鸡新城疫灭活疫苗的制备

鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗（N7a株+SZ株）说明书【兽药名称】通用名鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗（N7a株+SZ株）商品名无英文名Newcastle Disease and Avian Influenza（Subtype H9）Vaccine, Inactivated（Strain N7a+Strain SZ）汉语拼音Ji Xinchengyi Qinliugan（H9 Yaxing）Erlian Miehuoyimiao（N7a Zhu+SZ Zhu）【主要成分与含量】疫苗中含有灭活的鸡新城疫病毒N7a株，灭活前病毒含量≥108.6 EID50/0.1ml；含有灭活的禽流感（H9亚型）病毒SZ株，灭活前病毒含量≥108.5 EID50/0.1ml。

【性状】乳白色均匀乳剂。

【作用与用途】用于预防鸡新城疫和H9亚型禽流感。

免后21日可产生免疫力，免疫期为6个月。

【用法与用量】皮下或肌肉注射。

7～28日龄鸡，每只0.15ml；28日龄以上鸡，每只0.3ml。

【注意事项】（1）仅用于接种健康鸡。

（2）使用前应使疫苗恢复至室温。

（3）使用前和使用中应充分摇匀。

（4）疫苗开启后，限当日用完。

（5）本品严禁冻结，破乳后切勿使用。

（6）屠宰前28日内禁止使用。

（7）接种工作完毕，双手应立即洗净并消毒，用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。

【规格】（1）100ml/瓶（2）250ml/瓶（3）300ml/瓶（4）500ml/瓶【包装】【贮藏与有效期】2～8℃保存，有效期为18个月。

【批准文号】【生产企业】仅在兽医指导下使用。

鸡新城疫灭活疫苗乳化操作规程1、水相配制鸡新城疫Lasota株病毒液 90000ml（高效价）鸡新城疫158株病毒液 35000ml吐温-80 5500ml 121℃高压蒸汽灭菌后备用将吐温-80缓慢加入胚液中，边加边搅拌，用约20分钟将吐温-80加完，加完后再搅拌20分钟。

2、油相配制白油 25万ml司本 2.1万ml(8%)白油加热到116℃-118℃，保持20分钟后，缓慢加入司本，边加边搅拌，加完后继续搅拌20分钟，然后通冷水降温。

3、乳化打开阀门将水相缓慢加入到油相中，开启批次乳化机边加边搅拌，用时约20分钟加完。

加完后继续初步乳化20分钟。

初步乳化完成后，打开阀门并开启连续乳化机进行自循环乳化30分钟，然后通过连续乳化机，从A罐导入B罐，由B罐导入A，再由罐A罐导入B罐，乳化结束准备分装。

鸡新城疫-禽流感二联灭活疫苗乳化配苗生产规程一、配苗4、水相配制鸡新城疫Lasota株病毒液 9万ml（高效价）禽流感WD株病毒液 7万ml吐温-80 6400ml 121℃高压蒸汽灭菌后备用将吐温-80缓慢加入胚液中，边加边搅拌，用约20分钟将吐温-80加完，加完后再搅拌20分钟。

5、油相配制白油 24万ml司本 1.9万ml(8%)白油加热到116℃-118℃，保持20分钟后，缓慢加入司本，边加边搅拌，加完后继续搅拌20分钟，然后通冷水降温。

6、乳化打开阀门将水相缓慢加入到油相中，开启批次乳化机边加边搅拌，用时约20分钟加完。

加完后继续初步乳化20分钟。

初步乳化完成后，打开阀门并开启连续乳化机进行自循环乳化30分钟，然后通过连续乳化机，从A罐导入B罐，由B罐导入A，再由罐A罐导入B罐，乳化结束准备分装。

实验二鸡新城疫弱毒疫苗的制备新城疫又称亚洲鸡瘟，是由新城疫病毒引起的鸡的一种高度接触性传染病，其主要特征为呼吸困难、腹泻、神经紊乱及黏膜和浆膜出血，一年四季均可发生，为我国养鸡业的头号疾病。

预防和治疗所用的新城疫疫苗种类很多，大致包括灭活疫苗和弱毒疫苗两类。

下面以新城疫弱毒疫苗为例讲述其制备过程。

一、目的与要求1．掌握鸡新城疫弱毒疫苗的制备方法。

2．熟悉鸡新城疫弱毒疫苗制备的操作过程。

二、材料与试剂材料：种蛋、鸡胚孵化箱、冰箱、无菌操作台、手术镊子、注射器、蜡烛、酒精灯、酒精棉和碘酊等。

试剂：灭菌PBS液/生理盐水；青、链霉素溶液。

三、制备前准备1、种毒的选择：种毒属于弱毒力毒株，包括HB1株、F株、LaSota 株、LaSota-Clone30和N79株。

必须符合：①种毒对鸡胚的毒力。

以10倍稀释的种毒0.1ml尿囊腔接种10日龄鸡胚，鸡胚应于接种后24-120h内死亡70%以上，胎儿有明显病变，血凝价在1：640以上，胎儿有明显病变，血凝价在1：640以上。

②种毒对1月龄雏鸡滴鼻免疫的最小免疫量应不大于10-3/1滴。

③种毒对10日龄鸡胚半数感染量（EID50）应不大于10-7/0.1ml。

④种毒对初生雏鸡不致病。

2、种毒的稀释：用灭菌PBS液或0.85%生理盐水10-4～10-6稀释种毒，稀释时最好加入适当双抗溶液，并在4℃作用约4小时。

3、鸡胚的选择：最好选用SPF胚、其次选用非免疫胚，再次选用普通胚。

四、操作过程1、将购买的种蛋放于37℃温箱中孵育，加入适量水调节湿度。

2、孵育至9～11日龄时，将鸡胚置于黑暗的环境下，在照蛋器下，可观察到明显的胚体运动、丰富的血管和气室，用铅笔划出接种部位和气室部位。

划线时要尽量避开胚头和血管（尤其是大血管）。

3、将划好的鸡胚置于经紫外线消毒过的超净台中，先用碘酊消毒，再用酒精棉脱碘；4、用手术镊子在标记部位打孔，打孔时要在接种部位和气室各打一孔。

5、用灭菌注射器吸取0.1ml～0.2ml稀释病毒液，经接种孔注入鸡胚尿囊腔中；6、用石蜡先将接种孔封口后，在将气室孔封口；7、做好标记（时间，名称），置37℃温箱中继续孵育，增殖病毒。

鸡新城疫灭活疫苗乳化操作规程1、水相配制鸡新城疫Lasota株病毒液 90000ml（高效价）鸡新城疫158株病毒液 35000ml吐温-80 5500ml 121℃高压蒸汽灭菌后备用将吐温-80缓慢加入胚液中，边加边搅拌，用约20分钟将吐温-80加完，加完后再搅拌20分钟。

2、油相配制白油 25万ml司本 2.1万ml(8%)白油加热到116℃-118℃，保持20分钟后，缓慢加入司本，边加边搅拌，加完后继续搅拌20分钟，然后通冷水降温。

3、乳化打开阀门将水相缓慢加入到油相中，开启批次乳化机边加边搅拌，用时约20分钟加完。

加完后继续初步乳化20分钟。

初步乳化完成后，打开阀门并开启连续乳化机进行自循环乳化30分钟，然后通过连续乳化机，从A罐导入B罐，由B罐导入A，再由罐A罐导入B罐，乳化结束准备分装。

鸡新城疫-禽流感二联灭活疫苗乳化配苗生产规程一、配苗4、水相配制鸡新城疫Lasota株病毒液 9万ml（高效价）禽流感WD株病毒液 7万ml吐温-80 6400ml 121℃高压蒸汽灭菌后备用将吐温-80缓慢加入胚液中，边加边搅拌，用约20分钟将吐温-80加完，加完后再搅拌20分钟。

5、油相配制白油 24万ml司本 1.9万ml(8%)白油加热到116℃-118℃，保持20分钟后，缓慢加入司本，边加边搅拌，加完后继续搅拌20分钟，然后通冷水降温。

6、乳化打开阀门将水相缓慢加入到油相中，开启批次乳化机边加边搅拌，用时约20分钟加完。

加完后继续初步乳化20分钟。

初步乳化完成后，打开阀门并开启连续乳化机进行自循环乳化30分钟，然后通过连续乳化机，从A罐导入B罐，由B罐导入A，再由罐A罐导入B罐，乳化结束准备分装。

生物制品技术实验指导生物工程系目录实验规则⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 2 实验一、猪瘟、口蹄疫抗体间接血凝实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 3 实验二、鸡新城疫灭活疫苗的制备—照蛋及接毒⋯⋯⋯⋯ 4实验三、鸡新城疫灭活疫苗的制备—鸡胚收毒及测效价⋯⋯ 5 实验四、鸡新城疫灭活疫苗的制备—油乳苗的制备⋯⋯⋯⋯ 6实验五、氢氧化铝和蜂胶的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7 实验六、法氏囊炎病高免卵黄抗体的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8 实验七、法氏囊炎病高免卵黄抗体效价的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯9 实验八、兔瘟灭活苗的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10 实验九、大肠杆菌自家灭活疫苗的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11 实验十、动物实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12 实验十一、鸡白痢平板抗原的制备及使用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15 实验十二、免疫血清的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16 实验十二、细菌冷冻真空干燥实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18实验规则实验中所用材料，多具有传染性（如病原微生物、含病原微生物的血、尿、便、痰、脓汁及感染动物等），在实验过程中，必须严肃认真地进行无菌操作，以保证结果准确，防止实验室感染，防止病原微生物污染环境。

必须遵守以下各项。

1、实验前必须预习实验指导书。

若经提问发现没有预习者，须在教师指定的时间内预习完毕，方得参加实验。

、进实验室不得将书包、衣物等放在实验1台上，不必需的物品勿携入室内。

2、实验室内严禁饮食、吸烟及用嘴舔湿铅笔及瓶签，、如发生感染或污染等意外时，应立即报告指导老师，进行紧急处理。

5、保持实验室安静，不得谈笑喧哗，不许搞其他动作，以免影响他人实验。

实验进行时不准随意进出。

实验室中物品未经许可不准带出室外。

6、清洗仪器、用具、材料时，须将固形物倒入指定容器内，不得直接倒入水槽，以免造成水管堵塞。

7、实验过程中，须按操作规程仔细操作，注意观察试验结果，应及时记录。

不得抄写他人的实验实习记录，否则，须重做。

鸡新城疫疫苗种类及其使用方法一、鸡新城疫疫苗种类目前市场上常见的鸡新城疫疫苗主要有灭活疫苗和活疫苗两种。

1.灭活疫苗：灭活疫苗是将鸡新城疫病毒进行体外培养，经过特殊处理使其失去活性，然后注射给鸡只。

这种疫苗具有良好的稳定性和持久的免疫效果，被广泛应用于鸡新城疫疫苗的预防控制中。

2.活疫苗：活疫苗则是将鸡新城疫病毒进行制备、分离和纯化，保留其活性后接种给鸡只。

这种疫苗具有较强的活性和易于制备的特点，但其免疫效果不如灭活疫苗持久。

二、鸡新城疫疫苗的使用方法1.疫苗制备：对于灭活疫苗，需要将疫苗从冻存状态解冻，然后充分均匀摇匀。

对于活疫苗，则需要按照疫苗说明书的要求配制。

2.接种工具准备：接种时需要准备好接种枪、离心管、注射器、消毒液等工具。

确保这些工具已经彻底清洗和消毒，以免引入新的细菌感染。

3.接种操作：在接种前，要先判定羊群或鸡只的免疫状态，确保接种的时机合适。

然后，注射接种者必须保持手和工具的清洁卫生。

将疫苗注射到离心管中，然后用注射器抽取相应的疫苗。

接种时需要密切观察注射器针头的位置，确保将疫苗注射到鸡只的肌肉或皮下组织中，而不是血管内。

如果接种的是活疫苗，还需要注意避免交叉感染，避免污染。

4.接种注意事项：鸡新城疫疫苗需要在规定的温度条件下存储，接种前要检查疫苗是否过期。

在接种后，鸡只需要在观察期内进行观察，并及时处理接种后的不良反应，如发热、食欲减退等。

并且，接种后的鸡只需要根据疫苗的要求进行补种或者加强免疫。

总结：鸡新城疫疫苗种类主要有灭活疫苗和活疫苗两种。

使用方法包括疫苗制备、接种工具准备、接种操作以及接种注意事项。

鸡新城疫疫苗的正确使用可以有效预防和控制鸡新城疫疫情的发生。

shi yan yan jiu我国于1935年发现鸡新城疫，目前在全国范围内仍普遍存在，并且是我国养鸡业危害最大、经济损失最严重的禽病之一。

该病是由新城疫病毒引起的一种主要侵害鸡的急性高度接触传染性疾病。

鸡新城疫疫苗现今应用广泛的是油乳剂灭活疫苗。

而佐剂是一种非特异性免疫增强剂，可增强机体的免疫应答能力或改变免疫应答的类型。

为提高疫苗免疫效果，增强动物机体对疾病的抵抗能力，选择合适的佐剂尤为重要，通过对生物制品企业的调研了解到，目前一些生物制品企业大部分选择进口疫苗，虽然免疫效果相对与国产佐剂疫苗要好，但成本相对较高，影响企业产品在市场上的竞争力。

鸡新城疫疫苗的研究主要集中在不同类型的佐剂疫苗和不同厂家的佐剂疫苗对鸡新城疫疫苗抗体水平的影响，而对国产矿物油佐剂乳化条件优化方面的文章近几年未见报道。

结合实际生产中成本问题和实验室的条件，本研究将新城疫病毒与国产的矿物油佐剂配制鸡新城疫疫苗，并通过调节乳化因素（水相和油相的比例、乳化剂搅拌转数、乳化时间）进行单因素试验，通过理化相关试验确定最佳乳化条件，从而制备出稳定性更高的油乳剂灭活疫苗，从而为生物制品企业提供成本相对较低、免疫效果好、副反应小的油佐剂乳化方案。

1材料与方法1.1材料与设备1.1.1主要材料国产矿物油佐剂司本80（法国梅里亚公司）、摘要：目的：探索出应用国产矿物油佐剂配制鸡新城疫疫苗的最优方案。

方法：将新城疫病毒与国产的矿物油佐剂配制鸡新城疫疫苗，通过调节乳化因素（水相和油相的比例、乳化剂搅拌转数、乳化时间）进行单因素试验制备疫苗，并确定最佳乳化条件，从而制备出稳定性更高的油乳剂灭活疫苗。

结果：鸡新城疫油乳剂灭活疫苗稳定性，受乳化制备中乳化时间、搅拌转数、水相和油相比例的影响。

结论：试验结果表明，最佳的乳化时间是45分钟，最佳的搅拌转数是6000转/分，最佳油相和水相比例为7∶3。

关键词：鸡新城疫；疫苗；乳化因素；稳定性基金项目：大学生科技创新科研项目，吉农院合字［2016］第053号中图分类号：S852.5文献标识码：ADOI 编号：10.14025/ki.jlny.2017.11.020鸡新城疫灭活疫苗乳化工艺优化刘欣愿，王强，杨祥波*（吉林农业科技学院生物工程学院，吉林吉林132101）收获。

专利名称：鸡新城疫、禽流感病毒和禽腺病毒三联灭活疫苗的制备方法
专利类型：发明专利
发明人：张毓金,谢秉超,严悌昆
申请号：CN201710135704.3
申请日：20170308
公开号：CN106729690A
公开日：
20170531
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种鸡新城疫、禽流感病毒和禽腺病毒三联灭活疫苗的制备方法，其包括以下步骤：1)将禽腺病毒4型病毒接种于LMH细胞，经培养、冻融、离心、浓缩等步骤得到制苗病毒液；
2)将鸡新城疫病毒La Sota株和禽流感H9亚型分别接种于鸡胚尿囊腔，经培养，收获鸡胚病毒尿囊液，然后进行离心、浓缩，分别得到鸡新城疫、禽流感H9亚型制苗病毒液；3)将三种病毒的制苗病毒液进行灭活后，等体积混合，乳化制成乳剂型灭活疫苗。

本发明提供的三联疫苗效价高，对鸡新城疫病毒、禽流感病毒H9亚型和禽腺病毒4型病毒具有完全的免疫保护作用，安全性良好，稳定有效，保护期长。

申请人：广州博恒生物科技有限公司
地址：510530 广东省广州市萝岗区永和经济区田园西路35号办公楼201房
国籍：CN
代理机构：北京精金石专利代理事务所(普通合伙)
代理人：刘晔
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