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HLA基因检测PPT课件

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HLA2 PPT课件

HLA2 PPT课件
如果不加*号，提示为血清学检测结果，位点后只 需要两位数字，如HLA-B13。
常规的分子生物学检查结果用4位数字 表示，如HLA-A *0201，前两个数字代 表基因家族，后两个数字代表该家族 不同的成员，如HLA—A*0201和HLA— A* 0202。
从2010年4月1日开始，WHO的HLA命名 规则发生改变，即HLA抗原家族和成员 之间用冒号分隔，如HLA—A 02：04。
HLA命名组织
世界卫生组织命名委员会下属的HLA系统 命名委员会负责HLA系统的国际命名及管理
大写的HLA(说明是HLA的检测)，HLA后面一个横杠， 横杠后的大写字母A代表A位点，B代表B位点，以 此类推
位点后面如果加*号，提示为分子生物学检测结果， 后至少为4位数字，如HLA-A* 0101
（2）可溶性：存在于血清、初乳和尿液等体液中。
二、HLA-Ⅱ类分子的分布
1. APC B细胞、单核/巨噬细胞和树突状细胞； 2. 其他 激活的T细胞，精子和血管内皮细胞。
器官移植中，起主要作用的是哪种抗原？
虽然HLAⅠ类和Ⅱ类分子均是主要移植抗原，但这 两类抗原在移植中所起的作用是不相同的。
HLA抗原与抗体并非一把钥匙一把锁，常为 一个抗体与多个抗原反应；同一组抗原在 分子结构上存在共性。
目前发现的抗原决定簇有HLA I类110个(A 位点34个、B位点44个、C位点4个、A—B位 点20个、B—C位点5个和A．B．C位点3个)；
HLAⅡ类83个(DR位点60个、DQ位点l8个、 DP位点5个)
根据CREG的不同，可将目前常规检测的100 种HLA抗原分为10个CREG。
大量临床数据表明，在同一CREG中，即便 供者和受者的抗原不同，其发生移植后免 疫排斥的机率明显低于非同一CREG中的HLA 抗原错配。而器官移植存活率也明显高于 随机HLA抗原错配的患者。因此，有人称此 为可接受错配。

HLA课件

HLA课件
为功能基因
中华人民共和国卫生部医政司主办
HLA的命名
血清学分型的书写方式是：
①先书写HLA； ②以大写字母A、B、C、DR、DQ、DP表示位点； ③HLA与位点字母之间以“－”相连；
④该位点的血清学特异性以数字表示；
⑤HLA-B的4、6特异性书写为Bw4、Bw6 ； ⑥HLA-C的特异性书写为Cw
均能同等表达，两者的编码产物都可在细胞表面检测到。
连锁不平衡:是指HLA基因并不完全随机的组成单倍型，某些基
因比其他基因能更多或更少的连锁在一起。
中华人民共和国卫生部医政司主办
中华人民共和国卫生部医政司主办
HLA的基本概念及研究历史 HLA抗原组织分布及分子结构 HLA的基因结构和遗传特点 HLA的生物学功能 HLA的临床应用
要的移植抗原。
中华人民共和国卫生部医政司主办

中华人民共和国卫生部医政司主办
Ⅱ类分子的分布比较局限，主要表达于B细胞、单 核－巨噬细胞和树突状细胞等抗原递呈细胞上； 一些在正常情况下不表达Ⅱ类分子的细胞，在免 疫应答过程中亦可受细胞因子的诱导表达Ⅱ类分
子，因此Ⅱ类分子的表达被看成是抗原递呈能力
称为“宿主抗移植物反应” (HVGR），后者称为“移植物
抗宿主反应”或“移植物抗宿主病”（GVHD）。
中华人民共和国卫生部医政司主办
主要组织相容性抗原
(major histocompatibility system,MHS) ： 能引起快而强的排斥反应的抗原,是主要组 织相容性复合物（MHC）的编码产物.
II类分子提呈抗原

中华人民共和国卫生部医政司主办
HLA的基本概念及研究历史 HLA抗原组织分布及分子结构 HLA的基因结构和遗传特点 HLA的生物学功能

HLA简介ppt课件

HLA简介ppt课件

B5 B51 B52
B77 B17 B57
B59 B53 B49 B44 B63 B58
B21 B12 B15
Bw6
B48 B40 B60 B61 B73 B7 B22 B54 B55 B56 B67
B41 B42
B39
B14
B64
B65
B8
B18
B35
B50
B45
B76
B62
B75
B70
B46
B71
13
A36 A3 A26
A30
HLA-A Locus Cross-reactivity
A1
A2
A28
A11
A68
A10
A66 A25 A34
A43
A19
A31 A29 A32
A9 A23 A24
A69
宽窄团 强交叉 弱交叉
A33 A74
14
DR13 DR14
DR17
DR11 DR12 DR18 DR8 DR52
北京市红十字血液中心 北京红十字血液研究所
1
2
3
谢
谢
4
A
C
B
Coplement
D
Centromere
21-OHB C4B 21-OHA C4A Bf C2
DR
DR DQ DN DP DO
DQ
DP
A B4 B3 B2 B1 A1 B1 A2 B2 A1 B1 A2 B2
5
HLA 分类
1.HLA-Ⅰ A、 B 、 C 2.HLA-Ⅱ DR 、 DQ 、DP 3.HLA-Ⅲ BF 、C、 TNF、HOT、21-羟基酶
30

器官移植和HLA配型ppt课件

器官移植和HLA配型ppt课件

126 23 81 24 559 3
6
9
24
Ⅰ类基因
B
CA
851 276 506
62 10 28
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14
（二）单体型和连锁不平衡性
1.单体型遗传
父母与子女完全相同的几率： 0 父母与子女一半相同的几率：100% 子女间完全相同的几率： 25% 子女间一半相同的几率： 50% 子女间完全不同的几率： 25%
6
9
24
Ⅰ类基因
B
CA
851 276 506
62 10 28
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13
人群之中所有基因座位等位基因都相同的几率： 1262381245593851276506≈11019 人群之中MHC抗原相同的几率： 6924621028≈1109
基因型别 等位基因数 抗原特异性
Ⅱ类基因
DPB DPA DQB DQA DRB DRA
20世纪60 年代 20世纪70 年代 20世纪80 年代
临床免疫学检验
吉林医药学院检验学院
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1
器官移植与HLA分型检测技术
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2
主要组织相容性复合体 / HLA复合体 major histocompatibility complex, MHC
人类白细胞抗原 / MHC分子 / MHC抗原 human leukocyte antigen, HLA
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31
（二）使用免疫抑制药物
1、多为抑制T细胞药物 环孢菌素A（CsA）， FK-506、Rapamycin
2、去氧精胍菌素等抗生素类；阻断T细胞的生 长周期
3、激素 4、可溶性CK受体、抗CK抗体和抗粘附分子抗

HLA-B27检测及其临床应用ppt课件

HLA-B27检测及其临床应用ppt课件

流式细胞术法
➢ 利用荧光标记的HLA-B27单克隆抗体，与细胞表面的B27抗原结合，使
结合后的淋巴细胞具有一定的荧光强度，这种荧光强度可由流式细胞仪 测得的通道值来反映，以其值的高低判断HLA-B27抗原表达百分比，从 而判断HLA-B27是否阳性。
➢ 优点：全自动仪器检测，减少了人为因素的影响，重复性高，结果判断
种族差异大
世界性
性别分布
男＞女
女＞男
年龄
20-30
30-50
家族史
明显
不明显
类风湿因子
12
（－）
（）
HLA-B27与AS
HLA-B27阴性的AS
约5-10%的AS患者为HLA-B27阴性 AS患者的HLA-B27阳性率达90-95% 我国汉族人群HLA-B27阳性率2-7%（3千万-1亿），AS患病 率为0.3%（＞4百万），大部分HLA-B27阳性者并不发生AS。
AS发病原因机制目前尚未完全阐明，大多数 学者认为其与遗传，感染，免疫，环境因素 等有关。
16
HLA-B27检测方法
➢ 抗原水平
微量细胞毒法 流式细胞术法
➢ 基因水平
PCR-SSP
17
微量细胞毒法（MLCT）
➢ 原理：如果受试者淋巴细胞表面表达有相应的HLA-B27抗原，就可以与
B27抗体结合，形成Ag-Ab复合物激活补体，发生对细胞膜的破坏及细胞 杀伤作用，通过染色法观察，死细胞的细胞膜通透性改变，染料能够进 入使之着色，而活细胞细胞膜完整不被染色。根据死细胞占全部细胞的 百分比，可以判断受试者淋巴细胞表面是否存在HLA-B27抗原及其与抗 体的反应强度。
基因片段，以琼脂糖凝胶电泳分析PCR扩增产物，若出现目的条带则表 示HLA-B27为阳性。

白细胞血型HLA法医学ppt课件

白细胞血型HLA法医学ppt课件

技术挑战与解决方案
技术难题
HLA分型的灵敏度和特异性要求高，易受样 本质量、实验条件和操作人员技能等因素影 响。
解决方案
采用高分辨率的HLA分型技术和标准化操作 流程，加强实验室内质量控制，以及定期进
行技能培训和考核。
法律与伦理问题
隐私保护
HLA分型涉及个体基因信息，需严格遵守隐私保护法 律法规，确保基因信息安全。
序列特异性引物PCR（SSP-PCR）
通过特异性引物与HLA基因序列结合，进行PCR扩增，确定HLA基因型别。
序列特异性杂交（SSO）
利用探针与HLA基因序列的特异性结合，通过杂交信号的强度判断HLA基因型别。
高分辨率熔解曲线分析（HRM）
通过熔解曲线分析HLA基因序列的变异，确定HLA基因型别。
分型技术的选择与应用
血清学检测方法适用于已知抗体类型和抗原类型的检测，常用于输血配型和器官移 植。
DNA分型方法适用于大规模群体遗传学研究和个体识别，具有高分辨率和高通量特 点。
根据不同的应用需求选择合适的分型技术，如法医学鉴定、亲子鉴定、个体识别等 。
04
HLA在个体识别和亲子鉴定中的应用
个体识别的原理与方法
原理
跨学科合作
加强与其他相关学科的合作，如 法学、社会学和心理学等，共同 推动HLA法医学的发展和应用。
THANK YOU
感谢各位观看
方法
HLA基因分型技术、HLA表型检测技 术等。
HLA在个体识别和亲子鉴定中的优势与局限性
优势
HLA具有高度的遗传变异性和个体特异性，能够提供准确的个体识别和亲子鉴定结果。此外，HLA检 测方法成熟、稳定，可用于大规模的群体筛查和个体识别。
局限性

白细胞血型HLA法医学ppt课件

白细胞血型HLA法医学ppt课件

微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理 微量淋巴细胞毒实验步骤
使蛋白质变性的因素都会使HLA抗原发生不可逆的变化 HLA抗原的结构、HLA抗体的来源、特性及交叉反应，DNA分型方法。 主要表现为抗原与抗体反应减弱，或可逆性丧失。
抗体+相应抗原+补体— 主要表现为抗原与抗体反应减弱，或可逆性丧失。
2、DR、DQ抗原分型:
B淋巴细胞 从全淋巴细胞中通过尼 龙棉柱法 分离B淋巴细胞作微量淋巴细胞毒实 验。
来源
同种异体免疫：妊娠、输 血、器官移植，以产妇血 清获得为主；单克隆抗体； 免疫动物等。
多为IgG, 少为IgM，有细 胞毒作用，部分有凝集作 用。效价低，多数为多价.
交叉反应:
多数为同一座位上的Ag、Ab间；
掌握 了解
HLA的命名、遗传、应用、抗原在 体内的分布、测定I类抗原的试验 名称、原理， NIH技术
HLA抗原的结构、HLA抗体的来 源、特性及交叉反应，DNA分型
方法。
红细胞血型抗原
人类 白细胞膜上 白细胞特有抗原
的抗原
与其它组织共有抗原：HLA
1
HLA又称移 植抗原、组 织相容性抗 原.
2
基因群 MHC 主要组织相容 性复合体人类 的MHC称为 HLA系统
PCR-测序
血清学分型和DNA分型比较
DNA分型优于血清学分型
便于标准化 和比较
使用 范围广
减少 分型误差
提高分辨率 减少漏检
2、DR、DQ抗原分型 HLA-A23(9)：9为宽特异性，23为窄特异性
液中。成熟红细胞无，血小板有。
2、DR、DQ抗原分型
不同人群HLA抗原分布差异大，
成熟红细胞无，血小板有。
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50 40 30 6抗原 5抗原 4抗原 3抗原 不匹配
抗原匹配数
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18
常见HLA与疾病关联
疾病
HLA抗原 相对风险
—————————————————————————
强直性脊椎炎
B27
89.8
Behcet综合征
B51
10-15
多发性硬化症
DR2
4.8
乳糜泻
DR3
10.8
Grave’s病
DR3
（包括HLA、H-2、ChLA、RhLA、DLA、
SLA、RLA、GpLA、B等）
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5
1940年代，Snell和Gorer 小鼠间的肿瘤及皮肤移植试验发现：
决定小鼠间移植排斥与否（即组织相容性） 的基因位于17号染色体短臂
命名为组织相容性-2（H-2）
H-2是一个由许多紧密连锁的基因位点构成 的复杂系统
MHC、HLA、亚型、关联
➢ 什么是HLA分型
I型，II型，III型，IV型
➢ HLA分型与疾病检测
骨髓与器官移植，免疫性疾病，代谢性疾病，神经内科 疾病，骨科疾病等
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4
人类白细胞抗原 human leukocyte antigen , HLA
主要组织相容性复合体 Major histocompatibility complex， MHC
MiSeq
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25
Pacific Biosciences - Single-molecule real-time sequencing
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26
Sequencing based typing (SBT)
高等分辨HLA分型
27
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27
• Sanger 测序原理
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28
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13
HLA抗原和等位基因命名:
用血清学及细胞学方法检测抗原特异性:
HLA-B27, HLA-DR4（血清学方法） HLA-DPw2（细胞学方法）
用分子生物学方法检测等位基因：
HLA-DRB1*04 05
位点名 主型
等位基因序号
HLA-B*27 07
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14
例如HLA-B27
HLA-B*2701
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21
HLA 基因分型
低分辨: SSP
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22
rSSO Luminex bead for class I & class II
中等分辨HLA分型
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23
Next generation sequencing
高分辨高通量HLA分型
24
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24
Illumina Sequencing by Synthesis (SBS) chemistry
HLA-B*2708
HLA-B*2702
HLA-B*2709
HLA-B*2703
HLA-B*2710
HLA-B*2704
HLA-B*2711
HLA-B*27051
.
HLA-B*27052
.
HLA-B*2706
.
HLA-B*2707
HLA-B*2723
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15
Loci Considered to be Matched
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6
1950年代Dausset 经产妇血清进行个体之间抗体与白细胞 凝集和细胞毒试验
发现人的MHC，命名为HLA 基因位于第6号染色体短臂
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7
1960年代，Benacerraf 不同品系的豚鼠对一些抗原的免疫应答 能力比较发现：
控制机体对不同抗原的免疫应答能力的 基因（Ir基因）位于MHC基因复合体内。
• Sanger 测序原理
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
5’ T A T C G A C T
3’
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
5’ T A T C G A C T G
3’
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
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10
HLA基因系统的多态性及一些主要基因座位的等位基因数
正式命名显示多态性的HLA基因座位有31个，共2 320个等位基因。 图中所
示为常见基因座位的等位基因数。
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11
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12
HLA分型的基本检测方法： 细胞学方法测抗原特异性（型） 血清学方法测抗原特异性（型） （微量淋巴细胞毒试验） 分子生物学方法测等位基因 PCR/SSP PCR/Luminex PCR/SBT PCR/二代测序 PCR/流式细胞仪
3.7
系统性红斑狼疮
DR3
5.8
类风关
DR4
4.2
胰岛素依赖型糖尿病 DR3/DR4
25.0
重症肌无力
DR3
2.5
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19
小结
HLA的三个特性使其成为热点：
决定组织相容性 高度多态性 与疾病关联
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20
Table of Contents
1. HLA 和HLA分型检测 2. HLA 分型方法比较 3. 强直柱脊椎炎
HLA 基因检测
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1
Table of Contents
1. HLA 和HLA分型检测 2. HLA 分型方法比较 3. 强直柱脊椎炎
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2
Table of Contents
1. HLA 和HLA分型检测 2. HLA 分型方法比较 3. 强直柱脊椎炎
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3
基本概念
➢ 什么是HLA
Father’s Mother’s
4 M bp
DP DQDR BC A
HLA: 无血源相关 同胞兄妹 父母亲
10/10 单倍型全相合，半相合 半相合
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16
脐血干细胞移植 外周血干细胞移植
骨髓干细胞移植
17
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17
HLA-A、B、DR抗原配型与移植肾存活率 （加州大学资料）
十年存活 70 率（%） 60
5’ T A T C G A C T Nhomakorabea A3’
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
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8
Benacerraf、Dausset和Snell三位科学家
分别从不同角度对MHC的免疫遗传学进 行的开拓性研究，
荣膺1980年的诺贝尔医学和生理奖。
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9
HLA分型
HLA共分为4型：I型分子包括HLA-A、HLA-B和HLA-C，广泛存在与 各种组织细胞中； II型分子包括HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR，存在于B细胞、巨噬细胞 和活化T细胞中； III型分子为补体系统，包括C2和C4位点，存在于血清中； IV型分子可能是一些分化抗原，只存在于淋巴细胞、某些细胞毒性T细 胞和白细胞中。