我院梅毒血清学检测结果解释

梅毒检测技术及质量考评沈阳市CDC 刘娜2014.6.4目录一、梅毒的概述二、梅毒的实验室检测技术三、梅毒血清学质量考评总结一、梅毒的概述1、定义梅毒（Syphilis）是梅毒螺旋体（Treponema pallidum，TP）（即苍白螺旋体的苍白亚种）感染人体所引起的一种系统性、慢性、经典的性传播疾病，可引起人体多系统、多脏器的损害，产生多种多样的临床表现，导致组织破坏、功能失常，甚至危及生命。

是世界卫生组织所列的世界上50种常见传染病之一。

是我国卫生部规定的8种重点防治的性病之一。

《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病。

人间传染的病原微生物名录：危害程度第三类，样本在生物安全二级实验室中检测。

2、生物学特性2.1 形态细长，5-15×0.1-0.2um ，形似细密的弹簧，螺旋弯曲规则整齐，平均8～14个，两端尖直，折光性强，一般染料不易着色，姬姆萨染色则可染成桃红色。

2.2 培养梅毒螺旋体是厌氧、寄生性微生物，在体内可长期生存繁殖，一般不能人工培养。

1981年Fieldsteel等采用棉尾兔单层上皮细胞在微氧（1.5%氧）条件下培养，经9-12天孵育后，螺旋体数比接种数平均增加49倍，对兔仍保持毒力。

2、生物学特性2.3 生存条件干燥、肥皂水及一般消毒剂如1：1000苯酚、新洁尔灭、稀酒精均可于短时间将其杀死温度的影响：41-42℃时可生活1-2小时，在48℃仅半小时即失去感染力，100℃立即死亡。

对寒冷抵抗力大，在0℃时，可生活48小时，在低温（-78℃）保存数年，仍可保持其形态、活动及毒性在血液中4℃经3日可死亡，故在血库冰箱冷藏3日以上的血液就无传染性在封存的生理盐水稀释的组织液中可生活10小时左右在潮湿的器具或湿毛巾中，亦可生存数小时在干燥环境中可见迅速死亡2、生物学特性2.4 宿主梅毒螺旋体只感染人类人是梅毒的唯一传染源2.5 抗原分为三类：密螺旋体抗原即梅毒螺旋体表面特异性抗原：刺激机体产生特异的凝集抗体及密螺旋体制动抗体或溶解抗体，后者加补体可溶解螺旋体螺旋体内类属抗原：可产生补体结合抗体，与非病原性螺旋体有交叉反应非螺旋体抗原即磷脂类抗原：当螺旋体侵入组织后，组织中的磷脂可粘附在螺旋体上，形成复合抗原，此种复合抗原可刺激机体产生抗磷脂的自身免疫抗体，称为反应素，可与牛心肌或其他正常动物心肌提取的类脂质抗原起沉淀反应（康氏试验）或补体结合反应（华氏试验）3、传播途径3.1性接触主要传播途径，占95%以上。

TPPA、TP—AbELISA、TRUST三种方法检测血清梅毒结果分析目的分析TPPA、TP-Ab（ELISA）、TRUST三种方法检测血清梅毒的结果。

方法采用梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）、酶联免疫吸附试验（TP-Ab）、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）来对比检测150例临床确诊的梅毒阳性血清标本和70例正常血清标本。

结果TP-Ab、TPPA检测方面的灵敏性、特异性显著高于TRUST检测方法，P＜0.05。

结论TPPA具有较高的特异性，可以将其作为梅毒确证实验；TP-Ab（ELISA）法的灵敏度、特异性与TPPA法比较接近，是现阶段对梅毒抗体进行检测的首选方法；TRUST法的特异性较差，可以将其当成TP-Ab（ELISA）法的补充。

标签：TPPA；TP-Ab（ELISA）；TRUST；检测；血清梅毒梅毒作为慢性全身性性传播疾病，主要是因为梅毒螺旋体感染导致的，梅毒的病程较长，临床表现复杂，表现为多样性，会对患者的全身各个器官造成损害；疾病早期主要对黏膜和皮肤造成侵犯，疾病后期则会对中枢神经系统、心血管系统等器官造成侵犯。

现阶段因为人们滥用抗生素药物，导致部分梅毒患者表现为隐性感染，缺乏临床表现，因此在临床诊断中容易出现误诊和漏诊的情况[1]。

世界卫生组织认为，全球输血不安全是导致没有有效筛选传染性因子的主要原因。

所以采用高灵敏度、强特异性的筛选方式，对安全输血非常重要。

本研究主要分析了TPPA、TP-Ab（ELISA）、TRUST三种方法检测血清梅毒的结果，现将情况做如下分析。

1 资料与方法1.1一般资料1.1.1标本选择选择2014年1月～2016年1月经我院临床确诊的梅毒感染输血患者输血前的标本150例，并选择同期非梅毒感染输血患者的血清标本70例，对血清进行分离后再进行检测。

1.1.2试剂和方法TPPA试剂盒选择富士瑞必欧株式会社所提供的；TP-Ab 试剂盒则是由珠海丽珠试剂有限公司提供；TRUST试剂盒则是由上海荣盛生物技术有限公司所提供；选择SUNRISE酶标仪、新康医疗器械有限公司提供的XK-96型梅毒旋转振荡器和HydroFLex洗板机。

关于梅毒的实验室检测成都商报在2007年5月9日第5版中有这样一篇文章—“是梅毒，是没‘毒’女大学生考警蹊跷被刷”。

讲的是小梅在淮南市第一人民医院进行考警体检中被误诊（或是错诊）为梅毒的事。

其报道中对梅毒的实验室检查部份的叙述存在一定程度的误导，因此我们针对梅毒的病原体、实验室检查及检验方法等相关内容进行了组稿。

来进一步加深对梅毒实验室诊断的认识。

一、螺旋体的分类、寄生部位螺旋体的分类及传播方式二、生物学特性梅毒螺旋体即苍白密螺旋体的苍白亚种，人是其唯一宿主。

直径0.1—0.15μm，全长7--8μm。

在电镜下可见有细胞壁和细胞膜。

新鲜标本在暗视野显微镜下可观察其形态和活泼的运动方式。

梅毒螺旋体主要有两种抗原：1、密螺旋体抗原即梅毒螺旋体表面的特异抗原，与雅司、地方性梅毒、品他病等3种密螺旋体有共同抗原，可交叉反应。

2、非螺旋体抗原即磷脂类抗原，可刺激机体产生反应素，其与牛心肌的心脂质抗原发生反应，此法敏感性高，但有假阳性。

梅毒螺旋体对外界的抵抗力极弱，离体后1—2小时即死亡，对热和干燥特别敏感，在体外干燥环境下1—2小时或加1.5℃经1小即死亡。

血液中4℃放置3天可死亡，因此4℃血库存放3天以上的血液无传染梅毒的危险。

对肥皂水和常用化学消毒剂亦敏感，1%--2%石炭酸内数分钟就死亡。

梅毒的免疫属感染性免疫，有梅毒螺旋体感染时才有免疫力，一旦螺旋体被杀灭，其免疫力随之消失。

机体对梅毒螺旋体感染可产生细胞免疫和体液免疫反应，体液免疫中有两种抗体：一种是梅毒特异性抗体，主要是IgG、IgM，对螺旋体有制动作用，当有补体存在时，可将其杀死和溶解，对机体的再感染有保护作用。

另一种是抗脂质抗体的反应素，为IgG和IgM的混合物，对机体无保护作用。

三、送检标本和检验方法Ⅰ期梅毒病人取硬下疳渗出液，Ⅱ期梅毒取梅毒疹渗出液或局部淋巴抽出液。

对Ⅰ期梅毒末期以后（大约感染3—4周以后）的病人可分离血清检查有无梅毒螺旋体抗体和反应素。

慎重解释梅毒检验报告单河南省传染病医院皮肤性病科副主任医师赵会亮小李婚后十月怀胎，即将成为人母的她沉浸在喜悦的期盼中。

但到医院产前检查中有一项化验RPR结果是阳性，医生告知小李可能感染了梅毒，可能会影响到孩子。

这可吓坏了小李，她从来没有什么不洁性行为怎么会感染梅毒呢？进一步检查证实，小李的化验属于假阳性，随后小李在医院顺利地生下一个健康的宝宝。

这件事提醒我们，梅毒以及梅毒血清学检验比较复杂，在对患者解释时应慎重。

梅毒筛查的常用指标梅毒由于临床表现多样性而被皮肤科医师称为“模拟大师”，目前诊断因暗视野或荧光显微镜等设备不太普及而主要靠血清学检测来判定。

检验方法因抗原制备方法不同分为非螺旋体抗原试验和螺旋体抗原试验，前者主要包括：VDRL、USR、RPR 等，后者主要包括：FTA-ABS、TPHA、TPPA等。

初筛试验中VDRL因操作麻烦在大多数医院没有开展，USR、RPR是在VDRL基础上经过改良后的实验方法，操作简单且可以肉眼判定结果，有同样的特异与敏感性，因而被广泛应用。

确认试验中由于TPHA、TPPA操作简单且特异性、敏感性优于FTA-ABS而被广泛开展。

一般来讲，排除假阳性原因，确认试验所作为抗-IgG螺旋体抗体，即使足够规范的治疗，结果仍可为阳性，因此不作为疗效观察、复发、再治疗的依据。

假阳性假阴性都很“常见”因技术原因所限，两类梅毒血清学试验都存在生物学假阳性以及假阴性问题。

如：系统性红斑狼疮、风湿性心脏病、关节炎、肝硬化、结肠癌、静脉吸毒、妊娠、糖尿病、风疹、丝虫病、结核病等急慢性感染性疾病均可以导致假阳性。

这类假阳性结果，通过倍比稀释后滴度都很低，一般在1：8以下，两类试验结合来看即可明确。

由于试验敏感性、前带现象（血清梅毒螺旋体抗体浓度过高而抑制抗原抗体凝集）、梅毒感染时间长短等原因可以导致试验结果的假阴性，如：RPR在一期、三期梅毒阳性率分别为85%、80%。

假阳性和假阴性结合临床资料以及复检，一般情况下可以排除。

梅毒报告单，你会看吗刘水桂病人手术、输血前，医生一般会给病人开梅毒检测，但检测结果出来，对于非皮肤科医生看这梅毒结果报告单，也有点纳闷了，这报告单上TPPA阳性，但RPR阴性，病人是否感染梅毒了？带着以上的问题，我们回顾下梅毒的有关知识。

梅毒是由苍白密螺旋体苍白亚种（又名梅毒螺旋体）感染人体所引起的一种慢性、系统性性传播疾病，可引起人体多系统多器官损害，产生多种临床表现，导致组织破坏，功能失常，甚至危及生命。

梅毒血清学检查是诊断梅毒的重要依据，对梅毒早期诊断，发现传染源及控制梅毒传播具有重要意义。

因此，全面的认识和了解梅毒抗体检测对指导临床诊断和疗效观察具有重要意义。

当人体感染梅毒螺旋体后4-10周，血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性抗体和抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体。

根据检测所用抗原不同，可以分为二类检测方法：表1 梅毒检测实验方法分类上述的实验方法中，医院一般只检测非梅毒螺旋体血清学实验(VDRL、RPR、TRUST三种方法中一种），梅毒螺旋体血清学试验（TPPA、TPHA、FTA-ABS、ELISA、CLIA、RT六种方法中一种），大多数医院常见的检查方法为RPR和TPPA。

下面介绍一下两种实验方法的实验原理。

梅毒非特异性抗体试验原理梅毒螺旋体一旦感染人体，人体迅速对被损害的宿主细胞以及梅毒螺旋体细胞表面所释放的类脂物质作出免疫应答，在3周-4周产生抗类脂抗原的抗体（亦称为反应素），这些抗体主要是IgG和IgM型混合抗体。

非梅毒螺旋体试验是使用心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原的絮状凝集试验。

反应素与卵磷脂遇水形成胶体溶液，胆固醇遇水形成结晶。

当抗原与抗体（反应素）混合发生反应时，后者即粘附胶体微粒的周围，形成疏水性薄膜。

由于摇动、碰撞，使颗粒与颗粒互相粘附而形成肉眼可见的颗粒凝集和沉淀，即为阳性反应。

RPR试验是VDRL试验的一种改良方法。

该法是在抗原中加入活性炭颗粒作为指示物，加入了氯化胆碱，因此血清不需灭活。

梅毒螺旋体感染测定结果的报告与解释1梅毒螺旋体感染的检测方法1.1概述由于梅毒螺旋体侵入机体可产生非特异的反应素和抗密螺旋体抗体等两种抗体，因而免疫测定方法可根据所使用的抗原分为非密螺旋体抗原血清学试验和密螺旋体抗原血清学试验两大类，前者以心磷脂为抗原检测血清中抗心磷脂抗体，也就是所谓的反应素；后者则是以密螺旋体或其成分为抗原检测血清中特异的抗密螺旋体抗体。

1.2非密螺旋体抗原血清学试验非密螺旋体抗原血清学试验基本原理就是采用从牛心中提取的心磷脂作为抗原，梅毒螺旋体在破坏机体组织的过程中，体内释放一种心磷脂抗原，这种抗原可刺激机体产生相应的抗体即反应素，其与牛心中提取的心磷脂在体外可产生免疫结合反应。

此类试验主要包括VD RL(venereal disease research laboratory test)、RPR(rapid plasma regain circle card test)和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）等。

非密螺旋体抗原血清学试验操作简便快速，但是由于其所用的抗原是类脂质抗原，而不是密螺旋体抗原，因此特异性较差，可在多种疾病中出现假阳性的结果，例如麻风、结核、红斑狼疮、类风湿关节炎、猩红热等，据报道上述实验在没有梅毒感染史的正常人群中阳性率达0.1%。

此外，由于感染梅毒螺旋体后，机体血循环中心磷脂抗体的出现要晚于特异性的抗梅毒螺旋体抗体，并且三期梅毒这类抗体还有可能转阴。

基于以上原因，通常不推荐采用非密螺旋体抗原血清学试验作为梅毒的筛查试验，可用于梅毒疾病活动性的判定、疗效检测等。

1.3密螺旋体抗原血清学试验密螺旋体抗原血清学试验又称为梅毒特异性抗体检测试验。

目前较为常用的有：荧光密螺旋体抗体吸收试验（fluoresent treponemal a ntibody-absorption test, FTA-ABS）、梅毒螺旋体血球凝集试验（treponema pallidum hemagglutination assay, TPHA）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（treponema pallidum particle agglutination assay, TPPA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光免疫分析（CLIA）和蛋白印迹技术（Western blotting,WB）。