新生儿溶血病(HDN)的免疫血液学实验

HDN的血清学实验室检测结果：383例新生儿溶血病患者中，直接抗人球蛋白试验阳性率为53.12%，游离抗体试验阳性率为71.54%，抗体释放试验阳性率为83.29%。

结论：释放试验敏感度最高，是判定新生儿溶血病最有力的实验室证据。

Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2013.08.538新生儿溶血症（hemolytic disease of the newborn，HDN）是指母婴血型不合，母体血液中针对胎儿红细胞的免疫抗体IgG通过胎盘进入胎儿循环，发生同种免疫而引起的溶血。

在人类已发现的血型系统中，以ABO 血型系统不合引起的新生儿溶血病最常见，其次为Rh血型系统。

新生儿溶血病的临床表现轻重不一，取决于抗原性的强弱、个体的免疫反应、胎儿的代偿能力和产前的干预措施等因素。

Rh溶血病临床表现较为严重，进展快，而ABO溶血病的临床表现多数较轻。

Rh溶血病一般不发生在第一胎，而ABO溶血病可发生在第一胎。

HDN的血清学检测对该疾病的临床诊断具有重要的价值。

笔者就我市近年来发生的383例HDN的血清学检测结果分析报告如下。

1 材料与方法1.1 标本来源。

2010年1月～2013年1月本市4家医院送检的临床高胆红素血症或母亲血型为Rh阴性的HDN患儿383例，标本为患儿及母亲血液。

1.2 试剂。

抗-A（B）血清（长春生物制品研究所）；抗-D、抗人球蛋白试剂（广谱）、单克隆IgG、单抗C3（上海市血液中心）；ABO标准红细胞（本站自制）。

2 结果383例新生儿溶血病患者中，直接抗人球蛋白试验阳性率为53.12%，游离抗体试验阳性率为71.54%，抗体释放试验阳性率为83.29%。

3 讨论3.1 发病原因。

由于母亲的血型与胎儿（或婴儿）的血型不合，如Rh 血型不合或ABO血型不合引起同族免疫性溶血病，Rh血型不合所致溶血常较ABO血型不合为严重。

3.1.1 Rh血型不合。

Rh血型不合引起的新生儿溶血症在中国的发病率较低。

新生儿溶血性疾病产前血型血清学检测标准操作规程一、目的为规范新生儿溶血性疾病（HDN）产前血型血清学检测的技术操作，准确评估胎儿发生HDN 的危险程度，从而辅助临床正确的诊断和治疗。

二、适用范围输血科进行新生儿HDN产前血型血清学检测。

三、原理通过鉴定孕妇及其胎儿父亲的血型，推测胎儿可能的血型，进一步检测孕妇体内是否有针对胎儿红细胞血型抗原的抗体及其效价来评估胎儿发生HDN的危险程度。

四、步骤和方法1、检测孕妇ABO、RhD血型，红细胞不规则抗体及其丈夫ABO、RhD血型。

根据夫妇ABO 血型组合来推测母婴ABO血型是否相合：如果母婴血型配合则不需检测孕妇ABO血型IgG 抗体效价；如果母婴血型不配合（可能不配合）则需检测孕妇可能致敏胎儿红细胞的ABO 血型IgG抗体效价。

2、由于抗-A或者抗-B主要为IgM类，ABO血型不合极少发生胎儿HDN，故除有死胎史或者新生儿黄疸史的孕妇外，不需检测IgG抗-B及抗-A的效价。

3、如果孕妇为RhD阴性，丈夫RhD为阳性，孕妇不规则抗体阴性，建议孕妇以后每个月复检不规则抗体直至分娩。

4、如果孕妇不规则抗体为阳性，则需鉴定其特异性、Ig类型、37℃反应情况及其效价和丈夫红细胞是否表达对应的抗原，来评估抗体引起的HDN危险程度。

5、结果判定：效价>143有临床意义。

五、质量控制1、用于试验的试剂都在有效期内使用。

2、严格试验操作，设置阴、阳对照，结果符合预期才可判定试验结果。

六、注意事项1、HDN产前血型血清学检测结果只能为评估胎儿发生HDN的风险提供依据，并不能确定HDN 。

母婴ABO血型不合且孕妇IgG类ABO血型抗体效价在妊娠期持续升高或者检出了IgG类红细胞不规则抗体都是HDN的风险因素。

2、传统认为ABO血型系统IgG抗体效价高于64具有临床意义。

随着检测水平得的提高，其作为临床参考意义不大。

3、抗体效价与HDN的发生有一定的相关性，但是抗体效价的高低与HDN的严重程度并不完全一致，可能与IgG抗体亚类不同有关。

输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程1、目的：规范血液免疫学产前检查操作，确保试验过程及结果的准确性与可靠性。

2、范围：本规程适用于实验室血液免疫学产前检查试验操作。

3、职责：经授权的血型实验室试验人员负责血液免疫学产前检查试验过程及报告的发出。

4、原理孕妇和丈夫ABO血型不合（O/A、O/B、O/AB、A/B、A/AB、B/A、B/AB）时，孕妇体内的IgG抗A（B）可能会引起新生儿溶血病的发生。

本试验通过检测孕妇血清中有无IgG性质的抗A（B）抗体及其效价（应用巯基试剂破坏IgM抗体，检测IgG抗体效价）即可预测ABO系HDN发生的可能性。

应用筛选红细胞可检测孕妇血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，确定抗体的特异性，进一步检测非ABO系新生儿溶血病。

5、所需设备、材料或试剂：37℃恒温水浴箱、细胞洗涤离心机、抗-A抗-B血型定型试剂（单克隆抗体）、抗-D RH血型定型试剂（单克隆抗体）、凝聚胺介质试剂、抗人球蛋白试剂（抗-IgG、C3d）、（A、B、O）型标准红细胞悬液（2—5%）、商品化筛选细胞、谱细胞、2—ME试剂、12×75mm试管、塑料滴管。

6、检测环境条件：温度：18—25℃；湿度：30—70%7、标本要求7.1标本接收在接收标本时，应尽可能的了解、核对、记录患者的相关资料，包括受血者姓名、年龄、性别、临床诊断、输血史、用药史、妊娠史、标本编码等；7.2检验人员收到被检者产前检查申请按照申请单内容在试管上做标记(用记号笔在试管上标明被检者姓名、性别)，保留申请记录。

7.3按照要求进行血液采集。

将采好的血液沿试管壁注入已标识的抗凝试管中，反复颠倒混匀，放入2-8℃冰箱待用。

并填写《外来标本交接记录》及相关记录。

7.4标本的种类与数量：产前检查需送夫妇血样，血样均需抗凝（EDTA抗凝），女（母）5ml，男3ml。

7.5标本的保存与处理：完成所有试验内容后，要仔细核对实验结果，发出实验报告后，将实验所用的标本原始送检管存于2-8℃冰箱内至少7天以便进行查找和核对，之后交由单位相关部门统一处理。

新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程1、目的为规范输血科HDN血型血清实验诊断的技术操作，确保检测结果准确，明确HDN诊断及其原因，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。

2、适用范围本文件适用于本院输血科对HDN进行血型血清学实验诊断及其实验操作技术的规范化管理。

3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。

4、试验方法及原理4.1试验方法：微柱凝胶卡式法4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。

当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。

离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。

5、样本采集和处理取患儿不抗凝血1-2ml及EDTA-K2抗凝血3～4ml,24小时内送检。

将不抗凝血离心分离出血清备用。

6、试剂：5.1 0.9%的生理盐水；5.2戴安娜合血卡；5.3血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）、抗D标准血清；5.4 5%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；5.5长春博迅公司的血型定型试剂卡；7、仪器：1)XTL-4.7细胞洗涤离心机；2)DiaMed-ID Incubator 37 SⅠ温育器；3)DiaMed-ID Centrifuge 12 SⅡ7.5操作程序：7.5.1婴儿及母亲ABO血型鉴定是检查第一步，以便考虑以后进一步检查程序。

7.5.2如母子ABO不合（母O子A、B，母A子B、AB，母B子A、AB）则按下列步骤进行患儿血液三项试验：⑴直接抗人球蛋白试验（DAT）（微柱凝胶卡式法）1)取患儿不抗凝血离心后，用0.9%的生理盐水配成0.8%的红细胞悬液。

2)在戴安娜LISS/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔，加入配好的患儿红细胞悬液50μl。

3)将卡放入戴安娜离心机离心10分钟后判读结果。

新生儿溶血病血型血清学检验操作规程 SXYJ-GZ-02191目的辅助临床诊断母婴血型不合导致的新生儿溶血病。

2适用范围母婴血型不合新生儿黄疸者或产妇产前检出免疫性血型抗体且伴有母婴血型不合者。

3职责检测者负责依据此程序进行HDN产前血型血清学检验操作。

4材料与设备抗-A、抗-B血清、反定型试剂红细胞、血型物质或二硫苏糖醇（DTT）；实验室常规应用的耗材备品准备充分、仪器设备运行状态正常。

5操作方法5.1检查父亲、母亲及新生儿标本血型5.1.1ABO血型鉴定（方法参见SXYJ-GZ-0202）；5.1.2RhD抗原鉴定（方法参见SXYJ-GZ-0205）。

5.2新生儿标本的三项试验5.2.1直接抗人球蛋白试验：（方法参见SXYJ-GZ-0210）。

ABO新生儿溶血病时，直接Coomb’T的结果只起参考作用；ABO以外的新生儿溶血病标本的直抗结果，对临床诊断起决定作用。

5.2.2游离IgG抗体测定：（方法参见SXYJ-GZ-0211）。

测定新生儿血清中是否存在游离的IgG抗体。

用A型、B型红细胞检测可发现，A型新生儿血清中可有少量抗A和较多抗B；B型新生儿血清中可有少量抗B和较多的抗A，抗体筛选红细胞用来筛选ABO以外的IgG抗体，结果阳性时需要用谱细胞鉴定其特异性。

5.2.3放散试验：（方法参见SXYJ-GZ-0209）。

采用热放散方法，放散液中抗体鉴定用间接Coomb’T法（方法参见SXYJ-GZ-0211）。

患儿红细胞上放散出抗A、抗B或放散出ABO以外抗体，都是阳性指征。

5.3母亲标本的检查方法参见SXYJ-GZ-02186结果判定6.1根据凝集强度(方法参见SXYJ-GZ-0202:5.2.1.6)对结果进行判读6.2ABO HDN6.3其它血型系统HDN7报告发放根据检测结果形成报告，报告发放至检验申请送检人。

8注意事项8.1如果新生儿标本检测游离抗体阳性，直抗应该阳性，放散试验也应该是阳性，故在直抗阳性、游离抗体阳性时，放散试验可省去不做。

新生儿溶血病(HDN)实验室检查一、父母及新生儿血型鉴定目的：研究父母、新生儿血型与新生儿溶血病的关系原理：用已知的IgM类特异抗体与受检红细胞在室温条件下、盐水介质中反应，根据红细胞是否出现凝集来测定受检者细胞膜上有无与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定受检者的血型。

器材：小试管、记号笔、试管架、离心机、玻片、显微镜试剂：标准抗A、抗B血清、单克隆IgM型RhD抗血清（商品试剂）生理盐水标本：抗凝静脉血或末梢血实验步骤：制备受检者5%红细胞生理盐水悬液：抗凝血离心或红细胞自然沉降后取管底下层的红细胞大约10滴于小试管中，加入生理盐水2ml，充分混匀红细胞与生理盐水。

2500r/min离心3min后弃上清液，重复洗涤3次。

自管底吸取1滴压积红细胞加入19滴生理盐水混匀，此即为5%的红细胞生理盐水悬液。

1、玻片法（1）取洁净的玻片1块，用记号笔画出小格，标明A、B、D（2）在玻片已标记的区域内滴加抗A、抗B血清、RhD抗血清各1滴（3）在滴加抗血清的小格中分别加入受检者5%红细胞生理盐水各1滴；不断轻轻转动玻片，使抗血清与红细胞充分混匀，持续约1~5min（4）观察并判断结果肉眼观察有无凝集或溶血反应，再用低倍镜观察，判断阴性、阳性和阳性强度。

2、试管法（1）取小试管3支，分别标记A、B、D（2）分别滴加抗A、抗B血清、RhD抗血清于相应标记的试管中（3）分别滴加受检者5%红细胞生理盐水悬液1滴于试管中，混匀（4）以1000r/min离心1min（5）观察并判断结果取出试管，先观察上层清液有无溶血现象，再将试管轻轻摇动使沉于管底的红细胞浮起，肉眼观察有无凝集及凝集强度。

注意事项：1、器材：所用器材必须干燥洁净、防止溶血；为避免交叉污染，试管、尖滴管均一次性使用。

2、试剂：分型血清质量性能应符合合格实际要求。

3、标本：受检红细胞标本新鲜，无细菌污染。

4、标准抗血清从冰箱取出待其平衡致室温后在使用，用毕后应尽快放回冰箱保存，减少细菌污染。

新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程1、目的为规范输血科HDN血型血清实验诊断的技术操作，确保检测结果准确，明确HDN诊断及其原因，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。

2、适用范围本文件适用于本院输血科对HDN进行血型血清学实验诊断及其实验操作技术的规范化管理。

3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。

4、试验方法及原理4.1试验方法：微柱凝胶卡式法4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。

当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。

离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。

5、样本采集和处理取患儿不抗凝血1-2ml及EDTA-K2抗凝血3〜4ml,24小时内送检。

将不抗凝血离心分离出血清备用。

6、试剂：5.10.9%的生理盐水；5.2戴安娜合血卡；5.3血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）、抗D标准血清；5.45%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；5.5长春博迅公司的血型定型试剂卡；7、仪器：1）XTL-4.7细胞洗涤离心机；2）DiaMed-IDIncubator37SI温育器；3）DiaMed-IDCentrifuge12SII7.5操作程序：7.5.1婴儿及母亲ABO血型鉴定是检查第一步，以便考虑以后进一步检查程序。

7.5.2如母子ABO不合（母。

子A、B,母A子B、AB,母B子A、AB）则按下列步骤进行患儿血液三项试验：⑴直接抗人球蛋白试验（DAT）（微柱凝胶卡式法）1）取患儿不抗凝血离心后，用0.9%的生理盐水配成0.8%的红细胞悬液。

2）在戴安娜LISS/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔，加入配好的患儿红细胞悬液50口1。

3）将卡放入戴安娜离心机离心10分钟后判读结果。

4）结果观察：5）阳性：红细胞凝集，在凝胶柱中或表面形成红线。

新生儿溶血病ABO血型免疫性抗体检测分析目的探讨分析新生儿溶血病(Hemolytic Disease of the Newborn, HDN)ABO 血型免疫性抗体检测的价值。

方法选取我院2011年1月~2013年12月期间收治的200例新生儿高胆红素血症患儿，采用抗人球蛋白法和微柱凝胶法对患儿实施血型血清学检测，对于母婴ABO血型系统不合的HDN患儿的血液标本进行新生儿溶血三项检验：直接Coomb实验、游离抗体测定、抗体释放实验，检测免疫性抗体IgG的特异性。

结果200例新生儿高胆红素血症患儿中，母婴ABO 血型系统不合的HDN发生率为56﹪（112/200）。

母婴ABO血型系统不合的HDN 患儿中，48.21﹪（54/112）的患儿为IgG抗A导致，51.79﹪（58/112）的患儿为IgG抗B导致。

其中直接Coomb实验的阳性率为36.61﹪（41/112），游离抗体测定的阳性率为79.46﹪（89/112），抗体释放实验的阳性率为100﹪（112/112）。

结论新生儿溶血病ABO血型免疫性抗体检测的价值较大，能够快速有效的诊断，因此及时采取有效的治疗，对防治HDN具有重要意义。

标签：新生儿溶血病；ABO血型；免疫性抗体检测新生儿溶血病(Hemolytic Disease of the Newborn, HDN)作为一种同族血型的免疫疾病，是因母体血型与胎儿血型不合而引起的。

临床主要依靠血型血清学的免疫性抗体检测来对HDN进行诊断。

本文旨在探讨HDNABO血型免疫性抗体IgG检测对临床诊断的意义。

1 资料与方法1.1一般资料选取我院2011年1月~2013年12月间收治的200例新生儿高胆红素血症患儿，其中男性患儿102例，女性患儿98例。

年龄10h~6d，平均年龄为(3.5±0.5)d。

ABO血型A型患儿101例，B型患儿99例。

患儿母亲均为O 型，患儿母亲、患儿RhD血型均为阳性。

新生儿溶血病患者的免疫血液学检测结果研究【摘要】目的探讨不同群体新生儿溶血病(HDN)患者中ABOHDN患者的检出率。

方法采用免疫血液学的有关试验，鉴定HDN患者的ABO血型，定性检测HDN患者红细胞上结合的及血液中游离的病理性IgG抗A(B)。

结果本组HDN患者中，ABO HDN 患者的总体检出率为79.29%,按性别分类,男性及女性患者中ABO HDN患者的检出率分别为78.48%、79.89%,按ABO血型分类,A型及B型患者中ABO HDN患者的检出率分别为79.42%、80.73%。

结论不同群体的HDN患者中ABO HDN患者的检出率均较高，都大于78%。

【关键词】免疫血液学; ABO新生儿溶血病; 检出率Study on detection results of immunohematology of patients with haemolytic disease of the newborn【Abstract】Objectives To investigate the detection rate of patients with ABO haemolytic disease of the newborn (ABO HDN) in different groups of patients with haemolytic disease of the newborn (HDN) .Methods Using the related test of immunohematology，ABO blood type were determined in patients with HDN, anti-A (B) of pathological IgG binding to erythrocyte and free in blood were determined qualitatively in patients with HDN.Results In this groups of patients with HDN,total detection rate of patients with ABO HDN was79.29%, according to gender, detection rate of patients with ABO HDN in male and female patients were 78.48% and 79.89% respectively, according to ABO blood type, detection rate of patients with ABO HDN in blood type A and blood type B patients were 79.42% and 80.73% respectively. Conclusion All of the detection rate of patients with ABO HDN in different groups of patients with HDN were relatively high, and were more than 78%.【Key words】immunohematology;ABO haemolytic disease of the newborn; detection rate新生儿出生后出现溶血性黄疸症状，这类疾病称为新生儿溶血病(haemolytic disease of the newborn,HDN),按引起HDN的原因分类，可将HDN分为若干类型,其中最常见的类型为母婴ABO血型不合,由IgG抗A(B)所引起的ABO HDN[1,2]。