等药物，具有良好的药学性能。
此外，磷脂还可以用于生产高级化妆品，起到润肤、抗衰老等作用。
大豆种子DNA 快速提取方法的改良及应用收稿日期：2009-03-17基金项目：国家“863”高新技术研究发展计划项目（2006AA100104和2007AA10Z193）；黑龙江省科技厅重大攻关项目（GA06B103）；东北农业大学创新团队项目（CXT004）作者简介：朱振雷（1984-），男，山东人，硕士研究生，研究方向为植物基因工程与分子生物学。
E-mail:zhuzhenlei390826@ *通讯作者：朱延明，教授，博士生导师，研究方向为植物基因工程与分子生物学。
E-mail:ymzhu2001@朱振雷，束永俊，李勇，柏锡，才华，纪巍，朱延明*（东北农业大学生命科学学院，哈尔滨150030）摘要：高质量的DNA 是进行基因克隆等分子生物学试验的前提条件。
因大豆种子中蛋白质和油脂含量丰富，利用传统方法提取DNA 质量很难达到试验要求。
研究在SDS 提取液的基础上，通过添加表面活性剂NP-40和Tween-20，优化出一种适合于大豆种子DNA 快速提取的方法。
优化后的SDS 方法提取的DNA 质量较高，OD 260/OD 280在1.809～1.916之间，无蛋白质和RNA 污染。
对该方法提取的DNA 进行了基因克隆和分子标记的试验验证，结果表明，它们能够用于大豆基因克隆、分子标记。
关键词：大豆种子；DNA 提取；SDS ；基因克隆；分子标记中图分类号：S565.1文献标识码：A文章编号：1005-9369（2009）10－0060－04Improvement and application of the rapid DNA extraction method fromsoybean seeds/ZHU Zhenlei,SHU Yongjun,LI Yong,BAI Xi,CAI Hua,JI Wei,ZHU Yanming(College of Life Sciences,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China)Abstract:High-quality DNA is an important base of molecular biology manipulation,such as genecloning.There are lots of protein and fat in the soybean seeds,so the DNA extracted from them by using traditional methods is very difficult to achieve quality requirements of experiments.This study improved the SDS extraction buffer by adding NP-40and Tween-20,and established a rapid DNA extraction method that is suitable for soybean seeds.The DNA extraction by the optimized SDS extraction method has high-quality,and the values of OD 260/OD 280ranged from 1.809to 1.916,that means non-protein and RNA pollution.The DNA extraction method was validated by gene cloning and genotyping,and the results showed that it could be used for soybean gene cloning and molecular markers.Key words:soybean seeds;DNA extraction;SDS;gene cloning;molecular marker 大豆是世界上重要的经济与粮食作物，是人类食用油和植物蛋白的主要来源之一，全球对大豆的需求量持续增加。
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