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一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生长特性。
2. 掌握大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法。
3. 学习使用显微镜观察大肠杆菌的形态。
4. 熟悉大肠杆菌的生理生化特性。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性、无芽孢、兼性厌氧的细菌，广泛存在于自然界和人体肠道中。
大肠杆菌的培养和鉴定是微生物学实验中的重要内容。
本实验通过分离、纯化和鉴定大肠杆菌，了解其生长特性，为后续研究提供基础。
三、实验材料与仪器1. 材料：普通琼脂、营养肉汤、乳糖、胆盐、伊红、美蓝、无菌水、无菌棉签、酒精灯、培养皿、显微镜等。
2. 仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、电子天平、无菌操作台、移液器、试管等。
四、实验步骤1. 分离大肠杆菌（1）取少量疑似大肠杆菌的样品，用无菌棉签涂抹于营养肉汤中。
（2）将营养肉汤置于恒温培养箱中培养24小时。
（3）取培养后的肉汤，用无菌移液器吸取少量，涂布于普通琼脂平板上。
（4）将平板置于恒温培养箱中培养24小时，观察菌落生长情况。
2. 纯化大肠杆菌（1）挑取单菌落，接种于新的营养肉汤中。
（2）将培养后的肉汤置于恒温培养箱中培养24小时。
（3）取培养后的肉汤，用无菌移液器吸取少量，涂布于新的普通琼脂平板上。
（4）重复上述步骤，直至获得纯化的大肠杆菌。
3. 鉴定大肠杆菌（1）革兰氏染色：取纯化的大肠杆菌，制作革兰氏染色片，观察细菌形态。
（2）生化试验：进行乳糖发酵试验、硫化氢试验、吲哚试验等，鉴定大肠杆菌的生理生化特性。
4. 观察大肠杆菌形态（1）将纯化的大肠杆菌接种于营养肉汤中。
（2）将培养后的肉汤置于恒温培养箱中培养24小时。
（3）取培养后的肉汤，制作涂片，置于显微镜下观察细菌形态。
五、实验结果与分析1. 分离大肠杆菌在涂布有疑似大肠杆菌样品的琼脂平板上，观察到典型的圆形、湿润、边缘整齐的菌落。
2. 纯化大肠杆菌经过多次纯化，获得纯化的大肠杆菌。
3. 鉴定大肠杆菌革兰氏染色结果显示，大肠杆菌为革兰氏阴性菌。
分离大肠杆菌的方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，也是微生物学研究中的重要模式生物。
分离大肠杆菌是许多实验室中常见的操作，这里将介绍几种常用的分离方法。
1.无菌技术准备在进行分离大肠杆菌之前，必须保证实验环境的无菌。
操作前要用75%乙醇对操作台面进行消毒，使用无菌培养皿和试管，并佩戴无菌手套。
2.样品采集从目标样品中采集含有大肠杆菌的样品。
常见的样品类型包括食品、水样、粪便等。
采集样品时要注意避免污染，使用无菌容器收集样品。
3.预处理样品将采集到的样品进行预处理，以提高大肠杆菌的分离效率。
常用的预处理方法包括：(1) 粪便样品：将粪便样品稀释于无菌生理盐水中，通过离心操作去除大部分固体颗粒。
(2) 食品样品：将食品样品加入适量的无菌生理盐水中，进行均匀搅拌。
(3) 水样：直接使用无菌容器收集水样，避免污染。
4.选择培养基根据实验需要选择适合分离大肠杆菌的培养基。
常用的培养基包括营养琼脂糖平板（Nutrient Agar Plate）、MacConkey琼脂糖平板（MacConkey Agar Plate）等。
这些培养基含有适合大肠杆菌生长的营养物质，并可以通过某些特殊成分选择性地抑制其他细菌的生长。
5.涂布法涂布法是最常用的分离大肠杆菌的方法之一。
具体操作步骤如下：(1) 取一支无菌的鉴别环，将其蘸取预处理后的样品。
(2) 将鉴别环均匀地涂布在培养基平板的表面上。
(3) 使用无菌铁环或无菌玻璃杆均匀涂布，以保证样品的均匀分布。
(4) 将涂布好的培养基平板放置在恒温培养箱中，以适当的温度（通常为37摄氏度）进行培养。
6.滤膜法滤膜法是一种通过滤膜来分离大肠杆菌的方法。
具体操作步骤如下：(1) 准备无菌滤膜和滤膜培养基。
(2) 将预处理后的样品滤过滤膜，将滤膜放置在滤膜培养基平板上。
(3) 将滤膜培养基平板放置在恒温培养箱中进行培养。
7.生物化学试验分离大肠杆菌后，需要进行进一步的鉴别和确认。
实验1,大肠杆菌的培养和分离篇一：实验1 大肠杆菌的培养和分离实验教学提纲实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲实验目的1. 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2. 进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。
3. 说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。
实验材料1. 配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解。
2. 配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。
实验步骤1. 培养基灭菌。
在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB 固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。
既可以通气，又不使细菌进入。
)。
将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时）。
同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌。
2. 倒平板，倒斜面。
灭菌后。
待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。
超净工作台操作：打超净工作台的紫外灯（注意：打开紫外灯后人必须离开），持续30min，关闭紫外灯，打开过滤风和白炽灯。
将有培养基的三角瓶和培养皿放在灭菌后的超净工作台上后，点燃酒精灯，用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面，并用酒精棉球擦手。
待固体培养基冷却到60℃时（手放上还有些热的时候），在酒精灯火焰旁，以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封口膜，右手其他三个手指拿着三角瓶；左手拿着培养皿，并打开上盖的一边，将三角瓶的培养基约10～20mL倒入1 个培养皿中。
倒入后立即置于水平位置上，轻轻摇晃，使培养基铺满培养皿底，待凝，使之形成平面。
倒斜面（试管内空白斜面），用玻璃漏斗倒入试管内，每试管2mL。
分离大肠杆菌的方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，常存在于人和动物的肠道中。
尽管大肠杆菌在正常情况下对人体有益，但某些菌株也可以引起严重的感染和疾病。
因此，分离大肠杆菌并进行进一步研究和鉴定是非常重要的。
本文将介绍几种常用的分离大肠杆菌的方法。
1. 纯培养基分离法纯培养基分离法是分离大肠杆菌的常用方法之一。
首先，可以使用选择性培养基，如MacConkey琼脂培养基，其中含有发酵大肠杆菌的特定物质（如乳糖）。
大肠杆菌能够利用乳糖产生酸，导致琼脂变成红色。
然后，从样品中接种适量的细菌在含有选择性培养基的琼脂平板上进行培养。
大肠杆菌会在琼脂上生长并形成典型的红色菌落。
2. 群体分离法群体分离法是一种通过分离菌落的方法来分离大肠杆菌的有效方法。
首先，将样品均匀涂布在含有琼脂的培养基上，并在适当的温度下进行培养。
大肠杆菌在琼脂上形成单独的菌落，而其他细菌可能形成不同形状或颜色的菌落。
然后，通过挑选典型的菌落进行分离并进行进一步鉴定。
3. 抗生素敏感性试验大肠杆菌对不同抗生素的敏感性有所不同，因此抗生素敏感性试验可以作为分离大肠杆菌的方法之一。
将大肠杆菌接种在含有不同抗生素的琼脂平板上，然后观察菌落的生长情况。
大肠杆菌对某些抗生素具有抗性，因此在含有这些抗生素的琼脂平板上，大肠杆菌的生长会受到抑制，而其他细菌则可能继续生长。
通过观察菌落的生长情况，可以初步判断出含有大肠杆菌的菌落。
4. 生化试验生化试验是一种通过检测大肠杆菌所产生的特定酶或代谢产物来分离和鉴定大肠杆菌的方法。
例如，大肠杆菌能够产生β-半乳糖苷酶，可以将乳糖水解成葡萄糖和半乳糖。
通过将大肠杆菌接种在含有乳糖的培养基上，并添加某种指示剂，如菲嗪红，可以观察到培养基的颜色变化。
如果大肠杆菌存在，培养基会变成黄色。
5. 分子生物学方法分子生物学方法是一种准确且快速的分离大肠杆菌的方法。
通过检测大肠杆菌特有的基因或DNA片段，如16S rRNA基因，可以准确鉴定大肠杆菌。
实验1 大肠杆菌的培养和别离高二年级班学号：实验日期：____月日【知识准备】1．背景知识：大肠杆菌〔Escherichia coli，E.coli〕是微生物学和遗传学常用的实验材料，为单细胞原核生物，宽约0.5×1～3微米；具有由肽聚糖组成的细胞壁；周身具鞭毛，能运动。
大肠杆菌是在人和动物肠道中生活的、不会致病的正常栖居菌，但假设进入胆囊、膀胱等处也会引起炎症。
它能利用多种糖类物质产酸、产气，其代谢类型为异养兼性厌氧型；其代谢活动能产生大肠杆菌素〔抑制肠道内其他分解蛋白质的微生物生长〕，还能合成维生素B和K。
它们在肠道中大量繁殖，几乎占粪便干重的1/3。
实验室中用于培养微生物的营养物质称为培养基。
按培养基的物理状态可分为：液体培养基和固体培养基。
将已知的菌种引入新配制的培养基的过程称为接种。
而在固体培养基外表用蘸有菌种的接种环连续划线，既可以到达接种的目的，又可以实现别离菌种的目的。
这是因为划线过程中接种环与培养基外表接触，接种环上的菌液逐渐减少，因此划线最后部分细菌间的距离加大，经过培养后可出现由单个细菌细胞形成单菌落，这样就到达了别离细菌的目的。
2．实验原理：使用通用的细菌培养基〔如LB液体培养基〕可扩大培养大肠杆菌，使大肠杆菌迅速扩增。
在LB固体平面培养基上对大肠杆菌进行划线别离，经培养后培养基上每一个菌体会形成一个单独的菌落。
这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选突变菌株的最简便方法之一。
为保证配制的培养基上只生长大肠杆菌，而不被其他微生物污染，实验过程中要进行无菌操作。
3．思考题〔1〕为什么培养过程中会出现被其他微生物污染的现象？〔2〕进行了无菌操作是否肯定就不会出现被其他微生物污染的现象吗？〔3〕本实验的关键步骤——划线别离的目的是什么？〔4〕在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线?在操作过程中应注意什么？【实验目的】1．利用液体培养基进行大肠杆菌的扩增2．用固体平面培养基进行大肠杆菌的划线别离3．了解微生物实验的操作原理和培养条件【材料用具】大肠杆菌菌种装有固体培养基的、已灭菌培养皿；装有LB液体培养基的、已灭菌的250ml三角瓶封口膜和橡皮圈酒精灯接种环镊子装有酒精棉球的广口瓶恒温培养箱摇床【操作流程】灭菌、消毒划线、接种培养、观察【实验步骤】1．接种前的准备进行接种操作前，应先洗手，再用70%的酒精棉球擦拭双手和桌面。
⼤肠杆菌微⽣物培养实验报告及评价标准实验1 微⽣物的分离、培养及计数实验原理纯化分离：⼈为提供适宜的菌落⽣长的条件（包括营养、温度、Ph 等）。
⽤平板划线法，通过接种环在琼脂固体培养基表⾯连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表⾯。
在数次划线后培养，可以分离到由⼀个细胞繁殖⽽来的⾁眼可见的⼦细胞菌落。
筛选：转基因⼤肠杆菌有抗氨苄青霉素基因，所以在含有氨苄青霉素的LB 培养基中可以正常繁殖长成菌落。
⽽普通的⼤肠杆菌没有抗氨苄青霉素基因，咋含有氨苄青霉素的LB 培养基中不能繁殖。
由此可进⾏⼤肠杆菌的筛选。
梯度稀释并计数：通过浓度梯度稀释把液体培养基培养的⼤肠杆菌稀释到⼀定浓度，⽤稀释涂布平板法，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表⾯进⾏培养。
在稀释度⾜够⾼的菌液⾥，聚集在⼀起的微⽣物将被分散成单个细胞，从⽽能在培养基表⾯形成单个的菌落。
由此可计数计算⼤肠杆菌的数量。
实验⽬的1. 通过制备LB 固体培养基，对平板进⾏划线等，学会使⽤固体LB 平板。
2. 通过⽤液体培养基，学会对微⽣物进⾏扩⼤培养。
3. 通过稀释，学会⽤计数器对微⽣物进⾏计数。
实验材料和药品待分离的⼤肠杆菌菌液、⾼压蒸汽灭菌锅、LB 固体培养基、LB 液体培养基、接种环、玻璃涂布器、培养⽫、恒温培养箱、摇床、酒精灯、⽆菌⽔、移液枪、EP 管实验步骤（⽤简单的流程图表⽰）实验数据的记录与分析（如照⽚、表格等）稀释倍数104105⼤肠杆菌单个菌落个数837799111812平均数86.313.7浓度 1.726×1070.274×107实验结果与讨论结果：稀释了105计算出来的结果约为1.726×107ml/cm^3稀释了104计算出来的结果约为0.274×107ml/cm^3全组数据计算出来结果为2.233×107ml/cm^3讨论：在稀释倍数为104的试验中⼤肠杆菌菌落较少，原因可能是在稀释过程操作中，震荡不够，⽽且由于不⼩⼼洒了半管104稀释液，所以取液接种的时候底层的⼤肠杆菌数量偏少了。
